一品红组织培养与植株再生初步研究
摘要
本文以一品红(Euphorbia pulcherrima Willd)为材料，以幼嫩茎、叶片为外植体，以MS为基本培养基附加不同浓度和比例的细胞生长素、细胞分裂素，进行了愈伤组织的诱导、芽的分化、根的分化、芽的增殖及芽苗生根及以休眠芽为外植体快繁等的一些基本规律进行了研究；初步探讨了固体培养条件下，不同光质、不同糖及浓度对愈伤组织的形成、芽分化的影响，以期为一品红的快速繁殖提供一些基础资料，为我国优质一品红种苗的专业化生产提供可能性。
实验结果如下：
不同种类、不同浓度的激素及其组合对愈伤组织的诱导效果均不相同，愈伤组织的质量及再分化的能力也有较大的差别：不同的外植体在相同的生长素、相同浓度下，愈伤组织的诱导率、质量有明显差异。本文根据实验得出：以幼嫩茎段作为外植体，诱导愈伤组织时，单因子以MS+NAA。0.5mg．L—l组合因子以MS+ZT0.5；，a·：—l-4-NAA~．i—：．。+、—l为培养基效果最好：MS+6-BA^：o，e●L／l+NAA¨—o’2。mgL—1次之。诱导愈伤组织以叶片为外植体，单因子以MS+NAA．；—I．o，t．d．—I组合因子以MS牛6-BA，．o—。～·，—l+NAAo．5—：．。16·+—I 效果最好。在附加有NAA、2，4—D、IAA的培养基中，愈伤组织疏松、湿润、乳白色或白绿色、透明状或半透明状；在附加有IBA、KT的培养基上，愈伤组织致密、干燥、白绿色、易褐化；在低浓度(小于1．0mg·L—1)的ZT培养基上愈伤组织疏松、湿润、乳白色、容易分化：在高浓度(大于等于1．0mg·L—1)的ZT培养基上，愈伤组织致密、绿色、瘤状；在附加有6—BA的培养基上，最初切口处形成白色、致密、小晶体状的愈伤组织，随后逐渐转变为致密、绿色、瘤状的愈伤组织。
芽分化最佳培养基配方为MS+ZT：．o—：．。Ie·：)1+NAA¨叫。i，e·：—l 和MS+ZT0．5，e·、—l效果最好；MS+6-BA：．0—2：0。．e●L—l +NAAo．：刁．i，e·：—l 效果次之。并且在MS+ZT、MS+ZT+NAA的培养基中培养过程中容易形成胚性细胞团。开始时在愈伤组织表面，长出许多淡黄色、小颗粒状构成的球形细胞团、质地较坚硬，很容易从原愈伤组织上脱离下来，生长迅速，容易分化成苗。
不同糖类及糖浓度对一品红培养过程中愈伤组织的诱导率、愈伤组织的芽分化率具有显著影响；相比较而言，蔗糖效果比葡萄糖好，蔗糖的最适浓度范
！Zg霎自。】硕十堂付N玄
＼、GkW ＼lASTER S了HESIS
一
围为30一叨g·＊’，葡萄糖的最适范围为3卜SO g·厂’：同时还可知，高
浓度的蔗糖对愈伤组织的芽分化有明显的抑制作用，高浓度的葡萄糖对愈伤组
织的芽分化的抑制作用不显著。
根分化最佳培养基配方为皿＋IBAO。；。。。‘＋N恤．；、。。。’和m＋N讪。；。
叩厂‘效果最佳；MSHu儿．＊。＊厂‘效果次之。在MSHBA州AA培养上，形成
根数量多、白色、粗壮、多根毛、生长迅速，能产生次级根，但容易再愈伤组
织化；在MS叶AA培养基上分化出的根，乳黄色、直而细、根毛少、不愈伤组
织化。
芽的增殖培养基的最佳配方为MS＋ZTM．外‘＋NMi；。厂’和MS＋ZT闪．吓
－’＋6－BA。。。。‘＋Ni＊。L－‘效果次之。从芽的增殖培养中发现 ZT与 6－BA组
合在一起时，对于愈伤组织的形成、芽的分化均没有显著的促进作用，这一点
与前人在仙客来、泡桐等组织培养中的应用结果不太一致。在 MS ＋ ZT＊。厂’十
NAAo；T厂‘培养基上芽的增殖培养过程中，形成的芽粗壮、叶片生长正常。
试管苗生根培养基为MS十IAAM叩厂‘，MS ＋NAA。＊、幻．厂‘效果最好，MSH丸．；
呵·。州地。冈．＊‘效果次之。
以日光为对照，在红、绿、蓝、黄四种不同光质条件下，愈伤组织的诱导
率均有所提高，红光下愈伤组织诱导率最高。各种光质对愈伤组织芽的分化均
投有显著的促进作用，相比较而言，绿光比较有利。
This paper reported the research of Euphorbia Pulcherrima Willd used young sterm and young leaves as explants. The MS media was the basic media,given different concentration and ratio auxin or cytokinins. Studied callus induce,endosperm differentiation and reproduce,root differentiation and young plant rootage.Also studied the basic law of reproduction of dormant bud:the effect of different light qualituy and sucrose different concentration.Hope to offer some to the industrialization of Euphorbia Pulcherrima Willd.
Different hormone,different concentration could induce different callus.If given same factors,different explants had different callus ratio.If young endosperm was used as explants,the media MS+ZTo.2-i.omg.i_-i(follow as it)+NAAo.s-i.o was the best media.The mediaMS+6-BAi.o-2.o+NAAo.5-2.o seconded to it.If young leaves was used as explants,the mediaMS+6BAi.0-2 o+NAAo.5-2.o was the best media.The media MS+6-BAi.o seconded to it.If the media was given NAA,2,4-D,IAA,callus was loose,moist,milk white or white-green ,transparent or semi- transparent.If the media was given IBA,KT,callus was density,dry,white-green and easy to brown.Callus cultured hi low concentration^l.Omg.L"1) was better than that in high concentration(> 1 .Omg.L"1).
The media MS+ZTi.o-2.o+NAAo. 1-0.5 was the best media media for endosperm differentiation.The media MS+6-BAi o-2.o+NAAo.i-o5 seconded to it.Callus cultured in media MS+ZT+NAA was easy to regenerate particulate embryonic callus.On the suffice of callus,there was some cell group,and easy to regenerate plant.
Different concentration sugar had different effect to callus.The effect of media with sucrose was better than that with glucan.The concentration of sucrose from 30-40g.L'{ was suitable to callus,the concentration of glucan fromSO-SOg.L"1 was also suitable to callus.At the same time,high concentration sugar inhibited callus induction,but high concentration glucan did not inhibited callus induction.
The effect of media MS+IBAoa-i.o+NAAo.i-o.s was best to root differentiation,and media MS+IAAo2-os seconded to it.If media was given IBA,NAA,the root was white,more stronger and grew more quickly,had more root rip,but it would come out callus again.If media was given IAA,root was yellow,slim,less root rip and couldnot come to callus again.
The optimum media for amplification was MS+ZTi.o+NAAoj.The media
MS+ZTi.o+6-BA2.o+NAAo.iseconded to it,but the media MS+6-BA couldnot promote callus induce or differention.Endospenn cultured in media MS+ZTi.0 was strong and its leaves were normal.
The optimum media for root regeneration was MS+IAAi.o,and the media MS+IBAo.2+NAAo.5 seconded to it.
Contrasted to sun light,callus ratio in red,blue,green and white light was higher,callus ratio in red light was the highest. Light quality had no obvious effect to endosperm differentiation,but green light had a little effect.
实验结果如下：
不同种类、不同浓度的激素及其组合对愈伤组织的诱导效果均不相同，愈伤组织的质量及再分化的能力也有较大的差别：不同的外植体在相同的生长素、相同浓度下，愈伤组织的诱导率、质量有明显差异。本文根据实验得出：以幼嫩茎段作为外植体，诱导愈伤组织时，单因子以MS+NAA。0.5mg．L—l组合因子以MS+ZT0.5；，a·：—l-4-NAA~．i—：．。+、—l为培养基效果最好：MS+6-BA^：o，e●L／l+NAA¨—o’2。mgL—1次之。诱导愈伤组织以叶片为外植体，单因子以MS+NAA．；—I．o，t．d．—I组合因子以MS牛6-BA，．o—。～·，—l+NAAo．5—：．。16·+—I 效果最好。在附加有NAA、2，4—D、IAA的培养基中，愈伤组织疏松、湿润、乳白色或白绿色、透明状或半透明状；在附加有IBA、KT的培养基上，愈伤组织致密、干燥、白绿色、易褐化；在低浓度(小于1．0mg·L—1)的ZT培养基上愈伤组织疏松、湿润、乳白色、容易分化：在高浓度(大于等于1．0mg·L—1)的ZT培养基上，愈伤组织致密、绿色、瘤状；在附加有6—BA的培养基上，最初切口处形成白色、致密、小晶体状的愈伤组织，随后逐渐转变为致密、绿色、瘤状的愈伤组织。
芽分化最佳培养基配方为MS+ZT：．o—：．。Ie·：)1+NAA¨叫。i，e·：—l 和MS+ZT0．5，e·、—l效果最好；MS+6-BA：．0—2：0。．e●L—l +NAAo．：刁．i，e·：—l 效果次之。并且在MS+ZT、MS+ZT+NAA的培养基中培养过程中容易形成胚性细胞团。开始时在愈伤组织表面，长出许多淡黄色、小颗粒状构成的球形细胞团、质地较坚硬，很容易从原愈伤组织上脱离下来，生长迅速，容易分化成苗。
不同糖类及糖浓度对一品红培养过程中愈伤组织的诱导率、愈伤组织的芽分化率具有显著影响；相比较而言，蔗糖效果比葡萄糖好，蔗糖的最适浓度范
！Zg霎自。】硕十堂付N玄
＼、GkW ＼lASTER S了HESIS
一
围为30一叨g·＊’，葡萄糖的最适范围为3卜SO g·厂’：同时还可知，高
浓度的蔗糖对愈伤组织的芽分化有明显的抑制作用，高浓度的葡萄糖对愈伤组
织的芽分化的抑制作用不显著。
根分化最佳培养基配方为皿＋IBAO。；。。。‘＋N恤．；、。。。’和m＋N讪。；。
叩厂‘效果最佳；MSHu儿．＊。＊厂‘效果次之。在MSHBA州AA培养上，形成
根数量多、白色、粗壮、多根毛、生长迅速，能产生次级根，但容易再愈伤组
织化；在MS叶AA培养基上分化出的根，乳黄色、直而细、根毛少、不愈伤组
织化。
芽的增殖培养基的最佳配方为MS＋ZTM．外‘＋NMi；。厂’和MS＋ZT闪．吓
－’＋6－BA。。。。‘＋Ni＊。L－‘效果次之。从芽的增殖培养中发现 ZT与 6－BA组
合在一起时，对于愈伤组织的形成、芽的分化均没有显著的促进作用，这一点
与前人在仙客来、泡桐等组织培养中的应用结果不太一致。在 MS ＋ ZT＊。厂’十
NAAo；T厂‘培养基上芽的增殖培养过程中，形成的芽粗壮、叶片生长正常。
试管苗生根培养基为MS十IAAM叩厂‘，MS ＋NAA。＊、幻．厂‘效果最好，MSH丸．；
呵·。州地。冈．＊‘效果次之。
以日光为对照，在红、绿、蓝、黄四种不同光质条件下，愈伤组织的诱导
率均有所提高，红光下愈伤组织诱导率最高。各种光质对愈伤组织芽的分化均
投有显著的促进作用，相比较而言，绿光比较有利。
This paper reported the research of Euphorbia Pulcherrima Willd used young sterm and young leaves as explants. The MS media was the basic media,given different concentration and ratio auxin or cytokinins. Studied callus induce,endosperm differentiation and reproduce,root differentiation and young plant rootage.Also studied the basic law of reproduction of dormant bud:the effect of different light qualituy and sucrose different concentration.Hope to offer some to the industrialization of Euphorbia Pulcherrima Willd.
Different hormone,different concentration could induce different callus.If given same factors,different explants had different callus ratio.If young endosperm was used as explants,the media MS+ZTo.2-i.omg.i_-i(follow as it)+NAAo.s-i.o was the best media.The mediaMS+6-BAi.o-2.o+NAAo.5-2.o seconded to it.If young leaves was used as explants,the mediaMS+6BAi.0-2 o+NAAo.5-2.o was the best media.The media MS+6-BAi.o seconded to it.If the media was given NAA,2,4-D,IAA,callus was loose,moist,milk white or white-green ,transparent or semi- transparent.If the media was given IBA,KT,callus was density,dry,white-green and easy to brown.Callus cultured hi low concentration^l.Omg.L"1) was better than that in high concentration(> 1 .Omg.L"1).
The media MS+ZTi.o-2.o+NAAo. 1-0.5 was the best media media for endosperm differentiation.The media MS+6-BAi o-2.o+NAAo.i-o5 seconded to it.Callus cultured in media MS+ZT+NAA was easy to regenerate particulate embryonic callus.On the suffice of callus,there was some cell group,and easy to regenerate plant.
Different concentration sugar had different effect to callus.The effect of media with sucrose was better than that with glucan.The concentration of sucrose from 30-40g.L'{ was suitable to callus,the concentration of glucan fromSO-SOg.L"1 was also suitable to callus.At the same time,high concentration sugar inhibited callus induction,but high concentration glucan did not inhibited callus induction.
The effect of media MS+IBAoa-i.o+NAAo.i-o.s was best to root differentiation,and media MS+IAAo2-os seconded to it.If media was given IBA,NAA,the root was white,more stronger and grew more quickly,had more root rip,but it would come out callus again.If media was given IAA,root was yellow,slim,less root rip and couldnot come to callus again.
The optimum media for amplification was MS+ZTi.o+NAAoj.The media
MS+ZTi.o+6-BA2.o+NAAo.iseconded to it,but the media MS+6-BA couldnot promote callus induce or differention.Endospenn cultured in media MS+ZTi.0 was strong and its leaves were normal.
The optimum media for root regeneration was MS+IAAi.o,and the media MS+IBAo.2+NAAo.5 seconded to it.
Contrasted to sun light,callus ratio in red,blue,green and white light was higher,callus ratio in red light was the highest. Light quality had no obvious effect to endosperm differentiation,but green light had a little effect.
引文
1．魏国汶，胡新龙等。圣诞花的现代种植技术。花卉。1995，1(9)。
2．华东师范大学。东北师范大学主编。植物学(下)。高等教育出版社。
3．经济日报报业集团主办。中国花卉报。2000．4．22第2版。
4．谷瑞生等．植物离体培养中器官发生调控机制的研究进展[J]植物学通报，1999，16(3)：232-244．
5．裘文达主编。花卉每月管理技术。中国农业出版社。
6．裘文达，连俊，赵小进编著。商品花卉生产技术问答。中国农业出版社。
7．经济日报报业集团主办。圣诞红生产技术与管理。中国花卉报。2000．6．12第2版。
8．张万佛。绿叶端上“一品红”。花卉。1996．2(11)。
9．华东师范大学，东北师范大学主编。植物学(上)。高等教育出版社。
10．经济日报报业集团主办。一品红生产现状及市场分析。2000．5．25第3版。
11．北京医学院，北京中医学院主编。中草药成分化学。人民卫生出版社。
12．胡绪岚编译。均花保鲜新技术。中国农业出版社。
13．经济日报报业集团主办。一品红专业化种苗生产。中国花卉报。2000．6．1第3版。
14．费砚良，张金政主编。宿根花卉。中国林业出版社。
15．裘文达。园艺植物组织培养。上海：上海科技出版社。1998．36-40。
16．颜昌敬，《植物组织培养手册》。上海科技出版社。1989。
17．裘文达，曹孜义，《植物组织培养实用技术》，高等教育出版社。1989。
18．王熊等，“兰花快速繁殖的研究及花芽分化的探讨”。《植物生理学报》1984．10(4)：39。
19．陈家银等。“大岩桐叶片愈伤组织的诱导和植株再生”《植物生理学通讯》1990．26(3)：46。
20．程治英等，“几种热带观叶植物的组织培养”《植物生理学通讯》1986．21(1)：41。
21．赵西兰，“名贵花卉试管快速繁殖的研究”《山东农业科学》1992．(6)：42
22．庞基良等，“激素，光照对仙客来叶片愈伤组织诱导，分化及试管苗生长的影响。”《园艺学报》1994，21(1)：103
23．周吉源，赵洁，杨和平等。油菜薄层培养中不同光质对愈伤组织诱导和增殖的效应。华中师范大学学报(自然科学版)，1992．3．26(1)77-81
24．潘战生，陈暨耀，蔡怀新等。烟草叶组织培养中光与激素对形态发生的调节作用。实验生物学报，1989．22(3)：279-285
25.Loveys BR, Wareing PF. The red Light controlled Produetion of gibberellin in etiolated wheat leaves. Planda, 1971(98):109-116
26.Seibert M, wetherbee PI, JobDD. The eddects of light intensity and spectral quality on growth and shoot initiation in tobacco callus. Plant phyciol, 1975(56): 130-139
27.Men K, Friedrich B, Judel G K. Effect of Light intensity on the concentrations of phytohormones in developing wheat grains. J plant Physiol, 1985(120): 255-266
28．谢志兵，猕猴桃愈伤组织的诱导及植株再生的研究。硕士学位论文。1998
29．金芳，枣试管苗适宜生根培养基的选择研究。《甘肃农业科技》。1996(4)：20
30．常永健等，苹果茎尖培养中植物激素与不定根形成关系的研究。河北农业大学学报。1999．14(4)：1
31．李风云。猕猴桃组培苗生根移栽技术的改进。中国果树。1986(1)：39-40
32．曹效义，刘民国主编实用植物组织培养技术教程。甘肃科学技术出版社。
33．崔澄，林耀林主编。经济植物的组织培养与快速繁殖。农业出版社。
34．W·巴尔茨，E·赖因哈德，M·H·岑克主编，植物组织培养及其在生物技术上的应用。科学出版社。
35．中国科学院上海植物生理研究所细胞室编译。植物组织和细胞培养。上海科学技术出版社。
36．杜令阁，侯艳华，常维春等。人参花粉植株的诱导及体细胞无性系的建立。中国科学。1987(1)：34-41。
37．段金玉，胡虹。香荚兰的快速繁殖。云南植物研究。1989，11(1)：107-109。
38．倪德祥，王维荣，张丕芳等，光质和组合激素对菊花茎段培养中生长发育的影响。西北植物学报。1988，8(1)：16-27。
38．王维荣，王咏冬，欧阳光察等。光质对黄瓜及蕃茄愈伤组织培养中分化和有关酶的影响。植物生理学报。1991(2)：118-124。
40．王维荣编译。光对高等植物基因表达的调控作用。世界科学。1989(1)：20-22。
41．林耀林，猕猴桃离体茎段愈伤组织的诱导和植物再生。植物学报。1979．21(4)：339-344。
42．陈维伦，郭东红，杨善英等。山新杨叶外植体的器官分化以及生长调节物质对它的影响。植物学报，1980．22(4)：311-315。
2．华东师范大学。东北师范大学主编。植物学(下)。高等教育出版社。
3．经济日报报业集团主办。中国花卉报。2000．4．22第2版。
4．谷瑞生等．植物离体培养中器官发生调控机制的研究进展[J]植物学通报，1999，16(3)：232-244．
5．裘文达主编。花卉每月管理技术。中国农业出版社。
6．裘文达，连俊，赵小进编著。商品花卉生产技术问答。中国农业出版社。
7．经济日报报业集团主办。圣诞红生产技术与管理。中国花卉报。2000．6．12第2版。
8．张万佛。绿叶端上“一品红”。花卉。1996．2(11)。
9．华东师范大学，东北师范大学主编。植物学(上)。高等教育出版社。
10．经济日报报业集团主办。一品红生产现状及市场分析。2000．5．25第3版。
11．北京医学院，北京中医学院主编。中草药成分化学。人民卫生出版社。
12．胡绪岚编译。均花保鲜新技术。中国农业出版社。
13．经济日报报业集团主办。一品红专业化种苗生产。中国花卉报。2000．6．1第3版。
14．费砚良，张金政主编。宿根花卉。中国林业出版社。
15．裘文达。园艺植物组织培养。上海：上海科技出版社。1998．36-40。
16．颜昌敬，《植物组织培养手册》。上海科技出版社。1989。
17．裘文达，曹孜义，《植物组织培养实用技术》，高等教育出版社。1989。
18．王熊等，“兰花快速繁殖的研究及花芽分化的探讨”。《植物生理学报》1984．10(4)：39。
19．陈家银等。“大岩桐叶片愈伤组织的诱导和植株再生”《植物生理学通讯》1990．26(3)：46。
20．程治英等，“几种热带观叶植物的组织培养”《植物生理学通讯》1986．21(1)：41。
21．赵西兰，“名贵花卉试管快速繁殖的研究”《山东农业科学》1992．(6)：42
22．庞基良等，“激素，光照对仙客来叶片愈伤组织诱导，分化及试管苗生长的影响。”《园艺学报》1994，21(1)：103
23．周吉源，赵洁，杨和平等。油菜薄层培养中不同光质对愈伤组织诱导和增殖的效应。华中师范大学学报(自然科学版)，1992．3．26(1)77-81
24．潘战生，陈暨耀，蔡怀新等。烟草叶组织培养中光与激素对形态发生的调节作用。实验生物学报，1989．22(3)：279-285
25.Loveys BR, Wareing PF. The red Light controlled Produetion of gibberellin in etiolated wheat leaves. Planda, 1971(98):109-116
26.Seibert M, wetherbee PI, JobDD. The eddects of light intensity and spectral quality on growth and shoot initiation in tobacco callus. Plant phyciol, 1975(56): 130-139
27.Men K, Friedrich B, Judel G K. Effect of Light intensity on the concentrations of phytohormones in developing wheat grains. J plant Physiol, 1985(120): 255-266
28．谢志兵，猕猴桃愈伤组织的诱导及植株再生的研究。硕士学位论文。1998
29．金芳，枣试管苗适宜生根培养基的选择研究。《甘肃农业科技》。1996(4)：20
30．常永健等，苹果茎尖培养中植物激素与不定根形成关系的研究。河北农业大学学报。1999．14(4)：1
31．李风云。猕猴桃组培苗生根移栽技术的改进。中国果树。1986(1)：39-40
32．曹效义，刘民国主编实用植物组织培养技术教程。甘肃科学技术出版社。
33．崔澄，林耀林主编。经济植物的组织培养与快速繁殖。农业出版社。
34．W·巴尔茨，E·赖因哈德，M·H·岑克主编，植物组织培养及其在生物技术上的应用。科学出版社。
35．中国科学院上海植物生理研究所细胞室编译。植物组织和细胞培养。上海科学技术出版社。
36．杜令阁，侯艳华，常维春等。人参花粉植株的诱导及体细胞无性系的建立。中国科学。1987(1)：34-41。
37．段金玉，胡虹。香荚兰的快速繁殖。云南植物研究。1989，11(1)：107-109。
38．倪德祥，王维荣，张丕芳等，光质和组合激素对菊花茎段培养中生长发育的影响。西北植物学报。1988，8(1)：16-27。
38．王维荣，王咏冬，欧阳光察等。光质对黄瓜及蕃茄愈伤组织培养中分化和有关酶的影响。植物生理学报。1991(2)：118-124。
40．王维荣编译。光对高等植物基因表达的调控作用。世界科学。1989(1)：20-22。
41．林耀林，猕猴桃离体茎段愈伤组织的诱导和植物再生。植物学报。1979．21(4)：339-344。
42．陈维伦，郭东红，杨善英等。山新杨叶外植体的器官分化以及生长调节物质对它的影响。植物学报，1980．22(4)：311-315。