苦荞麦叶黄酮提纯及其功能活性研究
|
摘要
为了综合利用苦荞麦资源，本研究对处于盛花期(播种后第58天)苦荞麦叶干燥粉碎物中的黄酮进行了定性定量分析，并利用苦荞麦叶为原料生产苦荞黄酮精粉(tartary buckwheat flavonoids powder，TBFP)，对提取、纯化工艺进行了优化，测定了TBFP的总黄酮含量、芦丁含量，研究了TBFP功能性，并采用结晶法制备了纯化芦丁，完善了一个快速准确地测定苦荞麦中芦丁含量的高效液相色谱法。实验结论如下：
(1)超声波乙醇回流浸提工艺是苦荞麦叶黄酮提取的理想工艺，最佳条件为：超声波(20kHz)处理40min，料液比1:30、pH=8的60％乙醇溶液70℃浸提120min，浸提率达95.26％。
(2)本试验中苦荞麦叶黄酮的纯化工艺采用了DA—201小型大孔吸附树脂柱，最佳工艺是：将浸提液真空(60℃，0.09MPa)浓缩；200mL丙酮(AR级)萃取浓缩液，除去杂质；上样液中黄酮浓度为0.5mg／mL以1mL／min通过DA—201树脂柱(f20mm×300mm)；150 mL80％的乙醇(AR级)以1 mL／min洗脱并收集洗脱液；真空(60℃，0.09MPa)浓缩，制得苦荞麦叶黄酮精粉(TBFP)。
(3)用苦荞麦叶黄酮精粉(TBFP)进一步结晶精制芦丁工艺：用甲醇加热回流溶解TBFP，过滤，滤液放冷，结晶，过滤得湿粗芦丁。母液回收甲醇，放冷结晶，过滤得湿芦丁，将2次得到的湿芦丁于烘箱中40℃，0.09MPa避光条件烘去大部分甲醇，然后逐渐升温至90℃烘干，然后利用正丁醇加热至80℃左右溶解前步制得的芦丁，过滤，滤液加5mL去离子水，放冷结晶，过滤得湿芦丁，置于0.09MPa避光条件烘箱中90℃烘干得纯芦丁。本工艺制得的纯化芦丁含量和总黄酮含量分别为95.13％、97.89％。
(4)HPLC测定苦荞麦中芦丁含量的色谱条件是：色谱柱：Agilent C_(18)，10μm，4.6×250nm不锈钢柱；流动相：甲醇—水—冰乙酸(40:60:1)；流速：1.0mL／min；检测波长：330 nm，柱温：室温(20℃)。芦丁峰形对称，与相邻杂质峰之间能达到基线分离，灵敏度和精密度高，方法简便，芦丁浓度与峰面积显著相关，回归方程为：y=806.16x+297.45，R~2=0.999。
(5)苦荞麦叶提取物(TBFP)具有清除O_2、清除羟自由基以及还原的能力，且随着黄酮含量的增加而增加，但其清除能力及还原能力要比抗坏血酸的能力弱一些；苦荞麦叶提取物对亚硝酸钠有消除作用，对亚硝酸钠的最大清除率为67.18％。结果表明，此提取物具有较好的阻断清除亚硝酸钠的效果。
The leaf which contained the hightest flavonoids among the materials, so the flavonoids from tartary buckwheat leaves were investigated on the character and quantity for the multi-utilization of tartary buckwheat resource in this paper. And tartary buckwheat leaves was selected to produce tartary buckwheat flavonoids powder (TBFP), and the extraction and purification procedure of TBFP was optimized. A method of extraction and purification of rutin from tartary buckwheat was estabilished. The results were as follow:
1. The best technology of extracting flavonoids from tartary buckwheat leaves was as follow: the leaves(5g) was extracted with 150mL, pH=8, 60% ethanol under ultrasonic(20kHz) for 40 minutes, and reflux 120min in a water bath at 70℃.The extraction ratio of flavonoids was 95.26%.
2. The column of DA-201 resin was applied in the purification of flavonoids extract, the best technology was as follows:
First, condensing the extract to slurry, removing the oiliness by petroleum ether, extracting flavonoids from the slurry for 8h with acetone, filtrating in vacuum, and adapting the content of total flavonoids of extracted solution to 0.5mg/mL.
Second, taking 150 mL sample solution (0.5mg/mL) to pass the column at the flow speed of 1.0mL/min.
Third, eluting the flavonoids by 150 mL 80% ethanol-water solution at the velocity of 1.0 mL/min.
3. Condensing and drying the eluted solution under the vacuum. Refined craft of the buckwheat leaf purification: The methyl alcohol heated the backset current is dissolved, filtrate and put coldly, crystallization. Mother liquor retrieve methyl alcohol, put coldly crystallization, filter, wet 40℃in the oven of rutin 2 times, 0.09MPa photophobic condition bakes most methyl alcohol, then dry to 90℃gradually, the step made rutins to heat and dissolve to about 70℃of then utilized n-butyl alcohol to dissolve, filter, filtrate it with 5mL deionized water, the cold crystallization puts, filter rutins wetly, put 90℃in 0.09MPa photophobic condition oven dry rutins purly. The contents of rutin and total flavonoids of tartary buckwheat flavonoids powder were 95.13%, 97.89%, separately
4. The condition of HPLC was: column, Kromasil C18, 10μm, 4.6×250mm stainless steel; mobile phase, methanol—water—acetic acid(40: 60: 1); flow rate: 1.0 mL/ min; scanning wave-length 330 nm; temperature of column: room temperature(20℃). The absorbance peak of rutin is symmetry and seperated on the radical line. The conelation of content of rutin and area of peak was y = 806.16x + 297.45 R~2 = 0.999, the correlation was significant..
5. The antioxidizing activity of the extract of shattered leaves was better in scavenging superoxide anion, hydroxyl radical and deoxidizing Fe~(3+). And the capacity of scavenging enhance with the raise of content of total flavonoids in extracting from tartary buckwheat leaves. But the capacity of scavenging of total flavonoids in extracting flavonoids from tartary buckwheat leaves was inferior to Vc. The capability of scavenging sodium nitrite by extract of extracting from tartary buckwheat leaves was 67.18%. The results showed that the extract has high capabilities of scavenging sodium nitrite.
(1)超声波乙醇回流浸提工艺是苦荞麦叶黄酮提取的理想工艺，最佳条件为：超声波(20kHz)处理40min，料液比1:30、pH=8的60％乙醇溶液70℃浸提120min，浸提率达95.26％。
(2)本试验中苦荞麦叶黄酮的纯化工艺采用了DA—201小型大孔吸附树脂柱，最佳工艺是：将浸提液真空(60℃，0.09MPa)浓缩；200mL丙酮(AR级)萃取浓缩液，除去杂质；上样液中黄酮浓度为0.5mg／mL以1mL／min通过DA—201树脂柱(f20mm×300mm)；150 mL80％的乙醇(AR级)以1 mL／min洗脱并收集洗脱液；真空(60℃，0.09MPa)浓缩，制得苦荞麦叶黄酮精粉(TBFP)。
(3)用苦荞麦叶黄酮精粉(TBFP)进一步结晶精制芦丁工艺：用甲醇加热回流溶解TBFP，过滤，滤液放冷，结晶，过滤得湿粗芦丁。母液回收甲醇，放冷结晶，过滤得湿芦丁，将2次得到的湿芦丁于烘箱中40℃，0.09MPa避光条件烘去大部分甲醇，然后逐渐升温至90℃烘干，然后利用正丁醇加热至80℃左右溶解前步制得的芦丁，过滤，滤液加5mL去离子水，放冷结晶，过滤得湿芦丁，置于0.09MPa避光条件烘箱中90℃烘干得纯芦丁。本工艺制得的纯化芦丁含量和总黄酮含量分别为95.13％、97.89％。
(4)HPLC测定苦荞麦中芦丁含量的色谱条件是：色谱柱：Agilent C_(18)，10μm，4.6×250nm不锈钢柱；流动相：甲醇—水—冰乙酸(40:60:1)；流速：1.0mL／min；检测波长：330 nm，柱温：室温(20℃)。芦丁峰形对称，与相邻杂质峰之间能达到基线分离，灵敏度和精密度高，方法简便，芦丁浓度与峰面积显著相关，回归方程为：y=806.16x+297.45，R~2=0.999。
(5)苦荞麦叶提取物(TBFP)具有清除O_2、清除羟自由基以及还原的能力，且随着黄酮含量的增加而增加，但其清除能力及还原能力要比抗坏血酸的能力弱一些；苦荞麦叶提取物对亚硝酸钠有消除作用，对亚硝酸钠的最大清除率为67.18％。结果表明，此提取物具有较好的阻断清除亚硝酸钠的效果。
The leaf which contained the hightest flavonoids among the materials, so the flavonoids from tartary buckwheat leaves were investigated on the character and quantity for the multi-utilization of tartary buckwheat resource in this paper. And tartary buckwheat leaves was selected to produce tartary buckwheat flavonoids powder (TBFP), and the extraction and purification procedure of TBFP was optimized. A method of extraction and purification of rutin from tartary buckwheat was estabilished. The results were as follow:
1. The best technology of extracting flavonoids from tartary buckwheat leaves was as follow: the leaves(5g) was extracted with 150mL, pH=8, 60% ethanol under ultrasonic(20kHz) for 40 minutes, and reflux 120min in a water bath at 70℃.The extraction ratio of flavonoids was 95.26%.
2. The column of DA-201 resin was applied in the purification of flavonoids extract, the best technology was as follows:
First, condensing the extract to slurry, removing the oiliness by petroleum ether, extracting flavonoids from the slurry for 8h with acetone, filtrating in vacuum, and adapting the content of total flavonoids of extracted solution to 0.5mg/mL.
Second, taking 150 mL sample solution (0.5mg/mL) to pass the column at the flow speed of 1.0mL/min.
Third, eluting the flavonoids by 150 mL 80% ethanol-water solution at the velocity of 1.0 mL/min.
3. Condensing and drying the eluted solution under the vacuum. Refined craft of the buckwheat leaf purification: The methyl alcohol heated the backset current is dissolved, filtrate and put coldly, crystallization. Mother liquor retrieve methyl alcohol, put coldly crystallization, filter, wet 40℃in the oven of rutin 2 times, 0.09MPa photophobic condition bakes most methyl alcohol, then dry to 90℃gradually, the step made rutins to heat and dissolve to about 70℃of then utilized n-butyl alcohol to dissolve, filter, filtrate it with 5mL deionized water, the cold crystallization puts, filter rutins wetly, put 90℃in 0.09MPa photophobic condition oven dry rutins purly. The contents of rutin and total flavonoids of tartary buckwheat flavonoids powder were 95.13%, 97.89%, separately
4. The condition of HPLC was: column, Kromasil C18, 10μm, 4.6×250mm stainless steel; mobile phase, methanol—water—acetic acid(40: 60: 1); flow rate: 1.0 mL/ min; scanning wave-length 330 nm; temperature of column: room temperature(20℃). The absorbance peak of rutin is symmetry and seperated on the radical line. The conelation of content of rutin and area of peak was y = 806.16x + 297.45 R~2 = 0.999, the correlation was significant..
5. The antioxidizing activity of the extract of shattered leaves was better in scavenging superoxide anion, hydroxyl radical and deoxidizing Fe~(3+). And the capacity of scavenging enhance with the raise of content of total flavonoids in extracting from tartary buckwheat leaves. But the capacity of scavenging of total flavonoids in extracting flavonoids from tartary buckwheat leaves was inferior to Vc. The capability of scavenging sodium nitrite by extract of extracting from tartary buckwheat leaves was 67.18%. The results showed that the extract has high capabilities of scavenging sodium nitrite.
引文
1． 顾尧臣．小宗粮食加工(五)[J]．粮食与饲料工业,1999,7:21-24；1999,8:19-22
2． 林汝法．中国荞麦[M]．北京：中国农业出版社，1994
3． 尹礼国，钟耕等．荞麦营养特性、生理功能和药用价值研究进展[J]．粮食与油脂，2002,5:32-34
4． 鞠洪荣，王君高，卢燕．荞麦食品功能性与新产品的开发[J]．食品科技，1999,3:16-17
5． 郎桂常．苦荞麦的营养价值及其开发利用[J]．中国粮油学报，1996，8:9-14
6． 赵钢，唐宇．苦荞麦的营养和药用价值及其开发应用[J]．农牧产品开发，1999，7:17-18
7． Hiroyuki tomotake, Iwao Shimaoka, Jun Kayashita. A buckwheat protein product suppresses gallstone formation and plasm cholesterol more strongly than soy protein isolate in hamsters [J]. Biochemical and Molecular Action of Nutrients, 2000,6:1670-1674
8． Hiroyuki Tomotake, Iwao Shimaoka, Jun Kayasita. Stronger suppression of plasma cholesterol and enhancement of the fecal excretion of steroids by a buckwheat protein product than by a soy protein isolatein rats fed on a cholesterol-free diet [J]. Biosci. Biotechnol. Biochem., 2000,65(6):1412-1414
9． 张振福，罗文森．苦荞麦的化学成分与特殊功能[J]．粮食与饲料工业，1998,2:40-41
10． 张政，王转花，刘凤艳等．苦荞蛋白复合物的营养成分及抗衰老作用的研究[J]．营养学报，1999,21(2):159-162
11． 徐宝才，丁霄霖．荞麦抗营养素的研究进展[J]．粮食与饲料工业，2001，7:37-41
12． 朱永义，郭祯祥．谷物加工工艺及设备[M]．科学出版社，2002年8月第1版
13． 颜景宗．苦荞营养保健醋的生产[J]．中国调味品，1997，1:18-19
14． 尹礼国，钟耕，曾凡坤等．荞麦加工利用[J]．粮食与油脂，2002，(9):39-41
15． J.B.哈本．黄酮类化合物[M]．北京：科学出版社，1983年1月第一版
16． 王宪楷．天然药物化学[M]．北京：人民卫生出版社，1986年9月第一版
17． 肖崇厚，杨松松，洪筱坤．中药化学[M]．上海：上海科学技术出版社，2000年11月第4次印刷
18． 张德权，台建祥．黄酮的研究及应用概况[J]．食品与发酵工业，1999,25(6)：52-57
19． 张宏伟，李延红．荞麦饲喂与血糖关系的研究[J]．劳动医学，2001，18(2):93-95
20． 王峰峰，秦小兵．苦荞麦对大鼠血糖血脂的影响[J]．中国中西药结合杂志，1995，15(5):296-297
21． Jun Kayashita, Iwao Shimaoka, Misao Nakajoh. Consumption of a buckwheat protein extract retards 7, 12-Dimethylbenz [a] anthracene-Induced mammary carcinogenesis in rats [J]. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1999, 63(10):1837-1839
22． Jun Kayashita, Iwao Shimaoka, Misao Nakajoh. Consumption of a buckwheat protein extract lowers plasma cholesterol and raises fecal neutral sterols in cholesterol-fed rats because of its low digestibility [J]. Nutrient Requirements and Interactions, 1997, 48(12):1395-1399
23． Jun Kayashita, Iwao Shimaoka, Misao Nakajoh. Muscle Hypertrophy in rats fed on a buckwheat protein extract [J]. Biosci. Biotechnol. Biochem., 2001,63(7):1242-1245
24． Zhihe liu, Wakako Ishikawa, Xuxin Huang. A buckwheat protein product suppresses 1, 2-dimethylhydrazine-induced colon carcinogenesis in rats by reducing cell proliferation [J]. Nutrition and Cancer-research Communication, 2001, 38(8):1850-1853
25． 李丹，肖刚，丁霄霖．苦荞麦黄酮清除自由基作用的研究[J]．食品科技，2000,6:62-64
26． 江纪武，肖庆祥．植物药有效成分手册[M]．北京：人民卫生出版社，1986，902-905
27． 钱建亚，Dietmar Mayer,Manfted Kuhn．荞麦精粉中的黄酮及其自由基清除活性[J]．食品与发酵工业，2000,26(3)：24-30
28． 薛长晖，王佩维，姚晨之．苦荞粉提取液对NO2-清除作用的体外试验研究[J]．粮油加工与食品机械，2002,10：48-49
29． 赵维中，王宇翎，陈志武等．芸香甙的胃粘膜保护作用研究[J]．安徽医科大学学报，1998，33(2)：93-95
30． 宋必卫，马传庚，田薇等．芦丁的镇痛作用[J]．安徽医科大学学报，1995，30(3):177-179
31． 宋必卫，田薇，陈志武等．芦丁镇痛作用部位和机制的研究[J]．安徽医科大学学报，1996，31(3):12-15
32． 闫道广，周玫，陈媛等．槲皮素、芦丁和BHT对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制效应[J]．第一军医大学学报，1995，15(1)：24-25
33． 闫道广，周玫，陈媛．芦丁、槲皮素对已受到Fe2+和Cu2+氧化修饰的低密度脂蛋白的抑制作用[J]．第一军医大学学报，1995，15(2):103-105
34． 卢明珍，卢彦玲，王黎敏．芦丁对大鼠缺血再灌注心肌保护作用的研究[J]．山西临床医药，1999，8(1)：10-13
35． 王峰峰，秦小兵．苦荞麦对大鼠血糖血脂的影响[J]．中国中西药结合杂志，1995，15(5)：296-297
36． 冯立明，潘华珍，蔺福宝等．麦芽醇对红细胞自氧化损伤的保护作用[J]．中国药理学通报，1990,6(6)：26-28
37． 夏维木，刘定益，陈杞．芦丁对肾脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[J]．中草药，1998，29(5)：319-321
38． 孟刚，陈志武，马传庚．芸香甙对小鼠脑缺血损伤保护作用的实验研究[J]．中国药理学通报，2000，16(3)：305-307
39． 韩书亮．大苞雪莲四种成分抗癌作用研究[J]．癌变、畸变、突变，1995，7(2)：80-82
40． 刘羽中，杨洋．生物类黄酮提取由研究进展[J]．中外食品，2004,10:48-49
41． 吉文亮，秦民坚，王峥涛．射干中异黄酮提取工艺的研究[J]．中药材，23(8)：486-487
42． 朱万靖，倪培德，江志炜等．沙棘果渣中黄酮类化合物最佳提取工艺研究[J]．中国油脂，2001，26(2)：35-37
43． 冯耀声，李军．茶多酚的超临界萃取法研究[J]．浙江化工，1995，26(4):10-13
44． 李军，冯耀声．超临界二氧化碳萃取茶多酚的研究[J]．天然产物研究与开发，1996，8(3):42-47
45． 王岚．浅谈苦荞壳中芦丁的提取[J]．西部粮油科技，1998，23(6)：57-58
46． 周谨．微波提取银杏黄酮苷[J]．天然产物研究与开发，2001，14(1):40-42
47． 李山荣．微波提取银杏黄酮甙的新工艺[J]．食品科学，2000，21(2)：39-41
48． 龚盛昭，程江，杨卓如．表面活性剂协同提取芦丁研究[J]．林产化学与工业，2004，24(8)：93-96
49． 贾冬英．用正交法探讨苦荞麦茎及籽壳中总黄酮(芦丁)的乙醇提取工艺[J]．食品科学，1997，6:22-24
50． 陈运中．苦荞黄酮提取最佳工艺的研究[J]．广州食品工业科技，1999，3:29-31
51． J.B. Harborne, C.A; Williams. Advances in flavonoids research since 1992 [J]. Phytochemistry,2000, 55:481-504
52． 崔成九，蒙跃龙，杨钧．大孔树脂分离葛根素研究[J]．西北药学杂志，1999，14(4)：25
53． 傅冬和．DM-130树脂对甘草酸的吸附性及提纯应用研究[J]．天然产物研究与开发，2001，14(1)：60-62
54． 鲁植雄，江水泉．超临界CO2萃取南烛叶有效成分的色谱分析[J]．南京农业大学学报，1999，22(1)：101-103．
55． 封士兰．甘草黄酮的提取分离和含量测定[J]．兰州医学院学报，1998，24(4):20-21
56． Arthur B. Durkee. Polyphenols of the bran-aleurone fraction of buckwheat seed (Fagopyrum sagitatum, Gilib) [J]. J. Agric. Food chem., 1977, 25(2):286-287
57． B. Dave Oomah. Flavonoids and antioxidative activities in buckwheat [J]. J. Agric. Food chem., 1996, 44:1746-1750
58． 李晓芳．紫外分光光度法测定银杏叶提取物中芦丁含量[J]．时珍国医国药，2001，12(3):204-204
59． 宋寅生，曾照宏，郑青山．催化氧化紫外法测定复方芦丁片嚼组分的含量[J]．西北药学杂志，1998，13(2)：53-54
60． 陈新国．降糖口服液的质量研究[J]．湖北中医学院学报,2000，2(3)：45-46
61． 王丽琴，党高潮，顾莹．卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮素[J]．药物分析杂志，2000，20(1)：60-61
62． 黄武军，陈运生．薄层扫描法测定化痔胶囊中芦丁和黄芩甙的含量[J]．时珍国医国药，1998，9(5)：425-425
63． 马志茹，袁悼斌．单扫示波极谱法测定槐米和芦丁制剂中芦丁的含量[J]．中草药，1998，29(2):86-88
64． 张晓燕，姚国新，刘英等．高效液相色谱分析制备槐花散时温度对芦丁含量的影响[J]．时珍国医国药，2002，13(3)：136-137
65． 粱洁怡．HPLC法测定血压平片中芦丁的含量[J]．广东药学院学报，1998，14(4)：259-261
66． 杨美华，陈小荣，郑俊华．高效液相色谱法测定槐花药材中芦丁的含量[J]．中国药事，2000，14(1)：34-35
67． 程小霞．反相高效液相色潜测定降脂口服液中芦丁的含量[J]．时珍国医国药，2001，12(8):689-690
68． 王福成，豆文太，朱文学．HPLC测定山楂精中牡荆苷～2——0-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁的含量[J]．中成药，2002，24(2)：122-124
69． 朱丽华，蒋国强，杨水新．高效液相色谱法测定菟丝子中芦丁、槲皮素、及山奈酚的含量[J]．浙江中医学院学报，2001，25(4):65-66
70． 江纪武，肖庆祥．植物药有效成分手册[M]．北京：人民卫生出版社，1986年3月出版
71． 赵玉平，肖春玲．苦荞麦不同器官总黄酮含量测定及分析[J]．食品科学，2004，25(10):264-266
72． 郑荣梁．自由基生命科学进展(第七集)[M]．北京：原子能出版社，1999，13
73． Hagihara M. Age-dependent changer in lipid peroxide levels in the lipoprotein e fractions of human serum [J]. Gerontdogy,1984,39(3):269
74． 高春燕，田呈瑞．枸杞多糖体外抗氧化特性研究[J]．粮食与油脂，2005，(7):28-29
75． Yenhun He, Fereidoon Shahidi. Antioxidant activity of green tea and catechins in a fish meat model system[J].J Agric Food Chem., 1997,45(11):4262-4265
76． 张泽生，乌兰．金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究[J]．天津科技大学学报，2005，20(2)：5-8
77． 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定[S]．中华人民共和国国家标准GB/T 5009.3—2003
78． 李裕，刘有智等．苦荞麦中提取芦丁的工艺研究.[J].华北工学院学报，2002，23(2):130-132
79． 廖亮．银杏叶中总黄酮提取方法研究[J]．食品科学，1994，8：40-42
80． 肖诗明等．苦荞麦茎叶中黄酮的提取工艺研究[J]．西昌农业高等专科学校学报，2003，12：16-18
81． 王昌利．超声提取芦丁得率的实验研究[J]．中成药，1993，15(2)：7-8
82． 郑公铭，罗宗铭．黄荆籽抗氧化作用研究[J]．食品科学,1999,3：21-23．
83． 毛莉娟等．苦丁茶中黄酮的提取工艺[J]．食品科技，2002，11：18-19．
84． 肖崇厚等．中药化学．上海；上海科技出版社，1987，247-248．
85． 郁建平等．大孔树脂提取荞麦芦丁工艺研究．[J]．贵州农业科学1997，25(2)：3-8
86． 王厚全等．纯芦丁的制备．[J]．化学试剂,2001，23(4)：251-252
87． 马志茹．芦丁清除活性氧自由基作用的电化学研究.[J]．分析化学，1997，12(25)：1465
88． 严建刚等．芹菜黄酮的提取条件及其抗氧化活性研究．[J].西北农林科技大学学报(自然科学版)，2005，1：131-135
89． 王静，刘大川．紫白苏叶黄铜类化合物抗氧化性能的研究．[J]．中国油脂，2004,29(3)：33-36
2． 林汝法．中国荞麦[M]．北京：中国农业出版社，1994
3． 尹礼国，钟耕等．荞麦营养特性、生理功能和药用价值研究进展[J]．粮食与油脂，2002,5:32-34
4． 鞠洪荣，王君高，卢燕．荞麦食品功能性与新产品的开发[J]．食品科技，1999,3:16-17
5． 郎桂常．苦荞麦的营养价值及其开发利用[J]．中国粮油学报，1996，8:9-14
6． 赵钢，唐宇．苦荞麦的营养和药用价值及其开发应用[J]．农牧产品开发，1999，7:17-18
7． Hiroyuki tomotake, Iwao Shimaoka, Jun Kayashita. A buckwheat protein product suppresses gallstone formation and plasm cholesterol more strongly than soy protein isolate in hamsters [J]. Biochemical and Molecular Action of Nutrients, 2000,6:1670-1674
8． Hiroyuki Tomotake, Iwao Shimaoka, Jun Kayasita. Stronger suppression of plasma cholesterol and enhancement of the fecal excretion of steroids by a buckwheat protein product than by a soy protein isolatein rats fed on a cholesterol-free diet [J]. Biosci. Biotechnol. Biochem., 2000,65(6):1412-1414
9． 张振福，罗文森．苦荞麦的化学成分与特殊功能[J]．粮食与饲料工业，1998,2:40-41
10． 张政，王转花，刘凤艳等．苦荞蛋白复合物的营养成分及抗衰老作用的研究[J]．营养学报，1999,21(2):159-162
11． 徐宝才，丁霄霖．荞麦抗营养素的研究进展[J]．粮食与饲料工业，2001，7:37-41
12． 朱永义，郭祯祥．谷物加工工艺及设备[M]．科学出版社，2002年8月第1版
13． 颜景宗．苦荞营养保健醋的生产[J]．中国调味品，1997，1:18-19
14． 尹礼国，钟耕，曾凡坤等．荞麦加工利用[J]．粮食与油脂，2002，(9):39-41
15． J.B.哈本．黄酮类化合物[M]．北京：科学出版社，1983年1月第一版
16． 王宪楷．天然药物化学[M]．北京：人民卫生出版社，1986年9月第一版
17． 肖崇厚，杨松松，洪筱坤．中药化学[M]．上海：上海科学技术出版社，2000年11月第4次印刷
18． 张德权，台建祥．黄酮的研究及应用概况[J]．食品与发酵工业，1999,25(6)：52-57
19． 张宏伟，李延红．荞麦饲喂与血糖关系的研究[J]．劳动医学，2001，18(2):93-95
20． 王峰峰，秦小兵．苦荞麦对大鼠血糖血脂的影响[J]．中国中西药结合杂志，1995，15(5):296-297
21． Jun Kayashita, Iwao Shimaoka, Misao Nakajoh. Consumption of a buckwheat protein extract retards 7, 12-Dimethylbenz [a] anthracene-Induced mammary carcinogenesis in rats [J]. Biosci. Biotechnol. Biochem., 1999, 63(10):1837-1839
22． Jun Kayashita, Iwao Shimaoka, Misao Nakajoh. Consumption of a buckwheat protein extract lowers plasma cholesterol and raises fecal neutral sterols in cholesterol-fed rats because of its low digestibility [J]. Nutrient Requirements and Interactions, 1997, 48(12):1395-1399
23． Jun Kayashita, Iwao Shimaoka, Misao Nakajoh. Muscle Hypertrophy in rats fed on a buckwheat protein extract [J]. Biosci. Biotechnol. Biochem., 2001,63(7):1242-1245
24． Zhihe liu, Wakako Ishikawa, Xuxin Huang. A buckwheat protein product suppresses 1, 2-dimethylhydrazine-induced colon carcinogenesis in rats by reducing cell proliferation [J]. Nutrition and Cancer-research Communication, 2001, 38(8):1850-1853
25． 李丹，肖刚，丁霄霖．苦荞麦黄酮清除自由基作用的研究[J]．食品科技，2000,6:62-64
26． 江纪武，肖庆祥．植物药有效成分手册[M]．北京：人民卫生出版社，1986，902-905
27． 钱建亚，Dietmar Mayer,Manfted Kuhn．荞麦精粉中的黄酮及其自由基清除活性[J]．食品与发酵工业，2000,26(3)：24-30
28． 薛长晖，王佩维，姚晨之．苦荞粉提取液对NO2-清除作用的体外试验研究[J]．粮油加工与食品机械，2002,10：48-49
29． 赵维中，王宇翎，陈志武等．芸香甙的胃粘膜保护作用研究[J]．安徽医科大学学报，1998，33(2)：93-95
30． 宋必卫，马传庚，田薇等．芦丁的镇痛作用[J]．安徽医科大学学报，1995，30(3):177-179
31． 宋必卫，田薇，陈志武等．芦丁镇痛作用部位和机制的研究[J]．安徽医科大学学报，1996，31(3):12-15
32． 闫道广，周玫，陈媛等．槲皮素、芦丁和BHT对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制效应[J]．第一军医大学学报，1995，15(1)：24-25
33． 闫道广，周玫，陈媛．芦丁、槲皮素对已受到Fe2+和Cu2+氧化修饰的低密度脂蛋白的抑制作用[J]．第一军医大学学报，1995，15(2):103-105
34． 卢明珍，卢彦玲，王黎敏．芦丁对大鼠缺血再灌注心肌保护作用的研究[J]．山西临床医药，1999，8(1)：10-13
35． 王峰峰，秦小兵．苦荞麦对大鼠血糖血脂的影响[J]．中国中西药结合杂志，1995，15(5)：296-297
36． 冯立明，潘华珍，蔺福宝等．麦芽醇对红细胞自氧化损伤的保护作用[J]．中国药理学通报，1990,6(6)：26-28
37． 夏维木，刘定益，陈杞．芦丁对肾脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[J]．中草药，1998，29(5)：319-321
38． 孟刚，陈志武，马传庚．芸香甙对小鼠脑缺血损伤保护作用的实验研究[J]．中国药理学通报，2000，16(3)：305-307
39． 韩书亮．大苞雪莲四种成分抗癌作用研究[J]．癌变、畸变、突变，1995，7(2)：80-82
40． 刘羽中，杨洋．生物类黄酮提取由研究进展[J]．中外食品，2004,10:48-49
41． 吉文亮，秦民坚，王峥涛．射干中异黄酮提取工艺的研究[J]．中药材，23(8)：486-487
42． 朱万靖，倪培德，江志炜等．沙棘果渣中黄酮类化合物最佳提取工艺研究[J]．中国油脂，2001，26(2)：35-37
43． 冯耀声，李军．茶多酚的超临界萃取法研究[J]．浙江化工，1995，26(4):10-13
44． 李军，冯耀声．超临界二氧化碳萃取茶多酚的研究[J]．天然产物研究与开发，1996，8(3):42-47
45． 王岚．浅谈苦荞壳中芦丁的提取[J]．西部粮油科技，1998，23(6)：57-58
46． 周谨．微波提取银杏黄酮苷[J]．天然产物研究与开发，2001，14(1):40-42
47． 李山荣．微波提取银杏黄酮甙的新工艺[J]．食品科学，2000，21(2)：39-41
48． 龚盛昭，程江，杨卓如．表面活性剂协同提取芦丁研究[J]．林产化学与工业，2004，24(8)：93-96
49． 贾冬英．用正交法探讨苦荞麦茎及籽壳中总黄酮(芦丁)的乙醇提取工艺[J]．食品科学，1997，6:22-24
50． 陈运中．苦荞黄酮提取最佳工艺的研究[J]．广州食品工业科技，1999，3:29-31
51． J.B. Harborne, C.A; Williams. Advances in flavonoids research since 1992 [J]. Phytochemistry,2000, 55:481-504
52． 崔成九，蒙跃龙，杨钧．大孔树脂分离葛根素研究[J]．西北药学杂志，1999，14(4)：25
53． 傅冬和．DM-130树脂对甘草酸的吸附性及提纯应用研究[J]．天然产物研究与开发，2001，14(1)：60-62
54． 鲁植雄，江水泉．超临界CO2萃取南烛叶有效成分的色谱分析[J]．南京农业大学学报，1999，22(1)：101-103．
55． 封士兰．甘草黄酮的提取分离和含量测定[J]．兰州医学院学报，1998，24(4):20-21
56． Arthur B. Durkee. Polyphenols of the bran-aleurone fraction of buckwheat seed (Fagopyrum sagitatum, Gilib) [J]. J. Agric. Food chem., 1977, 25(2):286-287
57． B. Dave Oomah. Flavonoids and antioxidative activities in buckwheat [J]. J. Agric. Food chem., 1996, 44:1746-1750
58． 李晓芳．紫外分光光度法测定银杏叶提取物中芦丁含量[J]．时珍国医国药，2001，12(3):204-204
59． 宋寅生，曾照宏，郑青山．催化氧化紫外法测定复方芦丁片嚼组分的含量[J]．西北药学杂志，1998，13(2)：53-54
60． 陈新国．降糖口服液的质量研究[J]．湖北中医学院学报,2000，2(3)：45-46
61． 王丽琴，党高潮，顾莹．卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮素[J]．药物分析杂志，2000，20(1)：60-61
62． 黄武军，陈运生．薄层扫描法测定化痔胶囊中芦丁和黄芩甙的含量[J]．时珍国医国药，1998，9(5)：425-425
63． 马志茹，袁悼斌．单扫示波极谱法测定槐米和芦丁制剂中芦丁的含量[J]．中草药，1998，29(2):86-88
64． 张晓燕，姚国新，刘英等．高效液相色谱分析制备槐花散时温度对芦丁含量的影响[J]．时珍国医国药，2002，13(3)：136-137
65． 粱洁怡．HPLC法测定血压平片中芦丁的含量[J]．广东药学院学报，1998，14(4)：259-261
66． 杨美华，陈小荣，郑俊华．高效液相色谱法测定槐花药材中芦丁的含量[J]．中国药事，2000，14(1)：34-35
67． 程小霞．反相高效液相色潜测定降脂口服液中芦丁的含量[J]．时珍国医国药，2001，12(8):689-690
68． 王福成，豆文太，朱文学．HPLC测定山楂精中牡荆苷～2——0-鼠李糖苷、金丝桃苷、芦丁的含量[J]．中成药，2002，24(2)：122-124
69． 朱丽华，蒋国强，杨水新．高效液相色谱法测定菟丝子中芦丁、槲皮素、及山奈酚的含量[J]．浙江中医学院学报，2001，25(4):65-66
70． 江纪武，肖庆祥．植物药有效成分手册[M]．北京：人民卫生出版社，1986年3月出版
71． 赵玉平，肖春玲．苦荞麦不同器官总黄酮含量测定及分析[J]．食品科学，2004，25(10):264-266
72． 郑荣梁．自由基生命科学进展(第七集)[M]．北京：原子能出版社，1999，13
73． Hagihara M. Age-dependent changer in lipid peroxide levels in the lipoprotein e fractions of human serum [J]. Gerontdogy,1984,39(3):269
74． 高春燕，田呈瑞．枸杞多糖体外抗氧化特性研究[J]．粮食与油脂，2005，(7):28-29
75． Yenhun He, Fereidoon Shahidi. Antioxidant activity of green tea and catechins in a fish meat model system[J].J Agric Food Chem., 1997,45(11):4262-4265
76． 张泽生，乌兰．金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究[J]．天津科技大学学报，2005，20(2)：5-8
77． 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定[S]．中华人民共和国国家标准GB/T 5009.3—2003
78． 李裕，刘有智等．苦荞麦中提取芦丁的工艺研究.[J].华北工学院学报，2002，23(2):130-132
79． 廖亮．银杏叶中总黄酮提取方法研究[J]．食品科学，1994，8：40-42
80． 肖诗明等．苦荞麦茎叶中黄酮的提取工艺研究[J]．西昌农业高等专科学校学报，2003，12：16-18
81． 王昌利．超声提取芦丁得率的实验研究[J]．中成药，1993，15(2)：7-8
82． 郑公铭，罗宗铭．黄荆籽抗氧化作用研究[J]．食品科学,1999,3：21-23．
83． 毛莉娟等．苦丁茶中黄酮的提取工艺[J]．食品科技，2002，11：18-19．
84． 肖崇厚等．中药化学．上海；上海科技出版社，1987，247-248．
85． 郁建平等．大孔树脂提取荞麦芦丁工艺研究．[J]．贵州农业科学1997，25(2)：3-8
86． 王厚全等．纯芦丁的制备．[J]．化学试剂,2001，23(4)：251-252
87． 马志茹．芦丁清除活性氧自由基作用的电化学研究.[J]．分析化学，1997，12(25)：1465
88． 严建刚等．芹菜黄酮的提取条件及其抗氧化活性研究．[J].西北农林科技大学学报(自然科学版)，2005，1：131-135
89． 王静，刘大川．紫白苏叶黄铜类化合物抗氧化性能的研究．[J]．中国油脂，2004,29(3)：33-36