余甘多糖提取工艺及其功能学的研究
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摘要
为了开发福建余甘资源，对余甘中多糖的最佳提取工艺进行了研究，并按保健食品功能学评价程序对余甘多糖的抗氧化、抗肿瘤作用进行研究。
在单因素试验的基础上，通过正交实验确定了余甘多糖提取最佳工艺为采用品种为南大、100℃下浸提4h，提取率达到1.18％。
通过观察余甘多糖对CCl_4肝损伤小鼠的影响来研究其抗氧化作用，结果表明余甘多糖能显著降低小鼠肝脏中过氧化脂质(LPO)含量，并显著提高全血中超氧化物岐化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)的浓度(P＜0.05)，说明余甘多糖具有抗氧化作用，提示其可能有助于延缓衰老。
余甘多糖对S_(180)腹水瘤体外初步实验观察表明，余甘多糖各剂量能导致癌细胞破裂，细胞空泡，核固缩，说明余甘多糖可能具有抗肿瘤作用。
以环磷酰胺(CTX)为阳性对照组，以生理盐水为阴性对照组，观察各剂量余甘多糖对荷瘤(腹水瘤S_(180)和H_(22))小鼠生存天数的影响，结果表明高、中剂量的余甘多糖能显著延长荷瘤(S_(180))小鼠的生存天数(P＜0.05)，中剂量的余甘多糖能显著延长荷瘤(H_(22))小鼠的生存天数(P＜0.05)；采用小鼠体内淋巴细胞转化实验和小鼠碳廓清实验来观察余甘多糖对荷瘤(实体瘤S_(180))小鼠免疫功能的影响。结果表明，高、中、低剂量的余甘多糖对小鼠肉瘤均有抑制作用，抑瘤率分别达到52.13％、50.08％、31.33％：而中、低剂量的余甘多糖对小鼠的免疫功能没有抑制作用。余甘多糖的抑制肿瘤的机理可能是通过增强肌体免疫力和抗氧化作用来干预癌细胞的生长实现的。
For the sake of exploiting fujian Phyllanthus Emblica L. resources, the extraction technology of polysaccharide from Phyllanthus Emblica L. (PePs) and its functional effect of antioxygenation and antitumor was studied according to functional evaluation process of health food.
On the basis of single factor experiments, the optimum extraction technology was determined through orthogonal experiments: extracting 4h under the temperature of 100C by use of N AND A.
The effect of PePs on carbon tetrachloride intoxicated mice was studied to investigate its antioxidation. Results indicated that PePs obviously reduced LPO (Lipid peroxidation) contents in intoxicated mice liver, enhanced the SOD activity and the GSH contents in the blood(P<0.05). It is proved that PePs has the effect of antioxidation, and thus delaying senescence possibly.
Preliminary experiment of antitumor(S180) in vitro showed that PePs can break the cancer cell and make the cell vacuolus and karyopycnosis which indicated that PePs had possibly antineoplastic activity.
Model groups(transplanted S180 and H22 model in mice), control groups(CTX and physiological saline) and treated groups(4g/L 3g/L 2g/L 1g/L PePs solution) to abserve the antineoplastic activity and the effect of immune functions noduliferous mice by calculating the lymphocyte convertion rate and phagocytosis index. The results showed that high dose and middle dose can prolong remarkably the survival time of mice planted with S180 fluid tumor(P<0.05); middle dose can prolong remarkably the survival time of mice planted with H22 fluid tumor(P< 0.05); high dose, middle dose and low dose PePs could inhibit the tumor's growth, the inhibition rate was up to 52.13%, 50.08%, 31.33% respectively. The middle dose and low dose PePs have no inhibit effect on immunologic function of mice.
在单因素试验的基础上，通过正交实验确定了余甘多糖提取最佳工艺为采用品种为南大、100℃下浸提4h，提取率达到1.18％。
通过观察余甘多糖对CCl_4肝损伤小鼠的影响来研究其抗氧化作用，结果表明余甘多糖能显著降低小鼠肝脏中过氧化脂质(LPO)含量，并显著提高全血中超氧化物岐化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)的浓度(P＜0.05)，说明余甘多糖具有抗氧化作用，提示其可能有助于延缓衰老。
余甘多糖对S_(180)腹水瘤体外初步实验观察表明，余甘多糖各剂量能导致癌细胞破裂，细胞空泡，核固缩，说明余甘多糖可能具有抗肿瘤作用。
以环磷酰胺(CTX)为阳性对照组，以生理盐水为阴性对照组，观察各剂量余甘多糖对荷瘤(腹水瘤S_(180)和H_(22))小鼠生存天数的影响，结果表明高、中剂量的余甘多糖能显著延长荷瘤(S_(180))小鼠的生存天数(P＜0.05)，中剂量的余甘多糖能显著延长荷瘤(H_(22))小鼠的生存天数(P＜0.05)；采用小鼠体内淋巴细胞转化实验和小鼠碳廓清实验来观察余甘多糖对荷瘤(实体瘤S_(180))小鼠免疫功能的影响。结果表明，高、中、低剂量的余甘多糖对小鼠肉瘤均有抑制作用，抑瘤率分别达到52.13％、50.08％、31.33％：而中、低剂量的余甘多糖对小鼠的免疫功能没有抑制作用。余甘多糖的抑制肿瘤的机理可能是通过增强肌体免疫力和抗氧化作用来干预癌细胞的生长实现的。
For the sake of exploiting fujian Phyllanthus Emblica L. resources, the extraction technology of polysaccharide from Phyllanthus Emblica L. (PePs) and its functional effect of antioxygenation and antitumor was studied according to functional evaluation process of health food.
On the basis of single factor experiments, the optimum extraction technology was determined through orthogonal experiments: extracting 4h under the temperature of 100C by use of N AND A.
The effect of PePs on carbon tetrachloride intoxicated mice was studied to investigate its antioxidation. Results indicated that PePs obviously reduced LPO (Lipid peroxidation) contents in intoxicated mice liver, enhanced the SOD activity and the GSH contents in the blood(P<0.05). It is proved that PePs has the effect of antioxidation, and thus delaying senescence possibly.
Preliminary experiment of antitumor(S180) in vitro showed that PePs can break the cancer cell and make the cell vacuolus and karyopycnosis which indicated that PePs had possibly antineoplastic activity.
Model groups(transplanted S180 and H22 model in mice), control groups(CTX and physiological saline) and treated groups(4g/L 3g/L 2g/L 1g/L PePs solution) to abserve the antineoplastic activity and the effect of immune functions noduliferous mice by calculating the lymphocyte convertion rate and phagocytosis index. The results showed that high dose and middle dose can prolong remarkably the survival time of mice planted with S180 fluid tumor(P<0.05); middle dose can prolong remarkably the survival time of mice planted with H22 fluid tumor(P< 0.05); high dose, middle dose and low dose PePs could inhibit the tumor's growth, the inhibition rate was up to 52.13%, 50.08%, 31.33% respectively. The middle dose and low dose PePs have no inhibit effect on immunologic function of mice.
引文
[1] 刘凤书，侯开卫．余甘子对强致癌物质N-亚硝基化合物合成的阻断作用(一)[J]．热带作物学报．1988，9(2)：65-67．
[2] 侯开卫，刘凤书．余甘子对强致癌物质N-亚硝基化合物合成的阻断作用(二)[J]．热带作物学报．1989，10(1)：63．
[3] 侯开卫，宋圃菊．余甘子对强致癌物质N-亚硝基化合物在人体内合成的阻断作用[J]．林业科学研究．1989，2(1)：55．
[4] 梁学军．余甘子果汁和粉末阻断大鼠体内N-亚硝基脯氨酸合成[J]．广西热作科技．1990，(2)：8．
[5] 徐国平．余甘子果汁阻断胃癌高发区人群内源性N-亚硝基化合物合成[J]．中国食品卫生杂志．1991，3(4)：1．
[6] 梁学军，胡继繁．对不同条件下余甘果汁体外阻断N-亚硝基化合物合成作用的研究[J]．广西热作科技．1992(3)：2．
[7] 刘凤书，侯开卫．余甘果中超氧化物歧化酶的活性测定[J]．食品科学．1991(3)：2．
[8] 侯开卫，刘凤书．余甘抗衰老作用的研究[J]．食品科学．1990(4)：2．
[9] 吕荣欣．油甘果的营养及其开发利用[J]．食品科学，1987(10)：59．
[10] 卫生部药品生物制品检定所编著．余甘子．中国民族药志[M]．第三册．人民卫生出版社．1984：286～289．
[11] Giri, A. K., T. S. Banerjee. Antagonistic activity of herbal drug (Phyllanthus emblica) on cytological effects of environmental chemicals on mammalian cells[J].Cytologia, 1986, 51(2): 375.
[12] Haimanti Phir et al. Protection against cytotoxic effects of arsenic by dietary supplementation with crude extract of Emblica officinalis fruit[J]. Phytotherapy Research. 1990, 4(5): 172.
[13] Higashino, H. A. Suzuki. Chronic hypotensive effect of two Siamese plant powders, Imperata cylindrica and Phyllanthus emblica, on SHRSP[J]. Medical Journal of Kinki University 17(4 Suppl.): 31～34.
[14] Antar D S et al. Indian J of Medical Research. 1980, 72: 588.
[15] 夏泉，肖培根，王为力．传统药物余甘子的民族药学研究[J]．中国中药杂志．1997，22(9)：515～518．
[16] 张拥军，谈新刚．南瓜多糖的分离提取及其降血糖作用的研究[J]．食品科技．2001，000(005)：15～16，18．
[17] 孔庆胜，王彦英．南瓜多糖的分离、纯化及其降血脂作用中国[J]．生化药物杂志．2000，21(3)：130～132．
[18] 程霜，崔庆新．水溶性苦瓜多糖的提取与测定[J]．郑州粮食学院学报．2000，21(2)：53～56．
[19] 王桂云，梁忠岩，张丽萍等．沙棘果JS1多糖结构研究中GC-MS及13C-NMR分析[J]．分子科学学报．2001，017(003)：179～181．
[20] 陈玉香，张丽萍．沙棘果皮水溶性多糖Hn的结构研究[J]．分子科学学报．2000，16(1)：19～22．
[21] 王桂云，梁忠岩．沙棘果水溶多糖JS1的分离鉴定[J]．中国药学杂志．1999，34(4)：229～231．
[22] 林勤保．大枣多糖的单糖组成的高效液相色谱法研究[J]．郑州粮食学院学报．1998，19(3)：57～60．
[23] 李雪华，龙盛京．大枣多糖的提取与抗活性氧研究[J]．广西科学．2000，7(1)：54～56，63．
[24] 张庆，雷林生，杨淑琴等．大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其mRNA表达的影响[J]．第一军医大学学报．2001，21(8)：592～594．
[25] 阚建全，王雅茜．甘薯活性多糖抗突变作用的体外实验研究[J]．中国粮油学报．2001，16(1)：23～27．
[26] 戴伟娟，司端运．无花果多糖免疫药理作用的初步研究[J]．中国民族民间医药杂志．2000，(3)：160～162．
[27] 林佩芳．中华猕猴桃多糖复合物的抗肿瘤作用[J]．中华肿瘤杂志．1988，10(6)：440．
[28] 肖湘，俞丽君．油柑多糖的提取与清除氧自由基作用研究[J]．中国药学杂志．1998，33(5)：279～281．
[29] Sriva．，R，孔振武．植物中的生物活性多糖[J]．药学进展．1991，15(1)：35～39．
[30] 龙盛京，马文力．黑豆色素及多糖对全血化学发光和活性氧的抑制作用[J]．食品科学．1999，20(9)：9～12．
[31] Normakhmatov, R, et al. Polysaccharides of the fruit of Punica granatum. Chem. Nat. Compd., 35(1): 96～97.
[32] El-Badrawy, et al. Hypoglycemic effect of the glycan isolated from guava fruit (Psidium guajava). VDLUFA-Schriftenr., 1999, 52: 203～206.
[33] 董群、郑丽伊．改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J]．中国药学杂志，1996，31(9)：550～555．
[34] 张惟杰．复合多糖的生化研究技术[M]．浙江大学出版社，1999．
[35] Michel D. Colorimetri method for determination of sugar and related substance[J], Anal Chem, 1956, 28: 380～356.
[36] 施新猷主编．医学动物实验方法[M]．人民卫生出版社．1980．
[37] 冯仁丰．实用医学检验学[M]，上海：上海科学技术出版社，4：2000．
[38] 丁克祥．超氧化物歧化酶快速测定法[J]．老年医学杂志，1987，2：16．
[39] 陈志顺．过氧化脂质TBA显色三种方法比较[J]．临床医学检验杂志，1984，2：8．
[40] 孙存普主编．自由基生物学导论[M]．中国科学技术大学出版社，1999．
[41] 赵保路编著．氧自由基和天然抗氧化剂[M]．科学出版社，1999．
[42] 何照范编著．保健食品化学及检测技术[M]．中国轻工业出版社，1998．
[43] 金宗濂编著．功能食品评价原理及方法[M]．北京大学出版社，1995．
[44] Harman, D., 1956, The reaction for Free radicals during aging[J], Proc. Natl. Acad. Sci.78(11): 7124～7128.
[45] Harman, D., 1982, The Free radical theory of aging[J], Free radical in Biology, Vol.5 New York Acad. Press.
[46] Catherine A. Rice-Evans, Anthony T. Diplock and Martyn C.R. Symons. Techniques in Free Radical Research[M]. London, New York, Tokyo: Elsevier, Amsterdam, 1991: Chapter 3.
[47] M.Lazar, J.Ryehly, V.Klim, P. Pelikan and L. Valko. Free Radicals in Chemistry and Biology, Boca Raton[J]. Florida: CRC Press Inc. 1989: 5～37.
[48] Robins R A, Baldwin R W. T-cellsubsers in tumour rejection responses[J]. ImmunolToday, 1985, 6(2): 55～58.
[49] 吴铁，郭澄泓．用PHA在小鼠体内诱发淋巴细胞转化的初步观察[J]．上海免疫学杂志，1984，4(1)：57，49．
[50] Barry H, John M. C. Free radical in biology and medicine[M]. Oxford: Clarendon Press, 1989, 416～493.
[2] 侯开卫，刘凤书．余甘子对强致癌物质N-亚硝基化合物合成的阻断作用(二)[J]．热带作物学报．1989，10(1)：63．
[3] 侯开卫，宋圃菊．余甘子对强致癌物质N-亚硝基化合物在人体内合成的阻断作用[J]．林业科学研究．1989，2(1)：55．
[4] 梁学军．余甘子果汁和粉末阻断大鼠体内N-亚硝基脯氨酸合成[J]．广西热作科技．1990，(2)：8．
[5] 徐国平．余甘子果汁阻断胃癌高发区人群内源性N-亚硝基化合物合成[J]．中国食品卫生杂志．1991，3(4)：1．
[6] 梁学军，胡继繁．对不同条件下余甘果汁体外阻断N-亚硝基化合物合成作用的研究[J]．广西热作科技．1992(3)：2．
[7] 刘凤书，侯开卫．余甘果中超氧化物歧化酶的活性测定[J]．食品科学．1991(3)：2．
[8] 侯开卫，刘凤书．余甘抗衰老作用的研究[J]．食品科学．1990(4)：2．
[9] 吕荣欣．油甘果的营养及其开发利用[J]．食品科学，1987(10)：59．
[10] 卫生部药品生物制品检定所编著．余甘子．中国民族药志[M]．第三册．人民卫生出版社．1984：286～289．
[11] Giri, A. K., T. S. Banerjee. Antagonistic activity of herbal drug (Phyllanthus emblica) on cytological effects of environmental chemicals on mammalian cells[J].Cytologia, 1986, 51(2): 375.
[12] Haimanti Phir et al. Protection against cytotoxic effects of arsenic by dietary supplementation with crude extract of Emblica officinalis fruit[J]. Phytotherapy Research. 1990, 4(5): 172.
[13] Higashino, H. A. Suzuki. Chronic hypotensive effect of two Siamese plant powders, Imperata cylindrica and Phyllanthus emblica, on SHRSP[J]. Medical Journal of Kinki University 17(4 Suppl.): 31～34.
[14] Antar D S et al. Indian J of Medical Research. 1980, 72: 588.
[15] 夏泉，肖培根，王为力．传统药物余甘子的民族药学研究[J]．中国中药杂志．1997，22(9)：515～518．
[16] 张拥军，谈新刚．南瓜多糖的分离提取及其降血糖作用的研究[J]．食品科技．2001，000(005)：15～16，18．
[17] 孔庆胜，王彦英．南瓜多糖的分离、纯化及其降血脂作用中国[J]．生化药物杂志．2000，21(3)：130～132．
[18] 程霜，崔庆新．水溶性苦瓜多糖的提取与测定[J]．郑州粮食学院学报．2000，21(2)：53～56．
[19] 王桂云，梁忠岩，张丽萍等．沙棘果JS1多糖结构研究中GC-MS及13C-NMR分析[J]．分子科学学报．2001，017(003)：179～181．
[20] 陈玉香，张丽萍．沙棘果皮水溶性多糖Hn的结构研究[J]．分子科学学报．2000，16(1)：19～22．
[21] 王桂云，梁忠岩．沙棘果水溶多糖JS1的分离鉴定[J]．中国药学杂志．1999，34(4)：229～231．
[22] 林勤保．大枣多糖的单糖组成的高效液相色谱法研究[J]．郑州粮食学院学报．1998，19(3)：57～60．
[23] 李雪华，龙盛京．大枣多糖的提取与抗活性氧研究[J]．广西科学．2000，7(1)：54～56，63．
[24] 张庆，雷林生，杨淑琴等．大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其mRNA表达的影响[J]．第一军医大学学报．2001，21(8)：592～594．
[25] 阚建全，王雅茜．甘薯活性多糖抗突变作用的体外实验研究[J]．中国粮油学报．2001，16(1)：23～27．
[26] 戴伟娟，司端运．无花果多糖免疫药理作用的初步研究[J]．中国民族民间医药杂志．2000，(3)：160～162．
[27] 林佩芳．中华猕猴桃多糖复合物的抗肿瘤作用[J]．中华肿瘤杂志．1988，10(6)：440．
[28] 肖湘，俞丽君．油柑多糖的提取与清除氧自由基作用研究[J]．中国药学杂志．1998，33(5)：279～281．
[29] Sriva．，R，孔振武．植物中的生物活性多糖[J]．药学进展．1991，15(1)：35～39．
[30] 龙盛京，马文力．黑豆色素及多糖对全血化学发光和活性氧的抑制作用[J]．食品科学．1999，20(9)：9～12．
[31] Normakhmatov, R, et al. Polysaccharides of the fruit of Punica granatum. Chem. Nat. Compd., 35(1): 96～97.
[32] El-Badrawy, et al. Hypoglycemic effect of the glycan isolated from guava fruit (Psidium guajava). VDLUFA-Schriftenr., 1999, 52: 203～206.
[33] 董群、郑丽伊．改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J]．中国药学杂志，1996，31(9)：550～555．
[34] 张惟杰．复合多糖的生化研究技术[M]．浙江大学出版社，1999．
[35] Michel D. Colorimetri method for determination of sugar and related substance[J], Anal Chem, 1956, 28: 380～356.
[36] 施新猷主编．医学动物实验方法[M]．人民卫生出版社．1980．
[37] 冯仁丰．实用医学检验学[M]，上海：上海科学技术出版社，4：2000．
[38] 丁克祥．超氧化物歧化酶快速测定法[J]．老年医学杂志，1987，2：16．
[39] 陈志顺．过氧化脂质TBA显色三种方法比较[J]．临床医学检验杂志，1984，2：8．
[40] 孙存普主编．自由基生物学导论[M]．中国科学技术大学出版社，1999．
[41] 赵保路编著．氧自由基和天然抗氧化剂[M]．科学出版社，1999．
[42] 何照范编著．保健食品化学及检测技术[M]．中国轻工业出版社，1998．
[43] 金宗濂编著．功能食品评价原理及方法[M]．北京大学出版社，1995．
[44] Harman, D., 1956, The reaction for Free radicals during aging[J], Proc. Natl. Acad. Sci.78(11): 7124～7128.
[45] Harman, D., 1982, The Free radical theory of aging[J], Free radical in Biology, Vol.5 New York Acad. Press.
[46] Catherine A. Rice-Evans, Anthony T. Diplock and Martyn C.R. Symons. Techniques in Free Radical Research[M]. London, New York, Tokyo: Elsevier, Amsterdam, 1991: Chapter 3.
[47] M.Lazar, J.Ryehly, V.Klim, P. Pelikan and L. Valko. Free Radicals in Chemistry and Biology, Boca Raton[J]. Florida: CRC Press Inc. 1989: 5～37.
[48] Robins R A, Baldwin R W. T-cellsubsers in tumour rejection responses[J]. ImmunolToday, 1985, 6(2): 55～58.
[49] 吴铁，郭澄泓．用PHA在小鼠体内诱发淋巴细胞转化的初步观察[J]．上海免疫学杂志，1984，4(1)：57，49．
[50] Barry H, John M. C. Free radical in biology and medicine[M]. Oxford: Clarendon Press, 1989, 416～493.