蜡梅的离体培养及器官发生研究
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摘要
蜡梅Chimonanthus praecox(L.) Link是蜡梅科蜡梅属植物,是第三纪孑遗植物,特产于我国。蜡梅是稀有的冬季开花植物,具有较高的观赏价值和经济价值,是我国传统名花。本文以现有观赏蜡梅优良品种作为植物组织培养材料,针对芽尖和具腋芽的茎段二种外植体,对采样时期、外植体灭菌、芽器官伸长和根器官发育情况等进行了研究,主要研究结果如下：
1.蜡梅最适采样时期为5月。此时,蜡梅外植体的污染率低,保绿率高。
2.蜡梅外植体的选择。对不同外植体类型来说,芽尖的保绿率比茎段高,污染率低于茎段。对去除顶芽的枝条不同部位而言,枝条上部的污染率低,保绿率高。表明,芽尖和枝条上部适合作为蜡梅组织培养的外植体。
3.蜡梅外植体的最佳灭菌处理：先用75%酒精处理30s,再用0.1%升汞灭菌处理5-7 min。
4.在相同的培养基上,枝条上部的保绿情况以及芽伸长状况均优于枝条中下部。
5.诱导芽尖的芽器官伸长的最适培养基为：MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+琼脂7%+蔗糖3%,芽伸长率为8.00%。诱导枝条上部芽伸长的最适培养基为：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+琼脂7%+蔗糖3%,其芽伸长率为52.63%。
6.对基本培养基的探讨。结果表明,1/2MS(即大量元素减半)作为基本培养基,优于1/4MS基本培养基,其蜡梅外植体的芽伸长率高,保绿率高。
7.蜡梅茎段外植体在6-BA浓度和KT浓度不变的情况下,随NAA浓度增大,愈化率、保绿率及芽伸长率升高。KT与NAA浓度不变的条件下,茎段外植体随6-BA的浓度增加,愈化率、保绿率及芽伸长率降低。适宜的6-BA浓度为：1.0 mg/L,NAA浓度为：0.3 mg/L。
The shrub wintersweet (Chimonanthus praecox Link) belongs to the Calycanthaceae family. It is the plant of tertiary relict species, and the plant is native to China. Wintersweet is a rare species that flowers during winter in the China, which has the high of ornamental and economic value. In this paper, we used the good variety of wintersweet as plant tissue culture material and utilized the two kinds of explants like shoot tip and axillary buds to study the technology and methods of in vitro including the time of collecting explants, type of explant, sterilization treatment, development of axillary bud and rooting.The main results are as follows:
1. May is the optimum season to get explants. In this month, the contamination rate is the lowest, the maintaining green rate is the highest.
2. For the different types of explants, the maintaining rate of shoot tips is higher than that of the stem segments, and the contamination rate is lower than that of the stem segments. For the different parts of branches without shoot tips, contamination rate of the upper parts is the lowest and the maintaining green rate is highest. It is shown that the shoot tips and the top of branches are suitable for tissue culture of C. praecox explants.
3. The best sterilization effect was that the explants were immersed in 75% alcohol for 30 s, then were transferred into 0.1%HgCl2 for 5～7 min.
4. In the same medium, both maintaining green and elongation of the upper branches were better than those of the middle and bottom parts.
5. The optional medium composition for the elongation of shoot tips was like MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+ Agar7%+Sugar3% with the rate of 8.00%. And that of axillary buds was like MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+Agar7%+Sugar3% with the rate of 52.63%.
6. In basic medium, it was showed that the 1/2MS (1/2 of macroelements) as basic medium was the superior to MS,1/4MS due to the high frequencies of shoot elongation and maintaining green.
7. In the same concentration of 6-BA and KT, the maintaining green rate, the shoot elongation rate and the callus rate were increased with the increase of NAA concentration. In the same concentration of KT and NAA, the maintaining green rate, the shoot elongation rate and the callus rate were lowered with the increase of 6-BA concentration. The optional concentrations of 6-BA and NAA were 1.0 mg/L and 0.3 mg/L, respectively.
1.蜡梅最适采样时期为5月。此时,蜡梅外植体的污染率低,保绿率高。
2.蜡梅外植体的选择。对不同外植体类型来说,芽尖的保绿率比茎段高,污染率低于茎段。对去除顶芽的枝条不同部位而言,枝条上部的污染率低,保绿率高。表明,芽尖和枝条上部适合作为蜡梅组织培养的外植体。
3.蜡梅外植体的最佳灭菌处理：先用75%酒精处理30s,再用0.1%升汞灭菌处理5-7 min。
4.在相同的培养基上,枝条上部的保绿情况以及芽伸长状况均优于枝条中下部。
5.诱导芽尖的芽器官伸长的最适培养基为：MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+琼脂7%+蔗糖3%,芽伸长率为8.00%。诱导枝条上部芽伸长的最适培养基为：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+琼脂7%+蔗糖3%,其芽伸长率为52.63%。
6.对基本培养基的探讨。结果表明,1/2MS(即大量元素减半)作为基本培养基,优于1/4MS基本培养基,其蜡梅外植体的芽伸长率高,保绿率高。
7.蜡梅茎段外植体在6-BA浓度和KT浓度不变的情况下,随NAA浓度增大,愈化率、保绿率及芽伸长率升高。KT与NAA浓度不变的条件下,茎段外植体随6-BA的浓度增加,愈化率、保绿率及芽伸长率降低。适宜的6-BA浓度为：1.0 mg/L,NAA浓度为：0.3 mg/L。
The shrub wintersweet (Chimonanthus praecox Link) belongs to the Calycanthaceae family. It is the plant of tertiary relict species, and the plant is native to China. Wintersweet is a rare species that flowers during winter in the China, which has the high of ornamental and economic value. In this paper, we used the good variety of wintersweet as plant tissue culture material and utilized the two kinds of explants like shoot tip and axillary buds to study the technology and methods of in vitro including the time of collecting explants, type of explant, sterilization treatment, development of axillary bud and rooting.The main results are as follows:
1. May is the optimum season to get explants. In this month, the contamination rate is the lowest, the maintaining green rate is the highest.
2. For the different types of explants, the maintaining rate of shoot tips is higher than that of the stem segments, and the contamination rate is lower than that of the stem segments. For the different parts of branches without shoot tips, contamination rate of the upper parts is the lowest and the maintaining green rate is highest. It is shown that the shoot tips and the top of branches are suitable for tissue culture of C. praecox explants.
3. The best sterilization effect was that the explants were immersed in 75% alcohol for 30 s, then were transferred into 0.1%HgCl2 for 5～7 min.
4. In the same medium, both maintaining green and elongation of the upper branches were better than those of the middle and bottom parts.
5. The optional medium composition for the elongation of shoot tips was like MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+ Agar7%+Sugar3% with the rate of 8.00%. And that of axillary buds was like MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+Agar7%+Sugar3% with the rate of 52.63%.
6. In basic medium, it was showed that the 1/2MS (1/2 of macroelements) as basic medium was the superior to MS,1/4MS due to the high frequencies of shoot elongation and maintaining green.
7. In the same concentration of 6-BA and KT, the maintaining green rate, the shoot elongation rate and the callus rate were increased with the increase of NAA concentration. In the same concentration of KT and NAA, the maintaining green rate, the shoot elongation rate and the callus rate were lowered with the increase of 6-BA concentration. The optional concentrations of 6-BA and NAA were 1.0 mg/L and 0.3 mg/L, respectively.
引文
[1]王忠主编.植物生理学[M].北京：中国农业出版社,2000
[2]陈正华主编.木本植物组织培养及其应用[M].北京：高等教育出版社,1986
[3]谭文澄,戴策刚主编.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社,1997
[4]黄学林,李筱菊编著.高等植物组织离体培养的形态建成及其调控[M].北京：科学出版社,1995
[5]王蒂主编.植物组织培养[M].北京：中国农业出版社,2004
[6]李浚明.植物组织培养教程[M].北京：北京农业大学出版社,1992
[7]常海飞.晚蜜桃组织培养及植株再生研究[D].延安大学硕士学位论文,2009,1-6
[8]Chawla HS. Introduction to Plant Biotechnology[M]. Chemical Industry Press,2005
[9]李凌明.植物组织培养教程[M].北京：北京农业大学出版社,1991
[10]付润民编著.果树瓜类组织培养[M].陕西科学出版社,1988,107-108
[11]北京林业大学园林系花卉教研组编.花卉学[M].北京：中国林业出版社,1990
[12]谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社,1991
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