糖肽复合物高产真菌选育、发酵工艺优化和对肉仔鸡生产性能和免疫功能的影响
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摘要
本研究以药用真菌灵芝为主要研究对象，对灵芝的液体深层发酵工艺进行优化，运用原生质体技术进行了高产糖肽复合物新菌株的选育，以期提高深层发酵胞外PSPc的产量，研究了PSPc对肉仔鸡的生产性能和对免疫功能的影响。
试验一研究了灵芝液体深层发酵培养基中营养因子和非营养因子对PSPc分泌的影响，试验证明较高的碳氮比有利于PSPc的分泌，而且纤维素、半纤维素、Mg、K、P等营养因子对于灵芝的发酵过程中PSPc的分泌都有着一定的影响，并且确定了比较适合的添加量为KH_2PO_41.5g／L，MgSO_4·7H_2O 0.75g／L，最佳的C／N为50：1，添加纤维素和半纤维素、核酸可以促进PSPc的产量。以此为根据确定了以豆粕、玉米和麦麸为主要成分的培养基，以利于深层发酵PSPc的生产。在初步的发酵试验中PSPc的含量最高可以达到2.5mg／ml。
试验二运用原生质体技术，进行高产PSPc新菌株的选育，(1)通过对灵芝和香菇原生质体的制备和再生的条件进行了探索，可以使原生质体的数量达到10~7／ml，为利用原生质体进行紫外线诱变和原生质体融合试验打下了较好的基础并提供了丰富的试验材料。并利用荧光标记的方法，对灵芝和香菇的原生质体的融合条件和现象进行了观察和研究。(2)利用紫外线诱变选育出了两株在固体培养基上菌丝体生长速度和PSPc产量较高的新菌株(具体生产性能还有待进一步研究)。
试验三研究了液体深层发酵生产的PSPc对肉仔鸡的生产性能和免疫功能的影响。测定了不同生长阶段肉仔鸡的日增重、饲料转化率、牛血清白蛋白抗体、淋巴细胞转化率、死亡率、胸肌率、腿肌率和腹脂率。添加0.3％灵芝糖肽复合物饲料添加剂对肉仔鸡前期(28天)的生长性能最好较对照组的日增重提高5％，存在极显著差异(p＜0.01)，但是后期(47天)的生长性能与对照组差异不显著。添加0.3％和0.5％灵芝糖肽复合物对于肉仔鸡的免疫功能的增强效果是显著差异的。
This paper optimizes the conditions for the submerged fermentation process of Ganoerma lucidum and at the same time studies the application of the protoplast fusion technique on the breeding of variety which can produce high yield Polysaccharide Peptide Complex (PSPc) under submerged fermentation conditions. In addition, the influences the PSPc on the performance and immune function in broiler chickens have been studied.
Effects of the medium nutritional and non-nutritional ingredients on the excretion of PSPc have been investigated. The results showed that relatively higher C/N ratio was favorable to PSPc formation. And cellulose, hemicellulose, Mg, K. and P have a great influence on the growth of mycelia and the production of PSPc during fermentation. The optimal median with soybean powder, maize powder and wheat bran as the main gradients (C/N=50:l), and the optimal addition amount of KH2PO4(1.5g/L), MgSCV7H2O(0.75g/L) are confirmed. The fermentation experiment shows that the maximum yield of PSPc is 2.5mg/ml.
Protoplast fusion technique is used to breed the Ganoerma lucidum varieties which possess the steady property of high productivity. (l)The conditions of separation and regeneration of Ganoderma lucidum protoplast and Lentinula edodes protoplast are studied in detail. Results show that the highest production amounts to 107/ml. This study has laid the foundation for the following protoplast fusion and UV induced mutagenesis researchs. The fusion conditions between Ganoderma lucidum and Lentinus edodes have been studied by fluorescence labeled method. (2)By carrying out the UV induced mutagenesis of Ganoderma lucidum's protoplast, we obtain 2 mutants with higher mycelium growth rate and higher yield of PSPc in solid culture.
The influences of the PSPc obtained from submerged fermentation on the immune function and performance of broiler chickens have been studied in the third experiment. The average weight gain, feed conversion rate, bovine serum albumin(BSA) antibody value, T-lymphocyte proliferation, breast meat rate and leg meat rate have been tested. The animal test shows that the broiler chickens fed with the 0.3% fermentation broth for 28 days exhibit the best performance : 5% higher than the control group(p<0.01). The promoting effect of feeding 0.3% and 0.5% PSPc on the immune function of the broiler chickens is different.
试验一研究了灵芝液体深层发酵培养基中营养因子和非营养因子对PSPc分泌的影响，试验证明较高的碳氮比有利于PSPc的分泌，而且纤维素、半纤维素、Mg、K、P等营养因子对于灵芝的发酵过程中PSPc的分泌都有着一定的影响，并且确定了比较适合的添加量为KH_2PO_41.5g／L，MgSO_4·7H_2O 0.75g／L，最佳的C／N为50：1，添加纤维素和半纤维素、核酸可以促进PSPc的产量。以此为根据确定了以豆粕、玉米和麦麸为主要成分的培养基，以利于深层发酵PSPc的生产。在初步的发酵试验中PSPc的含量最高可以达到2.5mg／ml。
试验二运用原生质体技术，进行高产PSPc新菌株的选育，(1)通过对灵芝和香菇原生质体的制备和再生的条件进行了探索，可以使原生质体的数量达到10~7／ml，为利用原生质体进行紫外线诱变和原生质体融合试验打下了较好的基础并提供了丰富的试验材料。并利用荧光标记的方法，对灵芝和香菇的原生质体的融合条件和现象进行了观察和研究。(2)利用紫外线诱变选育出了两株在固体培养基上菌丝体生长速度和PSPc产量较高的新菌株(具体生产性能还有待进一步研究)。
试验三研究了液体深层发酵生产的PSPc对肉仔鸡的生产性能和免疫功能的影响。测定了不同生长阶段肉仔鸡的日增重、饲料转化率、牛血清白蛋白抗体、淋巴细胞转化率、死亡率、胸肌率、腿肌率和腹脂率。添加0.3％灵芝糖肽复合物饲料添加剂对肉仔鸡前期(28天)的生长性能最好较对照组的日增重提高5％，存在极显著差异(p＜0.01)，但是后期(47天)的生长性能与对照组差异不显著。添加0.3％和0.5％灵芝糖肽复合物对于肉仔鸡的免疫功能的增强效果是显著差异的。
This paper optimizes the conditions for the submerged fermentation process of Ganoerma lucidum and at the same time studies the application of the protoplast fusion technique on the breeding of variety which can produce high yield Polysaccharide Peptide Complex (PSPc) under submerged fermentation conditions. In addition, the influences the PSPc on the performance and immune function in broiler chickens have been studied.
Effects of the medium nutritional and non-nutritional ingredients on the excretion of PSPc have been investigated. The results showed that relatively higher C/N ratio was favorable to PSPc formation. And cellulose, hemicellulose, Mg, K. and P have a great influence on the growth of mycelia and the production of PSPc during fermentation. The optimal median with soybean powder, maize powder and wheat bran as the main gradients (C/N=50:l), and the optimal addition amount of KH2PO4(1.5g/L), MgSCV7H2O(0.75g/L) are confirmed. The fermentation experiment shows that the maximum yield of PSPc is 2.5mg/ml.
Protoplast fusion technique is used to breed the Ganoerma lucidum varieties which possess the steady property of high productivity. (l)The conditions of separation and regeneration of Ganoderma lucidum protoplast and Lentinula edodes protoplast are studied in detail. Results show that the highest production amounts to 107/ml. This study has laid the foundation for the following protoplast fusion and UV induced mutagenesis researchs. The fusion conditions between Ganoderma lucidum and Lentinus edodes have been studied by fluorescence labeled method. (2)By carrying out the UV induced mutagenesis of Ganoderma lucidum's protoplast, we obtain 2 mutants with higher mycelium growth rate and higher yield of PSPc in solid culture.
The influences of the PSPc obtained from submerged fermentation on the immune function and performance of broiler chickens have been studied in the third experiment. The average weight gain, feed conversion rate, bovine serum albumin(BSA) antibody value, T-lymphocyte proliferation, breast meat rate and leg meat rate have been tested. The animal test shows that the broiler chickens fed with the 0.3% fermentation broth for 28 days exhibit the best performance : 5% higher than the control group(p<0.01). The promoting effect of feeding 0.3% and 0.5% PSPc on the immune function of the broiler chickens is different.
引文
曹容华，等．灵芝糖肽复合物抗肿瘤的机理研究．山东医科大学学报，1992，30 (3)：203
曹容华．灵芝糖肽复合物对免疫调节作用的试验研究 (J)．山东医科大学学报，1993，31 (4)：287～290
陈国良．灵芝有效成分研究进展．中国食用菌，1994，4 (14)：7
陈海昌，唐屹，张岭花，等．原生质体融合技术提高啤酒酵母絮凝性的研究[J] ．微生物学通报，1994，21 (4)：203～217
陈书明．聂向庭．王勤等．人工培养灵芝免疫活性成分初探．山西农业大学学报，1994，14 (4)：429～430
董昌金．灵芝糖肽复合物的提取及对小鼠免疫功能影响的研究．湖北师范学院学报 (自然科学版，2001，21 (3)：72～77
方庆华，钟建江．灵芝真菌发酵生产灵芝糖肽复合物和灵芝酸．华东理工大学学报，2001，27 (3)：254～257
冯小黎，高文英，冯朴荪，等．灵芝菌液体深层培养的研究．中国生化药物杂志，1995，16 (5)：210～213．
黄为群，吴其威，黄瑞珊等．灵芝菌发酵产物组分的分离与性质研究．上海交通大学学报，1994，28 (2)：83～88
孔乐生，黄瑞珊，罗九甫．赤芝GL-2发酵液中多糖组分及活性研究．工业微生物，2000，30 (5)：27～30
关洪昌等．灵芝多枪D6时核酸蛋白质合成的影响及其初步分析．北京医学院学报，1981，13 (4)：261
郭嘉铭，上官舟建，陈景潮．药用真菌的研究与开发概述．中国食用菌，1993，13 (3)：8～10
贺红，肖省娥，徐新春，等．灵芝菌丝体深层培养的研究．广州中医药大学学报，1998，15 (3)：217～219
贺敏霞，史济平，褚志义．诺卡氏菌原生质体融合重组研究[J] ．生物工程学报，1989，5 (4)：303～308
江慧修，张金玲，戈玲，等．凝集性酵母融合株M N F 29的啤酒酿造实验研究[J] ．微生物学通报，1992，19 (1)：21～23
乐超声，邵伟，邓春霞．灵芝液体发酵条件的研究．生物学杂志，1999，16 (1)：15～17
李刚，李宝键．发酵灵芝菌粉和灵芝子实体中灵芝糖肽复合物含量的比较．中国食用菌，1999，19 (1)：36
李明春，梁东升．灵芝糖肽复合物对小鼠T细胞 IL-2，IL-3 mRNA 表达的影响．解放军药学学报，2001，17 (3)：125～128
李平作，徐柔，章克昌．灵芝胞外多糖深层发酵培养基的优化．无锡轻工大学学报，1998，17 (4)：26～30
李平作，章克昌．灵芝胞外生物活性多糖的PH控制发酵．微生物学通报，2000，27 (1)：1～8
李时珍．本草纲目．校点本下册．北京：人民卫生出版社，1982，1711～1712
李武军，郑幼霞，王洪洲，陆小燕．赤霉素产生菌藤仓赤霉原生质体的形成和再生[J] ．真菌学报，1992，11 (3)：221～228
林耀辉．灵芝GL8801液体发酵胞外多糖的提取和结构研究．福州大学学报(自然科学版)．1997，25 (1)：124～128
林占禧，高怀宾，林辉．菌草灵芝、菌糠和中草药饲料添加剂防治仔猪肠炎的效果．福建农林大学学报(自然科学版)，2004，33 (1)：85～88
刘冬，李世敏．pH值及溶解氧对灵芝糖肽复合物深层液态发酵的影响与控制．食品与发酵工业，2001，27 (6)：7～10
刘冬，李世敏，许柏球．灵芝菌丝体深层液体发酵培养基研究．微生物学杂志．2001，21 (2)
刘美琴．灵芝多糖的研究进展．微生物学通报，1998，25 (3)：173～175
陆正武．吗啡的精神神经的免疫学作用以及灵芝糖肽复合物肽对吗啡依赖小鼠的免疫保护效应．生理科学进展，1995，26 (1)：45
罗立新，姚汝华，周少奇．灵芝深层培养工艺的研究．华南理工大学学报 (自然科学版)，1997，25 (5)：67～70
罗少洪，杨红．灵芝糖肽复合物调节血糖作用的实验研究．广东药学院学报，2002，16 (2)：119～120
马玉银，于智勇．食用菌原生质体分离与再生的技术[J] ．生物学杂志，1992，2：13～15
穆国俊，董毓琨，黄冠辉．苏云金芽孢杆菌B t 3701与巨大芽孢杆菌B m 107种间原生质体融合[J] ．微生物学报，1995，35 (5)：322～326
潘继红，曹霞，李峰，等．灵芝液体培养营养需求的探讨．食用菌学报，1997，4 (1)：31～34
庞小燕，王吉瑛，赵凤生．构建直接发酵淀粉产生酒精的胶木融合菌株的研究[J] ．生物工程学报，2001，17 (2)：165～169
宋频然，常继东．灵芝胞外多糖高产菌株筛选及其深层发酵培养基的优化．食用菌学报，2003，10 (2)：9～16
孙东平，潘锋，史小丽等．灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化．中草药，2000，31 (12)：941
汤亚杰等．高等真菌深层发酵生产有用生物活性物质．华东理工大学学报，2001，12：704
王芳生．赤芝子实体中灵芝酸类成分的研究．药学学报，1997，32 (6)：447
王金发，陆军，武文，等．龟裂链霉菌原生质体的形成和再生[J] ．遗传，1986，8 (5)：23～25
王谦，李育岳．灵芝深层培养及应用研究．食用菌学报，1994，1 (2)：37～40
王宪，范云六．通过原生质体融合产生的苏云金杆菌的新菌株[J] ．生物工程学报，1987，3：29～37
王沁．假丝酵母原生质体形成与再生的研究[J] ．遗传，1996，18 (2)：43～45
王小铁，等．松杉树芝多糖对小鼠免疫功能的增强作用．灵芝研究专题讨论会论文摘要集，中国药学会等主办，1991：38
汪效英，刘广芬，陈崇宏．灵芝糖肽复合物的提取纯化及GLP_2抗血液凝固和抗血栓形成作用．福建医科大学学报，2002，36 (2)：189～192
吴东儒主编．糖类的生物化学．北京：高等教育出版社，1987，518
吴金男，郁达，吴铁军．灵芝胞外多糖液体发酵培养基的优化．山西师范大学学报 (自然科学版)，2001，15 (4)：59～63
谢春芳，杭怡群，潘杰．添加云芝多糖后鸡对ND，IBD免疫应答的实验．上海畜牧兽医通讯，1997，5：22
谢大为等．灵芝糖肽复合物成分BN_3C及苦参碱对小鼠T细胞的作用．中华微生物和免疫学杂志，1985，5 (1)：8～12
邢孔昭，王巽一，李焕娄．种间原生质体融合提高巴龙霉素单位产量的研究[J] ．生物工程学报，1988，4 (1)：48～54
邢来君，张军，孙光．米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验[J] ．真菌学报，1987，6 (4)：242～247
徐新等．灵芝糖肽复合物增强人脐血LAK细胞活性机理研究．中国肿瘤生物治疗杂志，1997，131：236
杨玉秀，段芳龄．灵芝糖肽复合物脂质体激活肝癌患者巨噬细胞抗肿瘤作用的研究．中华消化杂志，1997，17 (1)：58
杨云鹏，岳德超，霍泽民．薄盖灵芝菌深层发酵培养的研究．药学学报，1979，14 (7)：434～438．
余敦寿，易吉平．灵芝深层发酵菌丝体、发酵液及灵芝子实体的氨基酸分析比较．氨基酸杂志，1990：(2)：44～46
俞光第．云芝糖肽对大鼠下丘脑内侧基底部电活动和脾淋巴细胞免疫功能的调节．苏州医学院学报，1994，14 (5)：365
俞光第，等．灵芝糖肽对大鼠下丘脑内侧基底部电活动和免疫功能的影响．中国药理学报，1996，17 (3)：271
袁志明．啤酒酵母和产朊假丝酵母属间原生质体融合子的筛选[J] ．微生物学通报，1991，18 (5)：271～275
张瑾阳，吕婉瑜，韩卫华，等．金色链霉菌原生质体电融合[J] ．中国抗生素杂志，1993，18 (3)：163～168
张爵玉，黄仪凤．核苷酸制剂对灵芝的增产试验研究．钟恺农业技术学院学报，1995，8 (1)：23～26
张李阳，熊晓辉，沈昌，等．灵芝子实体及其深层培养产物特性的研究．中国食用菌，1998，17 (1)：15～16
张群豪，林志彬．灵芝糖肽复合物GL-B的抑瘤作用和机制研究．中国中西医结合杂志，1999，19 (9)：544～547
张卫国，刘欣，陈永泉．灵芝糖肽复合物的研究进展．广州食品工业科技，2003，19 (3)：85～89
张翼伸．多糖的结构与功能．生物学通报，1992，1：3～42
周键等．食用菌深层发酵的研究进展．微生物学通报，2003，30 (6)：111～114
周选围．不同培养基对灵芝菌丝生长的影响．汉中师范学院学报，1996，2：61～6
BohnJohnA, BemMillerJamesN. (1～3) - (-Glucansas biological reponse modifiers: a review of structure-functional activity relationships. Carbohydrate Polymers, 1995, 28: 3～14
Ferenczy L, Kevei F. Fusion of fungal protoplasts[J] . Nature, 1974, 248: 793～796
Fang Q H, Zhong J J. Process Biochemistry, 2002, 37 (7): 769～774
Goegelman R T.[P] . USPatent 4, 1988: 789, 684
Hamlyn P I, Ball C. Genetics of Industrial Microorganisms[M] . Sebek OK and Laskin AI (ed.), 1979: 185～199
HikinoH, KonnoC, MirinY, et al. Isolation and hypo-glycemicactivity of ganoderans A and B, glycans of Ganoderma lucidurn fruit bodies[J] . Planta Med, 1985, 4: 339-340
Jeong KH, Park W B, Kim H W, et al. Korean J of Mycol, 1992, 20 (4): 324～336
KacD. The major sterols from three species of polyporaceae[J] . Phytochemistry, 1984, 23: 2686-2690
LeeKM, LeeSY, LeeHY. Bistage control of pH for improving exopolysaccharide production from mycelia of Ganoderma lucidum in an air-lift fermentor[J] . Jbiosci Bio-eng, 1999, 88: 646-650
MizunoT, WangG, ZhangJ, et al. Reishi, Ganoderma lucidum and Ganoderma tsugae: bioactive substances and medicinal effects[J] . FoodRevlntl, 1995, 11: 151-166
Omura S, Ikada H, Tanaka H. Selective production of specific components of avermectins in streptomyces avermitillis[J] . J Antibiotics, 1991, 44 (5): 560～563
Seong-KugEo, Young-SoKim, Chong-kilLee, Seong-SunHan. Possible mode of antiviral activity of acidic protein bound polysaccharide isolated from Granoderma lucidum on herpes simplex viruses Journal of Ethnopharmacology 2000 (72): 475-481
SoneY, OkudaR, WadaN, et al. Structures and antitumoractivities of the polysaccharides isolated from fruitingbody and the growing fermentation of mycelium of Ganoderma lucidum[J] . Agric Biol Chem, 1985, 49: 2641-2653
Tosaka O. Abatracts of the Ⅳ th International Symposium on Genetics of Industrial Microorganisms[C] . 1982, 61
TsengTC, ShiaoMS, ShiehYS, et al. Study on Ganoderma lucidum Liquid culture and chemical composition of mycelium[J] . Bot Bull Acad Sinica, 1984, 25: 149-157
TsujikuraY, HiguchiT, MiyamotoY, et al. Manufacture of ganodericacid by fermentation of Ganoderma lucidum[P] . JP: 04304890, 1992
UsuiT, IwasakiY, HayashiK, et al. Antitumor activity of water-soluble β-glucane laborated by Ganodermaap-planatum. Agric Biol Chem, 1984, 45: 323～3265
Xia D, Lin Z B, U R Z et al. J Beijing Med Univ, 1989, 21 (6): 533
YangFC, LiauCB. The influence of environmental conditions on polysaccharide for mation by Ganoderma lucidum in submerged fermentations[J] . Process Biochem, 1998, 33: 547-553
Yeshiyuki Kimura, et al. Effects of the extracts of ganoderma lucidum on blood glucose level in rats. plant Medical. 1988, 54 (4): 290
曹容华．灵芝糖肽复合物对免疫调节作用的试验研究 (J)．山东医科大学学报，1993，31 (4)：287～290
陈国良．灵芝有效成分研究进展．中国食用菌，1994，4 (14)：7
陈海昌，唐屹，张岭花，等．原生质体融合技术提高啤酒酵母絮凝性的研究[J] ．微生物学通报，1994，21 (4)：203～217
陈书明．聂向庭．王勤等．人工培养灵芝免疫活性成分初探．山西农业大学学报，1994，14 (4)：429～430
董昌金．灵芝糖肽复合物的提取及对小鼠免疫功能影响的研究．湖北师范学院学报 (自然科学版，2001，21 (3)：72～77
方庆华，钟建江．灵芝真菌发酵生产灵芝糖肽复合物和灵芝酸．华东理工大学学报，2001，27 (3)：254～257
冯小黎，高文英，冯朴荪，等．灵芝菌液体深层培养的研究．中国生化药物杂志，1995，16 (5)：210～213．
黄为群，吴其威，黄瑞珊等．灵芝菌发酵产物组分的分离与性质研究．上海交通大学学报，1994，28 (2)：83～88
孔乐生，黄瑞珊，罗九甫．赤芝GL-2发酵液中多糖组分及活性研究．工业微生物，2000，30 (5)：27～30
关洪昌等．灵芝多枪D6时核酸蛋白质合成的影响及其初步分析．北京医学院学报，1981，13 (4)：261
郭嘉铭，上官舟建，陈景潮．药用真菌的研究与开发概述．中国食用菌，1993，13 (3)：8～10
贺红，肖省娥，徐新春，等．灵芝菌丝体深层培养的研究．广州中医药大学学报，1998，15 (3)：217～219
贺敏霞，史济平，褚志义．诺卡氏菌原生质体融合重组研究[J] ．生物工程学报，1989，5 (4)：303～308
江慧修，张金玲，戈玲，等．凝集性酵母融合株M N F 29的啤酒酿造实验研究[J] ．微生物学通报，1992，19 (1)：21～23
乐超声，邵伟，邓春霞．灵芝液体发酵条件的研究．生物学杂志，1999，16 (1)：15～17
李刚，李宝键．发酵灵芝菌粉和灵芝子实体中灵芝糖肽复合物含量的比较．中国食用菌，1999，19 (1)：36
李明春，梁东升．灵芝糖肽复合物对小鼠T细胞 IL-2，IL-3 mRNA 表达的影响．解放军药学学报，2001，17 (3)：125～128
李平作，徐柔，章克昌．灵芝胞外多糖深层发酵培养基的优化．无锡轻工大学学报，1998，17 (4)：26～30
李平作，章克昌．灵芝胞外生物活性多糖的PH控制发酵．微生物学通报，2000，27 (1)：1～8
李时珍．本草纲目．校点本下册．北京：人民卫生出版社，1982，1711～1712
李武军，郑幼霞，王洪洲，陆小燕．赤霉素产生菌藤仓赤霉原生质体的形成和再生[J] ．真菌学报，1992，11 (3)：221～228
林耀辉．灵芝GL8801液体发酵胞外多糖的提取和结构研究．福州大学学报(自然科学版)．1997，25 (1)：124～128
林占禧，高怀宾，林辉．菌草灵芝、菌糠和中草药饲料添加剂防治仔猪肠炎的效果．福建农林大学学报(自然科学版)，2004，33 (1)：85～88
刘冬，李世敏．pH值及溶解氧对灵芝糖肽复合物深层液态发酵的影响与控制．食品与发酵工业，2001，27 (6)：7～10
刘冬，李世敏，许柏球．灵芝菌丝体深层液体发酵培养基研究．微生物学杂志．2001，21 (2)
刘美琴．灵芝多糖的研究进展．微生物学通报，1998，25 (3)：173～175
陆正武．吗啡的精神神经的免疫学作用以及灵芝糖肽复合物肽对吗啡依赖小鼠的免疫保护效应．生理科学进展，1995，26 (1)：45
罗立新，姚汝华，周少奇．灵芝深层培养工艺的研究．华南理工大学学报 (自然科学版)，1997，25 (5)：67～70
罗少洪，杨红．灵芝糖肽复合物调节血糖作用的实验研究．广东药学院学报，2002，16 (2)：119～120
马玉银，于智勇．食用菌原生质体分离与再生的技术[J] ．生物学杂志，1992，2：13～15
穆国俊，董毓琨，黄冠辉．苏云金芽孢杆菌B t 3701与巨大芽孢杆菌B m 107种间原生质体融合[J] ．微生物学报，1995，35 (5)：322～326
潘继红，曹霞，李峰，等．灵芝液体培养营养需求的探讨．食用菌学报，1997，4 (1)：31～34
庞小燕，王吉瑛，赵凤生．构建直接发酵淀粉产生酒精的胶木融合菌株的研究[J] ．生物工程学报，2001，17 (2)：165～169
宋频然，常继东．灵芝胞外多糖高产菌株筛选及其深层发酵培养基的优化．食用菌学报，2003，10 (2)：9～16
孙东平，潘锋，史小丽等．灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化．中草药，2000，31 (12)：941
汤亚杰等．高等真菌深层发酵生产有用生物活性物质．华东理工大学学报，2001，12：704
王芳生．赤芝子实体中灵芝酸类成分的研究．药学学报，1997，32 (6)：447
王金发，陆军，武文，等．龟裂链霉菌原生质体的形成和再生[J] ．遗传，1986，8 (5)：23～25
王谦，李育岳．灵芝深层培养及应用研究．食用菌学报，1994，1 (2)：37～40
王宪，范云六．通过原生质体融合产生的苏云金杆菌的新菌株[J] ．生物工程学报，1987，3：29～37
王沁．假丝酵母原生质体形成与再生的研究[J] ．遗传，1996，18 (2)：43～45
王小铁，等．松杉树芝多糖对小鼠免疫功能的增强作用．灵芝研究专题讨论会论文摘要集，中国药学会等主办，1991：38
汪效英，刘广芬，陈崇宏．灵芝糖肽复合物的提取纯化及GLP_2抗血液凝固和抗血栓形成作用．福建医科大学学报，2002，36 (2)：189～192
吴东儒主编．糖类的生物化学．北京：高等教育出版社，1987，518
吴金男，郁达，吴铁军．灵芝胞外多糖液体发酵培养基的优化．山西师范大学学报 (自然科学版)，2001，15 (4)：59～63
谢春芳，杭怡群，潘杰．添加云芝多糖后鸡对ND，IBD免疫应答的实验．上海畜牧兽医通讯，1997，5：22
谢大为等．灵芝糖肽复合物成分BN_3C及苦参碱对小鼠T细胞的作用．中华微生物和免疫学杂志，1985，5 (1)：8～12
邢孔昭，王巽一，李焕娄．种间原生质体融合提高巴龙霉素单位产量的研究[J] ．生物工程学报，1988，4 (1)：48～54
邢来君，张军，孙光．米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验[J] ．真菌学报，1987，6 (4)：242～247
徐新等．灵芝糖肽复合物增强人脐血LAK细胞活性机理研究．中国肿瘤生物治疗杂志，1997，131：236
杨玉秀，段芳龄．灵芝糖肽复合物脂质体激活肝癌患者巨噬细胞抗肿瘤作用的研究．中华消化杂志，1997，17 (1)：58
杨云鹏，岳德超，霍泽民．薄盖灵芝菌深层发酵培养的研究．药学学报，1979，14 (7)：434～438．
余敦寿，易吉平．灵芝深层发酵菌丝体、发酵液及灵芝子实体的氨基酸分析比较．氨基酸杂志，1990：(2)：44～46
俞光第．云芝糖肽对大鼠下丘脑内侧基底部电活动和脾淋巴细胞免疫功能的调节．苏州医学院学报，1994，14 (5)：365
俞光第，等．灵芝糖肽对大鼠下丘脑内侧基底部电活动和免疫功能的影响．中国药理学报，1996，17 (3)：271
袁志明．啤酒酵母和产朊假丝酵母属间原生质体融合子的筛选[J] ．微生物学通报，1991，18 (5)：271～275
张瑾阳，吕婉瑜，韩卫华，等．金色链霉菌原生质体电融合[J] ．中国抗生素杂志，1993，18 (3)：163～168
张爵玉，黄仪凤．核苷酸制剂对灵芝的增产试验研究．钟恺农业技术学院学报，1995，8 (1)：23～26
张李阳，熊晓辉，沈昌，等．灵芝子实体及其深层培养产物特性的研究．中国食用菌，1998，17 (1)：15～16
张群豪，林志彬．灵芝糖肽复合物GL-B的抑瘤作用和机制研究．中国中西医结合杂志，1999，19 (9)：544～547
张卫国，刘欣，陈永泉．灵芝糖肽复合物的研究进展．广州食品工业科技，2003，19 (3)：85～89
张翼伸．多糖的结构与功能．生物学通报，1992，1：3～42
周键等．食用菌深层发酵的研究进展．微生物学通报，2003，30 (6)：111～114
周选围．不同培养基对灵芝菌丝生长的影响．汉中师范学院学报，1996，2：61～6
BohnJohnA, BemMillerJamesN. (1～3) - (-Glucansas biological reponse modifiers: a review of structure-functional activity relationships. Carbohydrate Polymers, 1995, 28: 3～14
Ferenczy L, Kevei F. Fusion of fungal protoplasts[J] . Nature, 1974, 248: 793～796
Fang Q H, Zhong J J. Process Biochemistry, 2002, 37 (7): 769～774
Goegelman R T.[P] . USPatent 4, 1988: 789, 684
Hamlyn P I, Ball C. Genetics of Industrial Microorganisms[M] . Sebek OK and Laskin AI (ed.), 1979: 185～199
HikinoH, KonnoC, MirinY, et al. Isolation and hypo-glycemicactivity of ganoderans A and B, glycans of Ganoderma lucidurn fruit bodies[J] . Planta Med, 1985, 4: 339-340
Jeong KH, Park W B, Kim H W, et al. Korean J of Mycol, 1992, 20 (4): 324～336
KacD. The major sterols from three species of polyporaceae[J] . Phytochemistry, 1984, 23: 2686-2690
LeeKM, LeeSY, LeeHY. Bistage control of pH for improving exopolysaccharide production from mycelia of Ganoderma lucidum in an air-lift fermentor[J] . Jbiosci Bio-eng, 1999, 88: 646-650
MizunoT, WangG, ZhangJ, et al. Reishi, Ganoderma lucidum and Ganoderma tsugae: bioactive substances and medicinal effects[J] . FoodRevlntl, 1995, 11: 151-166
Omura S, Ikada H, Tanaka H. Selective production of specific components of avermectins in streptomyces avermitillis[J] . J Antibiotics, 1991, 44 (5): 560～563
Seong-KugEo, Young-SoKim, Chong-kilLee, Seong-SunHan. Possible mode of antiviral activity of acidic protein bound polysaccharide isolated from Granoderma lucidum on herpes simplex viruses Journal of Ethnopharmacology 2000 (72): 475-481
SoneY, OkudaR, WadaN, et al. Structures and antitumoractivities of the polysaccharides isolated from fruitingbody and the growing fermentation of mycelium of Ganoderma lucidum[J] . Agric Biol Chem, 1985, 49: 2641-2653
Tosaka O. Abatracts of the Ⅳ th International Symposium on Genetics of Industrial Microorganisms[C] . 1982, 61
TsengTC, ShiaoMS, ShiehYS, et al. Study on Ganoderma lucidum Liquid culture and chemical composition of mycelium[J] . Bot Bull Acad Sinica, 1984, 25: 149-157
TsujikuraY, HiguchiT, MiyamotoY, et al. Manufacture of ganodericacid by fermentation of Ganoderma lucidum[P] . JP: 04304890, 1992
UsuiT, IwasakiY, HayashiK, et al. Antitumor activity of water-soluble β-glucane laborated by Ganodermaap-planatum. Agric Biol Chem, 1984, 45: 323～3265
Xia D, Lin Z B, U R Z et al. J Beijing Med Univ, 1989, 21 (6): 533
YangFC, LiauCB. The influence of environmental conditions on polysaccharide for mation by Ganoderma lucidum in submerged fermentations[J] . Process Biochem, 1998, 33: 547-553
Yeshiyuki Kimura, et al. Effects of the extracts of ganoderma lucidum on blood glucose level in rats. plant Medical. 1988, 54 (4): 290