雄黄纳米化后诱导人肺癌细胞株凋亡及抗血管生成的体外研究
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摘要
目的：研究攻毒复方“六神丸”中主要药物“雄黄”的纳米颗粒协同顺铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡和抗血管生成的作用机制,并探讨攻毒治法治疗肺癌的研究现状。方法：对人肺腺癌A549细胞株进行体外培养,将攻毒复方“六神丸”中的主要药物“雄黄”纳米化,以不同浓度的纳米雄黄(25ug/m1,50ug/ml,100ug/m1)与顺铂(2ug/m1)单用或联用,显微镜下观察A549细胞生长状态及形态学改变；AnnexinV/P工双染色法检测细胞凋亡；MTT法检测细胞增殖情况；免疫组化法检测Bcl-2、Caspase-3的表达；RT-PCR法检测Survivin、c-Myc的mRNA转录水平；免疫组化法检测integrinβ1和E-cd；免疫细胞化学染色法测定β-catenin；流式细胞仪检测b-FGF、MMP-9的表达。并查阅文献,总结挖掘攻毒治法治疗肺癌的历史沿革、理论以及临床研究成果。结果：不同浓度纳米雄黄可破坏人肺癌A549细胞的正常形态,诱导其凋亡；对A549细胞有明显抑制作用,与顺铂有协同作用,并可能呈时间和浓度依赖性；可抑制Bc1-2蛋白的表达,对Caspase-3有活化作用,抑制Survivin的表达；对integrin β1、E-cd、β-catenin、c-myc的表达有抑制作用；同时可以抑制b-FGF、MMP-9的表达,高浓度优于低浓度,与DDP联用效果最佳。结论：体外细胞培养实验证实纳米雄黄可能通过抑制A549细胞增殖、诱导其凋亡,通过多靶点作用发挥抗肿瘤转移、抗血管生成等疗效,为基于攻毒治法治疗肺癌提供了基础理论及实验室依据；大量的理论以及临床实践证明攻毒治法治疗肺癌疗效确切,具有较好的应用前景。
Objective:To study the toxic compound attack "Liushenwan" in the main drugs "realgar" in nanoparticles and cisplatin-induced apoptosis in cultured A549cells and anti-angiogenic mechanism,then attack drug therapies and treatment of lung cancer Research.
Methods:Human lung adenocarcinoma A549cells were cultured in vitro, the toxic compound attack "Liushenwan" in the main drug "realgar" nano-technology, with different concentrations of nanometer realgar (25ug/ml,50ug/ml,100ug/ml) and cisplatin (2ug/ml) alone or in combination with, A549cells under the microscope and morphological changes in the state; Annexin V/PI double staining to detect cell apoptosis; MTT assay inhibition of cell proliferation; Immunohistochemistry used to detect Bcl-2, Caspase-3expression; RT-PCR assay Survivin, c-Myc in the mRNA; immune staining integrinβ1and E-cd; immunocytochemistry method β-catenin; flow cytometry detection of b-FGF, MMP-9expression. Nanometer realgar of A549human lung cancer cells inhibited cell proliferation, induce apoptosis, anti-metastasis and the possible role of anti-angiogenesis mechanism for attacking drug therapies based on the treatment of lung cancer provide the basis for theory and laboratory evidence.
Results:Different concentrations of nanometer realgar can damage human lung cancer A549cells in the normal form; low concentrations to induce early apoptosis realgar nano-based, high concentrations of nanometer realgar Induced apoptotic based; on A549cells was significantly inhibited, and cisplatin a synergistic effect, and showed time and concentration dependent; inhibit the expression of Bcl-2protein, activation of Caspase-3has the role of inhibiting the expression of Survivin; of integrinβ1,E-cd, β-catenin and the expression of c-myc inhibit anti-metastasis effect of play; also can inhibit b-FGF, MMP-9expression, high concentrations than low concentrations, and DDP combined with the best results.
Conclusion:The in vitro cell culture experiments confirmed that realgar nanoparticles may inhibit A549cell proliferation and induce apoptosis, and play the role of multi-target anti-metastatic and anti-angiogenic efficacy for the treatment of lung cancer based on the challenged rule method provides the basic theory andlaboratory evidence; a lot of theory and clinical practice shows that attack toxic governance and effective treatment of lung cancer, with a good application prospect.
Objective:To study the toxic compound attack "Liushenwan" in the main drugs "realgar" in nanoparticles and cisplatin-induced apoptosis in cultured A549cells and anti-angiogenic mechanism,then attack drug therapies and treatment of lung cancer Research.
Methods:Human lung adenocarcinoma A549cells were cultured in vitro, the toxic compound attack "Liushenwan" in the main drug "realgar" nano-technology, with different concentrations of nanometer realgar (25ug/ml,50ug/ml,100ug/ml) and cisplatin (2ug/ml) alone or in combination with, A549cells under the microscope and morphological changes in the state; Annexin V/PI double staining to detect cell apoptosis; MTT assay inhibition of cell proliferation; Immunohistochemistry used to detect Bcl-2, Caspase-3expression; RT-PCR assay Survivin, c-Myc in the mRNA; immune staining integrinβ1and E-cd; immunocytochemistry method β-catenin; flow cytometry detection of b-FGF, MMP-9expression. Nanometer realgar of A549human lung cancer cells inhibited cell proliferation, induce apoptosis, anti-metastasis and the possible role of anti-angiogenesis mechanism for attacking drug therapies based on the treatment of lung cancer provide the basis for theory and laboratory evidence.
Results:Different concentrations of nanometer realgar can damage human lung cancer A549cells in the normal form; low concentrations to induce early apoptosis realgar nano-based, high concentrations of nanometer realgar Induced apoptotic based; on A549cells was significantly inhibited, and cisplatin a synergistic effect, and showed time and concentration dependent; inhibit the expression of Bcl-2protein, activation of Caspase-3has the role of inhibiting the expression of Survivin; of integrinβ1,E-cd, β-catenin and the expression of c-myc inhibit anti-metastasis effect of play; also can inhibit b-FGF, MMP-9expression, high concentrations than low concentrations, and DDP combined with the best results.
Conclusion:The in vitro cell culture experiments confirmed that realgar nanoparticles may inhibit A549cell proliferation and induce apoptosis, and play the role of multi-target anti-metastatic and anti-angiogenic efficacy for the treatment of lung cancer based on the challenged rule method provides the basic theory andlaboratory evidence; a lot of theory and clinical practice shows that attack toxic governance and effective treatment of lung cancer, with a good application prospect.
引文
[1]Parkin D M, Bary F M,Ferlay J, et al.Estimating the world cancer burden:Globocan 2000[J].Int J Cancer,2001;94(13):153.
[2]Peto R, Darby S, Deo H,等.1950年以来英国的吸烟、戒烟和肺癌状况：全国统计和两项病例对照研究的综合报告[J].英国医学杂志中文版,2000;3(4)：169.
[3]邓海滨,王中奇.徐振晔辨治肺癌经验[J].四川中医,2002;20(6)：1.
[4]Sugimura H,Nichols FC,Yang P etal.Survival after recurrent non-small-cell lung cancer after complete pulmonary resection.Ann Thorac Surg,2007;83(2):409-417.
[5]李忠,陈信义,姜苗.肺癌中医临床研究进展与用药思路[J].中国医药学报,2004;19(3)：176.
[6]Siddik ZH.Cisplatin:mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance. Oncogene,2003;22(47):7265-7279.
[7]Yoshimura N,Kudoh S,Mukohara T,et al.Phase Ⅰ/Ⅱ study of cisplatin combined with weekly paclitaxel in patients with advanced non-small-cell lung cancer.Br J Cancer,2004;90(6):1184-1189.
[8]Rosell R,Lord RV,Taron M,et al.DNA repair and cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer.Lung Cancer,2002;38(3):217-227.
[9]刘文哲,李金瀚,胡义德,等.顺铂诱导A549细胞凋亡的研究[J].中国肺癌杂志,2002;5(4)：254-256.
[10]刘文哲,胡义德,李金瀚.人肺腺癌A549/DDP耐药细胞减弱顺铂诱导的细胞凋亡[J].癌症,2000;19(4)：325-327.
[11]Schiller JH, Harrington D, Belani CP, et al. Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer[J]. N Engl J Med,2002; 346(2):92-98.
[12]Scagliotti GV, De Marinis F, Rinaldi M, et al. Phase III randomized trial comparing three platinum-based doublets in advanced non-small-cell lung cancer[J].J Clin Oncol, 2002;20(21):4285-4291.
[13]Spira A, Ettinger DS.Multidisciplinary management of lung cancer.N Engl JMed, 2004;350:379-392.
[14]王慧娟,王启鸣,朱辉等.吉非替尼治疗52例晚期非小细胞肺癌优势人群的临床观 察[J].癌症进展杂志,2009,7(4)：462-467.
[15]白皑,韩宝惠.吉非替尼治疗50例非小细胞肺癌脑转移的临床分析[J].中国癌症杂志,2010;20(2)：134-138.
[16]王永炎主编.中医内科学[M].上海：上海科学技术出版社,1997,6：91.
[17]洪广样.原发性支气管肺癌中医药治疗的探讨[J].江西中医药,1995;26(6)：3.
[18]周晓园,陶凯.顾振东治疗肿瘤的经验[J].中医杂志,1999;40(7)：395.
[19]邓海滨,王中奇.徐振晔辨治肺癌经验[J].四川中医,2002;20(6)：1.
[20]赵炜.李佩文治疗肺癌的经验[J].北京中医,2002;21(6)：329.
[21]骆文斌,吴承玉.肺癌中医病名规范研究[J].中医药学刊,2006;24(3)：480-481.
[22]周岱翰.肿瘤治验集要[M],广州：广东高教出版社,1997：141.
[23]邓海滨,王中奇.徐振晔辨治肺癌经验[J].四川中医,2002;20(6)：1.
[24]刘振东,吴林生.周维顺治疗肺癌经验[J].浙江中医学院学报,2004;28(2)：39.
[25]中国中西医结合研究会血瘀证中医专业委员会,血瘀证诊断标准.中西医结合杂志,1987;(3)：129.
[26]冷方南.中医证候辨证规范[M].北京：人民卫生出版社,1991：40.
[27]国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京：南京大学出版社,1994：1-6,9-12,25,147-148.
[28]孙建立,刘嘉湘.原发性支气管肺癌中医证的特征研究[J].中国中医基础医学杂志,2007;13(7)：536-537.
[29]朱华宇,周岱翰.益气解毒法治疗晚期肺癌的思路探讨[J].中华中医药杂志,2006;21(4)：235-236.
[30]周宜强.攻毒、排毒、解毒在治疗恶性肿瘤中的运用.世界中医药.2007;2(4)：200-203.
[31]黄金昶.“以毒攻毒”“温阳”“破淤”“通利二便”四法治疗肿瘤之我见.中国临床医生,2005;33(10)：51-52.
[32]袁国荣.益气养阴攻毒治疗中晚期肺癌.贵阳中医学院学报,2003;25(4)：39-40.
[33]李际强.刘伟胜攻毒法治疗肺癌经验简介.辽宁中医杂志.2009;36(3期)：340-341.
[34]刘嵘,濮德敏.雄黄的研究进展.时珍国医国药,2007;18(4)：982-984.
[35]叶晓川,杨祥良,徐辉碧.纳米雄黄研究进展.化学进展,2009;21(5)：934-939.
[36]王晓波,袭荣刚,李忠亮,等.纳米级雄黄粉体的制备.解放军药学学报,2002； 18(3)：129-133.
[37]孙立东,侯长安,薛巧珍,等.蝎毒抗癌因子治疗晚期肿瘤近期疗效观察[J].中国病理生理杂志,1992;8：25.
[38]郭晓庄.有毒中草药大辞典[M].天津：天津科技翻译出版公司,1992.
[39]李秀凤,殷辉安,唐明林等.纳米技术在中药新药研究中的应用.国外医学：中医中药分册,2003;25(6)：329-331,341.
[40]杨祥良,徐辉碧,吴继洲等.基于纳米技术的中药基础问题研究.华中理工大学学报,2000；28(12)：104-105.
[41]徐辉碧主编.纳米医药.清华大学出版社,2004,第一版：230.
[42]徐辉碧,杨祥良,谢长生等.纳米技术在中药研究中的应用.中国药科大学学报,2001;32(3)：161-165.
[43]白吉庆,王昌利.纳米技术在中药制剂研究中的应用[J].现代中医药,2005;25(6)：48-50.
[44]卢贞,张君.纳米技术与传统中药的结合与展望.中国医药指南.2010;8(9)：45-46.
[45]蔡大伟,张新春.纳米中药制剂的研究与应用[J].中国药业,2006;15(14)：64-65.
[46]Mu L,Feng SS.A novel controlled release formulation for the anticancer drug paclitaxel(Taxol):PLGA nanoparticles containing vitamin E TPGS[J].J Control Realease,2003;86(1):33-48.
[47]黄望香,陈建霞,罗玲,等.雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究[J].实用医技杂志,2005;12(8)：2011-2012.
[48]黄守国,孔北华,马玉燕,等.三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡机制的研究[J].肿瘤防治杂志,2002;9(2)：154-156.
[49]尹伶,濮德敏,吴青,等.雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究.数理医药学杂志,2007;20(6).
[50]王娟锐,王建刚,李艳.纯化雄黄体内外抗肿瘤作用[J].中国新药杂志,2008;17(12):1030-1033.
[51]庞琦,王汉斌等.雄黄治疗胶质瘤的初步试验研究[J].山东大学学报,2006;4(44)：376-379.
[52]尹伶,濮德敏,吴青等.雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究.数理医药学杂志,2007;6(20)：785-787.
[53]Levina V Marrangoni AM,DeMarcoR,etal.Drug-selected human lung cancer stem cells:cytokine network,tumorigenic and metastatic Properties[J].PloS ONE 2008; 3(7):3077.
[54]詹秀琴,赵凤鸣,郭立玮.实用中医药杂志,2006;22(7)：397-399.
[55]叶晓川,杨祥良,徐辉碧.纳米雄黄研究进展[J]化学进展,2009;21(5)：935.
[56]杜建.中药抗肿瘤机制研究进展[J].福建中医学院学报,2009;19(4)：1-4.
[57]季昌锋,徐瑛,刘根凡,等.超细粉碎设备在中药现代化中的应用.矿冶工程,2004;24(5)：39-41.
[58]袭荣刚.纳米雄黄制备及诱导U937肿瘤细胞凋亡机制研究[M].沈阳药科大学.2008；12.
[59]詹秀琴,郭立玮,付廷明,等.微米/纳米雄黄微粒的制备及粒度测定[J].南京中医药大学学报,2003；19(1)：24-25.
[60]王晓波,袭荣刚,李忠亮,等.纳米级雄黄粉体的制备[J].解放军药学学报,2002;18(3)：129-134.
[61]王子妤,王丽,张东生.纳米雄黄脂质体的制备、特性检测和体外抗肿瘤细胞作用的研究.东南大学学报(医学版).2009;28(3)：175-179.
[62]宁凝,彭作富,袁兰,等.雄黄纳米微粒对于白血病细胞的诱导凋亡及坏死作用[J].中国中药杂志,2005;30(2)：139.
[63]Eid GM,Cot tam DR,Velcu LM,et al.Effective treatment of poly cystic ovarian syndrome With Rouxen-Y gastric byPass[J].Surg Obesity Related Dis,2005;1(2): 77-80.
[64]Wajant H,GersPach J,Pfizenmaier K.Tumor theraPeutics by design:targeting and activation of death receptors.Cytokine Growth Faetor Rev.2005;16:55-76.
[65]Cory S,Huang DC,Adam JM.The Bcl-2 family:roles in cell survival and oncogenesis [J].Oncogene,2003; 22(53):8590.
[66]Heon SEO, Ko HM, Kin HA, et al. Platelet-activating factor induces up-regulation of antiapoptotic factors in a melanoma cell line through nuclear factor-kappa B activation[J]. Cancer Res,2006;66(9):481.
[67]Bcl-2、Bax表达及其与Hp感染的关系[J].中国现代医学杂志,2005;15(23)：3573.
[68]杨闯,魏振彤,郑宇等.肝癌中Bcl-2, Bax和C-myc基因的表达及其临床意义[J].中国老年学杂志,2009;4(29)：450.
[69]Hynes RO. Integrins:versatility, modulation and signaling in cell adhesion [J].Cell, 1992;69(1):11-25.
[70]Yano H, Mazaki Y, Kurokawa K, et al. Roles played by a subset of integrin signaling molecules in cadherin-based cell-cell adhesion [J] J Cell Biol,2004;166(2):283-295.
[71]Zucker S,Hymowitz M, Rollo EE, et al.Tumorigenic potential of extra cellarmatrix metalloproteinase inducer[J]. Am J Patho J.2001;158:1921-1928.
[72]明树红,孙铁英,肖伟,等.基质金属蛋白酶-2,-9及其抑制剂1在肺癌侵袭转移中的作用[J].中国呼吸与危重监护杂志,2005;4：198-202.
[1]丁诗语.六神丸、六君子汤诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究：[D].山东中医药大学.2002,4.
[2]郭刚.六神丸治疗恶性肿瘤的临床和实验研究：[D].山东中医药大学.2003,4.
[3]孙莉.六神丸抗肿瘤机理的实验研究：[D].山东中医药大学.2006,6.
[4]李炜.六神丸抗血管生成的实验研究：[D].山东中医药大学.2005,4.
[5]张春荣,姜伟,齐元富.六神丸对鼠S180生长的抑制作用与抑制血管生成的关系.中国预防医学杂志.2006(4)：327-330.
[6]李静.六神丸抗肿瘤的临床及实验研究：[D].山东中医药大学.2009,4.
[7]刘海燕.六神丸对RAS影响肿瘤血管生长的实验研究：[D].山东中医药大学.2009,4.
[8]黄利敏.六神丸抗肺癌转移及其作用靶点的实验及临床研究：[D].山东中医药大学.2009,4.
[9]李炜,孟艳冬,赵玲等.六神丸逆转灯盏细辛抑制MCF-7细胞凋亡作用的实验研究.河北中医.2006,28(12)：940-942.
[10]徐芳.六神丸诱导白血病细胞凋亡及调控凋亡相关基因的实验研究：[D].天津中医学院.2001,7.
[1l]庞纪平.六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究：[D].天津中医学院.2002,6.
[12]黄振东.用中药血清药理学方法观察六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究：[D].天津中医学院.2003,4.
[13]马洁.六神丸诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因的影响：[D].天津中医学院.2003,4.
[14]戴锡孟,于志峰,马洁等.六神丸诱导NB4细胞凋亡的实验研究.山东中医杂志.2004,2(12)：734-735.
[15]于志峰,戴锡孟,马洁等.六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究.中医研究.2005,(18)6：14-16.
[16]史哲新,杨文华,汤毅等.六神丸逆转白血病细胞多药耐药作用及相关机制研究.天津中医药大学学报.2007,26(1)：11-13.
[17]齐卫红,沈连忠,李欣等Beagle犬重复给予六神丸28d及恢复期14d毒性研究.毒理学杂志.2007,21(4)：304.
[18]齐卫红,李欣,沈连忠等Beagle犬经口给予六神丸急性毒性研究.毒理学杂志.2007,21(4)：303-304.
[19]王秀萍,曹志权,路雪雅.微量元素与健康研究.2003,20(4)：27-28.
[20]王晓波,袭荣刚.解放军药学学报,2002,18(6)：324-326.
[21]Ying D,Hui B X,Kai X H,et al.Pharmacol.Res.2001,44(6):513-518.
[22]Ye HQ,GanL,YangXL,et al.Biol.Trace.Elem.Res.2005,103 (2):117-132.
[23]Ye HQ,Yang XL,Gan L,et al.Conf.Proc.IEEE.Eng.Med.Biol.Soc.2005,7:7714-7717.
[24]叶寒青.纳米雄黄抗肿瘤作用机理研究.华中科技大学博士论文,2005.
[25]罗丽云,张天蓝,王夔.中国中药杂志.2006,31(16)：1343-1346.
[26]Wang X B,GaoHY,Hou BL,et al.Arch.Pharm.Res.2007,30(5):653-658.
[27]刘嵘,濮德敏,赵立波等.中国中药杂志.2008,33(1)：54-58.
[28]王晓波,袭荣刚,姚晓敏等.中国新药杂志.2007,16(22)：1869-1872.
[2]Peto R, Darby S, Deo H,等.1950年以来英国的吸烟、戒烟和肺癌状况：全国统计和两项病例对照研究的综合报告[J].英国医学杂志中文版,2000;3(4)：169.
[3]邓海滨,王中奇.徐振晔辨治肺癌经验[J].四川中医,2002;20(6)：1.
[4]Sugimura H,Nichols FC,Yang P etal.Survival after recurrent non-small-cell lung cancer after complete pulmonary resection.Ann Thorac Surg,2007;83(2):409-417.
[5]李忠,陈信义,姜苗.肺癌中医临床研究进展与用药思路[J].中国医药学报,2004;19(3)：176.
[6]Siddik ZH.Cisplatin:mode of cytotoxic action and molecular basis of resistance. Oncogene,2003;22(47):7265-7279.
[7]Yoshimura N,Kudoh S,Mukohara T,et al.Phase Ⅰ/Ⅱ study of cisplatin combined with weekly paclitaxel in patients with advanced non-small-cell lung cancer.Br J Cancer,2004;90(6):1184-1189.
[8]Rosell R,Lord RV,Taron M,et al.DNA repair and cisplatin resistance in non-small-cell lung cancer.Lung Cancer,2002;38(3):217-227.
[9]刘文哲,李金瀚,胡义德,等.顺铂诱导A549细胞凋亡的研究[J].中国肺癌杂志,2002;5(4)：254-256.
[10]刘文哲,胡义德,李金瀚.人肺腺癌A549/DDP耐药细胞减弱顺铂诱导的细胞凋亡[J].癌症,2000;19(4)：325-327.
[11]Schiller JH, Harrington D, Belani CP, et al. Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer[J]. N Engl J Med,2002; 346(2):92-98.
[12]Scagliotti GV, De Marinis F, Rinaldi M, et al. Phase III randomized trial comparing three platinum-based doublets in advanced non-small-cell lung cancer[J].J Clin Oncol, 2002;20(21):4285-4291.
[13]Spira A, Ettinger DS.Multidisciplinary management of lung cancer.N Engl JMed, 2004;350:379-392.
[14]王慧娟,王启鸣,朱辉等.吉非替尼治疗52例晚期非小细胞肺癌优势人群的临床观 察[J].癌症进展杂志,2009,7(4)：462-467.
[15]白皑,韩宝惠.吉非替尼治疗50例非小细胞肺癌脑转移的临床分析[J].中国癌症杂志,2010;20(2)：134-138.
[16]王永炎主编.中医内科学[M].上海：上海科学技术出版社,1997,6：91.
[17]洪广样.原发性支气管肺癌中医药治疗的探讨[J].江西中医药,1995;26(6)：3.
[18]周晓园,陶凯.顾振东治疗肿瘤的经验[J].中医杂志,1999;40(7)：395.
[19]邓海滨,王中奇.徐振晔辨治肺癌经验[J].四川中医,2002;20(6)：1.
[20]赵炜.李佩文治疗肺癌的经验[J].北京中医,2002;21(6)：329.
[21]骆文斌,吴承玉.肺癌中医病名规范研究[J].中医药学刊,2006;24(3)：480-481.
[22]周岱翰.肿瘤治验集要[M],广州：广东高教出版社,1997：141.
[23]邓海滨,王中奇.徐振晔辨治肺癌经验[J].四川中医,2002;20(6)：1.
[24]刘振东,吴林生.周维顺治疗肺癌经验[J].浙江中医学院学报,2004;28(2)：39.
[25]中国中西医结合研究会血瘀证中医专业委员会,血瘀证诊断标准.中西医结合杂志,1987;(3)：129.
[26]冷方南.中医证候辨证规范[M].北京：人民卫生出版社,1991：40.
[27]国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京：南京大学出版社,1994：1-6,9-12,25,147-148.
[28]孙建立,刘嘉湘.原发性支气管肺癌中医证的特征研究[J].中国中医基础医学杂志,2007;13(7)：536-537.
[29]朱华宇,周岱翰.益气解毒法治疗晚期肺癌的思路探讨[J].中华中医药杂志,2006;21(4)：235-236.
[30]周宜强.攻毒、排毒、解毒在治疗恶性肿瘤中的运用.世界中医药.2007;2(4)：200-203.
[31]黄金昶.“以毒攻毒”“温阳”“破淤”“通利二便”四法治疗肿瘤之我见.中国临床医生,2005;33(10)：51-52.
[32]袁国荣.益气养阴攻毒治疗中晚期肺癌.贵阳中医学院学报,2003;25(4)：39-40.
[33]李际强.刘伟胜攻毒法治疗肺癌经验简介.辽宁中医杂志.2009;36(3期)：340-341.
[34]刘嵘,濮德敏.雄黄的研究进展.时珍国医国药,2007;18(4)：982-984.
[35]叶晓川,杨祥良,徐辉碧.纳米雄黄研究进展.化学进展,2009;21(5)：934-939.
[36]王晓波,袭荣刚,李忠亮,等.纳米级雄黄粉体的制备.解放军药学学报,2002； 18(3)：129-133.
[37]孙立东,侯长安,薛巧珍,等.蝎毒抗癌因子治疗晚期肿瘤近期疗效观察[J].中国病理生理杂志,1992;8：25.
[38]郭晓庄.有毒中草药大辞典[M].天津：天津科技翻译出版公司,1992.
[39]李秀凤,殷辉安,唐明林等.纳米技术在中药新药研究中的应用.国外医学：中医中药分册,2003;25(6)：329-331,341.
[40]杨祥良,徐辉碧,吴继洲等.基于纳米技术的中药基础问题研究.华中理工大学学报,2000；28(12)：104-105.
[41]徐辉碧主编.纳米医药.清华大学出版社,2004,第一版：230.
[42]徐辉碧,杨祥良,谢长生等.纳米技术在中药研究中的应用.中国药科大学学报,2001;32(3)：161-165.
[43]白吉庆,王昌利.纳米技术在中药制剂研究中的应用[J].现代中医药,2005;25(6)：48-50.
[44]卢贞,张君.纳米技术与传统中药的结合与展望.中国医药指南.2010;8(9)：45-46.
[45]蔡大伟,张新春.纳米中药制剂的研究与应用[J].中国药业,2006;15(14)：64-65.
[46]Mu L,Feng SS.A novel controlled release formulation for the anticancer drug paclitaxel(Taxol):PLGA nanoparticles containing vitamin E TPGS[J].J Control Realease,2003;86(1):33-48.
[47]黄望香,陈建霞,罗玲,等.雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究[J].实用医技杂志,2005;12(8)：2011-2012.
[48]黄守国,孔北华,马玉燕,等.三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡机制的研究[J].肿瘤防治杂志,2002;9(2)：154-156.
[49]尹伶,濮德敏,吴青,等.雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究.数理医药学杂志,2007;20(6).
[50]王娟锐,王建刚,李艳.纯化雄黄体内外抗肿瘤作用[J].中国新药杂志,2008;17(12):1030-1033.
[51]庞琦,王汉斌等.雄黄治疗胶质瘤的初步试验研究[J].山东大学学报,2006;4(44)：376-379.
[52]尹伶,濮德敏,吴青等.雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究.数理医药学杂志,2007;6(20)：785-787.
[53]Levina V Marrangoni AM,DeMarcoR,etal.Drug-selected human lung cancer stem cells:cytokine network,tumorigenic and metastatic Properties[J].PloS ONE 2008; 3(7):3077.
[54]詹秀琴,赵凤鸣,郭立玮.实用中医药杂志,2006;22(7)：397-399.
[55]叶晓川,杨祥良,徐辉碧.纳米雄黄研究进展[J]化学进展,2009;21(5)：935.
[56]杜建.中药抗肿瘤机制研究进展[J].福建中医学院学报,2009;19(4)：1-4.
[57]季昌锋,徐瑛,刘根凡,等.超细粉碎设备在中药现代化中的应用.矿冶工程,2004;24(5)：39-41.
[58]袭荣刚.纳米雄黄制备及诱导U937肿瘤细胞凋亡机制研究[M].沈阳药科大学.2008；12.
[59]詹秀琴,郭立玮,付廷明,等.微米/纳米雄黄微粒的制备及粒度测定[J].南京中医药大学学报,2003；19(1)：24-25.
[60]王晓波,袭荣刚,李忠亮,等.纳米级雄黄粉体的制备[J].解放军药学学报,2002;18(3)：129-134.
[61]王子妤,王丽,张东生.纳米雄黄脂质体的制备、特性检测和体外抗肿瘤细胞作用的研究.东南大学学报(医学版).2009;28(3)：175-179.
[62]宁凝,彭作富,袁兰,等.雄黄纳米微粒对于白血病细胞的诱导凋亡及坏死作用[J].中国中药杂志,2005;30(2)：139.
[63]Eid GM,Cot tam DR,Velcu LM,et al.Effective treatment of poly cystic ovarian syndrome With Rouxen-Y gastric byPass[J].Surg Obesity Related Dis,2005;1(2): 77-80.
[64]Wajant H,GersPach J,Pfizenmaier K.Tumor theraPeutics by design:targeting and activation of death receptors.Cytokine Growth Faetor Rev.2005;16:55-76.
[65]Cory S,Huang DC,Adam JM.The Bcl-2 family:roles in cell survival and oncogenesis [J].Oncogene,2003; 22(53):8590.
[66]Heon SEO, Ko HM, Kin HA, et al. Platelet-activating factor induces up-regulation of antiapoptotic factors in a melanoma cell line through nuclear factor-kappa B activation[J]. Cancer Res,2006;66(9):481.
[67]Bcl-2、Bax表达及其与Hp感染的关系[J].中国现代医学杂志,2005;15(23)：3573.
[68]杨闯,魏振彤,郑宇等.肝癌中Bcl-2, Bax和C-myc基因的表达及其临床意义[J].中国老年学杂志,2009;4(29)：450.
[69]Hynes RO. Integrins:versatility, modulation and signaling in cell adhesion [J].Cell, 1992;69(1):11-25.
[70]Yano H, Mazaki Y, Kurokawa K, et al. Roles played by a subset of integrin signaling molecules in cadherin-based cell-cell adhesion [J] J Cell Biol,2004;166(2):283-295.
[71]Zucker S,Hymowitz M, Rollo EE, et al.Tumorigenic potential of extra cellarmatrix metalloproteinase inducer[J]. Am J Patho J.2001;158:1921-1928.
[72]明树红,孙铁英,肖伟,等.基质金属蛋白酶-2,-9及其抑制剂1在肺癌侵袭转移中的作用[J].中国呼吸与危重监护杂志,2005;4：198-202.
[1]丁诗语.六神丸、六君子汤诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究：[D].山东中医药大学.2002,4.
[2]郭刚.六神丸治疗恶性肿瘤的临床和实验研究：[D].山东中医药大学.2003,4.
[3]孙莉.六神丸抗肿瘤机理的实验研究：[D].山东中医药大学.2006,6.
[4]李炜.六神丸抗血管生成的实验研究：[D].山东中医药大学.2005,4.
[5]张春荣,姜伟,齐元富.六神丸对鼠S180生长的抑制作用与抑制血管生成的关系.中国预防医学杂志.2006(4)：327-330.
[6]李静.六神丸抗肿瘤的临床及实验研究：[D].山东中医药大学.2009,4.
[7]刘海燕.六神丸对RAS影响肿瘤血管生长的实验研究：[D].山东中医药大学.2009,4.
[8]黄利敏.六神丸抗肺癌转移及其作用靶点的实验及临床研究：[D].山东中医药大学.2009,4.
[9]李炜,孟艳冬,赵玲等.六神丸逆转灯盏细辛抑制MCF-7细胞凋亡作用的实验研究.河北中医.2006,28(12)：940-942.
[10]徐芳.六神丸诱导白血病细胞凋亡及调控凋亡相关基因的实验研究：[D].天津中医学院.2001,7.
[1l]庞纪平.六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究：[D].天津中医学院.2002,6.
[12]黄振东.用中药血清药理学方法观察六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究：[D].天津中医学院.2003,4.
[13]马洁.六神丸诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因的影响：[D].天津中医学院.2003,4.
[14]戴锡孟,于志峰,马洁等.六神丸诱导NB4细胞凋亡的实验研究.山东中医杂志.2004,2(12)：734-735.
[15]于志峰,戴锡孟,马洁等.六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究.中医研究.2005,(18)6：14-16.
[16]史哲新,杨文华,汤毅等.六神丸逆转白血病细胞多药耐药作用及相关机制研究.天津中医药大学学报.2007,26(1)：11-13.
[17]齐卫红,沈连忠,李欣等Beagle犬重复给予六神丸28d及恢复期14d毒性研究.毒理学杂志.2007,21(4)：304.
[18]齐卫红,李欣,沈连忠等Beagle犬经口给予六神丸急性毒性研究.毒理学杂志.2007,21(4)：303-304.
[19]王秀萍,曹志权,路雪雅.微量元素与健康研究.2003,20(4)：27-28.
[20]王晓波,袭荣刚.解放军药学学报,2002,18(6)：324-326.
[21]Ying D,Hui B X,Kai X H,et al.Pharmacol.Res.2001,44(6):513-518.
[22]Ye HQ,GanL,YangXL,et al.Biol.Trace.Elem.Res.2005,103 (2):117-132.
[23]Ye HQ,Yang XL,Gan L,et al.Conf.Proc.IEEE.Eng.Med.Biol.Soc.2005,7:7714-7717.
[24]叶寒青.纳米雄黄抗肿瘤作用机理研究.华中科技大学博士论文,2005.
[25]罗丽云,张天蓝,王夔.中国中药杂志.2006,31(16)：1343-1346.
[26]Wang X B,GaoHY,Hou BL,et al.Arch.Pharm.Res.2007,30(5):653-658.
[27]刘嵘,濮德敏,赵立波等.中国中药杂志.2008,33(1)：54-58.
[28]王晓波,袭荣刚,姚晓敏等.中国新药杂志.2007,16(22)：1869-1872.