细菌组合的固氮、解磷与抗病能力及不同培养条件的影响
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摘要
微生物制剂对可持续农业发展和生产安全食品有重要意义。本论文以已获得的具有抗病作用的稳定混合细菌组合为对象，研究其固氮、解磷作用及不同培养条件的影响，并对细菌功能的协同现象和抗病物质性质进行了初步研究。主要结果为：
1、确定细菌组合C15除对多种植物病原菌有抑制作用外，还具有较高的固氮酶活性(67.0nmol C_2H_4·h~(-1)·mg~(-1)Pr)、溶解磷酸钙能力(19.9mg P·mg~(-1)Pr)和分解卵磷脂的能力(9.1mg P·mg~(-1)Pr)。其它9个组合都能溶解磷酸钙和分解卵磷脂，C15对磷酸钙的溶解最高，达到19.9mg P·mg~(-1)Pr，C7对卵磷脂的分解最高，达到14.8mg P·mg~(-1)Pr。
2、发现组合A3、A5、B5、B10、C5、C7、C15对花生青枯病(Pseudomonas solanaceaxum Smith)或仙人掌斑点病(Erwinia carotovora subsp.carotovora)具有稳定的抗病协同作用。因此，抗病协同性在细菌之间有一定的普遍性。
3、利用葡萄糖和尿素作为C7的碳氮源、可溶性淀粉和NH_4NO_3作为C15的碳氮源有利于提高生物量和增加抗病活性。C7和C15在pH6-9范围内均可生长，分别在pH7.0和8.5时生长量最大。较大通气量能显著增加C7和C15发酵液的生物量。葡萄糖强烈促进细菌组合C7和C15分解卵磷脂的活性，乳糖显著促进C7和C15溶解磷酸三钙的能力。
4、本研究改进了测定细菌解磷和溶磷活性的方法，即离心收集发酵液菌体，以乙醚清洗剩余的卵磷脂，以稀盐酸清洗剩余的磷酸钙，消煮细菌细胞，然后进行钼锑抗比色测定。克服了对培养物上清液直接测定而忽略细菌生长对磷利用的弊端。
5、对C7具有抑制植物病原菌的物质在pH值为2-9、温度为30℃-90℃处理30min时其抑菌活性均不丧失，硫酸铵能够很好的沉淀浓缩C7的抑菌物质。
With the development of sustainable agriculture and the requirement of food safety, it is important for plant production and utilization to improve the research of microbial-agent. Based on the achieved stable bacterial mixture, we studied the effect of N-fixing, P-solubilizing and function expression in different culture condition, the synergism phenomenon of different strains in the bacterial mixture, and analyzed the physicochemical property of resisting-substance. The results are as follows:
1) Determination of N-fixing and P-solubilizing ability of 10 bacterial mixtures, it can be found C15, which can resist Verticillium dahlias Kleb. et. al, have a high nitrogenase activity to 67.0 nmolC2H4.h~-.mg-1Pr, and tricalcium phosphate discomposing to 19.9 mg P.mg-1Pr, and lecithin hydrolyzing ability to 9.1 mg P'mg"'Pr. All others mixtures can solubilize tricalcium phosphate and hydrolyze to lecithin and C15 is best for tricalcium phosphate, C7 is best for lecithin.
2) Except for C7, A5, B1, C5 and C7 have a synergistical action to resist Pseudomonas solanaceaxum Smith, and A3, A5, B5, C7 and C15 to Erwinia carotovora subsp.carofovora.
3) It can increase bacterial count and ability of disease resist to glucose as carbon source and urea as nitrogen for C7, soluble starch and NH4NO3 for C15. C7 and C15 can be culture in pH 6 to 9 medium and increase bacterial count to one order of magnitude. It is significant difference to P-solubilizing that C7 and C15 be culture in different carbon source. Glucose increase lecithin hydrolyzing ability and lactose increase tricalcium phosphate.
4) There is a improvement to assay bacterial P-solubilizing ability. This is, collect cell from culture medium and detach lecithin by ether, tricalcium phosphate by dilute hydrochloric acid, then digesting bacterial cell and assay P of cell. The content is including in P-solubilizing.
5) The activity of disease resisting substance of C7 can be keep in pH 2~9, 30℃~90℃ in half hour. The substance can be depose and concentrate by sulphate of ammonia.
1、确定细菌组合C15除对多种植物病原菌有抑制作用外，还具有较高的固氮酶活性(67.0nmol C_2H_4·h~(-1)·mg~(-1)Pr)、溶解磷酸钙能力(19.9mg P·mg~(-1)Pr)和分解卵磷脂的能力(9.1mg P·mg~(-1)Pr)。其它9个组合都能溶解磷酸钙和分解卵磷脂，C15对磷酸钙的溶解最高，达到19.9mg P·mg~(-1)Pr，C7对卵磷脂的分解最高，达到14.8mg P·mg~(-1)Pr。
2、发现组合A3、A5、B5、B10、C5、C7、C15对花生青枯病(Pseudomonas solanaceaxum Smith)或仙人掌斑点病(Erwinia carotovora subsp.carotovora)具有稳定的抗病协同作用。因此，抗病协同性在细菌之间有一定的普遍性。
3、利用葡萄糖和尿素作为C7的碳氮源、可溶性淀粉和NH_4NO_3作为C15的碳氮源有利于提高生物量和增加抗病活性。C7和C15在pH6-9范围内均可生长，分别在pH7.0和8.5时生长量最大。较大通气量能显著增加C7和C15发酵液的生物量。葡萄糖强烈促进细菌组合C7和C15分解卵磷脂的活性，乳糖显著促进C7和C15溶解磷酸三钙的能力。
4、本研究改进了测定细菌解磷和溶磷活性的方法，即离心收集发酵液菌体，以乙醚清洗剩余的卵磷脂，以稀盐酸清洗剩余的磷酸钙，消煮细菌细胞，然后进行钼锑抗比色测定。克服了对培养物上清液直接测定而忽略细菌生长对磷利用的弊端。
5、对C7具有抑制植物病原菌的物质在pH值为2-9、温度为30℃-90℃处理30min时其抑菌活性均不丧失，硫酸铵能够很好的沉淀浓缩C7的抑菌物质。
With the development of sustainable agriculture and the requirement of food safety, it is important for plant production and utilization to improve the research of microbial-agent. Based on the achieved stable bacterial mixture, we studied the effect of N-fixing, P-solubilizing and function expression in different culture condition, the synergism phenomenon of different strains in the bacterial mixture, and analyzed the physicochemical property of resisting-substance. The results are as follows:
1) Determination of N-fixing and P-solubilizing ability of 10 bacterial mixtures, it can be found C15, which can resist Verticillium dahlias Kleb. et. al, have a high nitrogenase activity to 67.0 nmolC2H4.h~-.mg-1Pr, and tricalcium phosphate discomposing to 19.9 mg P.mg-1Pr, and lecithin hydrolyzing ability to 9.1 mg P'mg"'Pr. All others mixtures can solubilize tricalcium phosphate and hydrolyze to lecithin and C15 is best for tricalcium phosphate, C7 is best for lecithin.
2) Except for C7, A5, B1, C5 and C7 have a synergistical action to resist Pseudomonas solanaceaxum Smith, and A3, A5, B5, C7 and C15 to Erwinia carotovora subsp.carofovora.
3) It can increase bacterial count and ability of disease resist to glucose as carbon source and urea as nitrogen for C7, soluble starch and NH4NO3 for C15. C7 and C15 can be culture in pH 6 to 9 medium and increase bacterial count to one order of magnitude. It is significant difference to P-solubilizing that C7 and C15 be culture in different carbon source. Glucose increase lecithin hydrolyzing ability and lactose increase tricalcium phosphate.
4) There is a improvement to assay bacterial P-solubilizing ability. This is, collect cell from culture medium and detach lecithin by ether, tricalcium phosphate by dilute hydrochloric acid, then digesting bacterial cell and assay P of cell. The content is including in P-solubilizing.
5) The activity of disease resisting substance of C7 can be keep in pH 2~9, 30℃~90℃ in half hour. The substance can be depose and concentrate by sulphate of ammonia.
引文
1 李明．微生物肥料研究．生物学通报，2001，36(7)：5～7
2 文化等．农业接口工程．北京：北京科学技术出版社，1996，74～77
3 占新华，蒋延惠，徐阳春，等．微生物制剂促进植物生长机理的研究进展．植物营养与肥料学报，1999，5(2)：97～105
4 Tien TM, Gaskins MH, Hubbell DH. Plant growth substances produced by Azospirillum brasilense and their effect on the growth of pearl millet (Pennisetuma mericaum L.). Applied and Envir. Microbiol., 1979, 37(5):1016～1024
5 尤崇杓．固氮酶的结构和功能研究进展．农业生物技术学报，1995，3(1)：1～12
6 陈廷伟，陈华癸．钾细菌的形态生理及其对磷钾矿物的分解能力．微生物，1960(2)：104～112
7 梁绍芬，姜瑞波．解磷微生物肥料的作用和应用．土壤肥料，1994(2)：46～48
8 李阜棣，胡正嘉．微生物学(第五版)．北京：中国农业出版社，2000，228
9 De Freitas, J. R. et al. Phosphate-solubilizing rhizobacteria enhance the growth and yield but not phosphorus uptake of canola (B rassica napus L.). Biol. Fertil. Soils, 1997, 24:358～364
10 Taha, S. M. et al. Activity of phosphate - dissolving bacteria in Egyptian. Plant Soil, 1969, 31:149～160
11 唐勇，陆玲，杨启银，等．解磷微生物及其应用的研究进展．天津农业科学，2001(6)：1～5
12 Roos W and Luckner M. Relationships between proton extrusion and fluxes of ammonium ions and organic acids in Penicillium cyclopium. Journal of General Microbiology, 1984, 130:1007～1014
13 Hynes R J. Active ion uptake and maintenance of cationanion balance: a critical examination of their role in regulating rhizosphere pH. Plant and Soil, 1990, 126: 247～264
14 Asea P E A, Kucey R M N and Stewart J W B. Inorganic phosphate solubilization by two Penicillium species in solution culture and soil. Soil Biol. Biochem., 1988, 20: 459～464
15 Illmer P and Schinner F. Solubilization of inorganic calcium phosphates solubilization mechanisms. Soil Biol. Biochem., 1995, 27(3): 257～263
16 Wenzel C L, Ashford A E and Summerell B A. Phosphate-solubilizing bacteria associated with proteoid root of seedlings of waratah. New Phytol., 1994, 128:487～496
17 Sperber J I. Solution of mineral phosphates by soil bacteria. Nature, 1957, 180:994～995
18 Louw H A, Webley D M. The bacteriology of the root region of the oat plant grown
under controlled pot culture conditions. J Appl Bact, 1959, 22(2): 216～226
19 林启美，王华，赵小蓉，等．一些细菌和真菌的解磷能力及其机理初探．微生物学通报，2001，28(2)：26～30
20 Narsian V and Patel H H. Aspergillus aculeatus as a rock phosphate solubilizer. Soil Biol. Biochem., 2000, 32:559～565
21 丁立孝，杨增军．防治烟草赤星病农用抗生素产生菌S—10菌株发酵条件的研究．莱刚农学院学报，1996，13(3)：164～168
22 宋小妍，刘训理，邵宗泽，等．农用抗生素S-921摇瓶发酵条件的研究．山东农业大学学报，2000，31(1)：281～285
23 宋广运，刘可春，刘昌衡，等．生抗一号抗生素产生菌的培养条件研究．山东科学，1997，10(4)：31～36
24 朱天辉，杨佐忠．枯草芽孢杆菌菌种退化及其控制．西南林学院学报，2000，20(1)：31～35
25 李孱，白景华，蔡昭玲，等．细菌素发酵培养基的优化及动力学初步分析．生物工程学报，2001，17(2)：187～192
26 操时树，鲁松清，喻子牛．苏云金芽孢杆菌工程菌的发酵培养基的优选，微生物农药及其产业化，北京，科学出版社，2000：13～20
27 陈育如，杨启银．解钾砖酸盐细菌培养基及培养条件的研究．南京师大学报(自然科学版)，2001(3)：88～92
28 Illmer P and Schinner F. Solubilization of inorganic phosphates by microorganisms isolated from forest soils. Soil Biol. Biochem., 1992, 24(4): 389～395
29 Beever R E and Burns D J W. Phosphorus uptake storage and utilization by fungi. Advances in Botanical Research, 1980, 8:127～219
30 JAMES E C, KUIACY C. Production of citric and oxalic acids and solubilization of calcium phosphate by Penicillium biaii. Appl Environ Micro, 1992, 58(5): 1451～1458
31 范丙全，金继运，葛诚．溶磷草酸青霉菌筛选及其溶磷效果的初步研究．中国农业科学，2002，35(5)：525～530
32 赵小蓉，林启美，李保国．C、N源及C／N比对微生物溶磷的影响．植物营养与肥料学报．2002，8(2)：197～204
33 Slater, J.H. Mixed culture and microbial communities.in eds. Bushell, Slater M.E., Slater JH. Mixed culture fermentations. Academic Press, London and Newyork, 1981: 1～24
34 Stephenson M. "Bacterial Metabolism". Longman, Green & Co, London: 1949
35 Atlas R.M. and Bartha R. Microbial Ecology: Fundamentals and Applications. Addison- Wesley orical perspectives on mixed cultures and microbial communities, In eds. Bull, Slater A.T., Slater J.H. Microbial Interactions and Communities (Volume 1). Academic Press, London and Newyork: 1～12
36 Atlas R.M. and Bartha R. Microbial Ecology: Fundamentals and Applications. Addison-Wesley Publication Company. California, 1981: 252～281
37 陈秀蓉，南志标．细菌多样性及其在农业系统中的作用．草业科学，2002，19(9)：34～38
38 黄建辉，白永飞，韩兴国．物种多样性与生态系统功能：影响机制及有关假说．生物多样性，2001：1～7
39 蒲一涛，钟毅沪，郑宗坤．混合培养对固氮菌和纤维素分解菌生长及固氮的影响．氨基酸和生物资源，2000，22(1)：1～4
40 李勤生，卫翔．混合培养对光和细菌生长量的影响．水生生物学报，1998(6)：101～105
41 陈文新．土壤和环境微生物学．北京：北京农业大学出版社，1990，114～121
42 冯树，周樱桥，张忠泽．微生物混合培养及其应用．微生物学通报，200 1(3)：92～95
43 张学君，缪卫国，朱桂宁，等．农作物重要病原菌拮抗菌的筛选．生物防治通报，1993，9(3)：126～129
44 丘元盛，莫小真，等．稻根联合固氮菌的研究Ⅰ：菌种的分离．微生物学报，1981，21(4)：468～472
45 Khammas K.M., Kaiser P. Pectin decomposition and associated nitrogen fixation fixation by mixed cultures of Azospirillum and Bacillus species. Can J Microbiol. 1992. 38:794～797
46 Holguin G., Bashan Y., et. al. Nitrogen fixing by Azospirillum brasilense Cd is provided when co-culture with a mangrove rhizosphere bacteria. Soil Biol Biochem. 1996.28(12): 1651～1660
47 崔宗均，李美丹，朴哲，等．一组高效稳定纤维素分解菌复合系MC1的筛选及功能，环境科学，2002(3)：36～39
48 冯树，张忠泽．混合菌——一类值得重视的微生物资源，世界科技研究与发展 2000(3)：44～47
49 陈红，李平，王玲霞，等．混合菌培养提高水稻纹枯病生防效果的研究，中国农学通报，2001(5)：1～5
50 龙苏，李法峰，陈明，等．氮球形芽孢杆菌与巨大孢杆菌的混合增效作用，核农学报，2000，14(6)：337～341
51 Mew T.W., Rosales A.M., Maningas G.V. Biological control of Rhizoctonia sheath blight and blast of rice. In: Ryder M.H., Stephens P.M., Bown G.D. (eds). Impreve Plant Productivity with Rhizosphere Bacteria Australia: CSRIO, 1993, 9～13
52 Vasntha Devi T, Malar Vizhi R., Gnanamanickam S.S. Biological control of sheath blight of rice in India with antagonistic bacteria. Plant and Soil, 1989, 119:325～330
53 Murray WD. Appl Environ Mocrobiol.1986, 51(4): 710～714
54 Mori Y. Appl Environ Microbiol. 1990, 56(1): 37～42
55 A.Ogoshietal., PGPR Present status & future prospects. Sapporo, Japan. 1997, 73～321
56 Loper, J.E., & Lindow,S.E., Report or gene systems use fuline caluating in situgene expression by soil and plant associated bacteria. ARS Root Dis & Bicontrol.1996, 96～109
57 郑福庆，黄文生，王彬，等．植物病害生物防治研究进展．江西植保，1998，21(3)：29～33
58 李荣森．我国微生物防治研究与微生物农药产业化的进展(1980-1999)．中国病毒学．杀虫微生物专刊，2000，15(11)：1～15
59 包建中，古德祥．中国生物防治．太原：山西科学技术出版社，1998．
60 梁志宏．葡萄土壤杆菌E26菌株防治根癌病相关特性研究：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，1999
61 王慧敏，孙艳丽，王建辉．生防菌株E26对部分生态因子的影响．中国农业科学，2002，35(1)：38～41
62 王慧敏，隋新华，李健强，等．樱桃根癌土壤杆菌及其对土壤杆菌素84敏感性的研究．微生物学报，1998，38(5)：381～385
63 周乐聪，唐文华．红蛋巢菌属生防菌的筛选及其对油菜菌核病的防治潜能．中国油料作物学报，2001，23(2)：52～56
64 张霞．枯草芽孢杆菌B931防治小麦全蚀病及促进植物生长的机理研究：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，1999
65 陈声明，吴雪昌．经济微生物制品学．北京：兵器工业出版社，2001，5：113～114
66 田黎，李光友．海洋生境芽孢杆菌(Bacillus spp．)的培养条件及产生的胞外抗菌蛋白，海洋学报．23(4)：87～92
67 郭坚华．抗青枯生防菌拮抗物质的初步研究．南京农大学报，1995，18(2)：59～62
68 董春，董成刚，赵青峰，等．利用拮抗细菌防治细菌防治烟青枯病的初步研究．广东农业科学，1996，5：28～30
69 王春霞．棉花根际促生菌筛选和分离鉴定．华中农大学报，1997，16(1)：29～32
70 黄昌华．B-HCH菌株发酵液对植物病原真菌的作用．中国生物防治，1996，12(3)：107～109
71 郭坚华．植物细菌性青枯病的生防机制和途径．中国生物防治1997，13(1)：42～46
72 孔建，王文夕，赵白鸽，等．枯草芽孢杆菌B-903菌株的研究Ⅰ．对植物病原菌的抑制作用和防治试验．中国生物防治，1999，11(4)：157～161
73 史建荣．小麦纹枯病拮抗细菌的筛选．中国生物防治，1996，12(4)：161～164
74 陈志谊，陆凡．拮抗细菌Tn5诱变菌株防治水稻纹枯病的研究．江苏农业学报，1996，12(1)：26～30
75 陈龙英．桃树根癌病的生物防治．中国果树，1995，1：8～10
76 沈寅初．国内外农用抗生素研究和发展概况．抗生素，1981，6(2)：57～64
77 徐亲民译．日本近年来新抗生素筛选研究动态．国外医约抗生素分册，257～263
78 辛伟．生物防治农业病虫害情报调研综述．贵州师范大学学报(自然科学版)，1994(12)：59～54
79 姜成林，徐丽华．加强微生物资源开发利用与保护的宣传．中国记者，2003(6)：12～13
80 许前欣，孟兆芳，于彩虹．微生物肥料农业应用的效益评价．天津农业科学．2000，6(2)：44～46
81 陶光灿，王素英，王玉平，等．芽胞杆菌属(Bacillus sp．)10株细菌混合制剂对4种作物出苗及苗期生长的影响．应用与环境生物学报，2003，9(6)：598～602
82 穆国俊，董毓琨，黄冠辉．苏云金芽孢杆菌Bt—3701与巨大芽孢杆菌Bm—107种间原生质融合．微生物学报，1995．35(5)：322～326
83 陈志谊．微生物农药在植物病虫害防治中的应用及发展策略．江苏农业科学，2001(4)：39～42
84 申继忠．微生物农药剂型加工研究进展．中国生物防治，1998，14(3)129～133
85 顾宝根，姜辉．我国生物农药的现状及问题．喻子牛等编．微生物农药及其产业化．北京：科学出版社，2000，11：13～20
86 王素英．对作物具有促生和防病作用的细菌组合的筛选：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，2003
87 李阜棣，喻子牛，何绍江．农业微生物学实验技术．北京：中国农业出版社．1996，305
88 赵斌，何绍江．微生物学实验．北京：科学出版社．2003，69～72
89 陈延熙．土壤微生物区系与植物病害关系研究法．北京农大植物病害生物防治研究室
90 张治锬．抗生素药品检验．北京：人民卫生出版社，1987，1
91 吴健胜，梁晶丹，王金生．细菌素Echcin防治作物真菌病害、细菌病害的研究．植物病理学报，1999，29(2)：104～109
92 周新胜，崔永三，李兰珍，等．白僵菌产品毒力生物测定及在标准化中的应用．森林病虫通讯，1996，2：1～3
93 陈秀蓉，南志标．细菌多样性及其在农业系统中的作用．草业科学，2002，19(9)：34～38
94 高宁，肖晓蓉，柴枫．两种种植材料对龈下优势菌生长及生长环境的影响．华西医大学报，2002，33(1)：62～64
95 林启美，赵小蓉，孙焱鑫，等．四种不同生态系统的土壤解磷细菌数量及种群分布，土壤与环境．2000，(9)：34～35
96 王占武，李晓芝，刘彦利，等．拮抗菌防治草莓枯萎病．中国生物防治，1999，15(4)：187
97 杨建雄．生物化学与分子生物学实验技术教程．北京：科学出版社，2002，35～36
98 邬行彦，熊宗贵，胡章助．抗生素生产工艺学，1980
99 林璧润，谢双大，杨丽梅，等．拮抗细菌P78对黄瓜疫病及丝瓜霜霉病的防治作用．中国生物防治，1999，15(3)：114～117
100 李阜棣，喻子牛，何绍江．农业微生物学实验技术．北京：中国农业出版社，1996，
202～205
101 沈业寿，沈业宏．米曲霉抗生素A3042的研究初报．中国调味品，1996，4：4～5
102 肖崇厚．中药化学．上海：上海科学技术出版社，1988，18～19
103 李金云．葡萄土壤杆菌E26菌株细菌素的提纯及部分性质分析：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，2001
104 抗生菌生物理化特性编写组．抗生菌生物理化特性．北京：人民卫生出版社，1984，130
105 宁正祥．食品成分分析手册．北京：中国轻工业出版社，1998，64～66
106 李启隆，迟锡增，曾泳淮，等．仪器分析．北京：北京师范大学出版社，1997，101～114
107 赵文宪，张悟铭，王长发，等．仪器分析实验．北京：高等教育出版社，1998，28～41
108 陈允魁．仪器分析．上海：上海交通大学出版社，1992，27～49
109 陈天寿．微生物培养基的制造与应用．中国农业出版社，1995，13～18
110 朱忠勇．实用医学检验学．北京，人民军医出版社．1992，493
111 中国科学院微生物研究所．菌种保藏手册．科学出版社．1980，22～23
112 王立超，连岩，张志新．温度、光照和pH之间的相互关系对光合细菌生长的影响．海洋湖沼通报，1997(4)：28～31
113 梁锦锋，陈欣，唐建军．1株磷细菌基本培养条件的研究．浙江林学院学报．2002，19(4)：342～345
114 尹瑞玲．我国旱地土壤的溶磷微生物．土壤，1988，20(5)：243～246
115 Kucey R.M.N.. Phosphate-solubilizing bacteria and fungi in various cultivated and virgin Alberta soils. Canadian Journal of Soil Science, 1983, 63:671～678
116 NB.Paul and WVB.Sundara Rao,Phosthate-dissolving bacteria in the rhizosphere of some cultivated beguines. Plant and Soil, 1971, 35: 127～132
117 梁绍芬，姜瑞波，葛诚主编．微生物肥料的生产和发展及存在的问题．北京：中国农业科技出版社．1996，61～65
118 许光辉，郑洪元主编．土壤微生物分析方法手册．北京：农业出版社．1986，119
119 林启美，吴玉光，刘焕龙．熏蒸法测定土壤微生物量碳的改进．生态学杂志，1999，18(2)：63～66
120 赵小蓉，林启美．细菌解磷能力测定方法的研究．微生物学通报，2001，28(1)：1～4
121 崔宗均．北方水稻田固氮生物资源及其固氮特性的研究．[博士学位论文]．北京：北京农业大学，1994
122 丘元盛，周淑平，等．稻根联合固氮细菌的研究Ⅱ．粪产碱菌A—15和阴沟肠杆菌E26的固氮特性．微生物学报，1981，21(4)：473～476
123 Dobereiner J. Isolation and identification of root associated diazotrphs, in Nitrogen Fixation with non-legumes. F.A.Skinner et al (Ed.) Kluwer Academic Publishers, 1989: 103～108
124 谢光辉．长江流域水稻田异养固氮菌资源的研究．[博士学位论文]．北京：北京农业
大学，1997
125 李群，文海波，刘雪鸿，等．MGSC27新型微生物液肥肥效试验．湖南农业科学，2000，6：13～14
126 山东农学院农药厂编．磷细菌肥．北京：农业出版社，1979，23
127 Asea P.E. A, Kucey R.M.N, Stewart J.W.B. Inorganic phosphate solubilization by two Penicillium species in solution culture and soil. Soil Biol. & Biochem, 1988,20:459～464
128 Thomas O V. Occurrence and ability of phosphate-solubilizing fungi from coconut plant soil. Plant and Soil, 1985, 87:357～364
129 Paul N B and Sundara rao W V B. Phosphate2dissolving bacteria in the rhizosphere of some cultivated legumes. Plant and Soil, 1971, 35:127～132
130 刘丽丽，王金华．磷细菌和钾细菌混合培养的研究．南开大学学报(自然科学)，1995，28(3)：22～25
131 Shimizu H, Mizuguchi T, et al. Appl Environ Microbiol, 1999, 65(7): 704～708
132 师正彬．植物病原细菌素的研究进展．植物保护，1995，4：37～39
133 郭坚华，潘登明，任欣正．抗青枯生防菌拮抗物质的初步研究．南京农业大学学报，1994，18(2)：59～62
134 胡剑等．拮抗菌BS-98分泌抗菌蛋白的条件及其发酵液特性，微生物学通报，1996，23(6)：323～326
135 G.Zheng et al. Isolation, partial purification and characterization of a bacteriocin produced by a newly isolated Bacillus subtilis strain, Lett. Appl. Microbiol. 1999, 28 (5): 363～367
136 吴冠芸，潘华珍，等．生物化学与分子生物学常用数据手册(第一版)，科学出版社，2000
137 周启，王道本．农用抗生素和微生物杀虫剂．北京：中国农业出版社，1995
138 丁立孝，李宝笃，张建丽，等．S—10菌株产生抗生素的初步鉴别及其应用研究．植物病理学报，1999，29(2)：190
139 刘训理，崔云龙，衣海青，等．树脂法提取农抗S—921研究．山东农业大学学报，1996，27(1)：1～6
140 司书毅，楼志贤，陶佩珍，等．抗病毒抗生素1670A的研究Ⅰ．产生菌的分类、发酵及活性成分的提取、分离与鉴别．中国抗生素杂志，2000，25(6)：407～411
141 Ando T, Hirayama K, et al. The structures of abthracycline antibiotics, cosmomycins A and B. Agro. Biol. Chem., 1985, 49:1207
142 Brockman H, Waehneldt T, Niemeyer J. Konstitution and konfiguration von. β— rhodomycinon Ⅱ and β—isorhodomycinon Ⅱ. Tetrahedron Lett, 1969, 415
143 Ihn W, Schlegel B, Fleck W F, et al. New anthhracycline antibiotics produced by Inter— specific recombinants ofstreptomycetes. Antibiot, 1980, 33, 1457
144 蒋细良．谢德龄．农用抗生素的作用机理．生物防治通报，1994，10(2)：76～81
2 文化等．农业接口工程．北京：北京科学技术出版社，1996，74～77
3 占新华，蒋延惠，徐阳春，等．微生物制剂促进植物生长机理的研究进展．植物营养与肥料学报，1999，5(2)：97～105
4 Tien TM, Gaskins MH, Hubbell DH. Plant growth substances produced by Azospirillum brasilense and their effect on the growth of pearl millet (Pennisetuma mericaum L.). Applied and Envir. Microbiol., 1979, 37(5):1016～1024
5 尤崇杓．固氮酶的结构和功能研究进展．农业生物技术学报，1995，3(1)：1～12
6 陈廷伟，陈华癸．钾细菌的形态生理及其对磷钾矿物的分解能力．微生物，1960(2)：104～112
7 梁绍芬，姜瑞波．解磷微生物肥料的作用和应用．土壤肥料，1994(2)：46～48
8 李阜棣，胡正嘉．微生物学(第五版)．北京：中国农业出版社，2000，228
9 De Freitas, J. R. et al. Phosphate-solubilizing rhizobacteria enhance the growth and yield but not phosphorus uptake of canola (B rassica napus L.). Biol. Fertil. Soils, 1997, 24:358～364
10 Taha, S. M. et al. Activity of phosphate - dissolving bacteria in Egyptian. Plant Soil, 1969, 31:149～160
11 唐勇，陆玲，杨启银，等．解磷微生物及其应用的研究进展．天津农业科学，2001(6)：1～5
12 Roos W and Luckner M. Relationships between proton extrusion and fluxes of ammonium ions and organic acids in Penicillium cyclopium. Journal of General Microbiology, 1984, 130:1007～1014
13 Hynes R J. Active ion uptake and maintenance of cationanion balance: a critical examination of their role in regulating rhizosphere pH. Plant and Soil, 1990, 126: 247～264
14 Asea P E A, Kucey R M N and Stewart J W B. Inorganic phosphate solubilization by two Penicillium species in solution culture and soil. Soil Biol. Biochem., 1988, 20: 459～464
15 Illmer P and Schinner F. Solubilization of inorganic calcium phosphates solubilization mechanisms. Soil Biol. Biochem., 1995, 27(3): 257～263
16 Wenzel C L, Ashford A E and Summerell B A. Phosphate-solubilizing bacteria associated with proteoid root of seedlings of waratah. New Phytol., 1994, 128:487～496
17 Sperber J I. Solution of mineral phosphates by soil bacteria. Nature, 1957, 180:994～995
18 Louw H A, Webley D M. The bacteriology of the root region of the oat plant grown
under controlled pot culture conditions. J Appl Bact, 1959, 22(2): 216～226
19 林启美，王华，赵小蓉，等．一些细菌和真菌的解磷能力及其机理初探．微生物学通报，2001，28(2)：26～30
20 Narsian V and Patel H H. Aspergillus aculeatus as a rock phosphate solubilizer. Soil Biol. Biochem., 2000, 32:559～565
21 丁立孝，杨增军．防治烟草赤星病农用抗生素产生菌S—10菌株发酵条件的研究．莱刚农学院学报，1996，13(3)：164～168
22 宋小妍，刘训理，邵宗泽，等．农用抗生素S-921摇瓶发酵条件的研究．山东农业大学学报，2000，31(1)：281～285
23 宋广运，刘可春，刘昌衡，等．生抗一号抗生素产生菌的培养条件研究．山东科学，1997，10(4)：31～36
24 朱天辉，杨佐忠．枯草芽孢杆菌菌种退化及其控制．西南林学院学报，2000，20(1)：31～35
25 李孱，白景华，蔡昭玲，等．细菌素发酵培养基的优化及动力学初步分析．生物工程学报，2001，17(2)：187～192
26 操时树，鲁松清，喻子牛．苏云金芽孢杆菌工程菌的发酵培养基的优选，微生物农药及其产业化，北京，科学出版社，2000：13～20
27 陈育如，杨启银．解钾砖酸盐细菌培养基及培养条件的研究．南京师大学报(自然科学版)，2001(3)：88～92
28 Illmer P and Schinner F. Solubilization of inorganic phosphates by microorganisms isolated from forest soils. Soil Biol. Biochem., 1992, 24(4): 389～395
29 Beever R E and Burns D J W. Phosphorus uptake storage and utilization by fungi. Advances in Botanical Research, 1980, 8:127～219
30 JAMES E C, KUIACY C. Production of citric and oxalic acids and solubilization of calcium phosphate by Penicillium biaii. Appl Environ Micro, 1992, 58(5): 1451～1458
31 范丙全，金继运，葛诚．溶磷草酸青霉菌筛选及其溶磷效果的初步研究．中国农业科学，2002，35(5)：525～530
32 赵小蓉，林启美，李保国．C、N源及C／N比对微生物溶磷的影响．植物营养与肥料学报．2002，8(2)：197～204
33 Slater, J.H. Mixed culture and microbial communities.in eds. Bushell, Slater M.E., Slater JH. Mixed culture fermentations. Academic Press, London and Newyork, 1981: 1～24
34 Stephenson M. "Bacterial Metabolism". Longman, Green & Co, London: 1949
35 Atlas R.M. and Bartha R. Microbial Ecology: Fundamentals and Applications. Addison- Wesley orical perspectives on mixed cultures and microbial communities, In eds. Bull, Slater A.T., Slater J.H. Microbial Interactions and Communities (Volume 1). Academic Press, London and Newyork: 1～12
36 Atlas R.M. and Bartha R. Microbial Ecology: Fundamentals and Applications. Addison-Wesley Publication Company. California, 1981: 252～281
37 陈秀蓉，南志标．细菌多样性及其在农业系统中的作用．草业科学，2002，19(9)：34～38
38 黄建辉，白永飞，韩兴国．物种多样性与生态系统功能：影响机制及有关假说．生物多样性，2001：1～7
39 蒲一涛，钟毅沪，郑宗坤．混合培养对固氮菌和纤维素分解菌生长及固氮的影响．氨基酸和生物资源，2000，22(1)：1～4
40 李勤生，卫翔．混合培养对光和细菌生长量的影响．水生生物学报，1998(6)：101～105
41 陈文新．土壤和环境微生物学．北京：北京农业大学出版社，1990，114～121
42 冯树，周樱桥，张忠泽．微生物混合培养及其应用．微生物学通报，200 1(3)：92～95
43 张学君，缪卫国，朱桂宁，等．农作物重要病原菌拮抗菌的筛选．生物防治通报，1993，9(3)：126～129
44 丘元盛，莫小真，等．稻根联合固氮菌的研究Ⅰ：菌种的分离．微生物学报，1981，21(4)：468～472
45 Khammas K.M., Kaiser P. Pectin decomposition and associated nitrogen fixation fixation by mixed cultures of Azospirillum and Bacillus species. Can J Microbiol. 1992. 38:794～797
46 Holguin G., Bashan Y., et. al. Nitrogen fixing by Azospirillum brasilense Cd is provided when co-culture with a mangrove rhizosphere bacteria. Soil Biol Biochem. 1996.28(12): 1651～1660
47 崔宗均，李美丹，朴哲，等．一组高效稳定纤维素分解菌复合系MC1的筛选及功能，环境科学，2002(3)：36～39
48 冯树，张忠泽．混合菌——一类值得重视的微生物资源，世界科技研究与发展 2000(3)：44～47
49 陈红，李平，王玲霞，等．混合菌培养提高水稻纹枯病生防效果的研究，中国农学通报，2001(5)：1～5
50 龙苏，李法峰，陈明，等．氮球形芽孢杆菌与巨大孢杆菌的混合增效作用，核农学报，2000，14(6)：337～341
51 Mew T.W., Rosales A.M., Maningas G.V. Biological control of Rhizoctonia sheath blight and blast of rice. In: Ryder M.H., Stephens P.M., Bown G.D. (eds). Impreve Plant Productivity with Rhizosphere Bacteria Australia: CSRIO, 1993, 9～13
52 Vasntha Devi T, Malar Vizhi R., Gnanamanickam S.S. Biological control of sheath blight of rice in India with antagonistic bacteria. Plant and Soil, 1989, 119:325～330
53 Murray WD. Appl Environ Mocrobiol.1986, 51(4): 710～714
54 Mori Y. Appl Environ Microbiol. 1990, 56(1): 37～42
55 A.Ogoshietal., PGPR Present status & future prospects. Sapporo, Japan. 1997, 73～321
56 Loper, J.E., & Lindow,S.E., Report or gene systems use fuline caluating in situgene expression by soil and plant associated bacteria. ARS Root Dis & Bicontrol.1996, 96～109
57 郑福庆，黄文生，王彬，等．植物病害生物防治研究进展．江西植保，1998，21(3)：29～33
58 李荣森．我国微生物防治研究与微生物农药产业化的进展(1980-1999)．中国病毒学．杀虫微生物专刊，2000，15(11)：1～15
59 包建中，古德祥．中国生物防治．太原：山西科学技术出版社，1998．
60 梁志宏．葡萄土壤杆菌E26菌株防治根癌病相关特性研究：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，1999
61 王慧敏，孙艳丽，王建辉．生防菌株E26对部分生态因子的影响．中国农业科学，2002，35(1)：38～41
62 王慧敏，隋新华，李健强，等．樱桃根癌土壤杆菌及其对土壤杆菌素84敏感性的研究．微生物学报，1998，38(5)：381～385
63 周乐聪，唐文华．红蛋巢菌属生防菌的筛选及其对油菜菌核病的防治潜能．中国油料作物学报，2001，23(2)：52～56
64 张霞．枯草芽孢杆菌B931防治小麦全蚀病及促进植物生长的机理研究：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，1999
65 陈声明，吴雪昌．经济微生物制品学．北京：兵器工业出版社，2001，5：113～114
66 田黎，李光友．海洋生境芽孢杆菌(Bacillus spp．)的培养条件及产生的胞外抗菌蛋白，海洋学报．23(4)：87～92
67 郭坚华．抗青枯生防菌拮抗物质的初步研究．南京农大学报，1995，18(2)：59～62
68 董春，董成刚，赵青峰，等．利用拮抗细菌防治细菌防治烟青枯病的初步研究．广东农业科学，1996，5：28～30
69 王春霞．棉花根际促生菌筛选和分离鉴定．华中农大学报，1997，16(1)：29～32
70 黄昌华．B-HCH菌株发酵液对植物病原真菌的作用．中国生物防治，1996，12(3)：107～109
71 郭坚华．植物细菌性青枯病的生防机制和途径．中国生物防治1997，13(1)：42～46
72 孔建，王文夕，赵白鸽，等．枯草芽孢杆菌B-903菌株的研究Ⅰ．对植物病原菌的抑制作用和防治试验．中国生物防治，1999，11(4)：157～161
73 史建荣．小麦纹枯病拮抗细菌的筛选．中国生物防治，1996，12(4)：161～164
74 陈志谊，陆凡．拮抗细菌Tn5诱变菌株防治水稻纹枯病的研究．江苏农业学报，1996，12(1)：26～30
75 陈龙英．桃树根癌病的生物防治．中国果树，1995，1：8～10
76 沈寅初．国内外农用抗生素研究和发展概况．抗生素，1981，6(2)：57～64
77 徐亲民译．日本近年来新抗生素筛选研究动态．国外医约抗生素分册，257～263
78 辛伟．生物防治农业病虫害情报调研综述．贵州师范大学学报(自然科学版)，1994(12)：59～54
79 姜成林，徐丽华．加强微生物资源开发利用与保护的宣传．中国记者，2003(6)：12～13
80 许前欣，孟兆芳，于彩虹．微生物肥料农业应用的效益评价．天津农业科学．2000，6(2)：44～46
81 陶光灿，王素英，王玉平，等．芽胞杆菌属(Bacillus sp．)10株细菌混合制剂对4种作物出苗及苗期生长的影响．应用与环境生物学报，2003，9(6)：598～602
82 穆国俊，董毓琨，黄冠辉．苏云金芽孢杆菌Bt—3701与巨大芽孢杆菌Bm—107种间原生质融合．微生物学报，1995．35(5)：322～326
83 陈志谊．微生物农药在植物病虫害防治中的应用及发展策略．江苏农业科学，2001(4)：39～42
84 申继忠．微生物农药剂型加工研究进展．中国生物防治，1998，14(3)129～133
85 顾宝根，姜辉．我国生物农药的现状及问题．喻子牛等编．微生物农药及其产业化．北京：科学出版社，2000，11：13～20
86 王素英．对作物具有促生和防病作用的细菌组合的筛选：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，2003
87 李阜棣，喻子牛，何绍江．农业微生物学实验技术．北京：中国农业出版社．1996，305
88 赵斌，何绍江．微生物学实验．北京：科学出版社．2003，69～72
89 陈延熙．土壤微生物区系与植物病害关系研究法．北京农大植物病害生物防治研究室
90 张治锬．抗生素药品检验．北京：人民卫生出版社，1987，1
91 吴健胜，梁晶丹，王金生．细菌素Echcin防治作物真菌病害、细菌病害的研究．植物病理学报，1999，29(2)：104～109
92 周新胜，崔永三，李兰珍，等．白僵菌产品毒力生物测定及在标准化中的应用．森林病虫通讯，1996，2：1～3
93 陈秀蓉，南志标．细菌多样性及其在农业系统中的作用．草业科学，2002，19(9)：34～38
94 高宁，肖晓蓉，柴枫．两种种植材料对龈下优势菌生长及生长环境的影响．华西医大学报，2002，33(1)：62～64
95 林启美，赵小蓉，孙焱鑫，等．四种不同生态系统的土壤解磷细菌数量及种群分布，土壤与环境．2000，(9)：34～35
96 王占武，李晓芝，刘彦利，等．拮抗菌防治草莓枯萎病．中国生物防治，1999，15(4)：187
97 杨建雄．生物化学与分子生物学实验技术教程．北京：科学出版社，2002，35～36
98 邬行彦，熊宗贵，胡章助．抗生素生产工艺学，1980
99 林璧润，谢双大，杨丽梅，等．拮抗细菌P78对黄瓜疫病及丝瓜霜霉病的防治作用．中国生物防治，1999，15(3)：114～117
100 李阜棣，喻子牛，何绍江．农业微生物学实验技术．北京：中国农业出版社，1996，
202～205
101 沈业寿，沈业宏．米曲霉抗生素A3042的研究初报．中国调味品，1996，4：4～5
102 肖崇厚．中药化学．上海：上海科学技术出版社，1988，18～19
103 李金云．葡萄土壤杆菌E26菌株细菌素的提纯及部分性质分析：[硕士学位论文]．北京：中国农业大学，2001
104 抗生菌生物理化特性编写组．抗生菌生物理化特性．北京：人民卫生出版社，1984，130
105 宁正祥．食品成分分析手册．北京：中国轻工业出版社，1998，64～66
106 李启隆，迟锡增，曾泳淮，等．仪器分析．北京：北京师范大学出版社，1997，101～114
107 赵文宪，张悟铭，王长发，等．仪器分析实验．北京：高等教育出版社，1998，28～41
108 陈允魁．仪器分析．上海：上海交通大学出版社，1992，27～49
109 陈天寿．微生物培养基的制造与应用．中国农业出版社，1995，13～18
110 朱忠勇．实用医学检验学．北京，人民军医出版社．1992，493
111 中国科学院微生物研究所．菌种保藏手册．科学出版社．1980，22～23
112 王立超，连岩，张志新．温度、光照和pH之间的相互关系对光合细菌生长的影响．海洋湖沼通报，1997(4)：28～31
113 梁锦锋，陈欣，唐建军．1株磷细菌基本培养条件的研究．浙江林学院学报．2002，19(4)：342～345
114 尹瑞玲．我国旱地土壤的溶磷微生物．土壤，1988，20(5)：243～246
115 Kucey R.M.N.. Phosphate-solubilizing bacteria and fungi in various cultivated and virgin Alberta soils. Canadian Journal of Soil Science, 1983, 63:671～678
116 NB.Paul and WVB.Sundara Rao,Phosthate-dissolving bacteria in the rhizosphere of some cultivated beguines. Plant and Soil, 1971, 35: 127～132
117 梁绍芬，姜瑞波，葛诚主编．微生物肥料的生产和发展及存在的问题．北京：中国农业科技出版社．1996，61～65
118 许光辉，郑洪元主编．土壤微生物分析方法手册．北京：农业出版社．1986，119
119 林启美，吴玉光，刘焕龙．熏蒸法测定土壤微生物量碳的改进．生态学杂志，1999，18(2)：63～66
120 赵小蓉，林启美．细菌解磷能力测定方法的研究．微生物学通报，2001，28(1)：1～4
121 崔宗均．北方水稻田固氮生物资源及其固氮特性的研究．[博士学位论文]．北京：北京农业大学，1994
122 丘元盛，周淑平，等．稻根联合固氮细菌的研究Ⅱ．粪产碱菌A—15和阴沟肠杆菌E26的固氮特性．微生物学报，1981，21(4)：473～476
123 Dobereiner J. Isolation and identification of root associated diazotrphs, in Nitrogen Fixation with non-legumes. F.A.Skinner et al (Ed.) Kluwer Academic Publishers, 1989: 103～108
124 谢光辉．长江流域水稻田异养固氮菌资源的研究．[博士学位论文]．北京：北京农业
大学，1997
125 李群，文海波，刘雪鸿，等．MGSC27新型微生物液肥肥效试验．湖南农业科学，2000，6：13～14
126 山东农学院农药厂编．磷细菌肥．北京：农业出版社，1979，23
127 Asea P.E. A, Kucey R.M.N, Stewart J.W.B. Inorganic phosphate solubilization by two Penicillium species in solution culture and soil. Soil Biol. & Biochem, 1988,20:459～464
128 Thomas O V. Occurrence and ability of phosphate-solubilizing fungi from coconut plant soil. Plant and Soil, 1985, 87:357～364
129 Paul N B and Sundara rao W V B. Phosphate2dissolving bacteria in the rhizosphere of some cultivated legumes. Plant and Soil, 1971, 35:127～132
130 刘丽丽，王金华．磷细菌和钾细菌混合培养的研究．南开大学学报(自然科学)，1995，28(3)：22～25
131 Shimizu H, Mizuguchi T, et al. Appl Environ Microbiol, 1999, 65(7): 704～708
132 师正彬．植物病原细菌素的研究进展．植物保护，1995，4：37～39
133 郭坚华，潘登明，任欣正．抗青枯生防菌拮抗物质的初步研究．南京农业大学学报，1994，18(2)：59～62
134 胡剑等．拮抗菌BS-98分泌抗菌蛋白的条件及其发酵液特性，微生物学通报，1996，23(6)：323～326
135 G.Zheng et al. Isolation, partial purification and characterization of a bacteriocin produced by a newly isolated Bacillus subtilis strain, Lett. Appl. Microbiol. 1999, 28 (5): 363～367
136 吴冠芸，潘华珍，等．生物化学与分子生物学常用数据手册(第一版)，科学出版社，2000
137 周启，王道本．农用抗生素和微生物杀虫剂．北京：中国农业出版社，1995
138 丁立孝，李宝笃，张建丽，等．S—10菌株产生抗生素的初步鉴别及其应用研究．植物病理学报，1999，29(2)：190
139 刘训理，崔云龙，衣海青，等．树脂法提取农抗S—921研究．山东农业大学学报，1996，27(1)：1～6
140 司书毅，楼志贤，陶佩珍，等．抗病毒抗生素1670A的研究Ⅰ．产生菌的分类、发酵及活性成分的提取、分离与鉴别．中国抗生素杂志，2000，25(6)：407～411
141 Ando T, Hirayama K, et al. The structures of abthracycline antibiotics, cosmomycins A and B. Agro. Biol. Chem., 1985, 49:1207
142 Brockman H, Waehneldt T, Niemeyer J. Konstitution and konfiguration von. β— rhodomycinon Ⅱ and β—isorhodomycinon Ⅱ. Tetrahedron Lett, 1969, 415
143 Ihn W, Schlegel B, Fleck W F, et al. New anthhracycline antibiotics produced by Inter— specific recombinants ofstreptomycetes. Antibiot, 1980, 33, 1457
144 蒋细良．谢德龄．农用抗生素的作用机理．生物防治通报，1994，10(2)：76～81