鲍曼不动杆菌泛耐药性与外排泵基因和外膜蛋白基因相关性的研究
|
摘要
目的探讨头孢哌酮-舒巴坦等13种抗菌药物对鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii,AB)的体外抗菌活性，为临床合理用药提供实验依据；了解AB主动外排系统和外膜蛋白基因的表达变化特点，分析其在介导细菌泛耐药中的作用。
方法收集苏州大学附属第一医院微生物室分离自临床感染患者的100株非重复AB菌株，全部经法国生物梅里埃公司的VITEKⅡCompact和手工试验重新鉴定确定为AB。
第一部分采用K-B法和琼脂二倍稀释法对100株AB进行13种抗菌药物体外抗菌活性的检测，观察AB的耐药状况并分析该组菌的耐药模式。
第二部分PCR扩增鲍曼不动杆菌中主动外排系统（AdeABC、AdeIJK）和外膜蛋白（CarO）的基因，通过琼脂糖凝胶电泳观察结果，初步探讨鲍曼不动杆菌临床分离株中外排泵的分布情况；实时荧光定量RT-PCR检测外排泵（AdeABC、AdeIJK）基因的mRNA表达水平，了解外排泵基因的表达情况，分析耐药株和敏感株在基因表达方面的差异。
结果第一部分临床常用的抗生素（如头孢他啶、哌拉西林、丁胺卡那、环丙沙星等）作用均较差，米诺环素、多黏菌素B和头孢哌酮-舒巴坦对AB有相对较好的抗菌活性，亚胺培南的作用相对差一些；100株AB中有75株泛耐药株，MIC测定的结果显示米诺环素、多粘菌素B和头孢哌酮-舒巴坦的耐药率分别为88%、59.15%、0%和21.13%，MIC值的几何均数分别为25.16（耐药）、5.85（中介）、1.06（敏感）和29.3（中介）。
第二部分敏感和泛耐药两组间adeB基因的PCR及RT-PCR检测结果比较均有统计学意义，而adeJ基因RT-PCR检测两组间无显著差异；98.57%的泛耐药菌株检测到carO基因。
结论AB临床分离株的耐药情况严重；米诺环素、多黏菌素B、头孢哌酮-舒巴坦对临床分离的泛耐药AB具有良好的抗菌活性，可作为治疗选择药物，而碳青霉烯类抗生素亚胺培南的抗菌作用较差；AB临床分离株adeB和adeJ基因检出率较高，且adeB基因在AB泛耐药株和少部分敏感株中表达量明显增加；AdeABC、AdeIJK主动外排系统及其基因表达量的增加在AB泛耐药性的形成中具有一定的作用。
Objective To determine the in vitro activities of13antimicrobials includingCefoperazone-sulbactam against clinical isolates of Acinetobacter baumannii and provideexperimental evidences for rational use of antimicrobial agents. To investigate the functionthat induce pan-drug resistance and gene expression of active efflux pump and outermembrane protein in Acinetobacter baumannii.
Methods A total of100non-repeated strains of Acinetobacter baumannii wereisolated from clinical specimens in The First Affiliated Hospital of Suchoow Universityand all of them had been re-identified by manual test and VITEK ⅡCompact ofBio-Merieux.
First part The susceptibilities of100strains clinical Acinetobacter baumannii wasdetermined by K-B and2-fold agar dilution method followed by NCCLS recommendations．
Second part The genes adeB、adeJ and carO were amplified by PCR and the resultswere observed by agarose gel electrophoresis．Reverse transcriptase polymerase chainreaction （RT-PCR） was used to measure the mRNA expression levels of active effluxpump AdeABC、AdeIJK.
Results First part The antibacterial activity of antibiotic frequently-used is poorerthan minocyline、polymixin B and sulperazone. There are75pan-drug resistant strains inall100strains, their resistant rate to Imipenem、minocyline、polymixin B and sulperazoneare88%、59.15%、0%and21.13%while the geometrical mean of MICs are25.16（resistance）、5.85（medium）、1.06（sensitive）和29.3（medium）.
Second part The test result of adeB gene including PCR and RT-PCR reveal thedifferences between resistant strains and sensitive strains have statistical significant whilethe expression level of adeJ gene between the two groups have no significant difference; The carO gene was detected in98.57%pan-drug resistant strains.
Conclusions The antibiotic resistance is very serious while minocyline、polymixin Band sulperazone with considerable antibacterial activities may be the choices formulti-drug resistant isolates infections of Acinetobacter baumannii．The positive rate ofadeB and adeJ gene is high in Acinetobacter baumannii. Besides, the expression level ofadeB gene obviously increased in pan-drug resistant strains and some sensitive strains.Theactive efflux pump AdeABC play a role in pan-drug resistance of Acinetobacter baumannii
方法收集苏州大学附属第一医院微生物室分离自临床感染患者的100株非重复AB菌株，全部经法国生物梅里埃公司的VITEKⅡCompact和手工试验重新鉴定确定为AB。
第一部分采用K-B法和琼脂二倍稀释法对100株AB进行13种抗菌药物体外抗菌活性的检测，观察AB的耐药状况并分析该组菌的耐药模式。
第二部分PCR扩增鲍曼不动杆菌中主动外排系统（AdeABC、AdeIJK）和外膜蛋白（CarO）的基因，通过琼脂糖凝胶电泳观察结果，初步探讨鲍曼不动杆菌临床分离株中外排泵的分布情况；实时荧光定量RT-PCR检测外排泵（AdeABC、AdeIJK）基因的mRNA表达水平，了解外排泵基因的表达情况，分析耐药株和敏感株在基因表达方面的差异。
结果第一部分临床常用的抗生素（如头孢他啶、哌拉西林、丁胺卡那、环丙沙星等）作用均较差，米诺环素、多黏菌素B和头孢哌酮-舒巴坦对AB有相对较好的抗菌活性，亚胺培南的作用相对差一些；100株AB中有75株泛耐药株，MIC测定的结果显示米诺环素、多粘菌素B和头孢哌酮-舒巴坦的耐药率分别为88%、59.15%、0%和21.13%，MIC值的几何均数分别为25.16（耐药）、5.85（中介）、1.06（敏感）和29.3（中介）。
第二部分敏感和泛耐药两组间adeB基因的PCR及RT-PCR检测结果比较均有统计学意义，而adeJ基因RT-PCR检测两组间无显著差异；98.57%的泛耐药菌株检测到carO基因。
结论AB临床分离株的耐药情况严重；米诺环素、多黏菌素B、头孢哌酮-舒巴坦对临床分离的泛耐药AB具有良好的抗菌活性，可作为治疗选择药物，而碳青霉烯类抗生素亚胺培南的抗菌作用较差；AB临床分离株adeB和adeJ基因检出率较高，且adeB基因在AB泛耐药株和少部分敏感株中表达量明显增加；AdeABC、AdeIJK主动外排系统及其基因表达量的增加在AB泛耐药性的形成中具有一定的作用。
Objective To determine the in vitro activities of13antimicrobials includingCefoperazone-sulbactam against clinical isolates of Acinetobacter baumannii and provideexperimental evidences for rational use of antimicrobial agents. To investigate the functionthat induce pan-drug resistance and gene expression of active efflux pump and outermembrane protein in Acinetobacter baumannii.
Methods A total of100non-repeated strains of Acinetobacter baumannii wereisolated from clinical specimens in The First Affiliated Hospital of Suchoow Universityand all of them had been re-identified by manual test and VITEK ⅡCompact ofBio-Merieux.
First part The susceptibilities of100strains clinical Acinetobacter baumannii wasdetermined by K-B and2-fold agar dilution method followed by NCCLS recommendations．
Second part The genes adeB、adeJ and carO were amplified by PCR and the resultswere observed by agarose gel electrophoresis．Reverse transcriptase polymerase chainreaction （RT-PCR） was used to measure the mRNA expression levels of active effluxpump AdeABC、AdeIJK.
Results First part The antibacterial activity of antibiotic frequently-used is poorerthan minocyline、polymixin B and sulperazone. There are75pan-drug resistant strains inall100strains, their resistant rate to Imipenem、minocyline、polymixin B and sulperazoneare88%、59.15%、0%and21.13%while the geometrical mean of MICs are25.16（resistance）、5.85（medium）、1.06（sensitive）和29.3（medium）.
Second part The test result of adeB gene including PCR and RT-PCR reveal thedifferences between resistant strains and sensitive strains have statistical significant whilethe expression level of adeJ gene between the two groups have no significant difference; The carO gene was detected in98.57%pan-drug resistant strains.
Conclusions The antibiotic resistance is very serious while minocyline、polymixin Band sulperazone with considerable antibacterial activities may be the choices formulti-drug resistant isolates infections of Acinetobacter baumannii．The positive rate ofadeB and adeJ gene is high in Acinetobacter baumannii. Besides, the expression level ofadeB gene obviously increased in pan-drug resistant strains and some sensitive strains.Theactive efflux pump AdeABC play a role in pan-drug resistance of Acinetobacter baumannii
引文
1. Kanafani Z A,Kara L,Hayek S, et al.Ventilator-associated pneumonia at a tertiary-carecenter in a developing country:incidence, microbiology, and susceptibility patterns ofisolated microorganisms[J]. Infect Control Hosp Epidemiol,2003,24(11):864-869.
2.凌保东.鲍曼不动杆菌抗生素多重耐药性:耐药机制与感染治疗对策[J].中国抗生素杂志,2010,4(35):241-254.
3.王金良.密切注视鲍曼不动杆菌的耐药发展趋势[J].中华检验医学杂志,2005,28(4):355-356.
4.张永,唐英春,陆坚,等.鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药分子机制的研究[J].中国抗生素杂志,2005，30(4):217-221.
5.李耘,吕媛. Mohnarin2009年度报告：非发酵革兰阴性杆菌耐药监测[J].中国临床药理学杂志,2011,27(5):348-351.
6.孔海深，杨青，陈晓，等. Mohnarin2010年度报告：华东地区细菌耐药监测[J].中华医院感染学杂志，2011，21（23）：4915-4920.
7. Doi Y，Husain S，Potoski BA，et a1．Extensively Drug-Resistant Acinetobacterbaumannii[J]．Emerg Infect Dis，2009，15(6)：980-982.
8. Magnet S, Courvalin P, Lambert T. Resistance-nodulation-cell division-type effluxpump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacter baumannii strainBM4454[J]. Antimicrob Agents Chemother,2001,45(12):3375-3380.
9. Su XZ, Chen J, Mizushima T, et al.Ade M, an H+-coupled Acinetobacter baumanniimultidrug efflux pump belonging to the MATE family of transporters[J]. AntimicrobAgents Chemother,2005,49(10):4362-4364.
10. Piolle LD, Magnet S, Bremont S, et al. AdeIJK, a resistance-nodulation-cell divisionpunp effluxing in Acinetobacter baumannii[J]. Antimicrob Agents Chemother,2008,52(2):557-562.
11. Piolle LD, Magnet S, Bremont S, et al. AdeIJK, a resistance-nodulation-cell divisionpunp effluxing in Acinetobacter baumannii[J]. Antimicrob Agents Chemother,2008,52(2):557-562.
12.黄菊招,孟小斌.抗菌药物体外敏感性实验在应用中存在的问题及解决方法初探［J］.广东药学，2004,14(1):53.
13. Falagas M E, Bliziotis I A, Kasiakou S K, et al. Outcome of infections due topandrug-resistant(PDR) Gram-negative bacteria[J]. BMC infect Dis,2005,5(1):24-25.
14.王辉，陈民钧.非发酵糖革兰阴性杆菌的耐药发展研究进展[J].中国抗生素杂志，2004,29（4）：193-195.
15.胡云建，陈玉兰，胡继红.舒巴坦对β-内酰胺酶菌株的抑酶增效作用[J].中华检验医学杂志，2000,23（1）：29-31.
16. Falagas M E, Bliziotis I A, Kasiakou S K, et al. Outcome of infections due topandrug-resistant(PDR) Gram-negative bacteria[J]. BMC infect Dis,2005,5(1):24-25.
17. Se′bastien Coyne,Ghislaine Guigon,Patrice Courvalin, et al. Screening andQuantification of the Expression of Antibiotic Resistance Genes in Acinetobacterbaumannii with a Microarray[J]. Antimicrob. Agents Chemother2010,54(1):333-340.
18. Silvia D’Arezzo,Luigi Principe,Alessandro Capone,et al.Changing carbapenemasegene pattern in an epidemic multidrug-resistantAcinetobacter baumannii lineagecausing multiple outbreaks in central Italy[J].J Antimicrob Chemother2011;66:54-61.
19. Li XZ，Zhang L，Nikaido H．Efflux pump-mediated intrinsic drug resistance inMycobacterium smegmatis[J]． Antimicrob Agents Chemother，2004，48(7)：2415-2423.
20. Li X Z，Nikaido H.Efflux-mediated drug resistance in bacteria [J].Drugs，2004，64(2)：159-204.
21. Magnet S，Courvalin P，Lambert T．Resistance-nodulation-cell division-type effluxpump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacter baumannii strainBM4454[J]．Antimicrob Agents Chemother，2001，45(12)：3375-3380.
22. Damier-Piolle L，Magnet S，Bremont S，et al．AdelJK，a resistance-nodulation-celldivision pump effluxing multiple antibiotics in Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother,2008，52(2)：557-562.
23. Se′bastien Coyne,Nicolas Rosenfeld,Thierry Lambert et al. Overexpression ofResistance-Nodulation-Cell Division Pump AdeFGH Confers Multidrug Resistance inAcinetobacter baumannii[J].Antimicrob Agents Chemother,2010,54(10):4389-4393.
24. Marchand I，Piolle D L，Courvalin P，et a1．Expression of the RND-type efflux pumpAdeABC in Acinetobacter baumanniiis regulated by the AdeRS two-componentsystem[J]．Antimicrob Agents Chemother，2004，48(8)：3298-3304.
25. Lu P L，Doumith M，Livermore D M，et al．Diversity of carbapenem resistancemechanisms in Acinetobacter baumannii from a Taiwan hospital： spread ofplasmid-borne OXA-72carbapenemase[J]．J Antimicrob Chemother，2009，63(4)：641-647.
26. Siroy A， Molle V,Lemaitre-Guillier C,et al.Channel formation by carO,thecarbapenem resistance-associated outer membrane protein of Acinetobacterbaumannii[J].Antimicrob Agents Chemother.2005,49(12):4876-4883.
1.凌保东.鲍曼不动杆菌抗生素多重耐药性:耐药机制与感染治疗对策[J].中国抗生素杂志，2010，4(35):241-254。
2.杨雅琼.浅谈鲍曼不动杆菌的耐药现状及治疗策略[J].中国医学检验杂志，2009，10（4）：257-260。
3. Bassetti M，Ginocchio F，Mikulska M.New treatment options against gram-negativeorganisms[J].Crit Care，2011，15:215。
4.李耘，吕媛. Mohnarin2009年度报告：非发酵革兰阴性杆菌耐药监测[J].中国临床药理学杂志，2011，27(5):348-351。
5.孔海深，杨青，陈晓，等. Mohnarin2010年度报告：华东地区细菌耐药监测[J].中华医院感染学杂志，2011，21（23）：4915-4920。
6. Donald H M，Scaife W，Amyes SGB， et a1．Sequence analysis of ARI-1，a novelOXA β-lactamase， responsible for imipenem resistance in Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrobial Agents Chemotherapy，2000；44(1)：196-199。
7. Bou G，Cervero G，Dominguez，et al．Characterization of a nosocomial outbreakcaused by a multiresistant Acinetobacter baumannii strain with acarhapenem-hydrolyzing enzyme：high level carbapenem resistance in A．baumanniiis not due solely to the presence of[beta]-lactamases[J]．Clinicl Microbial，2002；38(9)：3299-3305。
8. Kotra L P，Haddad J，Mobashery S．Aminoglycosides： perspectives on mechanismsof action and resistance and strategies to counter resistance[J].Antimicrobial AgentsChemotherapy，2000，44：3249-3256。
9.赵旺胜，江淑芳，顾兵，等．南京地区鲍曼不动杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究[J]．临床检验杂志，2007，25(2)：90-92。
10. Lu P L，Doumith M，Livermore D M，et a1．Diversity of carbapenem resistancemechanisms in Acinetobacter baumannii from a Taiwan hospital：spread of plasmid-borne OXA-72carbapenemase[J]．J Antimicrobial Chemotherapy，2009，63(4)：641-647．
11. Limansky A S，Mussi M A，Viale A M．Loss of a29-kilodalton outer membraneprotein in Acinetobacter baumannii is associated with imipenem resistance[J]．J ClinMicrobiol,2002，40(12)：4776-4778。
12. Siroy A，Molle V, Lemaitre-Guiller C，et al．Channel formation by CarO，thecarbapenem resistance-associated outer membrane protein of Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother,2005，49(12)：4876-4883。
13. Li X Z，Nikaido H. Efflux-mediated drug resistance in bacteria：an update[J]．Drugs，2009，69(12)：1555-1623。
14. Adams M D，Nickel G C，Bajaksouzian S，et a1．Resistance to colistin inAcinetobacter baumannii associated with mutations in the PmrAB two-componentsystem[J]． Antimicrobial Agents Chemotherapy，2009，53(9)：3628-3634。
15. Heritier C，Poirel L，Nordmann P．Cephalosporinase over-expression resulting frominsertion of ISAbal in Acinetobacter baumannii[J]．Clin Microbiol Infect，2006，12(2)：123。
16. Li X Z，Zhang L，Nikaido H．Efflux pump-mediated intrinsic drug resistance inMycobacterium smegmatis[J]．Antimicrobial Agents Chemotherapy，2004，48(7)：2415-2423。
17. Li X Z，Nikaido H. Efflux-mediated drug resistance in bacteria[J]．Drugs，2004，64(2)：159-204。
18.宋晓萍，刘萍萍，孙明娥，等.鲍曼不动杆菌耐药性监测与外排泵AdeB基因表达水平检测[J].国际检验医学杂志，2011，32（12）：1297-1298。
19. Magnet S，Courvalin P，Lambert T．Resistance-nodulation-cell division-type effluxpump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacter baumannii strainBM4454[J]．Antimicrob Agents Chemother，2001，45(12)：3375-3380。
20. Marchand I，Damier-Piolle L，Courvalin P，et a1．Expression of the RND-type effluxpump AdeABC in Acinetobacter baumannii is regulated by the AdeRStwo-component system[J]．Antimicrob Agents Chemother，2004，48(9)：3298-3304。
21. Damier-Piolle L，Magnet S，Bremont S，et al．AdelJK，a resistance-nodulation-celldivision pump effluxing multiple antibiotics in Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother,2008，52(2)：557-562。
22. Rajamohan G,VB Srinivasan,WA Gebreyes.Novel role of Acinetobacter baumanniiRND efflux transporters in mediating decreased susceptibility to biocides[J].JAntimicrob Chemother.2010,65:228-232。
23. Sebastien Coyne,Patrice Courvalin,Bruno Perichon.Efflux-Mediated AntibioticResistance in Acinetobacter. spp[J].Antimicrob AgentsChemother,2011,55(3):947-953。
24.张晓文，邵海枫，王卫萍，等.氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌16s rRNA甲基化酶基因研究[J].中国抗生素杂志，2011，36(11):855-858。
25.刘振茹，凌保东.多重耐药鲍曼不动杆菌16s rRNA甲基化酶研究进展[J]，中国抗生素杂志2011，10（36）：727-732。
26. Yokoyama K，Doi Yamane K，et al．Acquisition of16s rRNA methylase gene inPseudomonas aeruginosa[J]．Lancet，2003，362：1888-1893。
27.陈琳，陈杖榴，刘健华．氨基糖苷类药物耐药新机制-16s rRNA甲基化酶的研究进展[J]．中国首医科学，2006，36(11)：935-938。
28. Se′bastienCoyne， PatriceCourvalin， BrunoPe′richon.Efflux-Mediated AntibioticResistance in Acinetobacter spp[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2011，55(3):947-953。
29. Fournier P E，Vallenet D，Barbe V，et al.Comparative genomics of multidrugresistance in Acinetobacter baumannii[J].PLoS Gene，2006，2(1):e7。
30.李苏利，李杨，华川．多重耐药鲍氏不动杆菌耐药现状与临床对策[J]．中华医院感染学杂志，2005，15(12)：1438-1440。
31.王培升. ICU鲍氏不动杆菌感染的危险因素及控制对策[J].医学信息，2011，24(5):25-26。
32. Ang J Y，Ezike E，Asmar B I．Antibacterial resistance[J]．Indian J Pediaetr，2004，71：229-239。
33.周艳丽.鲍曼不动杆菌的耐药性分析[J].山东医药，2011，51(42):103-104。
34.张传来.重症监护病房鲍曼不动杆菌耐药性及感染相关因素分析[J].重庆医学，2011，10(40):3058-3060。
1.王辉.运用DNA测序技术提高不常见菌的鉴定水平.中华检验医学杂志[J].2012,35(7):577-578
2.王原，许江燕．VITEK-2compact全自动微生物鉴定仪对葡萄球菌鉴定能力的评价[J]．生物医学工程学进展，2010，4(31)：206-207．
2.凌保东.鲍曼不动杆菌抗生素多重耐药性:耐药机制与感染治疗对策[J].中国抗生素杂志,2010,4(35):241-254.
3.王金良.密切注视鲍曼不动杆菌的耐药发展趋势[J].中华检验医学杂志,2005,28(4):355-356.
4.张永,唐英春,陆坚,等.鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药分子机制的研究[J].中国抗生素杂志,2005，30(4):217-221.
5.李耘,吕媛. Mohnarin2009年度报告：非发酵革兰阴性杆菌耐药监测[J].中国临床药理学杂志,2011,27(5):348-351.
6.孔海深，杨青，陈晓，等. Mohnarin2010年度报告：华东地区细菌耐药监测[J].中华医院感染学杂志，2011，21（23）：4915-4920.
7. Doi Y，Husain S，Potoski BA，et a1．Extensively Drug-Resistant Acinetobacterbaumannii[J]．Emerg Infect Dis，2009，15(6)：980-982.
8. Magnet S, Courvalin P, Lambert T. Resistance-nodulation-cell division-type effluxpump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacter baumannii strainBM4454[J]. Antimicrob Agents Chemother,2001,45(12):3375-3380.
9. Su XZ, Chen J, Mizushima T, et al.Ade M, an H+-coupled Acinetobacter baumanniimultidrug efflux pump belonging to the MATE family of transporters[J]. AntimicrobAgents Chemother,2005,49(10):4362-4364.
10. Piolle LD, Magnet S, Bremont S, et al. AdeIJK, a resistance-nodulation-cell divisionpunp effluxing in Acinetobacter baumannii[J]. Antimicrob Agents Chemother,2008,52(2):557-562.
11. Piolle LD, Magnet S, Bremont S, et al. AdeIJK, a resistance-nodulation-cell divisionpunp effluxing in Acinetobacter baumannii[J]. Antimicrob Agents Chemother,2008,52(2):557-562.
12.黄菊招,孟小斌.抗菌药物体外敏感性实验在应用中存在的问题及解决方法初探［J］.广东药学，2004,14(1):53.
13. Falagas M E, Bliziotis I A, Kasiakou S K, et al. Outcome of infections due topandrug-resistant(PDR) Gram-negative bacteria[J]. BMC infect Dis,2005,5(1):24-25.
14.王辉，陈民钧.非发酵糖革兰阴性杆菌的耐药发展研究进展[J].中国抗生素杂志，2004,29（4）：193-195.
15.胡云建，陈玉兰，胡继红.舒巴坦对β-内酰胺酶菌株的抑酶增效作用[J].中华检验医学杂志，2000,23（1）：29-31.
16. Falagas M E, Bliziotis I A, Kasiakou S K, et al. Outcome of infections due topandrug-resistant(PDR) Gram-negative bacteria[J]. BMC infect Dis,2005,5(1):24-25.
17. Se′bastien Coyne,Ghislaine Guigon,Patrice Courvalin, et al. Screening andQuantification of the Expression of Antibiotic Resistance Genes in Acinetobacterbaumannii with a Microarray[J]. Antimicrob. Agents Chemother2010,54(1):333-340.
18. Silvia D’Arezzo,Luigi Principe,Alessandro Capone,et al.Changing carbapenemasegene pattern in an epidemic multidrug-resistantAcinetobacter baumannii lineagecausing multiple outbreaks in central Italy[J].J Antimicrob Chemother2011;66:54-61.
19. Li XZ，Zhang L，Nikaido H．Efflux pump-mediated intrinsic drug resistance inMycobacterium smegmatis[J]． Antimicrob Agents Chemother，2004，48(7)：2415-2423.
20. Li X Z，Nikaido H.Efflux-mediated drug resistance in bacteria [J].Drugs，2004，64(2)：159-204.
21. Magnet S，Courvalin P，Lambert T．Resistance-nodulation-cell division-type effluxpump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacter baumannii strainBM4454[J]．Antimicrob Agents Chemother，2001，45(12)：3375-3380.
22. Damier-Piolle L，Magnet S，Bremont S，et al．AdelJK，a resistance-nodulation-celldivision pump effluxing multiple antibiotics in Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother,2008，52(2)：557-562.
23. Se′bastien Coyne,Nicolas Rosenfeld,Thierry Lambert et al. Overexpression ofResistance-Nodulation-Cell Division Pump AdeFGH Confers Multidrug Resistance inAcinetobacter baumannii[J].Antimicrob Agents Chemother,2010,54(10):4389-4393.
24. Marchand I，Piolle D L，Courvalin P，et a1．Expression of the RND-type efflux pumpAdeABC in Acinetobacter baumanniiis regulated by the AdeRS two-componentsystem[J]．Antimicrob Agents Chemother，2004，48(8)：3298-3304.
25. Lu P L，Doumith M，Livermore D M，et al．Diversity of carbapenem resistancemechanisms in Acinetobacter baumannii from a Taiwan hospital： spread ofplasmid-borne OXA-72carbapenemase[J]．J Antimicrob Chemother，2009，63(4)：641-647.
26. Siroy A， Molle V,Lemaitre-Guillier C,et al.Channel formation by carO,thecarbapenem resistance-associated outer membrane protein of Acinetobacterbaumannii[J].Antimicrob Agents Chemother.2005,49(12):4876-4883.
1.凌保东.鲍曼不动杆菌抗生素多重耐药性:耐药机制与感染治疗对策[J].中国抗生素杂志，2010，4(35):241-254。
2.杨雅琼.浅谈鲍曼不动杆菌的耐药现状及治疗策略[J].中国医学检验杂志，2009，10（4）：257-260。
3. Bassetti M，Ginocchio F，Mikulska M.New treatment options against gram-negativeorganisms[J].Crit Care，2011，15:215。
4.李耘，吕媛. Mohnarin2009年度报告：非发酵革兰阴性杆菌耐药监测[J].中国临床药理学杂志，2011，27(5):348-351。
5.孔海深，杨青，陈晓，等. Mohnarin2010年度报告：华东地区细菌耐药监测[J].中华医院感染学杂志，2011，21（23）：4915-4920。
6. Donald H M，Scaife W，Amyes SGB， et a1．Sequence analysis of ARI-1，a novelOXA β-lactamase， responsible for imipenem resistance in Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrobial Agents Chemotherapy，2000；44(1)：196-199。
7. Bou G，Cervero G，Dominguez，et al．Characterization of a nosocomial outbreakcaused by a multiresistant Acinetobacter baumannii strain with acarhapenem-hydrolyzing enzyme：high level carbapenem resistance in A．baumanniiis not due solely to the presence of[beta]-lactamases[J]．Clinicl Microbial，2002；38(9)：3299-3305。
8. Kotra L P，Haddad J，Mobashery S．Aminoglycosides： perspectives on mechanismsof action and resistance and strategies to counter resistance[J].Antimicrobial AgentsChemotherapy，2000，44：3249-3256。
9.赵旺胜，江淑芳，顾兵，等．南京地区鲍曼不动杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究[J]．临床检验杂志，2007，25(2)：90-92。
10. Lu P L，Doumith M，Livermore D M，et a1．Diversity of carbapenem resistancemechanisms in Acinetobacter baumannii from a Taiwan hospital：spread of plasmid-borne OXA-72carbapenemase[J]．J Antimicrobial Chemotherapy，2009，63(4)：641-647．
11. Limansky A S，Mussi M A，Viale A M．Loss of a29-kilodalton outer membraneprotein in Acinetobacter baumannii is associated with imipenem resistance[J]．J ClinMicrobiol,2002，40(12)：4776-4778。
12. Siroy A，Molle V, Lemaitre-Guiller C，et al．Channel formation by CarO，thecarbapenem resistance-associated outer membrane protein of Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother,2005，49(12)：4876-4883。
13. Li X Z，Nikaido H. Efflux-mediated drug resistance in bacteria：an update[J]．Drugs，2009，69(12)：1555-1623。
14. Adams M D，Nickel G C，Bajaksouzian S，et a1．Resistance to colistin inAcinetobacter baumannii associated with mutations in the PmrAB two-componentsystem[J]． Antimicrobial Agents Chemotherapy，2009，53(9)：3628-3634。
15. Heritier C，Poirel L，Nordmann P．Cephalosporinase over-expression resulting frominsertion of ISAbal in Acinetobacter baumannii[J]．Clin Microbiol Infect，2006，12(2)：123。
16. Li X Z，Zhang L，Nikaido H．Efflux pump-mediated intrinsic drug resistance inMycobacterium smegmatis[J]．Antimicrobial Agents Chemotherapy，2004，48(7)：2415-2423。
17. Li X Z，Nikaido H. Efflux-mediated drug resistance in bacteria[J]．Drugs，2004，64(2)：159-204。
18.宋晓萍，刘萍萍，孙明娥，等.鲍曼不动杆菌耐药性监测与外排泵AdeB基因表达水平检测[J].国际检验医学杂志，2011，32（12）：1297-1298。
19. Magnet S，Courvalin P，Lambert T．Resistance-nodulation-cell division-type effluxpump involved in aminoglycoside resistance in Acinetobacter baumannii strainBM4454[J]．Antimicrob Agents Chemother，2001，45(12)：3375-3380。
20. Marchand I，Damier-Piolle L，Courvalin P，et a1．Expression of the RND-type effluxpump AdeABC in Acinetobacter baumannii is regulated by the AdeRStwo-component system[J]．Antimicrob Agents Chemother，2004，48(9)：3298-3304。
21. Damier-Piolle L，Magnet S，Bremont S，et al．AdelJK，a resistance-nodulation-celldivision pump effluxing multiple antibiotics in Acinetobacterbaumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother,2008，52(2)：557-562。
22. Rajamohan G,VB Srinivasan,WA Gebreyes.Novel role of Acinetobacter baumanniiRND efflux transporters in mediating decreased susceptibility to biocides[J].JAntimicrob Chemother.2010,65:228-232。
23. Sebastien Coyne,Patrice Courvalin,Bruno Perichon.Efflux-Mediated AntibioticResistance in Acinetobacter. spp[J].Antimicrob AgentsChemother,2011,55(3):947-953。
24.张晓文，邵海枫，王卫萍，等.氨基糖苷类药物双圈耐药型鲍曼不动杆菌16s rRNA甲基化酶基因研究[J].中国抗生素杂志，2011，36(11):855-858。
25.刘振茹，凌保东.多重耐药鲍曼不动杆菌16s rRNA甲基化酶研究进展[J]，中国抗生素杂志2011，10（36）：727-732。
26. Yokoyama K，Doi Yamane K，et al．Acquisition of16s rRNA methylase gene inPseudomonas aeruginosa[J]．Lancet，2003，362：1888-1893。
27.陈琳，陈杖榴，刘健华．氨基糖苷类药物耐药新机制-16s rRNA甲基化酶的研究进展[J]．中国首医科学，2006，36(11)：935-938。
28. Se′bastienCoyne， PatriceCourvalin， BrunoPe′richon.Efflux-Mediated AntibioticResistance in Acinetobacter spp[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2011，55(3):947-953。
29. Fournier P E，Vallenet D，Barbe V，et al.Comparative genomics of multidrugresistance in Acinetobacter baumannii[J].PLoS Gene，2006，2(1):e7。
30.李苏利，李杨，华川．多重耐药鲍氏不动杆菌耐药现状与临床对策[J]．中华医院感染学杂志，2005，15(12)：1438-1440。
31.王培升. ICU鲍氏不动杆菌感染的危险因素及控制对策[J].医学信息，2011，24(5):25-26。
32. Ang J Y，Ezike E，Asmar B I．Antibacterial resistance[J]．Indian J Pediaetr，2004，71：229-239。
33.周艳丽.鲍曼不动杆菌的耐药性分析[J].山东医药，2011，51(42):103-104。
34.张传来.重症监护病房鲍曼不动杆菌耐药性及感染相关因素分析[J].重庆医学，2011，10(40):3058-3060。
1.王辉.运用DNA测序技术提高不常见菌的鉴定水平.中华检验医学杂志[J].2012,35(7):577-578
2.王原，许江燕．VITEK-2compact全自动微生物鉴定仪对葡萄球菌鉴定能力的评价[J]．生物医学工程学进展，2010，4(31)：206-207．