抑制素基因疫苗pCISI免疫南阳黄牛试验研究
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摘要
本实验应用分子克隆、基因免疫、酶免疫测定、放射免疫等技术，研究抑制素基因免疫对黄牛抗抑制素抗体产生、生殖及生殖内分泌的影响，通过比较不同免疫原纯度、免疫剂量和免疫次数的免疫效果，探索最佳抑制素基因免疫方案，达到有效提高动物生殖力、降低实际成本、推广繁育新技术的目的。本研究的主要内容如下：
1．南阳黄牛对抑制素基因疫苗pCISI的免疲反应性研究
为分析黄牛对抑制素基因免疫的免疫反应性及其影响因素，本实验采用不同剂量、不同纯度的双拷贝抑制素融合质粒pCISI免疫两次免疫黄牛。结果表明：首次免疫10天后即产生了一定的抗抑制素抗体，首次免疫期间整个免疫组的抗体P／N值显著高于对照组(P＜0.05)，加强免疫期间抗体P／N值极显著高于对照组(P＜0.01)，抗体阳性牛的比例由16.83％提高到52.75％，前后差异显著(P＜0.05)。无论是抗抑制素抗体水平还是抗体阳性率，四个剂量组(0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg)组间均无明显差异(P＞0.05)，其中，以3.0mg剂量组产生的抗抑制素抗体水平最高(1.97±0.62)，2.25mg剂量组的抗体阳性率最高(56.62％，13／23)。高纯度pCISI(OD_(260)／OD_(280)介于1.8～2.0)的免疫效果略高于低纯度组(OD_(260)／OD_(280)介于1.7～1.8和2.0～2.1)，但两个纯度组组间无显著性差异(P＞0.05)。结合本次研究涉及的剂量与纯度，低纯度组中0.75mg抑制素融合质粒pCISI引起的免疫应答效果最佳，高纯度组中2.25mg抑制素融合质粒pCISI最佳。2.25mg和3.0mg剂量组中，高纯度组的抗体阳性率在全期显著高于低纯度组(P＜0.05)，但平均抗体P／N值无显著性差异(P＞0.05)。无论是抗体阳性率还是抗体P／N值，其余两剂量的高、低纯度组组间在各个免疫阶段均无显著性差异(P＞0.05)。研究表明，融合到乙肝表面抗原上的抑制素基因的表达产物在大型动物黄牛体内同样具有较强的抑制素免疫学活性，免疫效果随着免疫次数的增加而有所提高，但并没有完全随着免疫原剂量的增加、纯度的提高而提高。
2．抑制素pCISI基因免疫对黄牛生殖及生殖内分泌的影响
为探讨抑制素基因免疫对黄牛生殖及生殖内分泌的作用，本实验采用不同剂量(0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg)、不同纯度(高、低)的抑制素融合质粒pCISI两次免疫黄牛。结果发现，免疫组平均每头牛的成熟卵泡为1.99±0.99个，胎儿为1.35±0.50头，至少具有两个成熟大卵泡的牛的比例达61.29％，双胎率达35.14％，显
Techniques such as molecular clone, gene immunization, enzyme-linked immunoassay (ELISA) and radio immunoassay (RIA) etc were applied to study the immune response to inhibin gene immunization, effects on the reproduction and reproductive endocrinology in cattle. The different immune effects caused by different purity of vaccine, dose and adjuvant were studied to search for the best way to increase the reproduction of cattle, reduce the costs and popularize the new technology. The main content presents as follows:
1. The study of immunoreactive character of inhibin pCISI gene immunization on Nanyang cattle
In order to analyze the immunoreactive character of cattle to inhibin gene immunization and its affecting factors, the different dosages, purity of inhibin fusion expressing plasmid pCISI were used to immune the cattle twice. The results showed that there were some sheep with positive antibody against inhibin on 10 days after primary immunization, and the average antibody P/N value of immunization group were higher than the control remarkably in the period of primary immunization (P<0.05), those in the period of booster immunization were greatly remarkable higher than the control (P<0.01). After booster immunization the rate of cattle with positive antibody is from 16.83% to 52.75 % 46.7%, which was remarkably different. Both the level of antibody against inhibin and the rate of positive antibody, there was no remarkable difference in the four groups with different doses (0.75 mg, 1.5mg, 2.25mg, and 3.0 mg). The level of antibody against inhibin of 3.0mg immunization group was the highest (1.97±0.62), and the rate of positive antibody of 2.25mg immunization group was the highest (56.62%, 13/23). The immunization effect of highly purified pCISI (OD_(260)/ OD_(280) between 1.8 and 2.0) was slightly better than pCISI with lower purity (OD_(260)/ OD_(280) between1.7 and 1.8 or between 2.0 and 2.1), but the difference wasn't remarkable (P>0.05). Combined the dose with the purity, the effect of immunization response of 0.75mg inhibin fusion expressing plasmid pCISI in groups with lower purity was the best, and the effect of 2.25mg pCISI in groups with high purity was
1．南阳黄牛对抑制素基因疫苗pCISI的免疲反应性研究
为分析黄牛对抑制素基因免疫的免疫反应性及其影响因素，本实验采用不同剂量、不同纯度的双拷贝抑制素融合质粒pCISI免疫两次免疫黄牛。结果表明：首次免疫10天后即产生了一定的抗抑制素抗体，首次免疫期间整个免疫组的抗体P／N值显著高于对照组(P＜0.05)，加强免疫期间抗体P／N值极显著高于对照组(P＜0.01)，抗体阳性牛的比例由16.83％提高到52.75％，前后差异显著(P＜0.05)。无论是抗抑制素抗体水平还是抗体阳性率，四个剂量组(0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg)组间均无明显差异(P＞0.05)，其中，以3.0mg剂量组产生的抗抑制素抗体水平最高(1.97±0.62)，2.25mg剂量组的抗体阳性率最高(56.62％，13／23)。高纯度pCISI(OD_(260)／OD_(280)介于1.8～2.0)的免疫效果略高于低纯度组(OD_(260)／OD_(280)介于1.7～1.8和2.0～2.1)，但两个纯度组组间无显著性差异(P＞0.05)。结合本次研究涉及的剂量与纯度，低纯度组中0.75mg抑制素融合质粒pCISI引起的免疫应答效果最佳，高纯度组中2.25mg抑制素融合质粒pCISI最佳。2.25mg和3.0mg剂量组中，高纯度组的抗体阳性率在全期显著高于低纯度组(P＜0.05)，但平均抗体P／N值无显著性差异(P＞0.05)。无论是抗体阳性率还是抗体P／N值，其余两剂量的高、低纯度组组间在各个免疫阶段均无显著性差异(P＞0.05)。研究表明，融合到乙肝表面抗原上的抑制素基因的表达产物在大型动物黄牛体内同样具有较强的抑制素免疫学活性，免疫效果随着免疫次数的增加而有所提高，但并没有完全随着免疫原剂量的增加、纯度的提高而提高。
2．抑制素pCISI基因免疫对黄牛生殖及生殖内分泌的影响
为探讨抑制素基因免疫对黄牛生殖及生殖内分泌的作用，本实验采用不同剂量(0.75mg、1.5mg、2.25mg、3.0mg)、不同纯度(高、低)的抑制素融合质粒pCISI两次免疫黄牛。结果发现，免疫组平均每头牛的成熟卵泡为1.99±0.99个，胎儿为1.35±0.50头，至少具有两个成熟大卵泡的牛的比例达61.29％，双胎率达35.14％，显
Techniques such as molecular clone, gene immunization, enzyme-linked immunoassay (ELISA) and radio immunoassay (RIA) etc were applied to study the immune response to inhibin gene immunization, effects on the reproduction and reproductive endocrinology in cattle. The different immune effects caused by different purity of vaccine, dose and adjuvant were studied to search for the best way to increase the reproduction of cattle, reduce the costs and popularize the new technology. The main content presents as follows:
1. The study of immunoreactive character of inhibin pCISI gene immunization on Nanyang cattle
In order to analyze the immunoreactive character of cattle to inhibin gene immunization and its affecting factors, the different dosages, purity of inhibin fusion expressing plasmid pCISI were used to immune the cattle twice. The results showed that there were some sheep with positive antibody against inhibin on 10 days after primary immunization, and the average antibody P/N value of immunization group were higher than the control remarkably in the period of primary immunization (P<0.05), those in the period of booster immunization were greatly remarkable higher than the control (P<0.01). After booster immunization the rate of cattle with positive antibody is from 16.83% to 52.75 % 46.7%, which was remarkably different. Both the level of antibody against inhibin and the rate of positive antibody, there was no remarkable difference in the four groups with different doses (0.75 mg, 1.5mg, 2.25mg, and 3.0 mg). The level of antibody against inhibin of 3.0mg immunization group was the highest (1.97±0.62), and the rate of positive antibody of 2.25mg immunization group was the highest (56.62%, 13/23). The immunization effect of highly purified pCISI (OD_(260)/ OD_(280) between 1.8 and 2.0) was slightly better than pCISI with lower purity (OD_(260)/ OD_(280) between1.7 and 1.8 or between 2.0 and 2.1), but the difference wasn't remarkable (P>0.05). Combined the dose with the purity, the effect of immunization response of 0.75mg inhibin fusion expressing plasmid pCISI in groups with lower purity was the best, and the effect of 2.25mg pCISI in groups with high purity was
引文
[1] 卢全晟，张居农．母牛双胎技术的研究与应用[J]．黑龙江动物繁殖，2005，13(4)：18-21
[2] 杨利国主编．动物繁殖学[M]．北京：中国农业出版社，2003
[3] 雷雪芹，陈宏，袁志发．牛双胎的研究与应用[J]．黄牛杂志．2001，27(6)：33-34
[4] 杨利国，谢成侠．人工诱导黄牛和水牛生双胎[J]．南京农业大学学报，1986，57(4)：93-98
[5] 吴峰，谢成侠，杨利国．抗PMSG血清在人工诱导黄牛双胎中的作用[J]．南京农业大学学报，1990，13(3)：87-91
[6] 张爱菊，杨利国，张兆柏．应用LRH-A和PMSG提高黄牛繁殖率的研究[J]．黄牛杂志，1994，20(2)：41-44
[7] 杨利国，桑润滋，张居农，等．优质高效肉牛生产与产品加工[M]，北京：中国农业科技出版社，2000，61-67
[8] 王进荣，杨利国，王元兴．人抑制素主动免疫对母鸡产蛋和内分泌的影响[J]．中国畜牧杂志，2001，(2)：9-11
[9] 杨利国，张居农，王进荣，等．应用猪精液抑制素主动免疫法诱导黄牛孪生[J]．中国农业科学，2002，35(2)：207-212
[10] 王进荣，杨利国．抑制素被动免疫对母牛卵泡发育和生殖内分泌的影响及作用机制研究[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2001
[11] 李镅，杨利国．用人卵泡抑制素α亚基片段生产抗牛和猪抑制素单克隆抗体[J]．中国免疫学杂志，2001，17：65-69
[12] 姜勋平，杨利国．抑制素和bcl-2基因免疫对小鼠繁殖和生长的影响[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2001
[13] Dormelly J J. DNA vaccines. Annu Rev Immunol, 1997, 15: 617-648
[14] Thomas T, Jonathan A, Walter JS, et al. The immunology of DNA vaccines. Methods in Medicine, 1999, 29: 37-64
[15] 廖国阳．基因免疫机理及安全性研究进展[J]．国外医学免疫学分册，2001，24(6)：309-312
[16] 姜勋平，杨利国，刘桂琼，等．抑制素基因免疫对小鼠生殖的影响[J]．中国兽医学报，2002，22(4)：368-370
[17] 茆达干，杨利国，叶荣，等．抑制素α(1-32)基因免疫对大鼠卵泡发育和生殖激素的影响[J]．中国农业科学，2003，36(12)：1554-1559
[18] 张德坤，杨利国，张红琳，等．抑制素基因免疫诱导单胎绵羊孪生的研究[J]．中国农业大学学报，2004，9(4)：40-45
[19] 刑朝芳．两种新的抑制素基因疫苗免疫大鼠的效果比较及作用机制分析[D]．硕士论文．南京： 南京农业大学，2005
[20] 杨贤钦．浅谈牛的双胞胎[J]．广西畜牧兽医，2006，22(2)：95
[21] 吴乃科，万发春，孙希山．人工诱导母牛生产双胎肉牛的研究[J]．山东农业科学，2001，(1)：35-36
[22] Gregory KE, Echtemkamp SE, Dickerson GE. Twinning in cattle: Effects of twining on dystocia, reproductive traits, calf survival, calf growth and cow and productivity [J]. Anim Sci, 1990, 68: 3133-3144
[23] Gregory KE, Bennett GL, Vleck LD.Genetic and environmental parameters for ovulation rate, twinning rate, and weight traits in a cable population selected for twinning [J]. Anita Sci, 1997, 75: 1213-1222.
[24] Karlsen A, Ruane J, Klemetsdai G, et ai. Twining rate in Norwegian cattle: Frequence variance components, and genetic trends [J]. Anim Sci, 2000, 78:15-20
[25] Morris CA, Day AM, Peterson AJ. An experiment to measure the dose-response relationship of ovulation rate to FSH in cows selected with a history of twinning [J]. Anita Prod, 1991, 51:447-451
[26] Vleck LD, Gregory KE, Echternkamp SE. Ovulatign rate, twinning rate in cattle: Heritabilities and genetic correlation [J]. Anim Sci, 1996, 69:3213-3219
[27] Montgomery G W. Genes encoding the α and β chains of follicle—stimulation hormone are not site for the Booroola (FeeB) mutation in sheep[J]. J Repro Fert, 1992, 95:895-901
[28] 储明星．Booroola FeeB基因的遗传标记研究进展[J]．国外畜牧科技，2001，28(20)：37-40
[29] 雷雪芹，陈宏，袁志发，等．促卵泡生成素受体基因的SNP对牛双胎性状的标记研究[J]，云南畜牧兽医，2002，(4)：28-29
[30] 雷雪芹，陈宏，徐廷生，等．FSHR基因的PCR-RFLP对牛双胎性状的标记分析[J]．中国农学通报，2003，19(4)：7-10
[31] 雷雪芹，陈宏，袁志发．牛羊多胎性状的分子遗传基础研究[J]，黄牛杂志，2003，29(1)：3-4
[32] 雷雪芹，魏伍川，陈宏，等．6个牛品种在FSHR基因位点的遗传关系及其多态对双胎性状的标记[J]．西北农林科技大学学报(自然科学版)，2004，32(7)：1-6
[33] 魏伍川．牛羊FHSR基因5′转录启动调控区和部分结构区序列的研究[D]．博士论文．陕西：西北农林科技大学，2000
[34] 王艳玲，董丽亚，王秀云，等．应用促卵泡素提高牛双犊率的试验[J]．养殖技术顾问，2004，(1)：4
[35] 桑润滋，李建国，王凤鸣．生殖激素诱导母牛双胎试验研究[J]．黑龙江动物繁殖，1997，5(4)：5-7
[36] 杨利国．家畜繁殖研究进展[J]．畜牧与兽医，1994，(5)：236-238
[37] Sieh CX, Yang LG. Artificial induction of twin-pregnancy and the levels of plasma progesterone and estradiol in water buffaloes [J]. Buffalo Journal, 1986, (1): 37-45
[38] 任培欣，李健民，雷雪芹．新型黄牛双胎素的应用研究[J]．黄牛杂志，1995，21(3)：15-16
[39] 庞传利，孙志军，郭彬．奶牛1胎产4仔[J]．黑龙江动物繁殖，2004，12(4)：27
[40] 桑润滋主编．家畜繁殖生物技术[M]，北京：中国农业出版社，2002
[41] 桑润滋，田树军，杨利国，等．人工诱导肉牛双胎途径及效果研究．优质高效肉牛生产与产品加工[M]，北京：中国农业科技出版社，2000，68-70
[42] 桑润滋，刘春海．人工诱导母牛双胎的研究进展[J]．中国畜牧杂志，1998，34(4)：52-54
[43] 黎敏义，郭文军，刘颖，等．调控畜禽繁殖的激素免疫技术[J]．动物医学进展，2005，26(11)：1-4
[44] 陶勇．动物类固醇免疫的研究进展．黑龙江动物繁殖[J]，1998，6(3)：39-43
[45] 李晓丽，郭志云，曾宪垠．抑制素的研究进展及其在动物繁殖中的应用[J]．四川畜牧兽医，2003，11(30)：30-32
[46] 孙静．抑制素在妊娠过程中的生殖调节作用[J]．国外医学妇产科学分册，1998，25(3)：135-138
[47] 姚丽娟，李华峰．抑制素的研究进展[J]．山东畜牧兽医，1998，(5)：33-34
[48] Vale W, Rivier J, Vaughan J, et al. Purification and characterization of a FSH releasing protein form porcine ovarian follicular fluid [J]. Nature, 1986, 321: 776-779
[49] 张德坤．应用抑制素基因免疫技术诱导单胎绵羊孪生及其影响因素与作用机制研究[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2004
[50] Bradent D. Regulation of the synthetic rate of gonadotroph in releasing hormone receptors in rat pituitary cell cultures by inhibin [J]. Endocr, 1990, 127:2387-2392
[51] Hennies M, Voglmayr JK, Dietrich E, et al. Hormonal response of female goats to active immunization against a recombinant human inhibin alpha-subunit, and establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay for caprine follicle-stimulating hormone [J]. Reprod Domest Anim, 2001, 36(2): 65-7112
[52] 叶荣，牛树理，杨利国．抑制素及其在动物繁殖中的应用[J]．黑龙江畜牧兽医，1996，(2)：37-40
[53] Findly JK. Doughton BW. Tsonis CG. Inhnbin as a.fecundity vaccine [J]. Animal Reproduction Sience. 1993, 33: 325-343
[54] O'shea T, Hillard M A, Andson S T, et al. Inhibin immunization for increasing ovulation rate and superovulation [J]. Theriogenology. 1994, 41: 3-17
[55] Robertson DMM. Isoletion of inhibin α-subunit precursor proteins from bovine follicular fluid [J]. Endocrinology, 1989, 125: 2141-2149
[56] 姜庆林，储明星，陈国宏．哺乳动物抑制素简述[J]．中国畜牧兽医，2004，32(1)：40-42
[57] Shi FX, Mochida K, Ogura A, et al. Follicle selection in cyclic guinea pigs with active immunization against inhibin alpha-subunit [J]. Life Sciences, 2000, 66(25): 2489-2497
[58] Shi F, Ozawa M, Komura H, et al. Induction of superovulation by inhibin vaccine in cyclic guinea-pigs[J]. J Reprod Fertil, 2000, 118(1): 1-7
[59] 方小武，朱洪全，吴日然等．不育男性血清抑制素B水平测定[J]．中国医师杂志，2005，7(9)：1259
[60] 胡毓安，黄宇烽，徐建平等．生育及不育男性血清及精浆抑制素-B水平分析[J]．中华男科学，2003，9(6)：447-450
[61] Anderson AM, Petersen JH, Jorgensen N, et al. Serum inhinbin B and follicle-stimulating hormone levels as tools in the evaluation of infertile men: siginificance of adequater reference values from proven fertile men [J]. J Clin Endocrinol Metab, 2004, 89(6): 2873-2879
[62] 茆达干．抑制素基因免疫对大白鼠生殖生理影响的研究[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2003
[63] 叶荣，牛树理，杨利国．猪精液抑制素的提取与提纯及其生物学的测定[J]．新疆农业大学学报，1996，19(3)：8-11
[64] Lovell TM, Knight PG, Groome NP, et al. Changes in plasma inhibin A levels during sexual maturation in the female chicken and the effects of active immunization against inhibin alpha-subunit on reproductive hormone profiles and ovarian function [J]. Biol Reprod, 2001, 64(1): 188-196
[65] 杨灿锋，杨利国．猪垂体中卵泡抑制素受体的分析[D]．硕士论文．南京：南京农业大学，2002
[66] 张红琳，杨利国，王诚．应用磁珠免疫亲和层析法从猪卵泡液中提纯抑制素[J]．南京农业大学学报，2004，27(2)：72-75
[67] Wrathall JHK, Mcleod BJ. Inhibit immunoneutralization by antibodies raised against synthetic peptide sequences of inhibit a-subunit: effects on gonadorophin concentration and ovulation rate in sheep[J]. J Endocrinol, 1990, 124: 167-176
[68] Forage RG, Brown RW. The cloning and expression of inhibit genes:Subunit use an a fecundity vaccine[J]. Endocrinol, 1987, 14: 1-4
[69] 张小东，程瑞禾，夏银．人抑制素合成肽与猪精液抑制素提取物主动免疫对母羊生殖激素妊娠及产羔的影响[J]．南京农业大学学报，1998，21(4)：66-71
[70] 王进荣，杨利国，王元兴．人抑制素α亚基主动免疫对鸡卵泡发育和性腺激素及产蛋率的影 响[J]．南京农业大学学报，2000，23(4)：63-66
[71] 王杏龙，Wolfgang H．抑制素主动免疫后波尔山羊的排卵反应[J]．畜牧兽医学报，2003，34(2)：157-160
[72] Satterlee DG, Cadd GG, Fioretti WC. Active immunization of broiler breeder hens with a recombinant chicken inhibin fusion protein enhances egg lay [J]. Poult Sci. 2002, 81 (4): 519-528
[73] Wenstrom KD, Owen J, Chu DC, et al. Prospective evaluation of freebeta subunit of human chorionic gonatropin and dimeric inhibin A for an euploidy detection[J]. Am J Obstet Gynecol, 1999, 181:887-892
[74] 高晓东，丁明杰，张志坚．卵泡液提取物制备人抑制素α单抗的研究[J]．免疫学杂志，2000，16(1)：30-32
[75] 陈育枝，袁希平，张曦．羊抑制素的研究进展[J]．草食家畜(季刊)，2006，130(1)：23-26
[76] 何兰花．抑制素对雄性动物生殖的影响[J]．黑龙江畜牧兽医，2003，(12)：69-71
[77] Cummins L J. Increase in ovulation rate after immnization of Merino ewes with a fraction of bovine follicular fluid containtion inhibin activity [J]. Reprod Fert, 1986, 77: 365-372
[78] Bindon BM, Piper LR, Cahill LP, et al. Genetic and hormonal factors affecting superovulation [J]. Theriogenology, 1986, 25:53-70
[79] 杨利国，叶荣，牛树理．用猪精液抑制素主动免疫母牛提高排卵率．畜牧业与畜产加工研究进展[M]，北京：中国农业科技出版社，1996，415-417
[80] 牛树理，叶荣，杨利国．猪精液抑制素主动免疫黄牛诱导超数排卵的研究[J]．南京农业大学学报，1996，19(4)：52-55
[81] 刘春海，桑润滋，牛树理等．抑制素主动免疫对母牛卵泡发育的影响[J]．河北农业大学学报，1999，22(3)：72-74
[82] 王进荣，杨利国．抑制素免疫与母牛的繁殖[J]．草食家畜，2000，(3)：21-23
[83] Morris DG. Dermott MG, Grealy M, et al. Effect of immunization against synthetic peptide sequences of the alpha N- subunit bovine inhibin on ovulation rate, gonadotrophin concentrations and fertility in heifers[J]. Reprod Fertil, 1995, 103(2): 285-291
[84] Morris DG. Effect of immunization against synthetic peptide sequences of bovine inhibin α-subunit on ovulation rate and twin-carving.rate in heifers [J]. Animal Reprod Science, 1993, 38: 63-71
[85] Mihm M, Bleach ECL. Endocrine regulation of ovarian antral follicle development in cattle [J]. Animal Reproduction Science. 2003, 78:217-237
[86] Scanlon AR, Sunderland S J, Martin TL, et al. Active immunization of heifers against a synthetic fragment of bovine inhibin [J]. Journal of Reproduction and Fertility, 1993, 97(1): 213-222
[87] 桑润滋，王志刚，田树军等．抑制素(IB)主动免疫对牛超排效果的影响及机制[J]．中国兽医学报，2000，20(6)：597-600
[88] 黄光菊，俞颂东．抑制素在动物繁殖中的应用[J]．上海畜牧兽医通讯，2005，(3)：48-49
[89] Emma CL, Bleach ECL, Glencross RG, et al. Plasma Inhibin A in Heifers: Relationship with follicle dynamics, gonadotropins, and steroids suring the estrous cycle and after treatment with bovine follicular fluid [J]. Biology of Reproduction 2001, 64: 743-752
[90] Alobaidi SAR. Reproductive characterisies of lambs actively immunized early in life with inhibin enriched preparations from follicular fluid of cows [J]. J Reprod Fertil, 1987, 81: 403-440
[91] 刘桂琼，姜勋平，丁家桐，等．猪卵泡抑制素主动免疫对山羊生殖的影响[J]．畜牧兽医学报，2003，34(1)：37-39
[92] Anderson ST, Bindon BM, Hillard MA, et al. Increased ovulation rate in Merino ewes immunized against small synthetic peptide fragments of the inhibin alpha subunit [J]. Reprod Fertil Dev, 1998, 10(5): 421-431
[93] SeWani CR, Bagdasarian MM, Ireland JJ, et al. Display of an inhibit epitope in a surface-exposed loop of the E. coli heat-labile enterotoxin B subunit [J]. Vaccine, 1998, 16(17): 1611-1619
[94] 夏银，赵旭庭，张小冬，等．抑制素被动免疫对大鼠排卵率几血浆雌二醇与孕酮的影响[J]．畜牧兽医学报，1999，30(1)：6-9
[95] Geary TW, Reeves JJ. Production of a genetically engineered inhibin vaccine [J]. Vaccine. 1996, 14(13): 1273-1279
[96] Braun RP, Karvonen BC, King T. Immune response and protection induced by DNA vaccines encoding bovine parainfluenza virus type 3 glycoproteins [J]. Virology, 1999, 265: 46
[97] Burger HG. Inhibin: definition and nomenclature including related sudstanee [J]. Endor, 1998, 117:159-160
[98] 王进荣，杨利国．母鸡抑制素的研究进展[J]-中国禽业导刊，2000，(8)：8
[99] Lovel TM, Knight PG, Groome NP, et al. Changes in plasma inhibin A levels during sexual maturation in the female chicken and the effects of active immunization against inhibin alpha-subunit on reproductive hormone profiles and ovarian function [J]. Biol Reprod, 2001, 64(1): 188-196
[100] 于迎春，施振旦，刘颖，等．免疫抑制素提高粤黄鸡产蛋性能的研究[J]．农业生物技术学报，2006，14(1)：27-32
[101] Huang Y M, Shi Z D, Li MY, et al. Effects of immunization against inhibin on egg laying performance in Magang and Landaise geese. Proceedings of the 3rd World Waterflowl Conference, 2005，107-111
[102] 姬新颖，杨为松，王海涛．基因免疫研究的最新进展[J]．国外医学病毒学分册，1999，6(1)：6-8
[103] 陈启民主编．分子生物学[M]．天津：南开大学出版社，2000
[104] Facio VM. 'Naked' DNA transfer technoiogy for genetic vaccineation against infectious diseases [J]. Res Virol. 1997, 148: 101
[105] 施崇高，许良中．基因免疫抗肿瘤研究进展[J]．癌症，2000，19(6)：611-613
[106] Loehr BI, Pontarllo R, Rankin R, et al. Priming by DNA immunization augments T-cell responses induced by modified live bovine herpesvirus vaccine[J]. J Gen Viroi. 2001, 82(12): 3035-3043.
[107] 娄华．基因免疫研究进展及其面临的问题[J]．中国兽医科技，1999，29(12)：19-21
[108] 姜勋平，杨利国．卵泡抑制素主动和被动免疫及基因免疫研究进展[J]．畜牧与兽医，2000，32(4)：38-40
[109] 张德坤，杨利国，曹少先等．抑制素基因免疫对母羊生殖内分泌的影响[J]．南京农业大学学报，2005，28(4)：80-83
[110] 龙翔，杨利国，余荣等．．基因免疫与动物生殖[J]．动物科学与动物医学．2004，21(12)：39-40
[111] 曹少先．生长抑素DNA疫苗的构建及其对大鼠生长和相关激素的影响[D]．博士论文，南京：南京农业大学，2004
[112] 茆达干，杨利国，曹少先，等．抑制素与乙肝表面抗原融合质粒的构建及表达[J]．中国免疫学杂志，2003，19(11)：775-778
[113] 茆达干，杨利国，曹少先．影响基因疫苗免疫效果的因素[J]．中国免疫学杂志，2004，20(5)：360-363
[114] Danko I, Fritz JD, Jiao S, et al. Pharmacological enhancement of in vivo foreign gene expression in muscle [J]. Gene Ther, 1994, 1: 114-121
[115] 孟松树，李曦，智海东，等．CpGDNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响[J]．中国农业科学，2001，34(3)：342-344
[116] 石艳春．CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠Th1／Th2型免疫应答的影响[J]．中国免疫学杂志，2005，21(11)：329-335
[117] Krieg AM. CpG motifs in bacterial DNA and their immune effects [J]. Annual Rev Immunol, 2002, 20: 709-760
[118] Encke. CpG immuno-stimulatory motifs enhance humoral immune responses against hepatitis C virus core protein after DNA-based immunization [J]. Arch Virol, 2003, 148: 435-448
[119] 刘玉清，黄群山，王建辰．抑制素主动免疫对山羊排卵率的影响[J]．中国农业科学，1998， 31(1)：83-85
[120] 张红琳，杨利国．抑制素免疫在动物繁殖调控中的应用．黑龙江动物繁殖[J]．2002，10(1)：12-14
[121] 姜勋平主编．基因免疫的原理和方法[M]，北京：科学出版社，2004
[122] J．萨姆布鲁克，E．F．弗里奇，T．曼尼阿蒂斯著．黄培堂译．分子克隆实验指南(第三版)[M]．北京：科学出版社，2002
[123] Stepanov VG, Nyborg J. Preparative purification of plasmid DNA templates for in vitro transcription assays by consecutive differential precipitations [J]. Journal of Biotechnology, 2003, 102:223-231
[124] 梅玲玲，徐艺珍，程苏云．转基因食品DNA提取技术研究[J]．中国卫生检验杂志，2005，15(6)：689-749
[125] 章宁勇，于书敏，刘文菊，等．基因免疫研究进展[J]．实验动物科学与管理，2003，20(3)：28-36
[126] 段明星，庄峰锋，周志红．几种不同基因免疫途径的比较研究[J]．上海免疫学杂志，1999，19(5)：275-279
[127] 郭焱，郭巍．共表达HIV-1与IL-2基因产物免疫鼠T淋巴细胞亚群的研究[J]．武警医学院学报，2000，(4)：18-21
[128] 郭焱，金宁一，张应玖．HIVCN gp120与IL6基因共表达质粒的构建及其免疫调节作用[J]．第三军医大学学报，2001，23(7)：774
[129] Amulf H, Richard W, Romana H, et al. DNA vaccines for allergy treatment[J]. Methods, 2004, 32: 328-339
[130] 袁慧君，王三虎．基因免疫研究进展[J]．河南职业技术师范学院学报，2004，32(3)：42-46
[131] 张艽，张浩，胡盛寿，等．阳离子脂法介导质粒转染大鼠骨髓基质干细胞用于基因修饰的细胞移植治疗[J]．中国医学科学院学报，2005，27(4)：504-508
[132] 王根林．抑制素对动物排卵的免疫调节[J]．国外畜牧科技，1997，24(2)：35-39
[133] 徐文忠，杜念兴，李光地，等．生长抑素与乙肝表面抗原融合基因重组痘苗病毒的构建及其表达[J]．南京农业大学学报，1992，15(3)：74-80
[134] 黄炎坤，茆达干，杨利国，等．抑制素基因疫苗的构建[J]．郑州牧业工程高等专科学校学报，2002，22(3)：161-164
[135] 李亮，蔡志强，赵希岳．细菌质粒DNA的快速提取及检测[J]．江苏工业学院学报，2003，15(3)：30-31
[136] 单世华，李春娟，张君诚，等．农杆菌质粒DNA提取方法的改良与鉴定[J]．生物技术，2003，13(2)：19-20
[137] 陈显久，胥显民，牛勃．菌体中大量抽提质粒DNA方法的改进[J]．中国药物与临床，2003，3(2)：103-105
[138] 吕正兵，张方，夏颖．一种适合芽孢杆菌质粒DNA提取的改良碱裂解法[J]．安徽师范大学学报(自然科学版)，2002，25(1)：54-55
[139] 张学民，王金生．碱裂解法提取质粒DNA方法的改进[J]．安徽大学学报，2000，24(4)：75-78．
[140] 唐雪明，沈微，方惠英等．用异丙醇沉淀法快速提取质粒DNA[J]．生物学通报，2002，37(1)：55
[141] 詹丽钦，郑铃，陈贻锴．氯化锂用于质粒DNA的提纯[J]．福建医科大学学报，2001，35(2)：297-298
[142] 周鹤峰，邵敏，葛正龙．碱裂解法提取质粒DNA的研究[J]．遵义医学院学报，2005，28(3)：225-227
[143] 鲁敏，苏晨伟．变性蛋白对实验兔体温的影响[J]．中国养兔杂志，2000，(5)：12-13
[144] 岳晓莉，蒋玉凤，刘智勤，等．脑热清对家兔内毒素性发热下丘脑IL-1β及cAMP含量的影响[J]．北京中医药大学学报，2003，26(6)：33-35
[145] 董载勇，张明忠，申子平，等．现代家畜早期妊娠诊断技术应用概述[J]．贵州畜牧兽医，2004，28(3)：12-13
[146] Brethour JR. Using receiver operating characteristic analysis to evaluate the accuracy in predicting future quality grade from ultrasound marbling estimates on beef calves [J]. Journal of animal science, 2000, 78(9): 2263-2268
[147] May SG, Mies W L. Using live estimates and ultrasound measurements to predict beef carcass curability [J]. Journal of animal science. 2000, 78(5):1255-1261
[148] 邓立新，贾翔征，贺丛，等．B超检查奶牛同期发情和超数排卵期卵巢发育研究[J]．畜牧兽医杂志，2004，23(1)：1-4
[149] Adams G P. comparative patten of follicle development and selection in ruminant [J], Repord Fertil, 1999, 54:17-32.
[150] 范瑞文，董常生．家畜早期妊娠诊断方法的研究进展[J]．当代畜牧，2001，(5)：83-84
[151] 马毅，孙超．超声波影像诊断技术在牛繁殖中的应用[J]．黄牛杂志，2000，26(5)：51-54
[152] 莫宏坤．母牛的妊娠诊断[J]．广西畜牧兽医，2001，17(3)：15-17
[153] 赵凯，田文儒．超声诊断技术在兽医产科上的应用[J]，黑龙江畜牧兽医，2000，(9)：39-40
[154] 袁正宏，方昕，郑玲浩．免疫途径和载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究[J]．中华微生物学及免疫学杂志，1999，19(1)：25-27
[155] 杨利国，胡少昶，魏平华，等．酶免疫测定技术[M]．南京：南京大学出版社，1998
[156] 周永兴，冯志华，贾战生．丙型肝炎病毒核心基因免疫研究[J]．华人消化杂志，1998，6(11)：966-68
[157] 张梦华，杨为松，黄长形，等．汉滩病毒S基因真核表达载体的构建及免疫小鼠的初步研究[J]．中华微生物学和免疫学杂志，1999，19(1)：35-37
[158] 帕它木，黄贤仪，龚建福．氯化锂对小鼠脂质过氧化及抗氧化酶的影响[J]．劳动医学，2000，17(1)：25-26
[159] Stepanov V G, Nyborg J. Preparative purification of plasmid DNA templates for in vitro transcription assays by consecutive differential precipitations [J]. Journal of Biotechnology, 2003, 102:223-231.
[160] 褚晓红．碱裂解法小量制备质粒DNA应注意的问题[J]．湖北农业科学，2002(2)：78
[161] 邹湘辉，庄东红，钟名其等．大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较[J]．汕头大学学报(自然科学版)，2003，18(2)：20-24
[162] 冯志华，周永兴，贾战生．丙型肝炎病毒核心基因免疫诱生细胞免疫应答研究[J]，中华内科杂志．1999，38(7)：462-464
[163] 周东蕊，杨利国．提高奶牛繁殖力的技术措施[J]．中国奶牛，2002，(2)：36-38
[164] Bame JH, Dalton JC, Degelos SD, et al. Effect of long-term immunization against inhibin on sperm output in bulls[J]. Biol Reprod, 1999, 60(6): 1360-1366
[165] 王进荣，杨利国，王元兴．人抑制素主动免疫对母鸡产蛋和内分泌的影响[J]．中国畜牧杂志，2001，(2)：9-11
[166] 刘曙光，杨利国．牛卵泡抑制素抗体对小白鼠和大白鼠卵巢与子宫的作用[J]．黑龙江动物繁殖，1998，6(1)：1-3
[167] 张红琳．血脑屏障内皮细胞微囊对卵泡抑制素转运的研究及其受体分析[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2004
[168] 熊冬梅，李蓉，许良智．抑制素、激活素、卵泡抑素与卵泡发育[J]．华西医学，2006，21(1)：188-189
[169] 薛昱，储明星，周忠孝．抑制素基因的研究进展[J]．遗传，2004，26(5)：749-755
[170] Phillips D J. Activins, inhibins and follistatins in the large domestic species [J]. Domestic Animal Endocrinology. 2005, 28: 1-16
[171] 张明，朱庆，郑鸿培．家畜卵泡抑制素研究进展[J]．黑龙江畜牧兽医，2005，(11)，83-85
[172] 张博，高志峰，胡建民．抑制素及其对动物生殖机能的影响[J]．动物医学进展，2005，26(11)：15-17
[173] Mihm M, Bleach ECL. Endocrine regulation of ovarian antrai follicle development in cattle [J]. Animal Reproduction Science, 2003, 78: 217-237
[174] 王诚，杨利国，王锋．卵泡抑素的生物学作用及其机制的研究[J]．动物医学进展，2000，21(4)：9-12
[175] 杨灿锋，杨利国．抑制素的功能与作用机理探讨[J]．动物医学进展，2002，(1)：4-6
[176] 王友如，胡莎，崔永涛．几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较[J]．湖北师范学院学报(自然科学版)，2005，25(2)：70-104
[177] 单世华，李春娟．农杆菌质粒DNA提取方法的改良与鉴定[J]．生物技术，2003，(4)：19-20
[178] 杨芳，李积胜，赵昕，等．氯化锂对大鼠皮层CCK阳性神经元数的影响[J]．中国公共卫生，2005，21(9)：1000-1111
[179] 杨芳，李积胜，王毅，等．氯化锂对染铅大鼠神经行为的影响[J]．中国心理卫生杂志，2005，19(1)：11-14
[180] 詹丽钦，郑铃，陈贻锴．氯化锂用于质粒DNA的提纯[J]．福建医科大学学报，2001，35(2)：297-298
[181] 李汉帆，朱建如．食品容器及包装材料的安全性[J]．中国公共卫生管理，2006，22(2)：128-131
[182] 王守箐．气相色谱法测定单硝酸异山梨酯中氯仿、乙酸乙酯的残留量[J]．化学与生物工程，2005，(8)：55-56
[183] 黄秋森．气相色谱法测定茶多酚中的氯仿和乙酸乙酯残留[J]．福建分析测试，2005，14(2)：2172-2174
[184] 尤静，穆国平，范涛，等．气相色谱法测定脂质体中溶剂氯仿的残留量[J]．中国药物与临床，2006，6(2)：130-131
[185] 何书芹．重症氯仿中毒引起多脏器损害2例[J]．疑难病杂志，2006，5(1)：11
[186] 吴忠良，范嵋君，赵克强，等抑制素主动免疫对山羊繁殖率的影响[J]．畜牧与兽医，2000，32(1)：21
[2] 杨利国主编．动物繁殖学[M]．北京：中国农业出版社，2003
[3] 雷雪芹，陈宏，袁志发．牛双胎的研究与应用[J]．黄牛杂志．2001，27(6)：33-34
[4] 杨利国，谢成侠．人工诱导黄牛和水牛生双胎[J]．南京农业大学学报，1986，57(4)：93-98
[5] 吴峰，谢成侠，杨利国．抗PMSG血清在人工诱导黄牛双胎中的作用[J]．南京农业大学学报，1990，13(3)：87-91
[6] 张爱菊，杨利国，张兆柏．应用LRH-A和PMSG提高黄牛繁殖率的研究[J]．黄牛杂志，1994，20(2)：41-44
[7] 杨利国，桑润滋，张居农，等．优质高效肉牛生产与产品加工[M]，北京：中国农业科技出版社，2000，61-67
[8] 王进荣，杨利国，王元兴．人抑制素主动免疫对母鸡产蛋和内分泌的影响[J]．中国畜牧杂志，2001，(2)：9-11
[9] 杨利国，张居农，王进荣，等．应用猪精液抑制素主动免疫法诱导黄牛孪生[J]．中国农业科学，2002，35(2)：207-212
[10] 王进荣，杨利国．抑制素被动免疫对母牛卵泡发育和生殖内分泌的影响及作用机制研究[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2001
[11] 李镅，杨利国．用人卵泡抑制素α亚基片段生产抗牛和猪抑制素单克隆抗体[J]．中国免疫学杂志，2001，17：65-69
[12] 姜勋平，杨利国．抑制素和bcl-2基因免疫对小鼠繁殖和生长的影响[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2001
[13] Dormelly J J. DNA vaccines. Annu Rev Immunol, 1997, 15: 617-648
[14] Thomas T, Jonathan A, Walter JS, et al. The immunology of DNA vaccines. Methods in Medicine, 1999, 29: 37-64
[15] 廖国阳．基因免疫机理及安全性研究进展[J]．国外医学免疫学分册，2001，24(6)：309-312
[16] 姜勋平，杨利国，刘桂琼，等．抑制素基因免疫对小鼠生殖的影响[J]．中国兽医学报，2002，22(4)：368-370
[17] 茆达干，杨利国，叶荣，等．抑制素α(1-32)基因免疫对大鼠卵泡发育和生殖激素的影响[J]．中国农业科学，2003，36(12)：1554-1559
[18] 张德坤，杨利国，张红琳，等．抑制素基因免疫诱导单胎绵羊孪生的研究[J]．中国农业大学学报，2004，9(4)：40-45
[19] 刑朝芳．两种新的抑制素基因疫苗免疫大鼠的效果比较及作用机制分析[D]．硕士论文．南京： 南京农业大学，2005
[20] 杨贤钦．浅谈牛的双胞胎[J]．广西畜牧兽医，2006，22(2)：95
[21] 吴乃科，万发春，孙希山．人工诱导母牛生产双胎肉牛的研究[J]．山东农业科学，2001，(1)：35-36
[22] Gregory KE, Echtemkamp SE, Dickerson GE. Twinning in cattle: Effects of twining on dystocia, reproductive traits, calf survival, calf growth and cow and productivity [J]. Anim Sci, 1990, 68: 3133-3144
[23] Gregory KE, Bennett GL, Vleck LD.Genetic and environmental parameters for ovulation rate, twinning rate, and weight traits in a cable population selected for twinning [J]. Anita Sci, 1997, 75: 1213-1222.
[24] Karlsen A, Ruane J, Klemetsdai G, et ai. Twining rate in Norwegian cattle: Frequence variance components, and genetic trends [J]. Anim Sci, 2000, 78:15-20
[25] Morris CA, Day AM, Peterson AJ. An experiment to measure the dose-response relationship of ovulation rate to FSH in cows selected with a history of twinning [J]. Anita Prod, 1991, 51:447-451
[26] Vleck LD, Gregory KE, Echternkamp SE. Ovulatign rate, twinning rate in cattle: Heritabilities and genetic correlation [J]. Anim Sci, 1996, 69:3213-3219
[27] Montgomery G W. Genes encoding the α and β chains of follicle—stimulation hormone are not site for the Booroola (FeeB) mutation in sheep[J]. J Repro Fert, 1992, 95:895-901
[28] 储明星．Booroola FeeB基因的遗传标记研究进展[J]．国外畜牧科技，2001，28(20)：37-40
[29] 雷雪芹，陈宏，袁志发，等．促卵泡生成素受体基因的SNP对牛双胎性状的标记研究[J]，云南畜牧兽医，2002，(4)：28-29
[30] 雷雪芹，陈宏，徐廷生，等．FSHR基因的PCR-RFLP对牛双胎性状的标记分析[J]．中国农学通报，2003，19(4)：7-10
[31] 雷雪芹，陈宏，袁志发．牛羊多胎性状的分子遗传基础研究[J]，黄牛杂志，2003，29(1)：3-4
[32] 雷雪芹，魏伍川，陈宏，等．6个牛品种在FSHR基因位点的遗传关系及其多态对双胎性状的标记[J]．西北农林科技大学学报(自然科学版)，2004，32(7)：1-6
[33] 魏伍川．牛羊FHSR基因5′转录启动调控区和部分结构区序列的研究[D]．博士论文．陕西：西北农林科技大学，2000
[34] 王艳玲，董丽亚，王秀云，等．应用促卵泡素提高牛双犊率的试验[J]．养殖技术顾问，2004，(1)：4
[35] 桑润滋，李建国，王凤鸣．生殖激素诱导母牛双胎试验研究[J]．黑龙江动物繁殖，1997，5(4)：5-7
[36] 杨利国．家畜繁殖研究进展[J]．畜牧与兽医，1994，(5)：236-238
[37] Sieh CX, Yang LG. Artificial induction of twin-pregnancy and the levels of plasma progesterone and estradiol in water buffaloes [J]. Buffalo Journal, 1986, (1): 37-45
[38] 任培欣，李健民，雷雪芹．新型黄牛双胎素的应用研究[J]．黄牛杂志，1995，21(3)：15-16
[39] 庞传利，孙志军，郭彬．奶牛1胎产4仔[J]．黑龙江动物繁殖，2004，12(4)：27
[40] 桑润滋主编．家畜繁殖生物技术[M]，北京：中国农业出版社，2002
[41] 桑润滋，田树军，杨利国，等．人工诱导肉牛双胎途径及效果研究．优质高效肉牛生产与产品加工[M]，北京：中国农业科技出版社，2000，68-70
[42] 桑润滋，刘春海．人工诱导母牛双胎的研究进展[J]．中国畜牧杂志，1998，34(4)：52-54
[43] 黎敏义，郭文军，刘颖，等．调控畜禽繁殖的激素免疫技术[J]．动物医学进展，2005，26(11)：1-4
[44] 陶勇．动物类固醇免疫的研究进展．黑龙江动物繁殖[J]，1998，6(3)：39-43
[45] 李晓丽，郭志云，曾宪垠．抑制素的研究进展及其在动物繁殖中的应用[J]．四川畜牧兽医，2003，11(30)：30-32
[46] 孙静．抑制素在妊娠过程中的生殖调节作用[J]．国外医学妇产科学分册，1998，25(3)：135-138
[47] 姚丽娟，李华峰．抑制素的研究进展[J]．山东畜牧兽医，1998，(5)：33-34
[48] Vale W, Rivier J, Vaughan J, et al. Purification and characterization of a FSH releasing protein form porcine ovarian follicular fluid [J]. Nature, 1986, 321: 776-779
[49] 张德坤．应用抑制素基因免疫技术诱导单胎绵羊孪生及其影响因素与作用机制研究[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2004
[50] Bradent D. Regulation of the synthetic rate of gonadotroph in releasing hormone receptors in rat pituitary cell cultures by inhibin [J]. Endocr, 1990, 127:2387-2392
[51] Hennies M, Voglmayr JK, Dietrich E, et al. Hormonal response of female goats to active immunization against a recombinant human inhibin alpha-subunit, and establishment of an enzyme-linked immunosorbent assay for caprine follicle-stimulating hormone [J]. Reprod Domest Anim, 2001, 36(2): 65-7112
[52] 叶荣，牛树理，杨利国．抑制素及其在动物繁殖中的应用[J]．黑龙江畜牧兽医，1996，(2)：37-40
[53] Findly JK. Doughton BW. Tsonis CG. Inhnbin as a.fecundity vaccine [J]. Animal Reproduction Sience. 1993, 33: 325-343
[54] O'shea T, Hillard M A, Andson S T, et al. Inhibin immunization for increasing ovulation rate and superovulation [J]. Theriogenology. 1994, 41: 3-17
[55] Robertson DMM. Isoletion of inhibin α-subunit precursor proteins from bovine follicular fluid [J]. Endocrinology, 1989, 125: 2141-2149
[56] 姜庆林，储明星，陈国宏．哺乳动物抑制素简述[J]．中国畜牧兽医，2004，32(1)：40-42
[57] Shi FX, Mochida K, Ogura A, et al. Follicle selection in cyclic guinea pigs with active immunization against inhibin alpha-subunit [J]. Life Sciences, 2000, 66(25): 2489-2497
[58] Shi F, Ozawa M, Komura H, et al. Induction of superovulation by inhibin vaccine in cyclic guinea-pigs[J]. J Reprod Fertil, 2000, 118(1): 1-7
[59] 方小武，朱洪全，吴日然等．不育男性血清抑制素B水平测定[J]．中国医师杂志，2005，7(9)：1259
[60] 胡毓安，黄宇烽，徐建平等．生育及不育男性血清及精浆抑制素-B水平分析[J]．中华男科学，2003，9(6)：447-450
[61] Anderson AM, Petersen JH, Jorgensen N, et al. Serum inhinbin B and follicle-stimulating hormone levels as tools in the evaluation of infertile men: siginificance of adequater reference values from proven fertile men [J]. J Clin Endocrinol Metab, 2004, 89(6): 2873-2879
[62] 茆达干．抑制素基因免疫对大白鼠生殖生理影响的研究[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2003
[63] 叶荣，牛树理，杨利国．猪精液抑制素的提取与提纯及其生物学的测定[J]．新疆农业大学学报，1996，19(3)：8-11
[64] Lovell TM, Knight PG, Groome NP, et al. Changes in plasma inhibin A levels during sexual maturation in the female chicken and the effects of active immunization against inhibin alpha-subunit on reproductive hormone profiles and ovarian function [J]. Biol Reprod, 2001, 64(1): 188-196
[65] 杨灿锋，杨利国．猪垂体中卵泡抑制素受体的分析[D]．硕士论文．南京：南京农业大学，2002
[66] 张红琳，杨利国，王诚．应用磁珠免疫亲和层析法从猪卵泡液中提纯抑制素[J]．南京农业大学学报，2004，27(2)：72-75
[67] Wrathall JHK, Mcleod BJ. Inhibit immunoneutralization by antibodies raised against synthetic peptide sequences of inhibit a-subunit: effects on gonadorophin concentration and ovulation rate in sheep[J]. J Endocrinol, 1990, 124: 167-176
[68] Forage RG, Brown RW. The cloning and expression of inhibit genes:Subunit use an a fecundity vaccine[J]. Endocrinol, 1987, 14: 1-4
[69] 张小东，程瑞禾，夏银．人抑制素合成肽与猪精液抑制素提取物主动免疫对母羊生殖激素妊娠及产羔的影响[J]．南京农业大学学报，1998，21(4)：66-71
[70] 王进荣，杨利国，王元兴．人抑制素α亚基主动免疫对鸡卵泡发育和性腺激素及产蛋率的影 响[J]．南京农业大学学报，2000，23(4)：63-66
[71] 王杏龙，Wolfgang H．抑制素主动免疫后波尔山羊的排卵反应[J]．畜牧兽医学报，2003，34(2)：157-160
[72] Satterlee DG, Cadd GG, Fioretti WC. Active immunization of broiler breeder hens with a recombinant chicken inhibin fusion protein enhances egg lay [J]. Poult Sci. 2002, 81 (4): 519-528
[73] Wenstrom KD, Owen J, Chu DC, et al. Prospective evaluation of freebeta subunit of human chorionic gonatropin and dimeric inhibin A for an euploidy detection[J]. Am J Obstet Gynecol, 1999, 181:887-892
[74] 高晓东，丁明杰，张志坚．卵泡液提取物制备人抑制素α单抗的研究[J]．免疫学杂志，2000，16(1)：30-32
[75] 陈育枝，袁希平，张曦．羊抑制素的研究进展[J]．草食家畜(季刊)，2006，130(1)：23-26
[76] 何兰花．抑制素对雄性动物生殖的影响[J]．黑龙江畜牧兽医，2003，(12)：69-71
[77] Cummins L J. Increase in ovulation rate after immnization of Merino ewes with a fraction of bovine follicular fluid containtion inhibin activity [J]. Reprod Fert, 1986, 77: 365-372
[78] Bindon BM, Piper LR, Cahill LP, et al. Genetic and hormonal factors affecting superovulation [J]. Theriogenology, 1986, 25:53-70
[79] 杨利国，叶荣，牛树理．用猪精液抑制素主动免疫母牛提高排卵率．畜牧业与畜产加工研究进展[M]，北京：中国农业科技出版社，1996，415-417
[80] 牛树理，叶荣，杨利国．猪精液抑制素主动免疫黄牛诱导超数排卵的研究[J]．南京农业大学学报，1996，19(4)：52-55
[81] 刘春海，桑润滋，牛树理等．抑制素主动免疫对母牛卵泡发育的影响[J]．河北农业大学学报，1999，22(3)：72-74
[82] 王进荣，杨利国．抑制素免疫与母牛的繁殖[J]．草食家畜，2000，(3)：21-23
[83] Morris DG. Dermott MG, Grealy M, et al. Effect of immunization against synthetic peptide sequences of the alpha N- subunit bovine inhibin on ovulation rate, gonadotrophin concentrations and fertility in heifers[J]. Reprod Fertil, 1995, 103(2): 285-291
[84] Morris DG. Effect of immunization against synthetic peptide sequences of bovine inhibin α-subunit on ovulation rate and twin-carving.rate in heifers [J]. Animal Reprod Science, 1993, 38: 63-71
[85] Mihm M, Bleach ECL. Endocrine regulation of ovarian antral follicle development in cattle [J]. Animal Reproduction Science. 2003, 78:217-237
[86] Scanlon AR, Sunderland S J, Martin TL, et al. Active immunization of heifers against a synthetic fragment of bovine inhibin [J]. Journal of Reproduction and Fertility, 1993, 97(1): 213-222
[87] 桑润滋，王志刚，田树军等．抑制素(IB)主动免疫对牛超排效果的影响及机制[J]．中国兽医学报，2000，20(6)：597-600
[88] 黄光菊，俞颂东．抑制素在动物繁殖中的应用[J]．上海畜牧兽医通讯，2005，(3)：48-49
[89] Emma CL, Bleach ECL, Glencross RG, et al. Plasma Inhibin A in Heifers: Relationship with follicle dynamics, gonadotropins, and steroids suring the estrous cycle and after treatment with bovine follicular fluid [J]. Biology of Reproduction 2001, 64: 743-752
[90] Alobaidi SAR. Reproductive characterisies of lambs actively immunized early in life with inhibin enriched preparations from follicular fluid of cows [J]. J Reprod Fertil, 1987, 81: 403-440
[91] 刘桂琼，姜勋平，丁家桐，等．猪卵泡抑制素主动免疫对山羊生殖的影响[J]．畜牧兽医学报，2003，34(1)：37-39
[92] Anderson ST, Bindon BM, Hillard MA, et al. Increased ovulation rate in Merino ewes immunized against small synthetic peptide fragments of the inhibin alpha subunit [J]. Reprod Fertil Dev, 1998, 10(5): 421-431
[93] SeWani CR, Bagdasarian MM, Ireland JJ, et al. Display of an inhibit epitope in a surface-exposed loop of the E. coli heat-labile enterotoxin B subunit [J]. Vaccine, 1998, 16(17): 1611-1619
[94] 夏银，赵旭庭，张小冬，等．抑制素被动免疫对大鼠排卵率几血浆雌二醇与孕酮的影响[J]．畜牧兽医学报，1999，30(1)：6-9
[95] Geary TW, Reeves JJ. Production of a genetically engineered inhibin vaccine [J]. Vaccine. 1996, 14(13): 1273-1279
[96] Braun RP, Karvonen BC, King T. Immune response and protection induced by DNA vaccines encoding bovine parainfluenza virus type 3 glycoproteins [J]. Virology, 1999, 265: 46
[97] Burger HG. Inhibin: definition and nomenclature including related sudstanee [J]. Endor, 1998, 117:159-160
[98] 王进荣，杨利国．母鸡抑制素的研究进展[J]-中国禽业导刊，2000，(8)：8
[99] Lovel TM, Knight PG, Groome NP, et al. Changes in plasma inhibin A levels during sexual maturation in the female chicken and the effects of active immunization against inhibin alpha-subunit on reproductive hormone profiles and ovarian function [J]. Biol Reprod, 2001, 64(1): 188-196
[100] 于迎春，施振旦，刘颖，等．免疫抑制素提高粤黄鸡产蛋性能的研究[J]．农业生物技术学报，2006，14(1)：27-32
[101] Huang Y M, Shi Z D, Li MY, et al. Effects of immunization against inhibin on egg laying performance in Magang and Landaise geese. Proceedings of the 3rd World Waterflowl Conference, 2005，107-111
[102] 姬新颖，杨为松，王海涛．基因免疫研究的最新进展[J]．国外医学病毒学分册，1999，6(1)：6-8
[103] 陈启民主编．分子生物学[M]．天津：南开大学出版社，2000
[104] Facio VM. 'Naked' DNA transfer technoiogy for genetic vaccineation against infectious diseases [J]. Res Virol. 1997, 148: 101
[105] 施崇高，许良中．基因免疫抗肿瘤研究进展[J]．癌症，2000，19(6)：611-613
[106] Loehr BI, Pontarllo R, Rankin R, et al. Priming by DNA immunization augments T-cell responses induced by modified live bovine herpesvirus vaccine[J]. J Gen Viroi. 2001, 82(12): 3035-3043.
[107] 娄华．基因免疫研究进展及其面临的问题[J]．中国兽医科技，1999，29(12)：19-21
[108] 姜勋平，杨利国．卵泡抑制素主动和被动免疫及基因免疫研究进展[J]．畜牧与兽医，2000，32(4)：38-40
[109] 张德坤，杨利国，曹少先等．抑制素基因免疫对母羊生殖内分泌的影响[J]．南京农业大学学报，2005，28(4)：80-83
[110] 龙翔，杨利国，余荣等．．基因免疫与动物生殖[J]．动物科学与动物医学．2004，21(12)：39-40
[111] 曹少先．生长抑素DNA疫苗的构建及其对大鼠生长和相关激素的影响[D]．博士论文，南京：南京农业大学，2004
[112] 茆达干，杨利国，曹少先，等．抑制素与乙肝表面抗原融合质粒的构建及表达[J]．中国免疫学杂志，2003，19(11)：775-778
[113] 茆达干，杨利国，曹少先．影响基因疫苗免疫效果的因素[J]．中国免疫学杂志，2004，20(5)：360-363
[114] Danko I, Fritz JD, Jiao S, et al. Pharmacological enhancement of in vivo foreign gene expression in muscle [J]. Gene Ther, 1994, 1: 114-121
[115] 孟松树，李曦，智海东，等．CpGDNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响[J]．中国农业科学，2001，34(3)：342-344
[116] 石艳春．CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠Th1／Th2型免疫应答的影响[J]．中国免疫学杂志，2005，21(11)：329-335
[117] Krieg AM. CpG motifs in bacterial DNA and their immune effects [J]. Annual Rev Immunol, 2002, 20: 709-760
[118] Encke. CpG immuno-stimulatory motifs enhance humoral immune responses against hepatitis C virus core protein after DNA-based immunization [J]. Arch Virol, 2003, 148: 435-448
[119] 刘玉清，黄群山，王建辰．抑制素主动免疫对山羊排卵率的影响[J]．中国农业科学，1998， 31(1)：83-85
[120] 张红琳，杨利国．抑制素免疫在动物繁殖调控中的应用．黑龙江动物繁殖[J]．2002，10(1)：12-14
[121] 姜勋平主编．基因免疫的原理和方法[M]，北京：科学出版社，2004
[122] J．萨姆布鲁克，E．F．弗里奇，T．曼尼阿蒂斯著．黄培堂译．分子克隆实验指南(第三版)[M]．北京：科学出版社，2002
[123] Stepanov VG, Nyborg J. Preparative purification of plasmid DNA templates for in vitro transcription assays by consecutive differential precipitations [J]. Journal of Biotechnology, 2003, 102:223-231
[124] 梅玲玲，徐艺珍，程苏云．转基因食品DNA提取技术研究[J]．中国卫生检验杂志，2005，15(6)：689-749
[125] 章宁勇，于书敏，刘文菊，等．基因免疫研究进展[J]．实验动物科学与管理，2003，20(3)：28-36
[126] 段明星，庄峰锋，周志红．几种不同基因免疫途径的比较研究[J]．上海免疫学杂志，1999，19(5)：275-279
[127] 郭焱，郭巍．共表达HIV-1与IL-2基因产物免疫鼠T淋巴细胞亚群的研究[J]．武警医学院学报，2000，(4)：18-21
[128] 郭焱，金宁一，张应玖．HIVCN gp120与IL6基因共表达质粒的构建及其免疫调节作用[J]．第三军医大学学报，2001，23(7)：774
[129] Amulf H, Richard W, Romana H, et al. DNA vaccines for allergy treatment[J]. Methods, 2004, 32: 328-339
[130] 袁慧君，王三虎．基因免疫研究进展[J]．河南职业技术师范学院学报，2004，32(3)：42-46
[131] 张艽，张浩，胡盛寿，等．阳离子脂法介导质粒转染大鼠骨髓基质干细胞用于基因修饰的细胞移植治疗[J]．中国医学科学院学报，2005，27(4)：504-508
[132] 王根林．抑制素对动物排卵的免疫调节[J]．国外畜牧科技，1997，24(2)：35-39
[133] 徐文忠，杜念兴，李光地，等．生长抑素与乙肝表面抗原融合基因重组痘苗病毒的构建及其表达[J]．南京农业大学学报，1992，15(3)：74-80
[134] 黄炎坤，茆达干，杨利国，等．抑制素基因疫苗的构建[J]．郑州牧业工程高等专科学校学报，2002，22(3)：161-164
[135] 李亮，蔡志强，赵希岳．细菌质粒DNA的快速提取及检测[J]．江苏工业学院学报，2003，15(3)：30-31
[136] 单世华，李春娟，张君诚，等．农杆菌质粒DNA提取方法的改良与鉴定[J]．生物技术，2003，13(2)：19-20
[137] 陈显久，胥显民，牛勃．菌体中大量抽提质粒DNA方法的改进[J]．中国药物与临床，2003，3(2)：103-105
[138] 吕正兵，张方，夏颖．一种适合芽孢杆菌质粒DNA提取的改良碱裂解法[J]．安徽师范大学学报(自然科学版)，2002，25(1)：54-55
[139] 张学民，王金生．碱裂解法提取质粒DNA方法的改进[J]．安徽大学学报，2000，24(4)：75-78．
[140] 唐雪明，沈微，方惠英等．用异丙醇沉淀法快速提取质粒DNA[J]．生物学通报，2002，37(1)：55
[141] 詹丽钦，郑铃，陈贻锴．氯化锂用于质粒DNA的提纯[J]．福建医科大学学报，2001，35(2)：297-298
[142] 周鹤峰，邵敏，葛正龙．碱裂解法提取质粒DNA的研究[J]．遵义医学院学报，2005，28(3)：225-227
[143] 鲁敏，苏晨伟．变性蛋白对实验兔体温的影响[J]．中国养兔杂志，2000，(5)：12-13
[144] 岳晓莉，蒋玉凤，刘智勤，等．脑热清对家兔内毒素性发热下丘脑IL-1β及cAMP含量的影响[J]．北京中医药大学学报，2003，26(6)：33-35
[145] 董载勇，张明忠，申子平，等．现代家畜早期妊娠诊断技术应用概述[J]．贵州畜牧兽医，2004，28(3)：12-13
[146] Brethour JR. Using receiver operating characteristic analysis to evaluate the accuracy in predicting future quality grade from ultrasound marbling estimates on beef calves [J]. Journal of animal science, 2000, 78(9): 2263-2268
[147] May SG, Mies W L. Using live estimates and ultrasound measurements to predict beef carcass curability [J]. Journal of animal science. 2000, 78(5):1255-1261
[148] 邓立新，贾翔征，贺丛，等．B超检查奶牛同期发情和超数排卵期卵巢发育研究[J]．畜牧兽医杂志，2004，23(1)：1-4
[149] Adams G P. comparative patten of follicle development and selection in ruminant [J], Repord Fertil, 1999, 54:17-32.
[150] 范瑞文，董常生．家畜早期妊娠诊断方法的研究进展[J]．当代畜牧，2001，(5)：83-84
[151] 马毅，孙超．超声波影像诊断技术在牛繁殖中的应用[J]．黄牛杂志，2000，26(5)：51-54
[152] 莫宏坤．母牛的妊娠诊断[J]．广西畜牧兽医，2001，17(3)：15-17
[153] 赵凯，田文儒．超声诊断技术在兽医产科上的应用[J]，黑龙江畜牧兽医，2000，(9)：39-40
[154] 袁正宏，方昕，郑玲浩．免疫途径和载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究[J]．中华微生物学及免疫学杂志，1999，19(1)：25-27
[155] 杨利国，胡少昶，魏平华，等．酶免疫测定技术[M]．南京：南京大学出版社，1998
[156] 周永兴，冯志华，贾战生．丙型肝炎病毒核心基因免疫研究[J]．华人消化杂志，1998，6(11)：966-68
[157] 张梦华，杨为松，黄长形，等．汉滩病毒S基因真核表达载体的构建及免疫小鼠的初步研究[J]．中华微生物学和免疫学杂志，1999，19(1)：35-37
[158] 帕它木，黄贤仪，龚建福．氯化锂对小鼠脂质过氧化及抗氧化酶的影响[J]．劳动医学，2000，17(1)：25-26
[159] Stepanov V G, Nyborg J. Preparative purification of plasmid DNA templates for in vitro transcription assays by consecutive differential precipitations [J]. Journal of Biotechnology, 2003, 102:223-231.
[160] 褚晓红．碱裂解法小量制备质粒DNA应注意的问题[J]．湖北农业科学，2002(2)：78
[161] 邹湘辉，庄东红，钟名其等．大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较[J]．汕头大学学报(自然科学版)，2003，18(2)：20-24
[162] 冯志华，周永兴，贾战生．丙型肝炎病毒核心基因免疫诱生细胞免疫应答研究[J]，中华内科杂志．1999，38(7)：462-464
[163] 周东蕊，杨利国．提高奶牛繁殖力的技术措施[J]．中国奶牛，2002，(2)：36-38
[164] Bame JH, Dalton JC, Degelos SD, et al. Effect of long-term immunization against inhibin on sperm output in bulls[J]. Biol Reprod, 1999, 60(6): 1360-1366
[165] 王进荣，杨利国，王元兴．人抑制素主动免疫对母鸡产蛋和内分泌的影响[J]．中国畜牧杂志，2001，(2)：9-11
[166] 刘曙光，杨利国．牛卵泡抑制素抗体对小白鼠和大白鼠卵巢与子宫的作用[J]．黑龙江动物繁殖，1998，6(1)：1-3
[167] 张红琳．血脑屏障内皮细胞微囊对卵泡抑制素转运的研究及其受体分析[D]．博士论文．南京：南京农业大学，2004
[168] 熊冬梅，李蓉，许良智．抑制素、激活素、卵泡抑素与卵泡发育[J]．华西医学，2006，21(1)：188-189
[169] 薛昱，储明星，周忠孝．抑制素基因的研究进展[J]．遗传，2004，26(5)：749-755
[170] Phillips D J. Activins, inhibins and follistatins in the large domestic species [J]. Domestic Animal Endocrinology. 2005, 28: 1-16
[171] 张明，朱庆，郑鸿培．家畜卵泡抑制素研究进展[J]．黑龙江畜牧兽医，2005，(11)，83-85
[172] 张博，高志峰，胡建民．抑制素及其对动物生殖机能的影响[J]．动物医学进展，2005，26(11)：15-17
[173] Mihm M, Bleach ECL. Endocrine regulation of ovarian antrai follicle development in cattle [J]. Animal Reproduction Science, 2003, 78: 217-237
[174] 王诚，杨利国，王锋．卵泡抑素的生物学作用及其机制的研究[J]．动物医学进展，2000，21(4)：9-12
[175] 杨灿锋，杨利国．抑制素的功能与作用机理探讨[J]．动物医学进展，2002，(1)：4-6
[176] 王友如，胡莎，崔永涛．几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较[J]．湖北师范学院学报(自然科学版)，2005，25(2)：70-104
[177] 单世华，李春娟．农杆菌质粒DNA提取方法的改良与鉴定[J]．生物技术，2003，(4)：19-20
[178] 杨芳，李积胜，赵昕，等．氯化锂对大鼠皮层CCK阳性神经元数的影响[J]．中国公共卫生，2005，21(9)：1000-1111
[179] 杨芳，李积胜，王毅，等．氯化锂对染铅大鼠神经行为的影响[J]．中国心理卫生杂志，2005，19(1)：11-14
[180] 詹丽钦，郑铃，陈贻锴．氯化锂用于质粒DNA的提纯[J]．福建医科大学学报，2001，35(2)：297-298
[181] 李汉帆，朱建如．食品容器及包装材料的安全性[J]．中国公共卫生管理，2006，22(2)：128-131
[182] 王守箐．气相色谱法测定单硝酸异山梨酯中氯仿、乙酸乙酯的残留量[J]．化学与生物工程，2005，(8)：55-56
[183] 黄秋森．气相色谱法测定茶多酚中的氯仿和乙酸乙酯残留[J]．福建分析测试，2005，14(2)：2172-2174
[184] 尤静，穆国平，范涛，等．气相色谱法测定脂质体中溶剂氯仿的残留量[J]．中国药物与临床，2006，6(2)：130-131
[185] 何书芹．重症氯仿中毒引起多脏器损害2例[J]．疑难病杂志，2006，5(1)：11
[186] 吴忠良，范嵋君，赵克强，等抑制素主动免疫对山羊繁殖率的影响[J]．畜牧与兽医，2000，32(1)：21