护肝片工艺变更与质量参数的相关性研究
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摘要
目的：研究护肝片薄层定性鉴别、含量测定、HPLC指纹图谱和溶出度4种质量评价参数,建立其评价方法,对市售护肝片进行测定,分析不同来源的护肝片质量间的差异；采用所建立的质量评价方法,考察不同环节的工艺变更对产品质量的影响,并对工艺参数提出科学合理的建议范围,为护肝片实际生产工艺的优化提供科学依据。
方法：采用薄层色谱法对护肝片中五味子、柴胡和猪胆粉进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对护肝片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素进行含量测定；采用高效液相色谱法建立护肝片的指纹图谱,并以相似度评价市售护肝片的质量；采用高效液相色谱法测定护肝片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的溶出度,并绘制累积溶出曲线,进行模型拟合并计算溶出参数；以五味子中4种木脂素类有效成分为指标,单因素考察五味子提取工艺中的提取次数,并在此基础上,通过星点设计-效应面法优化五味子提取工艺中的乙醇浓度、提取时间和溶剂倍量；单因素考察护肝片成型工艺中的辅料种类,比较糊精与乳糖对上述各质量参数的影响。
结果：所建立的护肝片中五味子和柴胡的薄层定性鉴别方法稳定可行,可用于护肝片的质量控制,且不同来源的护肝片薄层斑点大小深浅差异显著；所建立的护肝片4种木脂素类成分的HPLC含量测定方法准确简便可行,且测得不同来源的护肝片中4种指标成分的含量差异显著；所建立的护肝片HPLC指纹图谱准确稳定可行,可用于护肝片的质量控制,且不同来源的护肝片指纹图谱相似度大于0.9；不同来源的护肝片4种指标成分的累积溶出曲线均差异显著,且溶出模型拟合结果也不尽相同；护肝片中五味子木脂素类成分的提取率与提取各因素间的关系基本呈非线性趋势,即成分的提取率随乙醇浓度、提取时间和溶剂倍量的提高而呈先迅速增加后缓慢降低的趋势,且主要受乙醇浓度的影响较大,五味子醇提工艺的优化范围为乙醇浓度80%-90%、提取时间1-2.5h、溶剂倍量4-6倍,最佳工艺条件为4.5倍量85%乙醇提取2次,每次1.5h；成型工艺中使用乳糖或糊精对护肝片4种指标成分的含量测定、指纹图谱及溶出行为无显著影响,乳糖相对略优。
结论：所建立的质量评价方法均准确稳定可行,可用于护肝片的质量控制；由薄层鉴别、含量测定及溶出度测定结果可知,市售不同来源的护肝片质量差异显著；关键工艺的变更对护肝片质量的影响较大,五味子木脂素类成分的提取率与提取各因素间的关系基本呈非线性趋势,最佳工艺条件为4.5倍量85%乙醇提取2次,每次1.5h；护肝片成型工艺中辅料的选择应综合考虑实际生产成本,建议厂家可根据自身经济状况选择二者之一。
Objective:To study 4 kinds of quality evaluation parameters of Hugan Pian, including the thin layer qualitative identification, quantitative determination, HPLC fingerprint and dissolution, and establish the evaluation methods. Hugan Pian on sale was measured to analyze the quality differences of Hugan Pian of different sources; using the established quality evaluation methods, the relationship between the process change and product quality was studied, and the scientific and reasonable ranges of process parameters were proposed, in order to provide a scientific basis on the process optimization of actual production of Hugan Pian.
Methods:Identifying qualitatively on Schisandrae chinensis fructus, Bupleuri radix and Suis fellis pulvis of Hugan Pian by thin layer chromatography; measuring the content of Schisandrol A, Schisantherin A, schisandrin A and y-Schisandrin by high performance liquid chromatography; establishing the fingerprint of Hugan Pian by high performance liquid chromatography and evaluating the quality of Hugan Pian on sale by similarity degree; measuring the dissolution of Schisandrol A, Schisantherin A, schisandrin A and y-Schisandrin by high performance liquid chromatography, drawing the cumulative dissolution curves, fitting the models and calculating the dissolution parameters; considering the content of 4 kinds of lignans effective constituents of Schisandrae chinensis fructus as the evaluation indexes, to study extraction times in the extraction process of Schisandrae chinensis fructus as single factor, and optimize ethanol concentration, extraction time and solvent times of extraction process of Schisandrae chinensis fructus by central composite design-response surface; to study the types of excipient in the molding process of Hugan Pian as single factor, by comparing the aspects of dextrin and lactose on the above quality parameters.
Results:The established thin layer qualitative identification methods of Schisandrae chinensis fructus and Bupleuri radix in Hugan Pian are steady and reliable, available for controlling the quality of Hugan Pian, and there are noticeable differences among sizes and depths of the spots of Hugan Pian of different sources; the established HPLC quantitative determination method of 4 kinds of lignan constituents in Hugan Pian is accurate, simple and feasible, and there are noticeable differences among the contents of 4 kinds of constituents from different Hugan Pian; the established HPLC fingerprint of Hugan Pian is accurate, stable and feasible, which can be used to control the quality of Hugan Pian, and the fingerprint similarity of Hugan Pian of different sources is greater than 0.9; cumulative dissolution curves of 4 kinds of index components in Hugan Pian from different places are noticeablely different, and the results of model fitting of dissolution are also different; the relationship between the extraction rate of lignans of Schisandrae chinensis fructus in Hugan Pian and various factors appears non-linear trend, that is, as ethanol concentration, extraction time and solvent times are increasing, the extraction rate of components climbs up rapidly and then declines slowly, influenced mainly by the ethanol concentration, the better range of extraction process of Schisandrae chinensis fructus in Hugan Pian are the ethanol concentration of 80%to 90%, the extraction time of 1～2.5h, the solvent times of 4 to 6 times, the optimum extraction process is extracting 2 times with 85% ethanol of 4.5 times,1.5h each time; using lactose or dextrin in molding process has no significant effect on quantitative determination of 4 kinds of index constituents, fingerprints and dissolutions, although lactose is better slightly.
Conclusion:The quality evaluation methods are reliable and can be used to control the quality of Hugan Pian; according to the results of thin layer qualitative identification, quantitative determination and dissolution, there are noticeable differences among the quality of Hugan Pian of different sources on sale; the significant process changes of Hugan Pian have great impact on its quality, the relationship between the extraction rate of lignans of Schisandrae chinensis fructus in Hugan Pian and various factors appears non-linear trend, the optimum extraction process is extracting 2 times with 85% ethanol of 4.5 times,1.5h each time; the choice of excipients in the molding process of Hugan Pian should be considered according to the actual production costs.
方法：采用薄层色谱法对护肝片中五味子、柴胡和猪胆粉进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对护肝片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素进行含量测定；采用高效液相色谱法建立护肝片的指纹图谱,并以相似度评价市售护肝片的质量；采用高效液相色谱法测定护肝片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的溶出度,并绘制累积溶出曲线,进行模型拟合并计算溶出参数；以五味子中4种木脂素类有效成分为指标,单因素考察五味子提取工艺中的提取次数,并在此基础上,通过星点设计-效应面法优化五味子提取工艺中的乙醇浓度、提取时间和溶剂倍量；单因素考察护肝片成型工艺中的辅料种类,比较糊精与乳糖对上述各质量参数的影响。
结果：所建立的护肝片中五味子和柴胡的薄层定性鉴别方法稳定可行,可用于护肝片的质量控制,且不同来源的护肝片薄层斑点大小深浅差异显著；所建立的护肝片4种木脂素类成分的HPLC含量测定方法准确简便可行,且测得不同来源的护肝片中4种指标成分的含量差异显著；所建立的护肝片HPLC指纹图谱准确稳定可行,可用于护肝片的质量控制,且不同来源的护肝片指纹图谱相似度大于0.9；不同来源的护肝片4种指标成分的累积溶出曲线均差异显著,且溶出模型拟合结果也不尽相同；护肝片中五味子木脂素类成分的提取率与提取各因素间的关系基本呈非线性趋势,即成分的提取率随乙醇浓度、提取时间和溶剂倍量的提高而呈先迅速增加后缓慢降低的趋势,且主要受乙醇浓度的影响较大,五味子醇提工艺的优化范围为乙醇浓度80%-90%、提取时间1-2.5h、溶剂倍量4-6倍,最佳工艺条件为4.5倍量85%乙醇提取2次,每次1.5h；成型工艺中使用乳糖或糊精对护肝片4种指标成分的含量测定、指纹图谱及溶出行为无显著影响,乳糖相对略优。
结论：所建立的质量评价方法均准确稳定可行,可用于护肝片的质量控制；由薄层鉴别、含量测定及溶出度测定结果可知,市售不同来源的护肝片质量差异显著；关键工艺的变更对护肝片质量的影响较大,五味子木脂素类成分的提取率与提取各因素间的关系基本呈非线性趋势,最佳工艺条件为4.5倍量85%乙醇提取2次,每次1.5h；护肝片成型工艺中辅料的选择应综合考虑实际生产成本,建议厂家可根据自身经济状况选择二者之一。
Objective:To study 4 kinds of quality evaluation parameters of Hugan Pian, including the thin layer qualitative identification, quantitative determination, HPLC fingerprint and dissolution, and establish the evaluation methods. Hugan Pian on sale was measured to analyze the quality differences of Hugan Pian of different sources; using the established quality evaluation methods, the relationship between the process change and product quality was studied, and the scientific and reasonable ranges of process parameters were proposed, in order to provide a scientific basis on the process optimization of actual production of Hugan Pian.
Methods:Identifying qualitatively on Schisandrae chinensis fructus, Bupleuri radix and Suis fellis pulvis of Hugan Pian by thin layer chromatography; measuring the content of Schisandrol A, Schisantherin A, schisandrin A and y-Schisandrin by high performance liquid chromatography; establishing the fingerprint of Hugan Pian by high performance liquid chromatography and evaluating the quality of Hugan Pian on sale by similarity degree; measuring the dissolution of Schisandrol A, Schisantherin A, schisandrin A and y-Schisandrin by high performance liquid chromatography, drawing the cumulative dissolution curves, fitting the models and calculating the dissolution parameters; considering the content of 4 kinds of lignans effective constituents of Schisandrae chinensis fructus as the evaluation indexes, to study extraction times in the extraction process of Schisandrae chinensis fructus as single factor, and optimize ethanol concentration, extraction time and solvent times of extraction process of Schisandrae chinensis fructus by central composite design-response surface; to study the types of excipient in the molding process of Hugan Pian as single factor, by comparing the aspects of dextrin and lactose on the above quality parameters.
Results:The established thin layer qualitative identification methods of Schisandrae chinensis fructus and Bupleuri radix in Hugan Pian are steady and reliable, available for controlling the quality of Hugan Pian, and there are noticeable differences among sizes and depths of the spots of Hugan Pian of different sources; the established HPLC quantitative determination method of 4 kinds of lignan constituents in Hugan Pian is accurate, simple and feasible, and there are noticeable differences among the contents of 4 kinds of constituents from different Hugan Pian; the established HPLC fingerprint of Hugan Pian is accurate, stable and feasible, which can be used to control the quality of Hugan Pian, and the fingerprint similarity of Hugan Pian of different sources is greater than 0.9; cumulative dissolution curves of 4 kinds of index components in Hugan Pian from different places are noticeablely different, and the results of model fitting of dissolution are also different; the relationship between the extraction rate of lignans of Schisandrae chinensis fructus in Hugan Pian and various factors appears non-linear trend, that is, as ethanol concentration, extraction time and solvent times are increasing, the extraction rate of components climbs up rapidly and then declines slowly, influenced mainly by the ethanol concentration, the better range of extraction process of Schisandrae chinensis fructus in Hugan Pian are the ethanol concentration of 80%to 90%, the extraction time of 1～2.5h, the solvent times of 4 to 6 times, the optimum extraction process is extracting 2 times with 85% ethanol of 4.5 times,1.5h each time; using lactose or dextrin in molding process has no significant effect on quantitative determination of 4 kinds of index constituents, fingerprints and dissolutions, although lactose is better slightly.
Conclusion:The quality evaluation methods are reliable and can be used to control the quality of Hugan Pian; according to the results of thin layer qualitative identification, quantitative determination and dissolution, there are noticeable differences among the quality of Hugan Pian of different sources on sale; the significant process changes of Hugan Pian have great impact on its quality, the relationship between the extraction rate of lignans of Schisandrae chinensis fructus in Hugan Pian and various factors appears non-linear trend, the optimum extraction process is extracting 2 times with 85% ethanol of 4.5 times,1.5h each time; the choice of excipients in the molding process of Hugan Pian should be considered according to the actual production costs.
引文
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[s].北京：中国医药科技出版社,2010：760-761.
[2]汪友永,史美甫,熊方武.病毒性肝炎药物专辑[M].北京：中国医药科技出版社,1994：124-126
[3]蒋学禄,罗杏娟,江彩珍.护肝片治疗药物性肝细胞损伤22例临床分析[J].中医药学刊,2006,24(5)：806.
[4]山本昌弘,等.关于柴胡剂治疗慢性肝炎的基础临床研究[J].国外医学中医中药分册,1983,5(6)：49.
[5]尾关恒雄,等.慢性肝炎的中药治疗[M].国外医学中医中药分册,1984,6(2)：12.
[6]熊玉兰,周钟鸣,王彦礼,等.茵陈有效成分对四氯化碳损伤的原代培养大鼠肝细胞的作用[J].中国实验方剂学杂志,2002,8(1)33.
[7]浅野宏.中药抗肝损伤的成分[J].药学通报,1985,20(7)：415.
[8]蒋锡源,杨珍珠,胡志军,等.50种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制HbsAg活性的比较[J].现代应用药学,1992,9(5)：208-211.
[9]王本祥.现代中药药理学[M].天津科学技术出版社,1999：221.
[10]苗明三.食疗中药药物学[M].北京：科学出版社,2001：525.
[11]廖虎平.护肝片治疗糖尿病脂肪肝伴肝功能异常的临床研究[J].中国医药导报,2007,4(12)：78.
[12]全红,蔺莉莉,张洪君,等.护肝片中五味子提取物p-环糊精包合工艺优选研究[J].中国药业,2009,45-46.
[13]全红,鲁一,张洪君,等.护肝片中北五味子超临界C02萃取工艺的研究[J].中国中医药科技,2008,433.
[14]蔺莉莉.护肝片新工艺和质量标准的研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库,2009,(11)：53.
[15]安玉明.护肝片醇提部分提取工艺的考察和优选[J].人参研究,2000,9(3)：39.
[16]许哲,朱国庆.五味子提取工艺研究[J].黑龙江医药,2010,23(4)：574.
[17]林慧伟.护肝片薄膜包衣工艺条件的摸索[J].海峡药学,2008,20(9)：22.
[18]邱智东,林哲,王凯.复方护肝片制剂成型工艺研究[C].中华中医药学会制剂分会学术交流会论文汇编,2003.
[19]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].广州：广东科技出版社,1995：502.
[20]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005： 472.
[21]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000：474.
[22]黄松,陶艳,王德杭,等.护肝片质量标准的提高[J].中国药师,2008,11(8)：951-952.
[23]全红,蔺莉莉,张洪君,等.新工艺护肝片的质量标准[J].中国药师,2010,13(5),661.
[24]王文清,汪秋兰,冯尧,等.反相高效液相色谱法测定茵陈药材及其制剂中绿原酸含量[J].医药导报,2007,26(2)：189.
[25]王敏春,王苑桃,温彩喜.HPLC测定护肝片中绿原酸的含量[J].陕西中医,2008,29(7)：894.
[26]陈福星.HPLC法测定护肝片中茵陈的含量[J].海峡药学,2007,19(5)：44.
[27]杜英峰,袁志芳,王春英,等.高效液相色谱法同时测定护肝片中五味子甲素和五味子乙素的含量[J].药物分析杂志,2004,24(4)：397.
[28]王薇丹,叶正良,宋丽丽,等.五味子液相色谱指纹图谱的研究[J].中国中药杂志,2010,35(21)：2871-2873.
[29]冯伟,韩华迎.五味子水溶性成分的HPLC指纹图谱研究[J].中成药,2006,28(4)：477.
[30]付绍平,杨博,陈彤,等.北五味子的液相色谱指纹图谱的建立[J].色谱,2008,26(1)：64.
[31]李军,姜华,尹卫平.柴胡及其煎剂中皂苷类成分的高效液相指纹图谱研究[J].时珍国医国药,2009,20(9)：2205-2206.
[32]林东昊,茅仁刚,王智华,等.23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a,c,d含量的RP-HPLC测定[J].药物分析杂志,2004,24(5)：479.
[33]赵丽,钟巧妮,雷玉霞,等.柴胡总苷高效液相色谱指纹图谱与主成分含量测定[J].医药导报,2008,27(3)：323.
[34]刘和平,谢培山,田润涛.柴胡属药材皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究[J].中药新药与临床药理,2008,19(1)：38.
[35]王凤云,江滨,曾元儿,等.绵茵陈药材高效液相色谱指纹图谱研究[J].广东药学院学报,2008,24(2)：118-120.
[36]邓湘昱,孙国祥.茵陈的HPLC指纹图谱研究[J].中成药,2005,27(3)：253-255.
[37]郭方遒,梁逸曾,黄兰芳,等.茵陈挥发油GC-MS指纹图谱分析[J].高等学校化学学报,2005,26(11)：2027-2030.
[38]肖雪,罗国安,王义明,等.中药板蓝根高效液相色谱法指纹图谱研究[J].江西中医学院学报,2010,22(3)：67-69.
[39]林文艳,莫建霞,于荣敏,等.板蓝根药材HPLC指纹图谱研究[J].中国现代应用药学杂志,2005,22(5)：378.
[40]全红,鲁一,张洪君,等.新工艺护肝片对实验性小鼠急慢性肝损伤的保护作用[J].中医药信息,2009,26(6)：107.
[41]白霜,金玲.护肝片预防小鼠酒精性肝损伤作用的实验研究.中国实验方剂学杂志,2008,14(6)：64.
[42]姚凤云.护肝片治疗酒精性肝病的实验研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库,2004,44.
[43]吴义春,吴强,杨雁,等.HSC的活化、增殖与TGF-β1及其Ⅰ型受体在中晚期纤维化肝组织中的改变及护肝片对其的影响[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2007,16(1)： 80.
[44]陈治安,向恩.护肝片预防抗结核药物所致肝损害的临床观察[J].中国现代药物应用,2010,4(9)：171.
[45]李丽梅.护肝片治疗脂肪肝58例临床分析[J].中外医疗,2008,(30)：112.
[46]李鸿霞.护肝片治疗脂肪肝的临床体会[J].中国社区医师,2010,12(21)：176.
[47]朱萍.护肝片治疗慢性乙型肝炎60例疗效分析[J].职业与健康,2008,24(2)：193.
[48]王跃.护肝片联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床疗效观察[J].中国微生态学杂志,2005,27(6)：474.
[49]朱正辉.干扰素-γ联合护肝片对慢性肝炎肝硬化患者肝纤维化指标的影响[J].现代医药卫生,2006,22(23)：3425.
[50]王浴生.中药药理与应用[M].北京：人民卫生出版社,1983,177.
[51]张彩丽,贺学礼.五味子研究进展[J].保定师范专科学校学报,2004,17(4)：37-39.
[52]刘超,朱宏吉.五味子研究现状[J].中国医药导报,2007,4(32)：15-16.
[53]刘继永,王英平,刘洪章.五味子化学成分及药理研究进展[J].特产研究,2005,(3)： 49-52.
[54]可成友,康宏玲,高珍,等.北五味子主要成分测定方法的研究进展[J].中国卫生检验杂志,2007,17(4)：754.
[55]田利鲜.柴胡的药理作用和临床运用[J].湖北中医杂志,2008,30(1)：59-60.
[56]匡海学.中药化学[M].北京：中国中医药出版社,2003,260-261.
[57]程玲.柴胡主要活性成分的药理作用研究[C].第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集,2009,464.
[58]安玉明,接传胤,祝世伟.柴胡的研究进展[J].人参研究,2001,13(1)：12-13.
[59]叶晓平,宋纯清.柴胡皂苷药理研究进展[J].中草药,2004,35(12)：1435.
[60]金顺姬.柴胡的药理作用及临床应用[J].现代医药卫生,2009,25(7)：1074-1075.
[61]张林丽.茵陈的药理研究和临床应用近况[J].广西医学,2003,25(11)：2184-2185.
[62]谢韬,梁敬钰,刘净.茵陈化学成分和药理作用研究进展[J].海峡药学,2004,16(1)： 9-10.
[63]孟繁钦,吴宜艳,雷涛,等.茵陈的药理作用及临床应用进展[J].牡丹江医学院学报,2009,30(1)：46-47.
[64]谢田,牛孝亮,刘占滨.茵陈的药理作用及临床应用进展[J].黑龙江中医药,2004,(4)：50-51.
[65]雷黎明,潘清平.板蓝根化学、药理、质量及提取方法的研究进展[J].时珍国医国药,2007,18(10)：2578-2580.
[66]彭爱红.板蓝根药理活性成分及临床应用进展[J].中国当代医药,2010,17(12)：13.
[67]李楚源,曾令杰.板蓝根研究进展[J].现代中药研究与实践,2005,19(3)：51-52.
[68]施霞,倪华,刘云海.板蓝根化学成分及其药理活性研究进展[J].中国医院药学杂志,2006,26(11)：1397-1398.
[69]何立巍,李祥,陈建伟.板蓝根抗病毒有效成分研究进展[J].中医药信息,2005,22(5)： 37-38.
[70]刘涛,耿健.猪胆汁的药理与临床应用[J].南京中医学院学报,1992,8(3)：188.
[71]王凯平,石朝周.动物胆汁药用研究的概况与展望[J].中国中医药科技,2000,7(5)：350-351.
[72]游元元,万德光.动物胆汁药用研究进展[J].贵阳中医学院学报,2007,29(4)：60.
[73]闫彦芳,张壮,王硕仁,等.猪、熊胆粉主要成分对ECV304细胞缺氧损伤保护作用的比较[J].北京中医药大学学报,2003,26(1)：33.
[74]李敏.绿豆化学成分及药理作用的研究概况[J].上海中医药杂志,2001,(5)：47-49.
[75]汪少芸,叶秀云,饶平凡.绿豆生物活性物质及功能的研究进展[J].中国食品学报,2004,4(1)：98-101.
[76]国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)[J].中国药品标准,2000,(4)：157.
[77]谢培山.中药质量控制的发展趋势[J].中医药现代化,2003,5(3)：56-59.
[78]王苏静,常世卿.中药色谱指纹图谱技术与应用[M].郑州大学出版社,2008,1-8.
[79]周晋,贺福元,罗杰英.中药(复方)指纹图谱研究进展[J].中医药导报,2007,13(1)： 87-89.
[80]刘和平,谢培山,田润涛.柴胡属药材皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究[J].中医新药与临床药理,2009,19(1)：38-4.
[81]韩哗华,霍飞凤,杨悠悠,等.中药指纹图谱的某些进展和展望[J].色谱,2008, 26(2)： 142-151.
[82]Brian T. Schaneberg Sara Crockett, Erdal Bedir, et. al. The role of chemical fingerprinting application to Ephedra[J]. Phytochemistry,2003,62(6):911-918.
[83]魏刚,李薇,徐鸿华GC-MS建立石牌广藿香挥发油指纹图谱方法学研究[J].中成药,2003,25(2)：91.
[84]赵大伟,孙丽梅,刘海燕,等.高效毛细管电泳与中药指纹图谱[J].临床荟萃,2009,18(14)：269-270.
[85]孙国祥,史香芬.玄参的毛细管电泳指纹图谱研究[J].中药药学,2007,7(7)：540-544.
[86]顾铭,欧阳藩,苏志国.高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试建立中药指纹图谱[J].生物工程学报,2008,19(6)：740-744.
[87]罗国安,王义明,曹进.多维多息特征谱及其应用[J].中成药,2000,22(6)：395-396.
[88]乔善磊.中药色谱指纹图谱相似度评价研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库,2004，5-49.
[89]詹雪艳,史新元,段天璇,等.色谱指纹图谱相似度方法的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(2)：248-250.
[90]倪力军,郭佳,曾晓虹,等.指纹图谱评价中药质量的方法学考证[J].中药新药与临床药理,2006,17(2)：117-119.
[91]陈波,康海宁,韩超,等.NMR指纹图谱与模式识别方法在食物分析中的应用[J].波谱学杂志,2006,23(3)：397-407.
[92]王文燕,赵强,张铁军,等.决明子的HPLC指纹图谱及模式识别研究[J].中草药,2009,40(10)：1640-1641.
[93]Massart D. L., Vandeginste B. G. M., Buydens L. M. C., et al. Handbook of Chemometrics and Qualimetrics, Elsevier, Amsterdam,1997.
[94]李新蕊.主成分分析、因子分析、聚类分析的比较与应用[J].山东教育学院学报,2007,(6)：23-26.
[95]Siddhartha G, Thomas B R. Thermal Data for Natural and Synthetic Fuels. New York: Marcel Dekker,1998:55.
[96]刘万仓,孙磊,于孟琦,等.中药指纹图谱模式识别研究进展[J].国际药学研究杂志,2010,37(6)：447.
[97]陈根顺,徐丽芳,李鹏.草珊瑚的HPLC指纹图谱研究[J].中草药,2011,42(2)：295.
[98]姜健,杨宝灵,苏明,等.基于主成分分析和人工神经网络的五味子质量鉴定方法研究[J].红外,2009,30(12)：39.
[1]徐丽华,黄芳,陈婷,等.板蓝根中的抗病毒活性成分[J].中国天然药物,2005,3(6)：359-360.
[2]陈帅,李燕,孙秋实,等.柴胡炮制后皂苷成分的变化分析[J].中成药,2010,32(5)：793-799.
[3]詹雪艳,史新元,段天璇,等.色谱指纹图谱相似度方法的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(2)：248-250.
[2]汪友永,史美甫,熊方武.病毒性肝炎药物专辑[M].北京：中国医药科技出版社,1994：124-126
[3]蒋学禄,罗杏娟,江彩珍.护肝片治疗药物性肝细胞损伤22例临床分析[J].中医药学刊,2006,24(5)：806.
[4]山本昌弘,等.关于柴胡剂治疗慢性肝炎的基础临床研究[J].国外医学中医中药分册,1983,5(6)：49.
[5]尾关恒雄,等.慢性肝炎的中药治疗[M].国外医学中医中药分册,1984,6(2)：12.
[6]熊玉兰,周钟鸣,王彦礼,等.茵陈有效成分对四氯化碳损伤的原代培养大鼠肝细胞的作用[J].中国实验方剂学杂志,2002,8(1)33.
[7]浅野宏.中药抗肝损伤的成分[J].药学通报,1985,20(7)：415.
[8]蒋锡源,杨珍珠,胡志军,等.50种治疗肝炎中草药与制剂体外抑制HbsAg活性的比较[J].现代应用药学,1992,9(5)：208-211.
[9]王本祥.现代中药药理学[M].天津科学技术出版社,1999：221.
[10]苗明三.食疗中药药物学[M].北京：科学出版社,2001：525.
[11]廖虎平.护肝片治疗糖尿病脂肪肝伴肝功能异常的临床研究[J].中国医药导报,2007,4(12)：78.
[12]全红,蔺莉莉,张洪君,等.护肝片中五味子提取物p-环糊精包合工艺优选研究[J].中国药业,2009,45-46.
[13]全红,鲁一,张洪君,等.护肝片中北五味子超临界C02萃取工艺的研究[J].中国中医药科技,2008,433.
[14]蔺莉莉.护肝片新工艺和质量标准的研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库,2009,(11)：53.
[15]安玉明.护肝片醇提部分提取工艺的考察和优选[J].人参研究,2000,9(3)：39.
[16]许哲,朱国庆.五味子提取工艺研究[J].黑龙江医药,2010,23(4)：574.
[17]林慧伟.护肝片薄膜包衣工艺条件的摸索[J].海峡药学,2008,20(9)：22.
[18]邱智东,林哲,王凯.复方护肝片制剂成型工艺研究[C].中华中医药学会制剂分会学术交流会论文汇编,2003.
[19]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].广州：广东科技出版社,1995：502.
[20]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005： 472.
[21]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2000：474.
[22]黄松,陶艳,王德杭,等.护肝片质量标准的提高[J].中国药师,2008,11(8)：951-952.
[23]全红,蔺莉莉,张洪君,等.新工艺护肝片的质量标准[J].中国药师,2010,13(5),661.
[24]王文清,汪秋兰,冯尧,等.反相高效液相色谱法测定茵陈药材及其制剂中绿原酸含量[J].医药导报,2007,26(2)：189.
[25]王敏春,王苑桃,温彩喜.HPLC测定护肝片中绿原酸的含量[J].陕西中医,2008,29(7)：894.
[26]陈福星.HPLC法测定护肝片中茵陈的含量[J].海峡药学,2007,19(5)：44.
[27]杜英峰,袁志芳,王春英,等.高效液相色谱法同时测定护肝片中五味子甲素和五味子乙素的含量[J].药物分析杂志,2004,24(4)：397.
[28]王薇丹,叶正良,宋丽丽,等.五味子液相色谱指纹图谱的研究[J].中国中药杂志,2010,35(21)：2871-2873.
[29]冯伟,韩华迎.五味子水溶性成分的HPLC指纹图谱研究[J].中成药,2006,28(4)：477.
[30]付绍平,杨博,陈彤,等.北五味子的液相色谱指纹图谱的建立[J].色谱,2008,26(1)：64.
[31]李军,姜华,尹卫平.柴胡及其煎剂中皂苷类成分的高效液相指纹图谱研究[J].时珍国医国药,2009,20(9)：2205-2206.
[32]林东昊,茅仁刚,王智华,等.23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a,c,d含量的RP-HPLC测定[J].药物分析杂志,2004,24(5)：479.
[33]赵丽,钟巧妮,雷玉霞,等.柴胡总苷高效液相色谱指纹图谱与主成分含量测定[J].医药导报,2008,27(3)：323.
[34]刘和平,谢培山,田润涛.柴胡属药材皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究[J].中药新药与临床药理,2008,19(1)：38.
[35]王凤云,江滨,曾元儿,等.绵茵陈药材高效液相色谱指纹图谱研究[J].广东药学院学报,2008,24(2)：118-120.
[36]邓湘昱,孙国祥.茵陈的HPLC指纹图谱研究[J].中成药,2005,27(3)：253-255.
[37]郭方遒,梁逸曾,黄兰芳,等.茵陈挥发油GC-MS指纹图谱分析[J].高等学校化学学报,2005,26(11)：2027-2030.
[38]肖雪,罗国安,王义明,等.中药板蓝根高效液相色谱法指纹图谱研究[J].江西中医学院学报,2010,22(3)：67-69.
[39]林文艳,莫建霞,于荣敏,等.板蓝根药材HPLC指纹图谱研究[J].中国现代应用药学杂志,2005,22(5)：378.
[40]全红,鲁一,张洪君,等.新工艺护肝片对实验性小鼠急慢性肝损伤的保护作用[J].中医药信息,2009,26(6)：107.
[41]白霜,金玲.护肝片预防小鼠酒精性肝损伤作用的实验研究.中国实验方剂学杂志,2008,14(6)：64.
[42]姚凤云.护肝片治疗酒精性肝病的实验研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库,2004,44.
[43]吴义春,吴强,杨雁,等.HSC的活化、增殖与TGF-β1及其Ⅰ型受体在中晚期纤维化肝组织中的改变及护肝片对其的影响[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2007,16(1)： 80.
[44]陈治安,向恩.护肝片预防抗结核药物所致肝损害的临床观察[J].中国现代药物应用,2010,4(9)：171.
[45]李丽梅.护肝片治疗脂肪肝58例临床分析[J].中外医疗,2008,(30)：112.
[46]李鸿霞.护肝片治疗脂肪肝的临床体会[J].中国社区医师,2010,12(21)：176.
[47]朱萍.护肝片治疗慢性乙型肝炎60例疗效分析[J].职业与健康,2008,24(2)：193.
[48]王跃.护肝片联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床疗效观察[J].中国微生态学杂志,2005,27(6)：474.
[49]朱正辉.干扰素-γ联合护肝片对慢性肝炎肝硬化患者肝纤维化指标的影响[J].现代医药卫生,2006,22(23)：3425.
[50]王浴生.中药药理与应用[M].北京：人民卫生出版社,1983,177.
[51]张彩丽,贺学礼.五味子研究进展[J].保定师范专科学校学报,2004,17(4)：37-39.
[52]刘超,朱宏吉.五味子研究现状[J].中国医药导报,2007,4(32)：15-16.
[53]刘继永,王英平,刘洪章.五味子化学成分及药理研究进展[J].特产研究,2005,(3)： 49-52.
[54]可成友,康宏玲,高珍,等.北五味子主要成分测定方法的研究进展[J].中国卫生检验杂志,2007,17(4)：754.
[55]田利鲜.柴胡的药理作用和临床运用[J].湖北中医杂志,2008,30(1)：59-60.
[56]匡海学.中药化学[M].北京：中国中医药出版社,2003,260-261.
[57]程玲.柴胡主要活性成分的药理作用研究[C].第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集,2009,464.
[58]安玉明,接传胤,祝世伟.柴胡的研究进展[J].人参研究,2001,13(1)：12-13.
[59]叶晓平,宋纯清.柴胡皂苷药理研究进展[J].中草药,2004,35(12)：1435.
[60]金顺姬.柴胡的药理作用及临床应用[J].现代医药卫生,2009,25(7)：1074-1075.
[61]张林丽.茵陈的药理研究和临床应用近况[J].广西医学,2003,25(11)：2184-2185.
[62]谢韬,梁敬钰,刘净.茵陈化学成分和药理作用研究进展[J].海峡药学,2004,16(1)： 9-10.
[63]孟繁钦,吴宜艳,雷涛,等.茵陈的药理作用及临床应用进展[J].牡丹江医学院学报,2009,30(1)：46-47.
[64]谢田,牛孝亮,刘占滨.茵陈的药理作用及临床应用进展[J].黑龙江中医药,2004,(4)：50-51.
[65]雷黎明,潘清平.板蓝根化学、药理、质量及提取方法的研究进展[J].时珍国医国药,2007,18(10)：2578-2580.
[66]彭爱红.板蓝根药理活性成分及临床应用进展[J].中国当代医药,2010,17(12)：13.
[67]李楚源,曾令杰.板蓝根研究进展[J].现代中药研究与实践,2005,19(3)：51-52.
[68]施霞,倪华,刘云海.板蓝根化学成分及其药理活性研究进展[J].中国医院药学杂志,2006,26(11)：1397-1398.
[69]何立巍,李祥,陈建伟.板蓝根抗病毒有效成分研究进展[J].中医药信息,2005,22(5)： 37-38.
[70]刘涛,耿健.猪胆汁的药理与临床应用[J].南京中医学院学报,1992,8(3)：188.
[71]王凯平,石朝周.动物胆汁药用研究的概况与展望[J].中国中医药科技,2000,7(5)：350-351.
[72]游元元,万德光.动物胆汁药用研究进展[J].贵阳中医学院学报,2007,29(4)：60.
[73]闫彦芳,张壮,王硕仁,等.猪、熊胆粉主要成分对ECV304细胞缺氧损伤保护作用的比较[J].北京中医药大学学报,2003,26(1)：33.
[74]李敏.绿豆化学成分及药理作用的研究概况[J].上海中医药杂志,2001,(5)：47-49.
[75]汪少芸,叶秀云,饶平凡.绿豆生物活性物质及功能的研究进展[J].中国食品学报,2004,4(1)：98-101.
[76]国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)[J].中国药品标准,2000,(4)：157.
[77]谢培山.中药质量控制的发展趋势[J].中医药现代化,2003,5(3)：56-59.
[78]王苏静,常世卿.中药色谱指纹图谱技术与应用[M].郑州大学出版社,2008,1-8.
[79]周晋,贺福元,罗杰英.中药(复方)指纹图谱研究进展[J].中医药导报,2007,13(1)： 87-89.
[80]刘和平,谢培山,田润涛.柴胡属药材皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究[J].中医新药与临床药理,2009,19(1)：38-4.
[81]韩哗华,霍飞凤,杨悠悠,等.中药指纹图谱的某些进展和展望[J].色谱,2008, 26(2)： 142-151.
[82]Brian T. Schaneberg Sara Crockett, Erdal Bedir, et. al. The role of chemical fingerprinting application to Ephedra[J]. Phytochemistry,2003,62(6):911-918.
[83]魏刚,李薇,徐鸿华GC-MS建立石牌广藿香挥发油指纹图谱方法学研究[J].中成药,2003,25(2)：91.
[84]赵大伟,孙丽梅,刘海燕,等.高效毛细管电泳与中药指纹图谱[J].临床荟萃,2009,18(14)：269-270.
[85]孙国祥,史香芬.玄参的毛细管电泳指纹图谱研究[J].中药药学,2007,7(7)：540-544.
[86]顾铭,欧阳藩,苏志国.高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试建立中药指纹图谱[J].生物工程学报,2008,19(6)：740-744.
[87]罗国安,王义明,曹进.多维多息特征谱及其应用[J].中成药,2000,22(6)：395-396.
[88]乔善磊.中药色谱指纹图谱相似度评价研究[D].中国优秀硕士学位论文全文数据库,2004，5-49.
[89]詹雪艳,史新元,段天璇,等.色谱指纹图谱相似度方法的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(2)：248-250.
[90]倪力军,郭佳,曾晓虹,等.指纹图谱评价中药质量的方法学考证[J].中药新药与临床药理,2006,17(2)：117-119.
[91]陈波,康海宁,韩超,等.NMR指纹图谱与模式识别方法在食物分析中的应用[J].波谱学杂志,2006,23(3)：397-407.
[92]王文燕,赵强,张铁军,等.决明子的HPLC指纹图谱及模式识别研究[J].中草药,2009,40(10)：1640-1641.
[93]Massart D. L., Vandeginste B. G. M., Buydens L. M. C., et al. Handbook of Chemometrics and Qualimetrics, Elsevier, Amsterdam,1997.
[94]李新蕊.主成分分析、因子分析、聚类分析的比较与应用[J].山东教育学院学报,2007,(6)：23-26.
[95]Siddhartha G, Thomas B R. Thermal Data for Natural and Synthetic Fuels. New York: Marcel Dekker,1998:55.
[96]刘万仓,孙磊,于孟琦,等.中药指纹图谱模式识别研究进展[J].国际药学研究杂志,2010,37(6)：447.
[97]陈根顺,徐丽芳,李鹏.草珊瑚的HPLC指纹图谱研究[J].中草药,2011,42(2)：295.
[98]姜健,杨宝灵,苏明,等.基于主成分分析和人工神经网络的五味子质量鉴定方法研究[J].红外,2009,30(12)：39.
[1]徐丽华,黄芳,陈婷,等.板蓝根中的抗病毒活性成分[J].中国天然药物,2005,3(6)：359-360.
[2]陈帅,李燕,孙秋实,等.柴胡炮制后皂苷成分的变化分析[J].中成药,2010,32(5)：793-799.
[3]詹雪艳,史新元,段天璇,等.色谱指纹图谱相似度方法的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(2)：248-250.