盾叶薯蓣中皂甙的提取分离、结构剖析及生物活性研究
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摘要
研究背景
钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主。因此，控制钉螺是血吸虫病防治的关键技术之一。目前常用的氯硝柳胺等化学灭螺剂，虽有高效速效的技术优势，但存在对鱼毒性大及价格高等弊病，因而从上世纪30年代以来，研制灭螺高效、环境安全及价格低廉的植物灭螺剂成了国内外研究的热点。但至今尚未研究出一种达到WHO要求的植物灭螺剂。
研究的内容和意义
开展杀螺显效植物DZ根茎中皂甙的提取分离、结构剖析及生物活性研究，为创制WHO标准的新型杀螺药物提供设计依据和物质基础。
研究方法和结果
DZ中皂甙的提取分离和结构剖析研究：使用DZ根茎原粉，经80％EtOH超声水浴浸提，离心、活性炭脱色、结晶及CCL法的分离纯化，获得有效皂甙单体DZ-I。经HPLC-VWD和ELSD检测，DZ-I的纯度为98％，结构解析进行中。
DZ-I的生物活性研究：依照WHO灭螺试验法研究，8．0 mg·L~(-1)和16．0 mg·L~(-1)。的DZ-I浸泡48h，灭螺率分别为91．6％和100％。
使用钉螺软体组织制备的GPT，在经L_(25)(5~6)正交试验法确定GPT反应的最佳组合条件(酶浓度0．1mg·mL~(-1)，底物浓度5μmol·L~(-1)，反应体系pH6．5，反应温度35℃，反应时间30min)下，用1．0、5．0、10、50、100 mg·L~(-1)的DZ-I作用GPT，其诱导活性分别为168、138、96、75及57％，结果显示低剂量DZ-I的诱导活性高。
使用平板抑菌法，50 mg·L~(-1)对棉花枯萎菌、水稻纹枯菌、黄瓜灰霉菌、小麦赤霉菌、苹果轮纹菌及棉花炭疽菌48h的生长抑制率分别为26．32、10．26、17．39、3．70、28.30及4．55％
Background of the research
Oncomelania hupensis is the only intermediate host of schistosoma japonicum Katsumade. So killing snail is one of the critical technologies to controling schistosomiasis . Now,chemical molluscicide such as niclosamide which is used commonly is high effective.but it is expensive and toxic to fish.therefore,from the 1930s,studying efficient,safe and inexpensive plant molluscicide become the hot spot in the world. But now there is no one plant molluscicide which can reach WHO'S standards.
Content and significance of the research
It is to study on exteraction and isolation,structural analysis and biological activity of sponins,which is from molluscicidal plant Dioscorea Zingberensis,For creation of new molluscicide offering basis for designand material basis.
Methods and results of reaserch
Extration and isolation and structural analysis of sponins from DZ. The DZ powder was extracted amd speparated by ultrasomit, centrifugal and acctivated carbon decolonzation, and was purificated by r-crystallization,TLC and CCL. Then,we got effective saponins DZ-I.By detection of HPLC VWD and ELSD, the purity of DZ-I is 98%.Stracture analysis of DZ-I is doing.
Molluscicide activity and inhibiting GPT activity of DZ-I. Molluscicidal test method according to the WHO'S standards,molluscicidal rates was 91.6 and 100% at 8.0 and 16.0 mg·L~(-1)(?) of DZ-I for immersion in 48h.
The GPT was spearated from snail, under the optimal conditions on the GPT response (0.1mg.ml~(-1)GPT,5μmol·L~(-1) substrate ,Ph6.5, 35℃,30min) by L_(25)(5~6) orthogonal matrix method,we studied the influence of DZ-I to GPT activity. The induced activity was 168, 138, 96, 75 and 57% at 1.0, 5.0, 10, 50 and 100 mg.L~(-1) of DZ-I. The result indicate that the induced activity is highest at the lowest concertration of DZ-I.
By the use of flat-panel antibacterial law, the inhibiting rate of 50 mg·L~(-1)DZ-I is 26.32、1.26、17.39、3.70、28.30 and 4.55% to Fusarium oxysporium , Rhizoctonia solani, Botrytis cinereapers , Gibberella zeae , Dothiorella gregaria , Colletotrichum gossypii respectively in 48 h.
钉螺是日本血吸虫的唯一中间宿主。因此，控制钉螺是血吸虫病防治的关键技术之一。目前常用的氯硝柳胺等化学灭螺剂，虽有高效速效的技术优势，但存在对鱼毒性大及价格高等弊病，因而从上世纪30年代以来，研制灭螺高效、环境安全及价格低廉的植物灭螺剂成了国内外研究的热点。但至今尚未研究出一种达到WHO要求的植物灭螺剂。
研究的内容和意义
开展杀螺显效植物DZ根茎中皂甙的提取分离、结构剖析及生物活性研究，为创制WHO标准的新型杀螺药物提供设计依据和物质基础。
研究方法和结果
DZ中皂甙的提取分离和结构剖析研究：使用DZ根茎原粉，经80％EtOH超声水浴浸提，离心、活性炭脱色、结晶及CCL法的分离纯化，获得有效皂甙单体DZ-I。经HPLC-VWD和ELSD检测，DZ-I的纯度为98％，结构解析进行中。
DZ-I的生物活性研究：依照WHO灭螺试验法研究，8．0 mg·L~(-1)和16．0 mg·L~(-1)。的DZ-I浸泡48h，灭螺率分别为91．6％和100％。
使用钉螺软体组织制备的GPT，在经L_(25)(5~6)正交试验法确定GPT反应的最佳组合条件(酶浓度0．1mg·mL~(-1)，底物浓度5μmol·L~(-1)，反应体系pH6．5，反应温度35℃，反应时间30min)下，用1．0、5．0、10、50、100 mg·L~(-1)的DZ-I作用GPT，其诱导活性分别为168、138、96、75及57％，结果显示低剂量DZ-I的诱导活性高。
使用平板抑菌法，50 mg·L~(-1)对棉花枯萎菌、水稻纹枯菌、黄瓜灰霉菌、小麦赤霉菌、苹果轮纹菌及棉花炭疽菌48h的生长抑制率分别为26．32、10．26、17．39、3．70、28.30及4．55％
Background of the research
Oncomelania hupensis is the only intermediate host of schistosoma japonicum Katsumade. So killing snail is one of the critical technologies to controling schistosomiasis . Now,chemical molluscicide such as niclosamide which is used commonly is high effective.but it is expensive and toxic to fish.therefore,from the 1930s,studying efficient,safe and inexpensive plant molluscicide become the hot spot in the world. But now there is no one plant molluscicide which can reach WHO'S standards.
Content and significance of the research
It is to study on exteraction and isolation,structural analysis and biological activity of sponins,which is from molluscicidal plant Dioscorea Zingberensis,For creation of new molluscicide offering basis for designand material basis.
Methods and results of reaserch
Extration and isolation and structural analysis of sponins from DZ. The DZ powder was extracted amd speparated by ultrasomit, centrifugal and acctivated carbon decolonzation, and was purificated by r-crystallization,TLC and CCL. Then,we got effective saponins DZ-I.By detection of HPLC VWD and ELSD, the purity of DZ-I is 98%.Stracture analysis of DZ-I is doing.
Molluscicide activity and inhibiting GPT activity of DZ-I. Molluscicidal test method according to the WHO'S standards,molluscicidal rates was 91.6 and 100% at 8.0 and 16.0 mg·L~(-1)(?) of DZ-I for immersion in 48h.
The GPT was spearated from snail, under the optimal conditions on the GPT response (0.1mg.ml~(-1)GPT,5μmol·L~(-1) substrate ,Ph6.5, 35℃,30min) by L_(25)(5~6) orthogonal matrix method,we studied the influence of DZ-I to GPT activity. The induced activity was 168, 138, 96, 75 and 57% at 1.0, 5.0, 10, 50 and 100 mg.L~(-1) of DZ-I. The result indicate that the induced activity is highest at the lowest concertration of DZ-I.
By the use of flat-panel antibacterial law, the inhibiting rate of 50 mg·L~(-1)DZ-I is 26.32、1.26、17.39、3.70、28.30 and 4.55% to Fusarium oxysporium , Rhizoctonia solani, Botrytis cinereapers , Gibberella zeae , Dothiorella gregaria , Colletotrichum gossypii respectively in 48 h.
引文
[1]毛守白．血吸虫生物学与血吸虫病的防治[M]．北京：人民卫生出版社．1991， 719-329．
[2]周晓农，汪天平，王立英，等．中国血吸虫病流行现状分析[J]．中华流行病学 杂志，2004，25(7)：555-558．
[3]上海寄生虫病研究所．血吸虫病的防治[M]．上海：上海人民出版社，1972．
[4]Xu XJ,Fang TQ. Observation on collecting Oncomelania hupensis when opening the sluices during flood season in Yangtze Rive. Kasetsart J, 1988, 22: 251-260.
[5]Xu XJ, Fang TQ, Yu CH, et al. Relationship between sluicing forirrigation and spreading of Oncomelania hupensisin Hubei province. Kasetsart J, 1989, 23: 281-286.
[6]马巍，匡尚富，廖文根，等．我国血吸虫病防治现状与研究方向[J]．中国水利 水电科学研究院学报，2006，4(4)．
[7]李兆芹、滕卫平、俞善贤、韩晓军．适合钉螺、血吸虫生长发育的气候条件变 化[J]．气象变化研究进展 2005，3(2)：106-109.
[8]周晓农，等．实用钉螺学[M].北京：科学出版社．2005，249-290．
[9]吴亮，陈盛霞，扬小明．植物灭螺剂及其灭螺机理的研究进展[J]．江苏大学学报 (医学版)2007，17(1)87-89
[10]Archibald R G. The use of fruit of the tree Balanites aegyptica in the control of schistosom iasis in the Sudan [J]. Trans R Soc Med Hyg, 1933, 27: 207-211
[11]Evans NA. Molluscicidal activity in the seeds of Millettia Thonningii[J]. Transaction of the Royal Society of Tropical Medi-cine and Hygiene, 1986, 80: 451-453.
[12]Hmamouchi M. Molluscicidal activity of some isoflavone compounds[J]. Fitoterapia, 1998, 69(2): 161-164.
[13]李洁．异黄酮化合物的生物效能及在血吸虫病控制中的作用[J]．中国病原生物学 杂志，2006，1(1)：62-63．
[14]谢格，刘绍明，周鸿勇，等．一种专用于消灭钉螺的麻风树籽提取物及提取方 法和应用：中国，98121712．5[P]．1999．
[15]Schall VT, de Vasconcellos MC, Villaca-Coelho AL, et al. Evaluation of temporal, seasonal and geographic stability of the molluscicidal property of Euphorbia splendens latex [J]. Rev Inst Med Trop Sao Paulo, 1992, 34(3): 183-191.
[16]Belot J, Geerts S, et al. Field trials to control schistosome intermediate hosts by theplant molluscicide Ambrosia maritime L. in the Senegal River Basin [J]. ActaTrop.1993, 52(4): 275-282.
[17]Madhina D, Shiff C. Prevention of snail miracidia interactions using Phytolaccadodecandra (L.Herit) (endod) as a miracidiacide: an alternative approach on the focalcontrol of schistosomiasis[J]. Tropical Medicine & International Health, 1996 Apr:1(2): 221-226.
[18]Hmamouchi M.Molluscicidal activity of some isoflavone compounds[J]. Fitoterapia,1998,69(2):161-164
[19]A. Evans, et.al.. Molluscicidal activity in the seeds of Millettia thonningii[J]. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 1986,80(3), 451-453.
[20]Perrett, P. J. Whitfield, et.al. The plant molluscicide Millettia thonningii as a topicalantischistosomal agent [J]. Journal of Ethnopharmacology, Volume 47, Issue1, 23 June 1995, Pages 49-54.
[21]Santos AF,Sant'Ana AE.Molluscicidal properties of some species of Annona[J].Phytam edicine,2001,8(2):115-120
[22]张蓉仙，扬小明，陈盛霞，等．银杏外种皮提取物杀灭钉螺的初步研究[J]．江苏 大学学报(医学版)，2006，16(1)：27-29
[23]TripathiSM,Singh DK.Molluscicidal activity of Punica granatum bark and cannaindicaroot[J].Braz JM ed Biol Res,2000,33(11):1351-1355
[24]Li W.X., Ko-dama O. and Akatsuda T.. Role of oxygenated fatty aceds in ricephytoalesin[J]. Agric. Bio. Chem., 1991.
[25]覃章兰，李文新等．杀灭钉螺新药物的研究——5，7-二羟基-4’-苄氧基黄烷酮的 合成及生物活性[J]．武汉大学学报，2000，46(6)：706-708．
[26]覃章兰，胡利，等．黄烷酮衍生物的合成及杀灭钉螺活性研究[J]．化学研究与 应用，2002，24(4)：475-476．
[27]魏风华，李文新，等．黄果茄植物提取物的灭螺效果及鱼类和大鼠急性毒性试 验研究[J]．中国地方病学杂志，2001，20(6)：419-421．
[28]WEI F.H., XU X.J., LIU J.G.and DAI Y.H. Study on Snail Control with plant molluscicide of Solarium Xantkocalpurm(SX)[J]. Annals of Tropical medicine & Parasitology, 2001, 95(3).
[29]魏风华，徐兴建，李文新，等．黄果茄植物提取物的灭螺效果及对鱼类和大鼠??急性毒性试验研究[J]．中国地方病杂志，2001，20(6)：419-421．
[30]刘汉成，陈伟，曹慕民，等．盾叶薯蓣杀湖北钉螺的量效与时效关系[J]．实用 寄生虫病杂志，1999，7(1)：13-14．
[31]王根法，宋庚明．茶树籽杀钉螺作用的初步试验[J]．中国寄生虫学与寄生虫病 杂志，1995，13(2)：114-116．
[32]N.M. MendesD.F.. Baptista. Evaluation of the molluscicidal properties of Euphorbiasplendens var. hislopii (N.E.B.) (Euphorbiaceae)-Ⅰ. Experimental Test in a LenticHabitat .Inst Oswoldo Cruz 87, 21-23.
[33]Duncan J. Laboratory evaluation of potential plant mlluscicide[A]. MottKE. PlantMolluscieides[M]. NewYork: JohWiley & Sons, Ltd, 1987: 251-266.
[34]Amuson OG. Search on molluscicidal compounds for four African medicinalplants[J]. Fitoterapia, 1995, 66(2): 113-116.
[35]陈梦菁．四川蜘蛛抱蛋的甾体皂甙[J]．天然产物研究与发，1995，7(1)：19-22．
[36]AbdelAziz A.M. Invetigation of Jatropha Curcasl, Euphorbiaceae[J]. Thesis, MSC, Pharm, University of Khatam, 1982.
[37]冯玉文，李文新，刘实，等．吉祥草中杀灭钉螺化合物的提取分离[J]．中国血 吸虫病防治杂志，2006，18(3)：178-181．
[38]王莹莹，李文新，王庆，邓灵福，祁超，阿不来提．富贵草杀灭钉螺效应研究，武汉植 物学研究2007，25(3)：276-279．
[39]石明达．拔契属植物的化学成分与药理活性研究进展[J]国外医药植物药分册， 1998，11(4)：163
[40]丁怡．天然甾体皂甙研究进展[J]．中_国新药杂志．2000，9(8)：521-523．
[41]Mett k.Plant molluscicdes[M].New York:John Wiley &Sons Ltd,1987.326.
[42]史振霞、李红．黄姜的研究利用现状[J]．陕西农业科技．2005，2：52-54．
[43]宋发军．甾体药源植物薯蓣属植物中薯蓣皂甙元的研究及生产状况[J]．天然产物 研究与开发．2005，14(3)：89-92．
[44]唐世蓉、吴余芳、庞自洁盾叶薯蓣甾体皂甙的分离鉴定[J]．植物学报．1983，25 (6)：556-561．
[45]刘承来、陈延镛、唐易芳、李伯刚．盾叶薯蓣中甾体皂甙的分离和鉴定[J]．植物 学报．1984，26(3)：283-289．
[46]刘承来、陈延镛．鲜盾叶薯蓣中原始皂甙的分离与鉴定[J]．植物学报．1985，27 (1)： 68-74．
[47]唐世蓉、姜志东．盾叶薯蓣地上部分的三个新甾体皂甙[J]．云南植物学研 究．1987，9(2)：233-238．
[48]德平、胡长鹰、唐世蓉、庞自洁．盾叶薯蓣水溶成分的研究[J]，中草药．2007， 38(1)：6-8．
[49]钱世辉，袁丽红、杨念云、欧阳平凯．盾叶薯蓣中甾体类化合物的分离与结构 鉴定[J]，中药材．2006，29(11)：1174-1176．
[50]唐世蓉，杨如同，等．中国薯蓣植物中的甾体皂甙及甾体皂甙元[J]．植物资源与 环境学报。2007，16(2)：64-72．
[51]靡留西、屠治本、张丽红，等．盾叶薯蓣植物根粉现场喷洒灭螺效果[J]．湖北预 防医学杂志．7(4)：25-27．
[52]汉成、冯冬初、曹慕民、蔡顺祥．DZ制剂杀灭湖北钉螺卵的实验研究[J]．中国寄 生虫病防治杂志，2001，14(1)：36-37．
[53]刘汉成、陈伟，等．盾叶薯蓣制剂杀湖北钉螺的药效[J]．中国寄生虫学与寄生虫 病杂志．2001，19(2)：126-127．
[54]天义，张丽红，糜留西，等．盾叶薯蓣灭钉螺活性成分的研究[J]．武汉植物学 研究，1998，16(1)：65-68．
[55]江洪，谭汝成等，盾叶薯蓣抽提物中甾体皂甙成分对植物病原菌的抑菌活性．[J] 华南农业大学学报，2002，23(3)：9．
[56]董静洲，易自力，等．盾叶薯蓣综合研究概况．[J]湖北农业科学，2004，2，84-88。
[57]林向阳，任凤莲，盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元的提取研究进展(综述)[J]．河北科技 师范学院学报．2005，19(3)：75-75．
[58]王昌利、张振光、杨景亮，等.超声提高薯蓣皂甙得率的试验研究[J]．中成药， 1994，16(4)：7-8．
[59]谭仁祥，等．植物成分分析[M]．科学出版社．2004：41．
[60]王根法．纸层析法对钉螺转氨酶初步研究[J]．中国寄生虫与寄生虫病杂志， 1990，8(2)：110．
[61]梁幼生．组织化学对ALP、SDH、LDH活力研究[J]．动物学杂志，1994，29 (3)： 6．
[62]彭旦明，彭镇华等．钉螺转氨酶与碱性磷酸酶活力研究[J]．中国血吸虫病防治杂 志．1998，10(2)：90-92．
[63]彭卫平，彭旦明等．江滩与兴林垦种区钉螺体内几种酶活性的比较[J].应用生态 学报．1995，6(2)：182-185．
[2]周晓农，汪天平，王立英，等．中国血吸虫病流行现状分析[J]．中华流行病学 杂志，2004，25(7)：555-558．
[3]上海寄生虫病研究所．血吸虫病的防治[M]．上海：上海人民出版社，1972．
[4]Xu XJ,Fang TQ. Observation on collecting Oncomelania hupensis when opening the sluices during flood season in Yangtze Rive. Kasetsart J, 1988, 22: 251-260.
[5]Xu XJ, Fang TQ, Yu CH, et al. Relationship between sluicing forirrigation and spreading of Oncomelania hupensisin Hubei province. Kasetsart J, 1989, 23: 281-286.
[6]马巍，匡尚富，廖文根，等．我国血吸虫病防治现状与研究方向[J]．中国水利 水电科学研究院学报，2006，4(4)．
[7]李兆芹、滕卫平、俞善贤、韩晓军．适合钉螺、血吸虫生长发育的气候条件变 化[J]．气象变化研究进展 2005，3(2)：106-109.
[8]周晓农，等．实用钉螺学[M].北京：科学出版社．2005，249-290．
[9]吴亮，陈盛霞，扬小明．植物灭螺剂及其灭螺机理的研究进展[J]．江苏大学学报 (医学版)2007，17(1)87-89
[10]Archibald R G. The use of fruit of the tree Balanites aegyptica in the control of schistosom iasis in the Sudan [J]. Trans R Soc Med Hyg, 1933, 27: 207-211
[11]Evans NA. Molluscicidal activity in the seeds of Millettia Thonningii[J]. Transaction of the Royal Society of Tropical Medi-cine and Hygiene, 1986, 80: 451-453.
[12]Hmamouchi M. Molluscicidal activity of some isoflavone compounds[J]. Fitoterapia, 1998, 69(2): 161-164.
[13]李洁．异黄酮化合物的生物效能及在血吸虫病控制中的作用[J]．中国病原生物学 杂志，2006，1(1)：62-63．
[14]谢格，刘绍明，周鸿勇，等．一种专用于消灭钉螺的麻风树籽提取物及提取方 法和应用：中国，98121712．5[P]．1999．
[15]Schall VT, de Vasconcellos MC, Villaca-Coelho AL, et al. Evaluation of temporal, seasonal and geographic stability of the molluscicidal property of Euphorbia splendens latex [J]. Rev Inst Med Trop Sao Paulo, 1992, 34(3): 183-191.
[16]Belot J, Geerts S, et al. Field trials to control schistosome intermediate hosts by theplant molluscicide Ambrosia maritime L. in the Senegal River Basin [J]. ActaTrop.1993, 52(4): 275-282.
[17]Madhina D, Shiff C. Prevention of snail miracidia interactions using Phytolaccadodecandra (L.Herit) (endod) as a miracidiacide: an alternative approach on the focalcontrol of schistosomiasis[J]. Tropical Medicine & International Health, 1996 Apr:1(2): 221-226.
[18]Hmamouchi M.Molluscicidal activity of some isoflavone compounds[J]. Fitoterapia,1998,69(2):161-164
[19]A. Evans, et.al.. Molluscicidal activity in the seeds of Millettia thonningii[J]. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 1986,80(3), 451-453.
[20]Perrett, P. J. Whitfield, et.al. The plant molluscicide Millettia thonningii as a topicalantischistosomal agent [J]. Journal of Ethnopharmacology, Volume 47, Issue1, 23 June 1995, Pages 49-54.
[21]Santos AF,Sant'Ana AE.Molluscicidal properties of some species of Annona[J].Phytam edicine,2001,8(2):115-120
[22]张蓉仙，扬小明，陈盛霞，等．银杏外种皮提取物杀灭钉螺的初步研究[J]．江苏 大学学报(医学版)，2006，16(1)：27-29
[23]TripathiSM,Singh DK.Molluscicidal activity of Punica granatum bark and cannaindicaroot[J].Braz JM ed Biol Res,2000,33(11):1351-1355
[24]Li W.X., Ko-dama O. and Akatsuda T.. Role of oxygenated fatty aceds in ricephytoalesin[J]. Agric. Bio. Chem., 1991.
[25]覃章兰，李文新等．杀灭钉螺新药物的研究——5，7-二羟基-4’-苄氧基黄烷酮的 合成及生物活性[J]．武汉大学学报，2000，46(6)：706-708．
[26]覃章兰，胡利，等．黄烷酮衍生物的合成及杀灭钉螺活性研究[J]．化学研究与 应用，2002，24(4)：475-476．
[27]魏风华，李文新，等．黄果茄植物提取物的灭螺效果及鱼类和大鼠急性毒性试 验研究[J]．中国地方病学杂志，2001，20(6)：419-421．
[28]WEI F.H., XU X.J., LIU J.G.and DAI Y.H. Study on Snail Control with plant molluscicide of Solarium Xantkocalpurm(SX)[J]. Annals of Tropical medicine & Parasitology, 2001, 95(3).
[29]魏风华，徐兴建，李文新，等．黄果茄植物提取物的灭螺效果及对鱼类和大鼠??急性毒性试验研究[J]．中国地方病杂志，2001，20(6)：419-421．
[30]刘汉成，陈伟，曹慕民，等．盾叶薯蓣杀湖北钉螺的量效与时效关系[J]．实用 寄生虫病杂志，1999，7(1)：13-14．
[31]王根法，宋庚明．茶树籽杀钉螺作用的初步试验[J]．中国寄生虫学与寄生虫病 杂志，1995，13(2)：114-116．
[32]N.M. MendesD.F.. Baptista. Evaluation of the molluscicidal properties of Euphorbiasplendens var. hislopii (N.E.B.) (Euphorbiaceae)-Ⅰ. Experimental Test in a LenticHabitat .Inst Oswoldo Cruz 87, 21-23.
[33]Duncan J. Laboratory evaluation of potential plant mlluscicide[A]. MottKE. PlantMolluscieides[M]. NewYork: JohWiley & Sons, Ltd, 1987: 251-266.
[34]Amuson OG. Search on molluscicidal compounds for four African medicinalplants[J]. Fitoterapia, 1995, 66(2): 113-116.
[35]陈梦菁．四川蜘蛛抱蛋的甾体皂甙[J]．天然产物研究与发，1995，7(1)：19-22．
[36]AbdelAziz A.M. Invetigation of Jatropha Curcasl, Euphorbiaceae[J]. Thesis, MSC, Pharm, University of Khatam, 1982.
[37]冯玉文，李文新，刘实，等．吉祥草中杀灭钉螺化合物的提取分离[J]．中国血 吸虫病防治杂志，2006，18(3)：178-181．
[38]王莹莹，李文新，王庆，邓灵福，祁超，阿不来提．富贵草杀灭钉螺效应研究，武汉植 物学研究2007，25(3)：276-279．
[39]石明达．拔契属植物的化学成分与药理活性研究进展[J]国外医药植物药分册， 1998，11(4)：163
[40]丁怡．天然甾体皂甙研究进展[J]．中_国新药杂志．2000，9(8)：521-523．
[41]Mett k.Plant molluscicdes[M].New York:John Wiley &Sons Ltd,1987.326.
[42]史振霞、李红．黄姜的研究利用现状[J]．陕西农业科技．2005，2：52-54．
[43]宋发军．甾体药源植物薯蓣属植物中薯蓣皂甙元的研究及生产状况[J]．天然产物 研究与开发．2005，14(3)：89-92．
[44]唐世蓉、吴余芳、庞自洁盾叶薯蓣甾体皂甙的分离鉴定[J]．植物学报．1983，25 (6)：556-561．
[45]刘承来、陈延镛、唐易芳、李伯刚．盾叶薯蓣中甾体皂甙的分离和鉴定[J]．植物 学报．1984，26(3)：283-289．
[46]刘承来、陈延镛．鲜盾叶薯蓣中原始皂甙的分离与鉴定[J]．植物学报．1985，27 (1)： 68-74．
[47]唐世蓉、姜志东．盾叶薯蓣地上部分的三个新甾体皂甙[J]．云南植物学研 究．1987，9(2)：233-238．
[48]德平、胡长鹰、唐世蓉、庞自洁．盾叶薯蓣水溶成分的研究[J]，中草药．2007， 38(1)：6-8．
[49]钱世辉，袁丽红、杨念云、欧阳平凯．盾叶薯蓣中甾体类化合物的分离与结构 鉴定[J]，中药材．2006，29(11)：1174-1176．
[50]唐世蓉，杨如同，等．中国薯蓣植物中的甾体皂甙及甾体皂甙元[J]．植物资源与 环境学报。2007，16(2)：64-72．
[51]靡留西、屠治本、张丽红，等．盾叶薯蓣植物根粉现场喷洒灭螺效果[J]．湖北预 防医学杂志．7(4)：25-27．
[52]汉成、冯冬初、曹慕民、蔡顺祥．DZ制剂杀灭湖北钉螺卵的实验研究[J]．中国寄 生虫病防治杂志，2001，14(1)：36-37．
[53]刘汉成、陈伟，等．盾叶薯蓣制剂杀湖北钉螺的药效[J]．中国寄生虫学与寄生虫 病杂志．2001，19(2)：126-127．
[54]天义，张丽红，糜留西，等．盾叶薯蓣灭钉螺活性成分的研究[J]．武汉植物学 研究，1998，16(1)：65-68．
[55]江洪，谭汝成等，盾叶薯蓣抽提物中甾体皂甙成分对植物病原菌的抑菌活性．[J] 华南农业大学学报，2002，23(3)：9．
[56]董静洲，易自力，等．盾叶薯蓣综合研究概况．[J]湖北农业科学，2004，2，84-88。
[57]林向阳，任凤莲，盾叶薯蓣中薯蓣皂甙元的提取研究进展(综述)[J]．河北科技 师范学院学报．2005，19(3)：75-75．
[58]王昌利、张振光、杨景亮，等.超声提高薯蓣皂甙得率的试验研究[J]．中成药， 1994，16(4)：7-8．
[59]谭仁祥，等．植物成分分析[M]．科学出版社．2004：41．
[60]王根法．纸层析法对钉螺转氨酶初步研究[J]．中国寄生虫与寄生虫病杂志， 1990，8(2)：110．
[61]梁幼生．组织化学对ALP、SDH、LDH活力研究[J]．动物学杂志，1994，29 (3)： 6．
[62]彭旦明，彭镇华等．钉螺转氨酶与碱性磷酸酶活力研究[J]．中国血吸虫病防治杂 志．1998，10(2)：90-92．
[63]彭卫平，彭旦明等．江滩与兴林垦种区钉螺体内几种酶活性的比较[J].应用生态 学报．1995，6(2)：182-185．