用户名: 密码: 验证码:
沙葱中黄酮类化合物的分离纯化、结构鉴定及其对小鼠免疫抗氧化机能影响的研究
详细信息    本馆镜像全文|  推荐本文 |  |   获取CNKI官网全文
摘要
本文通过分离纯化沙葱中的黄酮类化合物,以昆明种小白鼠为动物模型,研究饲喂沙葱黄酮对机体免疫及抗氧化能力的影响。试验共分三个部分:
     第一部分试验确定沙葱黄酮最佳提取纯化条件,应用75%乙醇提取沙葱中黄酮类化合物,提取温度为70℃、提取时间为2h/2次。应用聚酰胺层析柱分离纯化,用30%、50%、70%和95%的乙醇溶液洗脱,用液相色谱-电喷雾离子化-质谱串联技术(LC-ESI-MS-MS)鉴定沙葱黄酮的结构,结果如下:30%乙醇洗脱出8种沙葱黄酮类化合物,分别是①山奈素-4′-O-3,7-O-O-二葡萄糖苷(m/z609)、②槲皮素-7-O-3-O-芸香糖苷(m/z609)、③山奈素-4′-O-7-O-葡萄糖-3-O-二葡萄糖苷(m/z771)、④7-O-5, 4′-二甲氧基-3′-羟基黄酮醇(m/z329)、⑤3′,4′-环氧基-7-O-5-甲氧基黄酮醇(m/z327)、⑥槲皮素-7-O-3-O-二葡萄糖苷(m/z625)、⑦槲皮素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m/z463)、⑧山奈素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m/z447);50%乙醇洗脱出7种沙葱黄酮类化合物,分别是①木犀草素-5′-O-葡萄糖-4-羟基苯丙酸(m/z593)、②槲皮素-7-O-3-O-芸香糖苷(m/z609)、③山奈素-4′-O-3,7-O-O-二葡萄糖苷(m/z609)、④7-O-5, 4′-二甲氧基-3′-羟基黄酮醇(m/z329)、⑤3′,4′-环氧基-7-O-5-甲氧基黄酮醇(m/z327)、⑥槲皮素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m/z463);⑦山奈素-7-O-3-O-葡萄糖苷(m/z447);70%乙醇洗脱出3种沙葱黄酮类化合物,分别是①7-O-5, 4′-二甲氧基-3′-羟基黄酮醇(m/z329)、②3′,4′,3,4-四羟基-6-O-类黄酮(m/z 273)、③3′,4′-环氧基-7-O-5-甲氧基黄酮醇(m/z327);95%乙醇洗脱出2种沙葱黄酮类化合物,分别是①3′,4′-环氧基-7-O-5-甲氧基黄酮醇(m/z327)、②7-O-5, 4′-二甲氧基-3′-羟基黄酮醇(m/z329)。
     第二部分试验应用纯昆明种小白鼠480只(体重:20±2g),随机分为4组,每组120只(雌雄各半),分笼饲养。第1组为对照组,第2组为添加75.36mg/kg·BW·d沙葱组,第3组为添加75.36mg/kg·BW·d75%乙醇提取的沙葱总黄酮粗提物组,根据预试验的结果第4组为添加75.36mg/kg·BW·d30%乙醇洗脱纯化后沙葱黄酮添加组,预饲期5d,正式试验期14d,正式试验期内2次宰杀采血并分离血清,剖离肝脏、胸腺和脾脏称重。试验结束时,沙葱组和沙葱黄酮纯化组的血清T-SOD、GSH-Px含量显著高于对照组和沙葱黄酮粗提物组(P<0.05),沙葱黄酮纯化组和沙葱黄酮粗提物组的血清CAT含量显著高于对照组(P<0.05),试验各组的血清MDA含量低于对照组,但差异不显著(P>0.05),试验组血清T-AOC含量显著高于对照组(P<0.05)。试验组肝脏T-SOD含量显著高于对照组(P<0.05),试验组之间差异不显著(P>0.05),沙葱黄酮纯化组的肝脏GSH-Px含量显著高于其它各组(P<0.05),对照组、沙葱组和沙葱黄酮纯化组的肝脏CAT含量显著高于沙葱黄酮粗提物组(P<0.05),沙葱组和沙葱黄酮纯化组肝脏MDA含量显著低于对照组和沙葱黄酮粗提物组(P<0.05),沙葱黄酮纯化组肝脏T-AOC含量高于其它各组,但差异不显著(P>0.05)。试验结果显示:沙葱黄酮可提高血清和肝脏中抗氧化酶类的含量和活性,降低体内脂质过氧化产物的含量,从而提高机体的抗氧化能力。
     第三部分试验设计同第二部分,试验结束时,试验各组的脾脏指数高于对照组,但差异不显著(P>0.05),沙葱黄酮纯化组胸腺指数显著高于其它各组(P<0.05);沙葱黄酮纯化组的血清ACP含量显著高于其它各组(P<0.05),试验各组肝脏ACP含量显著高于对照组(P<0.05);试验各组碳廓清指数高于对照组,但差异不显著(P>0.05),沙葱黄酮纯化组的吞噬指数、血清溶菌酶含量显著高于其它各组(P<0.05);沙葱黄酮纯化组血清lgG含量显著高于对照组(P<0.05);沙葱黄酮纯化组CD19~+细胞数量高于其它各组,但差异不显著(P>0.05);沙葱黄酮纯化组CD4~+细胞数量显著高于对照组和沙葱组(P<0.05),对照组CD8~+细胞数量高于其它各组(P>0.05);试验组血清NO含量均高于对照组,其中沙葱黄酮粗提物组显著高于对照组和沙葱黄酮纯化组(P<0.05),高于沙葱组但差异不显著(P>0.05)。试验结果显示:沙葱黄酮纯化组能提高免疫器官指数、血液和肝脏的ACP和溶菌酶的含量,从而增强吞噬细胞消化和降解异物的能力,并且沙葱黄酮纯化组能显著提高小鼠的碳廓清指数(κ)和吞噬系数(α),因此沙葱黄酮在增强机体非特异性免疫机能方面发挥着重要作用;沙葱黄酮纯化组还可提高小鼠外周血中IgG的含量和CD19~+细胞(B细胞)百分率,表明沙葱黄酮通过增加机体抗体形成细胞的数量或增强抗体形成细胞的功能,而提高机体体液免疫功能;通过提高外周血中CD4~+细胞和CD8~+细胞数量而增强机体的细胞免疫机能。沙葱黄酮还可通过提高血液中生物信息传递分子――NO的含量,活化巨噬细胞发挥非特异性杀菌和杀肿瘤作用,在T淋巴细胞和B淋巴细胞的参与下进行复杂的免疫活动。
Is this paper, Kunming mice were used to study the effect of flavonoids separated and purified from Allium mongolium Regel on immity and antioxidant function in body. The experiment was divided into three parts:
     The first part of the experiment determined the best extracting and purifying conditions of the flavonoids from Allium mongolium Regel,75% ethanol c used to extract flavonoids in Allium mongolium Regel,extraction temperature was 70℃,extraction time was 2 hours/2 times. Polyamide column chromatography was used to separate and purify flavonoids,using 30%,50%,70% and 95%ethanol washed and then the structure of flavonoids from Allium Mongolium Regel was identified by liquid chromatography -ESI-tandem mass spectrometry technology (LC-ESI-MS-MS).The results showd that:eight kinds of flavonoids from Allium mongolium Regel were separated by 30% ethanol They are,kaempferol-4′-O-3,7-O-O-2glucosidase(m/z609), quercetin-7- O- 3-O -rutaceaeglucoside(m/z609),kaempferol-4'-O-7-O-glucose-3-O-2glucosidase(m/z771),7-O-5,4′-dimethoxy-3'-hydroxyflavonol(m/z329),3′,4′-epoxy-7-O-5-methoxy-flavonol(m/z327),quercetin-7-O-3-O-2glucosidase(m/z625),quercetin-7-O-3-O-glucoside(m/z463) and kaempferol-7-O-3-O-glucoside(m/z447) respectively; seven kinds of flavonoids from Allium mongolium Regel were separated by 50% ethanol they are, Luteolin -5'-O-glucose-4-hydroxy phenylpropionate(m/z593),quercetin-7-O-3-O-rutaceae glucosi -de(m/z609),kaempferol-4'-O-3,7-O-O-2glucosidase(m/z609),7-O-5,4′-dimethoxy-3'-hydroxyflavonol(m/z329),3′,4′-epoxy-7-O-5-methoxy-flavonol(m/z327),quercetin-7-O-3-O-glucoside(m/z463) and kaempferol-7-O-3-O-glucoside(m/z447) respectively; three kinds of flavonoids from Allium mongolium Regel were separated by 70% ethanol they are,7-O-5,4′-dimethoxy-3'-hydroxy flavonol(m/z329),3',4',3,4- 4hydroxy-6-O–flavonoid (m/z273) and 3′,4′- epoxy -7- O- 5- methoxy-flavonol(m/z327) respectively; two kinds of flavonoids from Allium mongolium Regel were separated by 95% ethanol they are,3′,4′-epoxy-7-O-5- methoxy-flavonol(m/z327) and 7-O-5, 4′-dimethoxy -3'- hydroxyl flavonol(m/z329) respectively.
     In the second part of the experiment,480 (weight 20±2g) pure-blooded Kongming mice, which were divided randomly into four groups and each group 120 (half female and half male), were raised in different cages which were named control group, 75.36mg/kg·BW·d Allium mongolium Regel supplementation group,75.36mg/kg·BW·d flavonoid extract supplementation group,75.36mg/kg·BW·d flavonoids purification supplementation group. Preparatory experimental period lasted for 5 days and the formal experimental period lasted for 14 days. After two slaughters being done during the formal experimental period, two slaughter experiment were conducted,the blood was collected and serum was isolated ,and live thymus and spleen was dissected and weighed.
     The result show that, the content of T-SOD and GSH-Px in serum to Allium mongolium Regel group and flavonoids purification group was higher than that of control group and flavonoid extract group(P<0.05). The content of CAT in serum of flavonoids purification group and flavonoid extract group was higher than that of control group(P<0.05).The content of MDA in serum of experiment groups was lower than that of control group, but the difference was not significant(P>0.05).The content of T-AOC in serum of experiment groups was higher than that of control group(P<0.05).The content of T-SOD in liver of experiment groups was higher than that of control group(P<0.05), but the difference was not significant in experiment groups(P>0.05).The content of GSH-Px in liver of flavonoids purification group was higher than that of other groups(P<0.05).As compared to the control group, The CAT content in liver of flavonoid extract supplementation group was significant lower(P<0.05).The content of MDA in liver of Allium mongolium Regel group and flavonoids purification group were lower than that of control group and flavonoid extract group(P<0.05).The content of T-AOC in liver of flavonoids purification group was higher than that of other groups, but the difference didn′t reach statistical significant(P>0.05).From the results we conduded that flavonoid of Allium mongolium Regel can enhance the content and activity of antioxidant enzymes in serum and liver and reduce the content of lipid peroxidation in vivo, thereby enhance the body's antioxidant capacity.
     The design of the third part of experimental was the same as the second part. The results showed, the spleen index of experiment groups were higher than that of control group, but the difference was not significant (P>0.05).The thymus index of flavonoids purification group was higher than that of other groups(P<0.05).The content of ACP in serum of flavonoids purification group was higher than that of other groups(P<0.05); The carbon clearance index of experiment groups was higher than that of control group, but the difference was not significant (P>0.05).The phagocytic index and lysozyme content in serum of flavonoids purification group were higher than other groups(P< 0.05),the content of lgG in serum to flavonoids purification group was higher than that of control group(P<0.05).The number of CD19~+ of flavonoids purification group was higher than that of other groups, but the difference was not significant (P>0.05).The number of CD4~+ of flavonoids purification group was higher than that of control group and Allium mongolium Regel group(P<0.05).The number of CD8~+ of control group was higher than that of other groups(P>0.05).The content of NO in serum of experiment groups was higher than that of control group, the content of NO in serum of flavonoid extract group was higher than that of control group(P<0.05), flavonoids purification group(P<0.05) and Allium mongolium Regel group(P>0.05).
     The results showed that flavonoids purification supplementation group can enhance immune organs index, the content of ACP and lysozyme in blood and liver, thereby enhance the capability of phagocytes to digest and degradate of foreign body. Meanwhile, carbon dissection index(κ) and engulfed coefficient(α) of mice in flavonoids purification group was significantly increased,so flavonoid of Allium mongolium Regel played an important role in enhancing the body non-specific immune function.Flavonoid of Allium mongolium Regel can improve the content of IgG and the percentage of CD19~+ (B cell) in the peripheral blood of mice. The results indicated that flavonoid of Allium mongolium Regel stronghten the immune function of body fluid; Through increasing the number of antibody in the body formatting cell and enhancing the function antibody formation of cell.Through increasing the cell numbers of CD4~+ and CD8~+ in blood, flavonoid of Allium mongolium Regel enhanced humoral immune function. Flavonoid of Allium mongolium Regel activated macrophages by creasing the content of NO,which was biological information transmission and play the non-specific sterilization and killing tumor function of macrophages and carry through complex immunization activities with participation with T lymphocytes and B lymphocyte.
引文
1 包颖.内蒙古葱属植物的地理分布[J].内蒙古师大学报自然科学(汉文)版,2000,6(29)2:130 ~135
    2 中国植物志编辑委员会.中国植物志(14 卷)[M].北京:科学出版社,1980,170~172
    3 张美莉,高聚林.蒙古韭生物学特性及营养价值初探[J].内蒙古农业科技,1997,5:25~26
    4 刘丽娟,刘银燕,杨晓虹.葱属植物甾体化合物及黄酮化合物的研究进展[J].中国药学杂质,2000,6(35-6):367~371
    5 Obdulio BG, Castillo ,Julian,Marin Francisco R, et al Uses and properties of citrus flavonoids[J]. J Agric Food Chem,1997,45(12):4505
    6 M Kadkhodaee, G R Hanson, R A Towner, et al. Detection of hydroxyl and carbon-centred radicals by EPR spectros copy after ischaemia and reperfusion of the rat kidney [J]. FreeRadic Res. 1996, 25(1):31-42.
    7 凌官庭.有“第七营养素”之称的多酚类物质[J].中国食品添加剂,2000,1:27~38
    8 汪发瓒,唐进.中国植物志(14 卷)[M].北京:科学出版杜,1980
    9 马毓泉.内蒙古植物志(第 8 卷)[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1985,191~198
    10 邹忠梅,于德泉,从浦珠.葱属植物化学及药理研究进展[J].药学学报,1999,34(5):395~400
    11 吴雁,彭军鹏,姚利强,等.葱属植物挥发油研究[J].沈阳药学院学报,1993,10:45
    12 彭军鹏,乔艳秋,肖克岳,等.葱属植物挥发油研究Ⅲ-薤[J].中国药物化学杂志,1994, 14:282
    13 哈斯巴根.内蒙古草地葱属植物的民族植物学研究[J].中国草地,1999(5):42~47
    14 张美莉,高聚林,隋艳杰.蒙古韭种子发芽特性初报[J].内蒙古农牧学院学报,1998,19(1):115~117
    15 巴俊杰,张春丽,高建萍,等.沙葱营养成分分析[J].内蒙古农业大学学报,2002,23(4):56~60
    16 斯琴巴特尔,刘新民.蒙古韭的营养成分及民族植物学[J].中国草地,2002,24(3):52~54
    17 陈刚,贾敬芬,郝建国,等.沙葱(Allium mongolicum Reel)离体培养再生可育植株[J].植物研究,2003,23(1):51~55
    18 赵丽华.沙葱和油料籽实对羊肉理化指标及食用品质的影响[D].内蒙古农业大学硕士学位论文,2005
    19 卢媛.沙葱、地椒风味活性成分及其对绵羊瘤胃发酵和羊肉风味的影响[D].内蒙古农业大学硕士学位论文,2002
    20 张宇宏.沙葱和油料籽实对蒙古绵羊血液生化指标的影响[D].内蒙古农业大学硕士论文,2005
    21 赵春艳.沙葱和油料籽实对绵羊瘤胃发酵及免疫机能的影响[D].内蒙古农业大学硕士论文,2005
    22 赵国芬.沙葱和油料籽实对绵羊瘤胃发酵、营养物质消化流通及胴体品质影响的研究[D].内蒙古农业大学博士论文,2005
    23 Turner M.W.90 years on:a Therapy to"stimulates The pHagocutes"? Scand J. Immunol., 1998,48:124
    24 Christopher CR,Deirdre RC,Hilary AH,et al. Anti-HIV-1 activity of chemically modified heparins: correlation between binding to the V3 loop of gp120 andinhibition of cellular HIV-1 infection in vitro[J] .Biochemistry 1994, 33: 6974~6980
    25 Ferket, PR, and Qureshi, M.A. The immune system and nutrition in poultry[M]. ANECA. Mexico City.2000.
    26 Puhl W et al.Eur.J.Rlleumatic in flammation[M].1984,4:264
    27 万利.自由基的产生对运动疲劳的影响及其恢复机制[J].河北体育学院报,2004,18(1):21~22
    28 陈淑兰,赵盛.免疫与衰老[J].河北职工医学院学报,2004,21(1):31~32
    29 张洪泉,余文新.中华抗衰老医药学[M].北京:科学出版社,2000,71~82
    30 凌庭.天然抗氧化剂及其消除氧自由基的进展[J].食品工业,2000,3 :19~22
    31 黄克和.白由基与肿瘤的关系[J].中国兽医杂志,1995,21(2):42~45
    32 李庆林,陈志武,马传庚.黄蜀葵花总黄酮对心肌损伤的保护作用及其机制[J].中国药理学通报,2001,17(4):466
    33 乌日娜,张昕原,张维兰,等.广枣总黄酮对阿霉素引起大鼠心肌过氧化损伤的保护作用[J].中草药,2001,32(6):527
    34 刘惟莞,杨晓茹,屠治本,等.水杉总黄酮抗实验性心肌肥厚及抑制心室 c-Fos 蛋白表达的作用[J].中草药,2001,32(4):329
    35 刘惟莞,曾加雄,石明健,等.水杉总黄酮对肾性高血压大鼠左室肥厚的作用[J].中草药,2000,31(11):837
    36 王继光,吕高虹.苦参总黄酮抗实验性心率失常作用的研究[J].中药药理与临床,2001,17 (5):13
    37 王丽娟,王勇,李金鸣.灯盏花素对豚鼠心室肌细胞迟发性外向钾电流的影响[J].中国药理学通报,2002,18(3):326
    38 伶继铭,刘玉玲,周崇坦,等.黄岑茎叶总黄酮抗心率失常作用研究[J].中草药,2002,33(8):731
    39 张莎莎,王玉华,爱民.广枣总黄酮对豚鼠右心室乳头肌的影响[J].中国药理学报,2002,18(2):20~26
    40 于长青,张东杰,牟光庆,等.麦胚黄酮类提取物对血脂和抗氧化的影响[J].营养学报,2001, 23(4):390
    41 韩淑英,吕华,朱丽莎,等.荞麦种子总黄酮降血脂、血糖及抗脂质过氧化用的研究[J].中国药理学通报,2001,17(6):694
    42 陈晓军,陈学芬,李茂,等.显齿蛇葡萄总黄酮降脂作用的研究[J].广西中医药,2001,24 (5):53
    43 李传勋,周琴,高广猷,等.银杏叶黄酮对高血脂大鼠血脂水平的影响[J].大连医科大学学报,2001,23(3):179
    44 李法琦,陈运贞.灯盏花素逆转自发性高血压大鼠重塑的研究[J].中国循环杂志,2002,17 (2):151
    45 许芝兰,耿秀芳,马秀青,等.淫羊藿总黄酮降压作用机理的研究[J].中医药学报,2002,30(4):57
    46 耿秀芳,孙晓丽,王洪刚,等.银杏叶总黄酮降压的实验与临床研究[J].中国中药杂志,2002, 27(8):606
    47 吴锦晖,章茂,王家良,等.醋柳黄酮急其单体对培养自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞 c-myc表达的影响[J].华西药学杂志,2001,16(1):72
    48 陈建康,王雷,李柯,等.银杏黄酮与蛇激酶的抗凝溶栓作用[J].心脏杂志,2001,13(4):308
    49 敖英,刘惟莞,严常开,等.水杉总黄酮对大鼠血小板拒绝、血液流变性的作用及机制探讨[J].中草药,2002,33(4):327
    50 韩谷鸣,姚倩,李洪莲,等.穿心莲黄酮对血小板活化反应的抑制作用及机理研究[J].中国中西医结合杂志,2000,20(7):527
    51 汪德清,CritchleyJulian ATH,丁保国,等.黄芪总黄酮对扑热息痛所致肝损伤的保护机理探讨[J].中国中药杂志,2001,26(9):617
    52 卢新华,陈虎云,戴俊,等.苦菜总黄酮对实验性肝损伤的防护作用[J].中国现代医学杂志,2002,12(3):8
    53 许东晖,陈颖,梅雪婷,等.水稻黄酮对大鼠实验性肝纤维化的作用[J].中国药科大学学报,2002,33(3):234
    54 孙福祥,杨明霞,娜仁花,等.广枣总黄酮对阿霉素所致红细胞过氧化的抑制作用[J].中成药,2001,23(8):606
    55 张政,周源,王转花,等.苦荞麦麸皮中黄酮类的抗氧化活性研究[J].药物生物技术,2001, 8(4):217
    56 阿不都热依木,斯拉甫,哈木拉提.电子顺磁共振技术研究一枝蒿总黄酮抗氧化作用[J].中国药理学通报,2001,17(6):648
    57 张英,吴晓琴,俞卓裕.竹叶和银杏叶总黄酮含量及其抗氧自由基活性的比较研究[J].中国中药杂志,2002,27(4):254
    58 贺建荣,张琰,程建峰,等.黄芪总黄酮、黄芪多糖及阿魏酸清除氧自由基作用的研究[J].中国美容医学,2001,10(3):191
    59 赵铁华,花金宝,石艳华,等.黄岑茎叶总黄酮对小鼠肉瘤体内增殖的抑制作用[J].中国中医药信息杂志,2001,8(7):34
    60 徐德平,江汉湖,汤涛,等.大豆及丹贝异黄酮对乳腺癌、子宫癌和卵巢癌细胞的抑制作用[J].食品科学,2001,22(6):69
    61 李伟东,阚毓鸣,洪敏,等.后莫紫檀素、美迪紫檀素对人肝癌细胞抑制作用的研究[J].沈阳药科大学学报,2001,18(3):211
    62 韩京艳,邢东明,孙虹,等.银杏叶总黄酮内酯及天然配比抗氧化作用的比较[J].中国药理学通报,2002,18(1):115
    63 高杉,董六一,岑德意,等.黄蜀葵花总黄酮对对脑缺血损伤的保护作用[J].中国中医基础医学杂志,2002,8(6):19
    64 陈康宁,董为伟.灯盏花素对脑缺血神经元凋亡的防治作用[J].中国临床神经科学,2000, 8 (1):5
    65 何泉华,灯芹葵.Xanthone 对大鼠不全脑缺血再灌损伤的保护作用[J].广州医学院学报,2001,29(1):11
    66 沈自尹,陈瑜.淫羊藿总黄酮与补肾复方对皮质酮大鼠 T 细胞凋亡相关基因群调控的对比研究[J].中国免疫学杂志,2002,18(3):187
    67 德文,张悦.蜂胶黄酮对小鼠脑一氧化碳影响的研究[J].中医药学刊,2001,18(1):90
    68 孙英,王景明,骆永珍.淫羊藿总黄酮促进免疫功能低下小鼠 IL-2 和 NK 活性的实验研究[J].中草药,2002,33(7):635
    69 赵铁华,邓淑华,高巍,等.黄岑茎叶总黄酮对免疫功能影响的实验研究[J].中国中医药科技,2001,8(3):177
    70 李勇,季晖,李萍,等.淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的影响[J].中国药科大学学报,2002,33(1):48
    71 江永南,莫红缨,陈济民.淫羊藿总黄酮磷脂复合物防治去势大鼠丢失的实验研究[J].中国中药杂志,2002,27(3):221
    72 武雪芬,白雁.金银花叶药用成分的提取及抑菌实验研究[J].中成药,2001,23(6):448
    73 王理达,果得安,胡迎庆,等.四种抗真菌天然产物对威克海姆原藻超微结构的影响[J].北京医科大学学报,2000,32(3):219
    74 刘增琪,景涛.中药提取分离技术的应用进展[J].天津药学,2003,4(15):64~67
    75 St Angelo A J, James Jr C. Analysis of Lipids from Cooked Beef by Thin-layer. Chromatography with Flame-ionization Detection [J]. JAOCS. 1993,70 (12): 1245 -1250
    76 Reverchon E, Marrone C .Modeling and simulation of the sepercritical CO2 extraction for vegetable oils [J]. J Super Crit.Fluids. 2001,19(2):161-175
    77 杨庆隆,许顺荣.浅谈酶在中药制剂中的应用[J].中成药,1995,6:25~29
    78 杨祖荣.超声技术在天然药物有效成分提取中的应用[J].河南中医学院学报,2003,26(3):29~31
    79 王铮敏.超声波在植物有效成分提取中的应用[J].三明高等专科学校学报,2002,19(4):45~51
    80 Viorio L,Yang R.Microuave-assisted extraction of organic compounds from standard reference soils and sediments [J].Anal chem, 1994, 66:1097-1106
    81 Rodrigudz I,santamarinl M, Bollain M H, et al.specoation of organotin compounds in marine biomaterials after basic leaching in a non-focued microwave extraetor equipped with pressurized vessels [J] chromatogr, 1997, 774:379-387
    82 王军武,许松林,徐世民,等.分子蒸馏技术的应用现状[J].化工进展,2002,21(7):499~502
    83 袁黎明,傅苦农,等.高速逆流色谱在植物有效成分分离中的应用[J].药物分析杂志,1998,18(1):60
    84 陆强,邓修.提取与分离天然产物有效成分的新方法一双水相萃取技术[J].中成药,2000,22(9):653~655
    85 刘培楠,等.仪器分析及其在生理科学中的应用[J].北京:科学出版社,1965,10:84
    86 莱德雷原著,陶义训等译.色层法[M].北京:石油化学工业出版社,1959,6
    87 H. H.斯特兰原著,孙载坚译.色层吸附分析法[M].北京:科学出版社,1959,3
    88 Chiu D,Lubin B and Shohet S B.Peroxidative reaction in red cell biology.In:Pryor WA.Ed.Free Radicals in Biology Vol.V [M]:New York:Acedemic Press,1982:115-160
    89 魏胜华,鱼红闪.黄酮类活性成分的分离提纯[J].大连轻工业学院学报,2003,22(2):114
    90 李伯庭,王湘,李小进.大孔吸附树脂在天然产物分离中的应用[J].中草药,1990,2(8):42
    91 巴根那,赵贤芳,等.蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究[J].时珍国医国药,1999,10(4):48~52
    92 陈云龙,谢笔钧,等.银杏叶黄酮糖苷精制工艺的研究[J].浙江大学学报(理学版),1999,26(2):80
    93 房芳,张广强,谢新年.用分光光度法进行黄酮类化合物含量测定的研究[J].河南中医药学刊,1997,12(2):17~19
    94 Bianchini F, Vainio H. Allium vegetables and organosulfur compounds: do they help prevent cancer? [J].Environ Health Perspect,2001,109(9):893-902
    95 Acketmann RT, Mulrow CD, Ramirez G, et al. Garlic showspromise for improving some cardiovascular risk factors[J].ArchInure Med,2001,161(6):813-824.
    96 Harris JC, Cottrell SL, Plummer S, et al. Antimicrobial properties of Album sativum(garlic) [J].Appl MLcrobiol Biotechxiol,2001,57(3):282-286.
    97 Kim KM,Chun SB,Koo MS,et al. Differential regulation of NO availability from macrophages and endothelial cells by the garlic component S-allyl cysteine[J].Fru Radic Biol Med,2001,30(7):747-756.
    98 姚新生主编.天然药物化学(第三版)[M].北京:人民卫生出版社,1998,1~10
    99 张巧娥.沙葱提取物的分离鉴定及其对绵羊消化道共轭亚油酸含量和脂肪沉积影响的研究[D].内蒙古农业大学博士学位论文,2007:25~26
    100 游见明.生姜黄酮的提取方法比较[J].四川食品与发酵,2005,2(41):29~31
    101 于村,俞莎,沈向红.保健食品中总黄酮测定方法的研究[J].中国卫生检测,2002,12(4):401~402
    102 林辉.中药高良姜总黄酮的含量测定[J].时珍国医国药,2001,12(6):486~487
    103 李李.李李生中生物李与黄酮类化合物的提取、纯化及黄酮类化合物的生物活性研究[D].南昌大学博士研究生学位论文,2007
    104 刘杰超.苹果汁中多酚物质的分离提取及其主要生物活性的研究[J].中国农业科学院硕士学位论文,2003
    105 李建法,胡六江,吕金红,等.苦丁茶黄酮类化合物的提取与分析[D].浙江林业科技,2005,1,25(1):31~34
    106 王兰珍,马希汉,王妹清,等.元宝枫叶总黄酮提取方法研究[J].西北林学院学报,1997,12(4):64~67
    107 郭月英.苦荞壳中黄酮类化合物提取的研究[D].内蒙古农业大学硕士学位论文,2004:25~26
    108 丁利君,吴振辉,蔡创海,等.菊花中黄酮类物质提取方法的研究[J].食品工业科技,2002,2:20~22
    109 谭仁祥.植物成分分析[M].北京:科学出版社,2002,1~300
    110 刘战.沙葱提取物对鼠的一般毒性的研究[D].内蒙古农业大学硕士学位论文,2007:17
    111 徐叔云,卞如濂,陈修.药理学实验方法(第三版)[M].北京:人民卫生出版社,2002:9~19,14~36
    112 郑荣梁.自由基生命科学进展[M].VOL8.原子能出版社,2000,11:56~59
    113 赵保路.氧自由基和天然抗氧化剂[M].北京:科学出版社,1999
    114 姜绍通,等.茶多酚-猪油乳化体系的抗氧化效果[J].食品科学,1999,20(5):9
    115 孙毓庆.仪器分析[M].北京:科学出版社,2005
    116 姜艳艳,刘斌,石任兵.高效液相色谱-质谱联用技术在天然产物分离鉴定中的应用[J].药品评价,2005,2(1):11~16
    117 M. Brolis, B. Gabetta, N. Fuzzati,et al. Identification by high-performance liquid Chromato gra-phyd-iode array detection-mass spectrometry and quantification byhigh-performance liquid chromatography-UV absorbance detection of active constituents of Hypericum perforatum[J].J Chromatogra, 1998,825:9-16
    118 Natividad Chaves,Jose J.Rios Gutierrez,et al.Analysis of secreted flavonoids of Cistus ladanifer L.by high-performance liquid chromatogra-phy-practical beam mass spectrometry[J].J Chromatogra,1998,799:111-115
    119 Lin L Z, He X G, Michael Lindemnarier, et al. Liquid chromatography-electrospray ionition mass spectrometry study of flavoniods of the roots of Astranalus mongholicus and A. membranaceus[J].J Chromatogra, 2000,876: 87- 95.
    120 Yuan J,Gong Y M, -Ju P,et a1.HPLC-MS2 analysis of chemical constituents in Epimedium koreanum.Chin Tradit Herb Drugs(中草药),2004,35 (4):371-374
    121 Che Q M,Li X Y,Li Y M.Studies on Metabolies of Baicalin in Human Urine.Chin J Chin Mater Med(中国中药杂志),2001,26(11):768-769
    122 A.Romani,A Baldi,N Mullinacci,et al. Extraction and Identification of Polyphenolic Compounds and Carbohyrates in Phillyrea (Phillyrea angustifolia L) Leaves[J]. Chromatographia, 1996,42(9/10):571-577
    123 王义明,张思巨,等.用 LC/ESI-MS/MS 研究肉苁蓉与其代用品中的苯乙醇苷类化合物[J].药学学报,2000,35(11):839~842
    124 Huck C W.Buchmeiner M R.Bonn G K. Fast analysis if flavonoids in plant extracts by liquid chromatography-ultraviolet absorbance detection on poly(carboxylic acid)-coated silica and electrospray ionization tandem mass spectrometric detection. J Chromatogr A, 2001, 943: 33
    125 刘莉华,宛晓春,李大祥,等.黄酮类化合物抗氧活性构效关系的研究进展[J].安徽农业大学学报,2002,229(3):265~270
    126 张英,吴小琴.黄酮类化合物结构与清除活性氧自由基效能关系的研究[J].天然产物研究与开发,1998,10(4):26~33
    127 Husain S,R etal. Hydroxyl radical selivening activity of flavonoids[J]. Phytochenstry,1987,26: 2487-2491
    128 邹耀洪,李桂荣.黄酮类化合物清除活性氧自由基性能的研究[J].常熟高专学报,2001,3(15):47~50
    129 方允中,李文杰.自由基与酶[M].北京:科学出版社,1989,196~200
    130 李英哲,黄连珍等.维生素 A 缺乏对大鼠脂质过氧化和抗氧化系统的影响[J].营养学报 2001,23(1):l~4
    131 Holdom M D,Lechenne B,Hay RJ,et al.Production and characterization of recombinant Aspergillus fumigatus Cu,Zn superoxide dismutase and its recognition by immune human sera[J].J Clin Microbiol,2000,38(2):558-562
    132 刘德良,鲁国平.氧自由基与其抗氧化剂研究进展[J].哈尔滨医药,1994,14(3):55~56
    133 Boyce N.W., Holdsworty S.R. Hydrowyl radical mediation of immune renal injury by desferrioxamine[J]. Kidney Intl,1986,30:813-891
    134 张强.脂质过氧化物对单核巨噬细胞系统功能的影响[J].上海免疫学杂志,1992,12(3):146
    135 Lung C C. Immunochemical properties of MDA-Protem adducts[J].J Immunol MeThods, 1990,128(1):127
    136 季月白,杨尚琪,油书恒,等.丙二醛对巨噬细胞免疫功能的抑制作用[J].中国公共卫生学报,1995,14(4):254~255
    137 Elangovan V, Nanhini D, Mancemegalai S, et al. Studies on The status of lipidperoxidation and The antioxidant system during aging[J].Med Sci RES,1992,20:385-387
    138 Kinnula V L, Crapo K O. Generation and disposal of reactive oxygen metabolites in lung[J]. Lab Invest, 1995,73(1):3-19
    139 郑建仙.功能性食品(第三卷)[M].北京:中国轻工业出版社,1999
    140 李引乾,郝志明,段清学,等.鸡胚尿囊液对小鼠免疫功能与抗应激作用的影响[J].中国兽医科技,2003,33(11):46~48
    141 李素芬,冯敏山,阎国红.生化黄腐酸对肉仔鸡生产性能及免疫器官的影响[J].中国饲料,2000,(14):14~15
    142 林学颜,张玲主编.现代细胞与分子免疫学[M].北京:科学出版社,1999,8:32~37
    143 金治萃,高光,常江,等.枸杞煎剂对小鼠免疫功能的影响[J].包头医学院学报,1997,13(3):3~4
    144 谢金鲜,林启云,杨柯,等.台湾家白蚁醇提物对免疫功能的影响及抗应激作用研究[J].广西中医学院学报,1998,15(2):36~38
    145 宋俊梅,王增兰,丁霄霖.白首乌总甙对小鼠免疫功能的影响[J].无锡轻工大学学报,2001,20(6):588~593
    146 张顺利,郭玫,张新胜,等.热休克对小鼠心、肝、肾磷酸酶活性的影响[J].上海实验动物科学,1998,18(2):73~76
    147 丁剑冰,王士平,黄增迅.小鼠脾发育分化的组织学及组织化学观察[J].解剖学杂志,1997,20(5):500~503
    148 郭斌,樊海燕,贾玉海.红鱼骨素对荷瘤小鼠免疫功能的影响[J].辽宁中医杂志,2002,29(2):104~105
    149 李书桐,李铁军,郑钦岳,等.淫羊藿甙对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响[J].第二军医大学学报,1995,16(6):541~544
    150 杨静玉,于庆海,李爽,等.淫羊藿总黄酮对免疫功能低下小鼠的免疫增强作用[J].沈阳药科大学学报,1998,15(2): 94~97
    151 郝炳华,陶明,何立端,等.淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠细胞免疫及红细胞免疫功能的影响[J].西安医科大学学报,1999,20(3):323~325
    152 龙振洲,主编.医学免疫学(第二版)[M].北京:人民卫生出版社,1997,104~105
    153 徐叔云,魏伟,梁君山.中药抗炎免疫药理的研究思路[J].药学研究,1992,16(2):65~69
    154 张逸凡,于庆海.淫羊藿总黄酮的免疫调节作用[J].沈阳药科大学学报,1999,7,16(3):182~184
    155 王慧芳,曾林,赵爱珍,等.生姜对小鼠血清溶菌酶活性的影响[J].动物医学进展,2001, 22(4):70~71
    156 周平,高玉祥.青蒿琥酯对小鼠免疫功能的影响[J].蚌埠医学院学报,1996,21(1):5~7
    157 杨保全,许卫.溶菌酶在口腔疾病中的作用[J].现代口腔医学杂志,1990,4(1):40~41
    158 谢秩勋,刘雄,陈奉,等.热负荷对血清溶菌酶活性的影响[J].中国免疫学杂志,1997,13:148~149
    159 京宁,韩一平,陈玉林,等.溶葡萄球菌酶对烧伤小鼠吞噬细胞功能的影响[J].中华整形烧伤外科杂志,1995,11(4):255~257
    160 Krusteva E,Hristova S,Damyanov D,et al .Clinical study of The effect of The Preparation DEODAN on Leukopenia,induced by cytostatics.Int J lmmunopHarmacol, 1997, 19(9-10): 487-492
    161 杨保全,王克群.溶菌酶治疗牙周炎 36 例疗效观察[J].口腔医学,1989,9(4):201~202
    162 陶义训.免疫学和免疫学检验[M].北京:人民卫生出版社,1999:19~21
    163 Friesen B D, Guenter W Marquardt R R,et al. The effect of enzyme supplementation on the apparent metabolizable energy and nutrient digestibilities of wheat barley,oats and rye for young broiler chich Poultry Sci, 1992,32:1710-1721
    164 江汉湖主编.食品免疫学导论[D].北京:化学工业出版社,2006:134
    165 Sheu, B. C., S. M. Hsu, R. H. Lin, P. L. Torng, and S. C. Huang. 1999. Reversed CD4/CD8 ratios of tumor-infiltrating lymphocytes are correlated with the progression of human cervical carcinoma Cancer 86(8):1537-1543
    166 沈关心,周汝麟主编.现代免疫学实验技术(第二版)[M].湖北科学技术出版社,2002: 228~242,267~268,298~299
    167 吴敏毓主编.免疫细胞间的相互作用与调节.医学免疫学[M].合肥:中国科学技术大学出版社,1993,96~99
    168 潘宇政.银杏黄酮甙对人体免疫机能的影响[J].广西医科大学学报,1998,15(4):27~28
    169 潘智鸣,张修武,陆浩,等.银杏、黄芪及其复方制剂增强机体特异性免疫功能的比较研究[J].衡阳医学院学报,1997,25(1):19
    170 Macmicking J., Xie Q.W., Stuehr D.J, et al. Nitric oxide and macrophage function. Annu Rev Immunol, 1997,15:323-50
    171 Liew F.Y.,Lox F.E.G.nonspecific defence mechanismahe role of nitric oxide. J.Immunol Today,1991,12(3):A 17-21
    172 周娅,王宁萍,赵建宁,等.枸杞多糖对小鼠巨噬细胞内酶活性及 NO 诱生的影响[J].山东中医杂志,2000,19(5):361~363
    173 赵红卫.一氧化氮与免疫调节[J].上海免疫学杂志,1996,16(6):373~375
    174 蒋波,楚正绪.一氧化氮与炎症[J].国外医学-生理病理科学与临床分册,1998,18(1): 44~47
    175 张黎,陈志武,王瑜,等.银杏叶总黄酮杭炎作用及机制的探讨[J].安徽医科大学学报,2001,36(5):350~352
    176 姚余有,江礼生,陈敏珠.黄芪总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用及机制研究[J].中成药,2001,23(9):661~663
    177 黎海彬,李琳,等.药用植物有效成分提取技术[J].现代化工,2002,22(5):59~62
    178 中国科学院上海药物研究所编著.中草药有效成分提取与分离(第二版)[M].上海:上海科学技出版社,1983,7:103~108
    179 Liang F,,Li LJ,Abliz Z. et al.Rapid Commun.Mass Spectrom. 2002, 16: 1168-1173
    180 祁克宗,王林安.自由基和生物抗氧化系统理论与外科学的关系[J].安徽农业大学学报,1996,23(2):171~174
    181 李英哲,黄连珍等.维生素 A 缺乏对大鼠脂质过氧化和抗氧化系统的影响[J].营养学报,2001,23(1):1~4
    182 吴肇汉.实用临床营养治疗学[M].上海:上海科学技术出版社,2001:204~208
    183 李引乾,郝志明,段清学,等.鸡胚尿囊液对小鼠免疫功能与抗应激作用的影响[J].中 国兽医科技,2003,33 (11): 46~48
    184 Cao GH, Emin Sofic.Antioxidant and prooxidant behavior of flavonoids structure-activity relationships[J].Free Radical Bidogy&Medicine, 1997, 22 (5): 749
    185 张鞍灵,刘国张,高锦明,等.黄酮类化合物生物活性与结构的关系[J].西北林学院学报,2001,16(2):75~79
    186 Yokozawa T, Dong E, Liu ZW, et al. Antioxidant activity of flavones and flavonols in vitro[J]. Phytotherapy Research. 1997, 11(6):446-449
    187 陈季武,朱振勤,杭凯,等.八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系[J].华东师范大学学报(自然科学版),2002,1:90~95
    188 陈志武,宋必卫,方明,等.芸香苷抗氧化作用的初步研究[J].中国药理学通报,1995,11:75~76
    189 汪为群,张艳,方志栋,等.金丝桃甙对心肌脂质过氧化的影响[J].中国药理学通报,1995,11(2):123~125
    190 汪德清,沈文梅,田业平,等.黄芪的三种提取成分对自由基作用的影响[J].中国药理学通报,1994,10:129~132
    191 Lu Chai-Ming,Yang Jenq-Jer. A New Acylated Flavonol Glycoside and Antioxidant Effects of Hedyotis diffusa[J]. Planta medica.2000,66(4):374-377
    192 韩冰,杨峻山.淫羊藿药理作用研究概况[J].中草药,2000,31(11):873~875
    193 钟正贤,陈学芬,周桂芬,等.广西产藤茶总黄酮的药理研究[J].广西科学,1999,3
    194 柳乃奎,黄雪松聚酰胺柱层析分离姜酚类物质的效果食品工业科技 2005,26(1):99~102
    195 吴瑞宁,黄慰生,蔡建秀,等.蕨类植物中总黄酮的提取[J].福州大学学报(自然科学版),2003,31(6):738~741
    196 甘春丽,王晶,杨异卉,等.聚酰胺柱色谱法分离黄酮醇与二氢黄酮醇类化合物[J].哈尔滨医科大学学报,2007,41(6):552~554
    197 郑颖,蓝闽波,徐德生,等.聚酰胺树脂分离甘草总黄酮及抗氧化活性研究[J].中成药,2006,28(10):1521~1522
    198 余丹妮,徐德生,冯怡,等.聚酰胺-大孔树脂联用富集益母草总黄酮[J].中国中药杂志,2008,33(3):264~268
    199 潘见,陈强,谢慧明,等.大孔树脂对葛根黄酮的吸附分离特性研究[J].农业工程学报,1999,15(1):236~240
    200 陈冲等.银杏叶提取物的生产工艺条件研究[J].中草药,1997,28(7):402
    201 肖顺昌等.银杏叶黄酮制备工艺研究[J].中国医药工业杂志 1990,21(5):340~342
    202 刘重芳等.银杏叶有效成分的提取和测定[J].中成药,1992,12(5):7~9
    203 麻秀平,蒋朝晖等.大孔树脂对银杏叶黄酮的吸附研究[J].中国中药杂志,1997,22(9):539~542
    204 李园媛,巴军,陈志.唐古特大黄黄酮类化合物的纯化[J].青海师范大学学报(自然科学版).2005,(3):73~74
    205 张英,吴晓琴,丁霄霖.黄酮类化合物结构与清除活性氧自由基效能关系的研究[J].天然产物研究与开发,1997,10,4:26~33
    206 孙存普,张建中,段绍瑾.自由基生物学导论[M].合肥:中国科学技术大学出版社,1999
    207 王卫东,陈复生.陈皮中黄酮类化合物抗氧化活性的研究[J].中国食品添加剂,2007,1(10):59~62
    208 刘晓宇,张俊杰,王蕊霞.葛根总黄酮的提取及抗氧化活性评价研究[J].食品科学,2007,28(10):232~237
    209 张瑞菊,邢桂丽,孙海波.陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性[J].食品与药品,2007,9(11):22~25
     210 贾征,黄文,薛安.杜仲叶黄酮的超声提取及其抗氧化性研究[J].安徽农业科学,2008,36(4):1286~1288
    211 刘国强,杨桂文,安利国.芦笋黄酮对 D-半乳糖衰老小鼠大脑皮层 SOD.MDA 的影响[J].科技信息,2008,2:119

© 2004-2018 中国地质图书馆版权所有 京ICP备05064691号 京公网安备11010802017129号

地址:北京市海淀区学院路29号 邮编:100083

电话:办公室:(+86 10)66554848;文献借阅、咨询服务、科技查新:66554700