老龄大鼠脑缺血/再灌注细胞凋亡及相关基因表达和脑脉通对其影响
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摘要
缺血性脑血管病是老年人常见病，随着老年人口的增多及老龄化社会的到来，发病人数将进一步增加。其病理基础与缺血后引起的神经元坏死和迟发性神经元死亡密切相关。其治疗主要是溶栓、应用神经保护剂（包括谷氨酸拮抗剂、钙通道阻滞剂等）、外科治疗等，虽然取得了一定疗效，但因缺乏满意效果或安全性使其临床应用受到限制。新的神经保护剂正在试验中。
中医认为正虚血瘀，浊毒内蕴是老年缺血性卒中发生的前提，肝风旋动，挟浊毒损伤脑络是老年脑缺血损伤的发展的关键；解毒降浊、益气活血法是治疗老年脑缺血/再灌注损伤的主要方法。
而目前中医药、西医药及中西医结合方法防治缺血性脑血管病的实验研究中多以青年动物为对象，忽视了人类脑血管疾病中增龄因素的重要性。这对于探讨老年缺血性脑血管病病理生理特点及用于指导临床防治方面有一定的差距。因此，本课题以老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的特征、细胞凋亡调控基因表达变化及其与中医气虚血瘀，浊毒损络的关系为研究的切入点,用“益气活血”、“解毒降浊”的脑脉通进行干预以阻断缺血损伤因果转换、恶势循环，保护神经细胞。采用大脑中动脉栓塞（线栓）致缺血3h、再灌注3 h、6h、12h、24h、72h为模型，用病理形态学、免疫组织化学法、免疫荧光法、分子生物学技术等实验方法，从整体、细胞、分子、基因表达水平上，动态观察不同时间点青年与老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的特征及凋亡调控基因表达的异同,并进一步研究了脑脉通对老年脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。主要实验内容与结果如下。
1 老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡特征及脑脉通的保护作用
应用整体观察包括神经功能评分、脑组织含水量、梗塞面积等及一般形态学方法包括HE染色、尼氏染色、透射电镜,琼脂糖凝胶电泳等技术对比研究了老龄与青年大鼠脑缺血/再灌注后不同时间点整体和形态学变化特征的异同及脑脉通对其影响。结果发现老龄大鼠容易遭受缺血/再灌注损伤, 其损伤出现的时间早，损伤程度重,缺血损伤后梗塞面积大,其损害可随着缺血及再灌注时间的延长而加重,凋亡细胞数、凋亡小体呈现先少再多后少的变化规律，坏死细胞数随再灌注时间延长而增加。缺血性损伤发生不可逆时，在损伤中心区有坏死细胞增多,凋亡细胞减少，这些特征可能与增龄导致的细胞衰老有关。脑脉通中、大剂量可明显改善脑缺血/再灌注所致的神经元损伤，表现为改善神经功能、减轻脑组织含水量、缩小梗塞面积、减轻神经细胞损伤，保护神经元。其可能机理是合成自身修复所需的内源性蛋白，从而有利于神经元的修复；或可保护神经胶质细胞及血管内皮细胞，上调星形胶质细胞的活化状态,而有利于神经元的修复。这些作用可能与其益气扶正，解毒降浊的作用有关。
2 老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡基因表达的变化及脑脉通对其调节作用。
在取得上述结果的基础上，进一步应用免疫组织化学法、免疫荧光法、分子生物学等实验方法，动态观察了不同时间点青年与老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡调控基因表达的异同及脑脉通对其影响。结果如下。
2.1 老龄大鼠脑缺血/再灌注后细胞膜Fas、Fasl的表达及脑脉通的作用
脑缺血后Fas、Fasl均在缺血后注定死亡的细胞上表达，以半暗带区表达最强，缺血中心区及周边区亦可见弱表达； Fas、Fasl均随再灌注时间的延长而表达增强。老龄大鼠Fas、Fasl表达的增强时间均较青年大鼠早，其高表达持续时间较长。脑脉通解毒降浊，可以下调Fas、Fasl的表达，从而抑制细胞凋亡的发生，其效果等同于尼莫地平。
2.2 老龄大鼠脑缺血/再灌注后细胞浆Bcl-2、Bax的表达及脑脉通的作用
老年脑缺血后Bcl-2可见弱阳性表达，但其表达无时间规律性。青年大鼠脑缺血后Bcl-2均呈全脑性的增高,以缺血损伤侧为强，并随着缺血时间的延长先升后降，至再灌注72h时与假手术组比较无明显差异，其与缺血后细胞凋亡成负相关。青年或老龄大鼠脑缺血/再灌注后诱发Bax持续表达, 其表达与细胞凋亡成正相关。老龄大鼠Bax表达的增强时间及高峰时间均较青年大鼠早，其高表达持续时间较长。Bcl-2是抑制凋亡的基因，Bax是促进凋亡的基因，表达Bcl-2的细胞其形态多正常，表达Bax的细胞其形态多异常。老年脑缺血再灌注后Bcl-2的低表达或不表达及Bax的早表达和高表达可能与增龄导致的内源性保护能力降低有关，从而使老年脑缺血后神经元损伤较青年大鼠重。
脑脉通益气扶正，解毒降浊可以上调Bcl-2的表达，抑制Bax基因表达，对缺血神经元有保护作用。其对缺血前期的保护效应等同于尼莫地平，晚期的保护效应优于尼莫地平。
2.3 老龄大鼠脑缺血/再灌注后细胞核caspase-3活性变化及脑脉通的作用
Caspase-3是缺血后神经细胞凋亡的关键蛋白酶，其活性变化与缺血后神经元凋亡密切相关。 caspase-3的激活位于Fas、Fasl的下游。老龄大鼠缺血/再灌注后 caspase的激活早于青年大鼠。本实验显示应用脑脉通可降低脑缺血/再灌注后
脑组织caspase－3的活性，说明脑脉通可能通过作用于caspase－3前酶或调节其上游基因的表达，抑制其激活；或直接抑制caspas
Cerebral ischemia is a common disease in old people. Morbidity has been rising progressively along with the increase of the aged people and the coming of senile society. The pathophysiological mechanism of cerebral ischemia disease is related with necrosis and delayed neuronal death after cerebral ischemia reperfusion. Thrombolysis, neuro-protective drugs (including glutamic acid antagonist, Ca2+ pathway blocker etc) and surgical treatment are applied , but their protective effect is unsatisfactory. Though we have already got some research results, there is still lacking of data about its safety. Their application in clinic, therefore, is limited. The new neuro-protective drugs are still in its experimental stage.
Traditional Chinese medical theory think that blood stasis due to deficiency of Qi and Toxic materials in blood are the basic mechanism of cerebral I/R. The key factor is that the brain microvascular is impaired by the liver-feng due to toxic materials. Reinforcing genuine Qi, removing stagnaion of blood and getting rid of pathogenic factors are important therapies for cerebral ischemia reperfusion in the aged people.
At present, only young animals, instead of old ones, are used to study the mechanism of brain impairment after cerebral I/R. Obviously, it isn't reasonable because of the key factor of aging is ignored. Some efforts have to be made before release of its pathophysiological mechanism and guide to protection of neurocyte and treat disease.
1. The nature of neurocyte apoptosis after cerebral ischemia and I/R in the aged rats and the protective effect of Naomaitong
This study are reported that ischemia apoptotic cell death of neurons was delayed in the aged SD rats. Age-related changes in the process of neuronal death following acute focal cerebral I/R were studied. The young (4~5 months old) and the aged (20~21 months old) were compared by observation (including oedema by wet-dry/wet, infarct size etc.). This project also employed morphology (including hematoxylin-eosin stain, Nissl stain, electronic microscope etc.), in situ nick-end labeling (TUNEL method) and electrophoresis techniques. The results showed that the infarct size induced by I/R in the brain of aged rats was larger than that of the young, furthermore, the damage area (size and degree) expanded along with the increased extent of ischemia and the prolonged time of reperfusion. Oedema of brain in aged rats induced by I/R demonstrated that no age-related change in the early stage. But the mount of water being taken into brain in the aged rats was significantly greater than in the young with the prolonged time of reperfusion. The degree of brain's damage was also increased with increasing time of reperfusion. The number of
apoptotic cell and apoptotic body changed from time to time. There was a little in the early stage, a lot in the middle stage and a little in the late stage. Necrotis cells rose with time of I/R. This character could be related with aging cells due to the increasing age factor.
Naomaitong and Nimodipine could decrease oedema of the brain, diminish the infarct size and improve synhochrome of neuro-damage induced by I/R and reduce histological damage, protect neuron ultrastructure, including to decrease swollen mitochondria and enhance activation of glial cells etc.
2. The changes of gene expression of apoptotic cell after I/ R in the aged rats and the protective effect of Naomaitong
This research employed immunohistochemistry, biochemistry and molecular biology techniques to observe dynamically the changes of apoptotic regular gene expression at the different time-point (3h, 6h, 12h, 24h and 72h of MCAO). We measured the brain of 4~5 month-old and 20~21 month-old rats subject to ischemia and reperfusion. Neuro-protective effect of Naomaitong was studied at the same time.
2.1. Age-related changes of gene expression of Fas and Fas1 after I/R and neuro-protective effect of Naomaitong
The results showed that gene expression of Fas and Fas1 after I/R happened in all ischemic brain of ra
中医认为正虚血瘀，浊毒内蕴是老年缺血性卒中发生的前提，肝风旋动，挟浊毒损伤脑络是老年脑缺血损伤的发展的关键；解毒降浊、益气活血法是治疗老年脑缺血/再灌注损伤的主要方法。
而目前中医药、西医药及中西医结合方法防治缺血性脑血管病的实验研究中多以青年动物为对象，忽视了人类脑血管疾病中增龄因素的重要性。这对于探讨老年缺血性脑血管病病理生理特点及用于指导临床防治方面有一定的差距。因此，本课题以老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的特征、细胞凋亡调控基因表达变化及其与中医气虚血瘀，浊毒损络的关系为研究的切入点,用“益气活血”、“解毒降浊”的脑脉通进行干预以阻断缺血损伤因果转换、恶势循环，保护神经细胞。采用大脑中动脉栓塞（线栓）致缺血3h、再灌注3 h、6h、12h、24h、72h为模型，用病理形态学、免疫组织化学法、免疫荧光法、分子生物学技术等实验方法，从整体、细胞、分子、基因表达水平上，动态观察不同时间点青年与老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡的特征及凋亡调控基因表达的异同,并进一步研究了脑脉通对老年脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响。主要实验内容与结果如下。
1 老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡特征及脑脉通的保护作用
应用整体观察包括神经功能评分、脑组织含水量、梗塞面积等及一般形态学方法包括HE染色、尼氏染色、透射电镜,琼脂糖凝胶电泳等技术对比研究了老龄与青年大鼠脑缺血/再灌注后不同时间点整体和形态学变化特征的异同及脑脉通对其影响。结果发现老龄大鼠容易遭受缺血/再灌注损伤, 其损伤出现的时间早，损伤程度重,缺血损伤后梗塞面积大,其损害可随着缺血及再灌注时间的延长而加重,凋亡细胞数、凋亡小体呈现先少再多后少的变化规律，坏死细胞数随再灌注时间延长而增加。缺血性损伤发生不可逆时，在损伤中心区有坏死细胞增多,凋亡细胞减少，这些特征可能与增龄导致的细胞衰老有关。脑脉通中、大剂量可明显改善脑缺血/再灌注所致的神经元损伤，表现为改善神经功能、减轻脑组织含水量、缩小梗塞面积、减轻神经细胞损伤，保护神经元。其可能机理是合成自身修复所需的内源性蛋白，从而有利于神经元的修复；或可保护神经胶质细胞及血管内皮细胞，上调星形胶质细胞的活化状态,而有利于神经元的修复。这些作用可能与其益气扶正，解毒降浊的作用有关。
2 老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡基因表达的变化及脑脉通对其调节作用。
在取得上述结果的基础上，进一步应用免疫组织化学法、免疫荧光法、分子生物学等实验方法，动态观察了不同时间点青年与老龄大鼠脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡调控基因表达的异同及脑脉通对其影响。结果如下。
2.1 老龄大鼠脑缺血/再灌注后细胞膜Fas、Fasl的表达及脑脉通的作用
脑缺血后Fas、Fasl均在缺血后注定死亡的细胞上表达，以半暗带区表达最强，缺血中心区及周边区亦可见弱表达； Fas、Fasl均随再灌注时间的延长而表达增强。老龄大鼠Fas、Fasl表达的增强时间均较青年大鼠早，其高表达持续时间较长。脑脉通解毒降浊，可以下调Fas、Fasl的表达，从而抑制细胞凋亡的发生，其效果等同于尼莫地平。
2.2 老龄大鼠脑缺血/再灌注后细胞浆Bcl-2、Bax的表达及脑脉通的作用
老年脑缺血后Bcl-2可见弱阳性表达，但其表达无时间规律性。青年大鼠脑缺血后Bcl-2均呈全脑性的增高,以缺血损伤侧为强，并随着缺血时间的延长先升后降，至再灌注72h时与假手术组比较无明显差异，其与缺血后细胞凋亡成负相关。青年或老龄大鼠脑缺血/再灌注后诱发Bax持续表达, 其表达与细胞凋亡成正相关。老龄大鼠Bax表达的增强时间及高峰时间均较青年大鼠早，其高表达持续时间较长。Bcl-2是抑制凋亡的基因，Bax是促进凋亡的基因，表达Bcl-2的细胞其形态多正常，表达Bax的细胞其形态多异常。老年脑缺血再灌注后Bcl-2的低表达或不表达及Bax的早表达和高表达可能与增龄导致的内源性保护能力降低有关，从而使老年脑缺血后神经元损伤较青年大鼠重。
脑脉通益气扶正，解毒降浊可以上调Bcl-2的表达，抑制Bax基因表达，对缺血神经元有保护作用。其对缺血前期的保护效应等同于尼莫地平，晚期的保护效应优于尼莫地平。
2.3 老龄大鼠脑缺血/再灌注后细胞核caspase-3活性变化及脑脉通的作用
Caspase-3是缺血后神经细胞凋亡的关键蛋白酶，其活性变化与缺血后神经元凋亡密切相关。 caspase-3的激活位于Fas、Fasl的下游。老龄大鼠缺血/再灌注后 caspase的激活早于青年大鼠。本实验显示应用脑脉通可降低脑缺血/再灌注后
脑组织caspase－3的活性，说明脑脉通可能通过作用于caspase－3前酶或调节其上游基因的表达，抑制其激活；或直接抑制caspas
Cerebral ischemia is a common disease in old people. Morbidity has been rising progressively along with the increase of the aged people and the coming of senile society. The pathophysiological mechanism of cerebral ischemia disease is related with necrosis and delayed neuronal death after cerebral ischemia reperfusion. Thrombolysis, neuro-protective drugs (including glutamic acid antagonist, Ca2+ pathway blocker etc) and surgical treatment are applied , but their protective effect is unsatisfactory. Though we have already got some research results, there is still lacking of data about its safety. Their application in clinic, therefore, is limited. The new neuro-protective drugs are still in its experimental stage.
Traditional Chinese medical theory think that blood stasis due to deficiency of Qi and Toxic materials in blood are the basic mechanism of cerebral I/R. The key factor is that the brain microvascular is impaired by the liver-feng due to toxic materials. Reinforcing genuine Qi, removing stagnaion of blood and getting rid of pathogenic factors are important therapies for cerebral ischemia reperfusion in the aged people.
At present, only young animals, instead of old ones, are used to study the mechanism of brain impairment after cerebral I/R. Obviously, it isn't reasonable because of the key factor of aging is ignored. Some efforts have to be made before release of its pathophysiological mechanism and guide to protection of neurocyte and treat disease.
1. The nature of neurocyte apoptosis after cerebral ischemia and I/R in the aged rats and the protective effect of Naomaitong
This study are reported that ischemia apoptotic cell death of neurons was delayed in the aged SD rats. Age-related changes in the process of neuronal death following acute focal cerebral I/R were studied. The young (4~5 months old) and the aged (20~21 months old) were compared by observation (including oedema by wet-dry/wet, infarct size etc.). This project also employed morphology (including hematoxylin-eosin stain, Nissl stain, electronic microscope etc.), in situ nick-end labeling (TUNEL method) and electrophoresis techniques. The results showed that the infarct size induced by I/R in the brain of aged rats was larger than that of the young, furthermore, the damage area (size and degree) expanded along with the increased extent of ischemia and the prolonged time of reperfusion. Oedema of brain in aged rats induced by I/R demonstrated that no age-related change in the early stage. But the mount of water being taken into brain in the aged rats was significantly greater than in the young with the prolonged time of reperfusion. The degree of brain's damage was also increased with increasing time of reperfusion. The number of
apoptotic cell and apoptotic body changed from time to time. There was a little in the early stage, a lot in the middle stage and a little in the late stage. Necrotis cells rose with time of I/R. This character could be related with aging cells due to the increasing age factor.
Naomaitong and Nimodipine could decrease oedema of the brain, diminish the infarct size and improve synhochrome of neuro-damage induced by I/R and reduce histological damage, protect neuron ultrastructure, including to decrease swollen mitochondria and enhance activation of glial cells etc.
2. The changes of gene expression of apoptotic cell after I/ R in the aged rats and the protective effect of Naomaitong
This research employed immunohistochemistry, biochemistry and molecular biology techniques to observe dynamically the changes of apoptotic regular gene expression at the different time-point (3h, 6h, 12h, 24h and 72h of MCAO). We measured the brain of 4~5 month-old and 20~21 month-old rats subject to ischemia and reperfusion. Neuro-protective effect of Naomaitong was studied at the same time.
2.1. Age-related changes of gene expression of Fas and Fas1 after I/R and neuro-protective effect of Naomaitong
The results showed that gene expression of Fas and Fas1 after I/R happened in all ischemic brain of ra
引文
1 陶根鱼，杜晓泉. 益气活血法在缺血性中风病中的地位. 陕西中医学院学报，1998，21（2）：1～2
2 田德录. 中医内科学，北京中医药大学七年制中医学专业补充教材，1994.164
3 卢明，刘茂才. 益气活血法对脑梗塞作用的临床及实验研究近况. 中医文献杂志，1999，（2）：43～45
4 卢明，刘茂才. 补阳还五汤对脑梗塞作用的临床及实验研究近况. 中国中医药信息杂志，2000，7 （6）：17～19
5 包祖晓，赵国平.缺血性中风应用益气活血药的规律探讨.中医药研究，2001，17（3）：6～7
6 王永炎. 关于提高脑血管疾病疗效难点的思考. 中国中西医结合杂志，1997，17（2）：195～196
7 余恒才，陈伟儿. 解毒通梗液直肠滴注合蝮蛇抗栓酶及脑活素治疗急性脑梗死34例疗效观察. 中国中西医结合急救杂志，2000，7（5）：286～289
8 温跃才. 加味黄连解毒汤治疗脑梗塞100例.吉林中医药，1998，（1）：26
9 李建生. 益元活血汤治疗老年人腔隙性脑梗塞临床观察. 河南中医，1994，14（5）：292
10 李建生. 益元活血方对老年腔隙性脑梗塞患者TXB2和6-keto-PGF1α的影响. 辽宁中医杂志，1996，23（12）：531～532
11 李建生. 益元活血方治疗老年人腔隙性脑梗塞的观察及其对血小板功能的影响. 中 国中医急症，1999，4（5）：199～201
12 张树泉，李世杰，苗香圃.论补肾活血化痰是治疗脑梗塞的基本方法.山东中医杂志，1997，16（12）：534
张牧寒. 补肾通脉片对脑梗塞患者血中LPO、GSH及GSH-PX水平的影响. 中国中
13 医药科技，1995，2（1）：14～15
14 李平. 张学文教授论颅脑水瘀证治疗. 中国中医急症，1993，2（5）：209～210
15 黄融琪. 中风急性期脑水肿救治体会. 福建中医药，1994，25（3）：27
16 张启熙. 化痰通瘀法为主治疗脑梗塞85例疗效观察. 上海中医药杂志，1997，（8）：26
17 戴维葆，郑军. 清开灵、脉络宁并化瘀通腑汤治急性脑梗塞275例.辽宁中医杂志，1996，（2）：64～65
18 王玉民. 中风病神昏的病机探讨.中医杂志，1999，40（9）：24～26
19 陈理书，陈丽芬，蒋方建，等. 中风痰瘀气血关系探讨.北京中医药大学学报，1998，21（6）：57～58
20 魏和国，刘欣. 平逆通络口服液治疗急性脑梗塞152例临床观察. 天津中医，1995，12（4）：17～18
21 夏苏英. 平肝活血汤治疗急性脑梗塞31例. 湖南中医杂志，1998，14（1）：29
22 阮宗武，顾月星. 熄风通络欣加味治疗急性脑梗塞45例. 中国中医药信息杂志，2000，7（1）：43
23 易振佳，鄢东红，金益强. 天龙熄风颗粒治疗急性脑梗塞肝阳化风证的指标变化及其意义. 湖南医科大学学报，1997，22（5）：416～418
24 李美珍，张继平，顾卫，等. 平肝化浊合剂对脑梗塞大鼠血浆t-PA、PAI活性和电解质的影响. 中国中医药科技，2000，7（2）：86～87
25 郑思榕，李红. 破瘀通脉散治疗急性脑梗塞疗效与机理探讨. 福建中医药，2000，31（3）：6～7
26 陈汝兴，郑思榕. 破瘀通脉散对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 医学理论与实践，1998，11（9）：386
27 吕程序，成胤祖. 脑血栓形成350例辨证论治分析. 辽宁中医杂志，1983，7（11）：17
28 屈凤林，王光日. 自拟活血通脉散治疗缺血性中风168例临床观察，中医杂志，1999，40（11）：667～670
29 李桂金，李保东，罗伟. 川芎嗪对脑梗塞患者血浆血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α含量的影响. 中西医结合实用临床急救，1996，9（3）：385
30 胡世贵. 川芎嗪、清开灵注射液加自拟脑偏复元汤加减配合西药治疗脑梗塞102例. 安徽中医临床杂志，2000，12（2）：66～67
31 陈怀珍，张宗铭. 参麦注射液合川芎嗪治疗急性脑梗塞36例临床观察.中国中医急症，1998，7（1）：25～26
32 张海声. 大剂量丹参注射液治疗缺血性脑血管病120例. 陕西中医，1991，12（4）：153
33 李桂明. 葛根素注射液治疗脑梗塞45例疗效观察. 新中医，1999，30（8）：20
34 曾晓琼，奚朗秋. 葛根素与脑活素治疗脑梗死30例观察. 实用中医药杂志，2000，16（9）：34
35 马琳，何娅. 葛根素注射液治疗急性脑栓塞65例. 陕西中医，1999，20（1）：11
36 李洪峰.灯盏花注射液治疗急性脑梗塞疗效观察.实用中国中西医结合杂志，2001，1(1):40～41
赵建国，赵红，靳宗，等. 灯盏花素注射液对脑梗塞病人血流变学改变的临床观
37 察. 中国中医急症，1997，6（1）：3～4
38 张丽娟，翟国军，贾小强.红花注射液治疗脑梗塞45例.中医研究，2001，14（4）：31～32
39 庄柏翔，刘永葆，耿德勤. 脉络宁对脑梗塞患者纤维量的溶解功能的影响.中国中西医结合杂志，1995，15（3）：175
40 王云翔，孙治水，孙旗立，等. 脑心康治疗缺血性脑血管疾病65例. 辽宁中医杂志，1995， 22(12):552
41 宋军，陈可冀.提高中西医结合治疗脑血管病疗效的途径与方法刍议. 中国中西医结合杂志，1994，14（6）：367
42 张华媛，刘光忠，朱建萍，等. 中西药抗氧化剂治疗急性脑梗塞临床分析. 中国中西医结合实用临床急救，1997，4（11）：511～513
43 张华英.纳络酮联合醒脑静治疗急性脑梗塞临床观察.中华实用中西医结合杂志，2001，1（2）：1011
44 吴琦，沈志斌，王忠良，等. 针刺配合静滴醒脑静治疗急性缺血性脑梗塞60例. 中医药信息，1999，16（5）：43～45
45 李成永，张鹏宇，张波，等. 针刺对急性脑梗塞病人血清肿瘤坏死因子水平变化影响的研究. 中国中医药科技，1998，5（6）：357
46 赵颖，王进. 针刺对急性脑梗塞患者脑血流量的影响. 中国中医急症，1997，6（6）：246～247
47 石学敏，李军，阎莉，等. 针刺治疗中风病的临床研究. 上海针灸杂志，1992，（4）：4
48 范刚启，刘冠军. 针刺治疗中风病的时机选择. 中医杂志，1997，38（3）：178～179
49 陈春富，郭述苏，冯林，等. 黄芪对大鼠脑缺血、血脑屏障及脑血流的影响. 卒中与神经疾病杂志，1998，5（3）：132～134
50 王世军，姬广臣，史仁毕，等. 葛根素、川芎嗪、丹参注射液对大脑中动脉阻断大鼠脑微循环血流量的影响. 中成药，2000，22（6）：426～428
51 王福文，王磊一，徐淑兰，等. 葛根素对兔脑循环及脑代谢的影响. 时珍国医国药，2000，11（7）：590～591
52 杨志敏，黄燕，刘茂才. 复方北芪液对局灶性脑缺血大鼠脑组织保护作用的实验研究. 中国中医急症，1999，8（3）：134～135
53 开丽，王中峰. 人参二酵组皂甙对缺血再灌注脑组织超微结构及NOS的影响. 中国应用生理学杂志，1998，14（3）：205～207
54 张英鸽，刘天培. 人参皂甙对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中国药理学与毒理学杂志，1994，8（1）：12～18
55 廖维靖，杨万同，周云峰. 当归对大鼠脑缺血损伤保护作用的实验研究. 中草药，1999，（3）：273～274
56 王国贤. 人参二醇皂甙对沙土鼠急性脑缺血损伤的保护作用. 中国药理学通报，1996，12（6）：575
57 姜开余，钱曾年. 三七总皂甙对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的作用. 中成药，1995，17（7）：32～34
和平，叶其昌，罗德生，等. 洋金花总生物碱对完全性脑缺血/再灌注损伤复苏效
58 应的实验研究. 临床麻醉学杂志，1994，10（5）：249～251
59 陈国俊，秦震. 黄芪皂甙对大鼠MCAO/IR模型脂质过氧化产物含量的影响. 卒中与神经疾病杂志，1997，4 （4）：169～171
60 梁健，王富强，郑平香，等. 延胡索乙素抗脂质过氧化作用与对脑缺血/再灌注大鼠行为及病理改变的保护. 中国药理学通报，1999，15（2）：167～169
61 杨军，王静，冯平安，等. 赤芍总甙对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中药材，2000，23（2）：95～97
62 石晶，陶沂，胡晋红，等. 姜黄素对缺血再灌注大鼠脑组织SOD、MDA和亚硝酸盐含量的影响. 第二军区大学学报，1999，20（6）：386～387
63 徐琪，郭中钰，康劲松，等. 红景天对大鼠脑缺血/再灌注损伤时自由基损伤保护作用的实验研究. 白求恩医科大学学报，1999，25（3）：232～234
64 周兰兰，明亮，江勤，等. 银香叶提取物对反复脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中国中西医结合杂志，2000，20（5）：356～358
65 雷燕，黄启福，王永炎. 复圣散对高脂大鼠缺血再灌后的脑保护作用. 中国中医基础医学杂志，1999，5（12）：22～25
66 周迎春，邵念芳. 脑脉通口服液对兔脑缺血/再灌注损伤保护作用的实验研究. 中国中医急症，1999，8（4）：173～175
67 周文斌，杨志敏，李光涛，等. 益气活血口服液对局灶脑缺血/再灌注模型脑组织中SOD、MDA的影响. 福建中医药，1999，30（5）：37～38
68 冀宏，李澎涛，黄启福. 解毒通络方抗大鼠脑缺血/再灌注后脂质过氧化损伤的实验研究. 北京中医药大学学报，2000，23（6）：21～23
69 刘新峰，金泳清，管亚东. 川芎嗪对急性脑缺血后脑组织Ca2+和Ca2+—Mg2+—ATP酶活性的影响. 南京大学学报（自然科学版），1995，31：91～94
70 胡书群，张光毅，赵文君. 红花对脑缺血Ca2+/cam-PKⅡ活性抑制作用的影响. 徐州医学院学报，1998，15（3）：225～228
71 孙峰，刘天培. 比较粉防己碱和尾卡地平对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的影响. 中国药理学报，1995，16（2）：145～148
72 陈小夏，何冰，杜淇璋. 灯盏花素对缺血再灌注大鼠脑组织ATPase活性的保护作用. 中药新药与临床药理，1998，9（4）：214～216
73 何丽娅，黄察新. 生姜对缺血性脑损伤时过氧化氢酶、Ca2+—ATPase活性及乳酸含量的影响. 医学理论与实践，1999，12（1）：7～9
74 张泓. 脑脉室对大鼠脑缺血/再灌注后脑含水量、钙、钾、镁的影响. 中国中医药科技，1998，5（6）：350～351
75 唐一鹏，赵树民，孙丽萍，等. 抗呆合剂对小鼠缺血再灌注脑内氨基酸、乙酰胆碱酯酶活力的影响.北京中医药大学学报，1999，22（4）：16～18
76 李国安，贺石林，邓长青，等. 补阳还五汤对血管壁抗血栓功能的影响. 中西医结合杂志，1989，9（1）：26～28
77 张继平，李长龄，张玉萍，等. 补阳还五汤对大鼠动脉血栓形成前后动脉血中血小板活化因子含量的影响. 中国中西医结合杂志，1998，18（12）：730～732
78 刘志龙，邓长青，葛金文，等. 补阳还五汤和益气活血方抗脑缺血/再灌注损伤机理的比较研究. 中药药理与临床，1995，11（6）：14～18
邓常青，葛金文，王群，等. 比较黄芪和活血方对兔脑再灌注损伤血栓素A2及前
79 列环素和环核苷酸的影响. 中国中西医结合杂志，1995，15（3）：165～168
80 郑恩榕，陈汝兴. 破瘀通脉散对缺血性脑损伤的保护作用. 医学理论与实践，1999，12（1）：10～12
81 李净，王键，许冠荪. 脉络通对急性脑缺血/再灌注大鼠TXB2、PGI2及TNF含量的影响. 中国中医基础医学杂志，1999，5（9）：20～22
82 刘众，史荫绵，陈达仁，等. 川芎对急性实验性大白鼠血浆中β-TG、PF4及TXB2，6-酮-PGF1α含量的影响. 中国中西医结合杂志，1990，10（9）：543～544
83 肖苏红，葛金文. 川芎嗪对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中国中药杂志，1993，18（7）：435～436
84 雷燕，黄启福，王永炎. 中药复圣散对高脂血症大鼠脑缺血/再灌注后脑内若干神经肽含量的影响. 中国中西医结合杂志，2000，20（3）：205～207
85 李建生，李建国，赵君敏，等. 补肾活血、泻下及开窍活血方药对老龄大鼠脑缺血/再灌注多器官损伤的保护作用. 河南中医，2000，20（3）：13～16
86 王春霞，包仕尧，张志琳，等. 脑缺血/再灌注时bcl-2蛋白的表达及药物干预作用的研究. 卒中与神经疾病杂志，2000，7（1）：7～9
87 王春霞，包仕尧，刘春风，等. 尼莫通和川芎嗪对脑缺血一再灌注时c-fos和bcl-2蛋白的表达的影响. 中国危重病急救医学，1999，11（10）：609～611
88 潘力雄，姚志彬，陈以慈. c-fos蛋白在大鼠脑缺血再灌流海马中的表达及其与黄连素抗脑缺血的关系. 中华实验外科杂志，1996，13（1）：57
89 张君庆，张香阁，张均田. 人参皂甙Rg1抗神经细胞凋亡作用机制的研究. 药学学报，1997，32（6）： 406～410
90 脑缺血后脑组织一氧化碳合成酶基因表达及丹参影响的初步研究. 卒中与神经疾病杂志，1997，4（1）：1～3
2 田德录. 中医内科学，北京中医药大学七年制中医学专业补充教材，1994.164
3 卢明，刘茂才. 益气活血法对脑梗塞作用的临床及实验研究近况. 中医文献杂志，1999，（2）：43～45
4 卢明，刘茂才. 补阳还五汤对脑梗塞作用的临床及实验研究近况. 中国中医药信息杂志，2000，7 （6）：17～19
5 包祖晓，赵国平.缺血性中风应用益气活血药的规律探讨.中医药研究，2001，17（3）：6～7
6 王永炎. 关于提高脑血管疾病疗效难点的思考. 中国中西医结合杂志，1997，17（2）：195～196
7 余恒才，陈伟儿. 解毒通梗液直肠滴注合蝮蛇抗栓酶及脑活素治疗急性脑梗死34例疗效观察. 中国中西医结合急救杂志，2000，7（5）：286～289
8 温跃才. 加味黄连解毒汤治疗脑梗塞100例.吉林中医药，1998，（1）：26
9 李建生. 益元活血汤治疗老年人腔隙性脑梗塞临床观察. 河南中医，1994，14（5）：292
10 李建生. 益元活血方对老年腔隙性脑梗塞患者TXB2和6-keto-PGF1α的影响. 辽宁中医杂志，1996，23（12）：531～532
11 李建生. 益元活血方治疗老年人腔隙性脑梗塞的观察及其对血小板功能的影响. 中 国中医急症，1999，4（5）：199～201
12 张树泉，李世杰，苗香圃.论补肾活血化痰是治疗脑梗塞的基本方法.山东中医杂志，1997，16（12）：534
张牧寒. 补肾通脉片对脑梗塞患者血中LPO、GSH及GSH-PX水平的影响. 中国中
13 医药科技，1995，2（1）：14～15
14 李平. 张学文教授论颅脑水瘀证治疗. 中国中医急症，1993，2（5）：209～210
15 黄融琪. 中风急性期脑水肿救治体会. 福建中医药，1994，25（3）：27
16 张启熙. 化痰通瘀法为主治疗脑梗塞85例疗效观察. 上海中医药杂志，1997，（8）：26
17 戴维葆，郑军. 清开灵、脉络宁并化瘀通腑汤治急性脑梗塞275例.辽宁中医杂志，1996，（2）：64～65
18 王玉民. 中风病神昏的病机探讨.中医杂志，1999，40（9）：24～26
19 陈理书，陈丽芬，蒋方建，等. 中风痰瘀气血关系探讨.北京中医药大学学报，1998，21（6）：57～58
20 魏和国，刘欣. 平逆通络口服液治疗急性脑梗塞152例临床观察. 天津中医，1995，12（4）：17～18
21 夏苏英. 平肝活血汤治疗急性脑梗塞31例. 湖南中医杂志，1998，14（1）：29
22 阮宗武，顾月星. 熄风通络欣加味治疗急性脑梗塞45例. 中国中医药信息杂志，2000，7（1）：43
23 易振佳，鄢东红，金益强. 天龙熄风颗粒治疗急性脑梗塞肝阳化风证的指标变化及其意义. 湖南医科大学学报，1997，22（5）：416～418
24 李美珍，张继平，顾卫，等. 平肝化浊合剂对脑梗塞大鼠血浆t-PA、PAI活性和电解质的影响. 中国中医药科技，2000，7（2）：86～87
25 郑思榕，李红. 破瘀通脉散治疗急性脑梗塞疗效与机理探讨. 福建中医药，2000，31（3）：6～7
26 陈汝兴，郑思榕. 破瘀通脉散对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 医学理论与实践，1998，11（9）：386
27 吕程序，成胤祖. 脑血栓形成350例辨证论治分析. 辽宁中医杂志，1983，7（11）：17
28 屈凤林，王光日. 自拟活血通脉散治疗缺血性中风168例临床观察，中医杂志，1999，40（11）：667～670
29 李桂金，李保东，罗伟. 川芎嗪对脑梗塞患者血浆血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α含量的影响. 中西医结合实用临床急救，1996，9（3）：385
30 胡世贵. 川芎嗪、清开灵注射液加自拟脑偏复元汤加减配合西药治疗脑梗塞102例. 安徽中医临床杂志，2000，12（2）：66～67
31 陈怀珍，张宗铭. 参麦注射液合川芎嗪治疗急性脑梗塞36例临床观察.中国中医急症，1998，7（1）：25～26
32 张海声. 大剂量丹参注射液治疗缺血性脑血管病120例. 陕西中医，1991，12（4）：153
33 李桂明. 葛根素注射液治疗脑梗塞45例疗效观察. 新中医，1999，30（8）：20
34 曾晓琼，奚朗秋. 葛根素与脑活素治疗脑梗死30例观察. 实用中医药杂志，2000，16（9）：34
35 马琳，何娅. 葛根素注射液治疗急性脑栓塞65例. 陕西中医，1999，20（1）：11
36 李洪峰.灯盏花注射液治疗急性脑梗塞疗效观察.实用中国中西医结合杂志，2001，1(1):40～41
赵建国，赵红，靳宗，等. 灯盏花素注射液对脑梗塞病人血流变学改变的临床观
37 察. 中国中医急症，1997，6（1）：3～4
38 张丽娟，翟国军，贾小强.红花注射液治疗脑梗塞45例.中医研究，2001，14（4）：31～32
39 庄柏翔，刘永葆，耿德勤. 脉络宁对脑梗塞患者纤维量的溶解功能的影响.中国中西医结合杂志，1995，15（3）：175
40 王云翔，孙治水，孙旗立，等. 脑心康治疗缺血性脑血管疾病65例. 辽宁中医杂志，1995， 22(12):552
41 宋军，陈可冀.提高中西医结合治疗脑血管病疗效的途径与方法刍议. 中国中西医结合杂志，1994，14（6）：367
42 张华媛，刘光忠，朱建萍，等. 中西药抗氧化剂治疗急性脑梗塞临床分析. 中国中西医结合实用临床急救，1997，4（11）：511～513
43 张华英.纳络酮联合醒脑静治疗急性脑梗塞临床观察.中华实用中西医结合杂志，2001，1（2）：1011
44 吴琦，沈志斌，王忠良，等. 针刺配合静滴醒脑静治疗急性缺血性脑梗塞60例. 中医药信息，1999，16（5）：43～45
45 李成永，张鹏宇，张波，等. 针刺对急性脑梗塞病人血清肿瘤坏死因子水平变化影响的研究. 中国中医药科技，1998，5（6）：357
46 赵颖，王进. 针刺对急性脑梗塞患者脑血流量的影响. 中国中医急症，1997，6（6）：246～247
47 石学敏，李军，阎莉，等. 针刺治疗中风病的临床研究. 上海针灸杂志，1992，（4）：4
48 范刚启，刘冠军. 针刺治疗中风病的时机选择. 中医杂志，1997，38（3）：178～179
49 陈春富，郭述苏，冯林，等. 黄芪对大鼠脑缺血、血脑屏障及脑血流的影响. 卒中与神经疾病杂志，1998，5（3）：132～134
50 王世军，姬广臣，史仁毕，等. 葛根素、川芎嗪、丹参注射液对大脑中动脉阻断大鼠脑微循环血流量的影响. 中成药，2000，22（6）：426～428
51 王福文，王磊一，徐淑兰，等. 葛根素对兔脑循环及脑代谢的影响. 时珍国医国药，2000，11（7）：590～591
52 杨志敏，黄燕，刘茂才. 复方北芪液对局灶性脑缺血大鼠脑组织保护作用的实验研究. 中国中医急症，1999，8（3）：134～135
53 开丽，王中峰. 人参二酵组皂甙对缺血再灌注脑组织超微结构及NOS的影响. 中国应用生理学杂志，1998，14（3）：205～207
54 张英鸽，刘天培. 人参皂甙对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中国药理学与毒理学杂志，1994，8（1）：12～18
55 廖维靖，杨万同，周云峰. 当归对大鼠脑缺血损伤保护作用的实验研究. 中草药，1999，（3）：273～274
56 王国贤. 人参二醇皂甙对沙土鼠急性脑缺血损伤的保护作用. 中国药理学通报，1996，12（6）：575
57 姜开余，钱曾年. 三七总皂甙对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的作用. 中成药，1995，17（7）：32～34
和平，叶其昌，罗德生，等. 洋金花总生物碱对完全性脑缺血/再灌注损伤复苏效
58 应的实验研究. 临床麻醉学杂志，1994，10（5）：249～251
59 陈国俊，秦震. 黄芪皂甙对大鼠MCAO/IR模型脂质过氧化产物含量的影响. 卒中与神经疾病杂志，1997，4 （4）：169～171
60 梁健，王富强，郑平香，等. 延胡索乙素抗脂质过氧化作用与对脑缺血/再灌注大鼠行为及病理改变的保护. 中国药理学通报，1999，15（2）：167～169
61 杨军，王静，冯平安，等. 赤芍总甙对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中药材，2000，23（2）：95～97
62 石晶，陶沂，胡晋红，等. 姜黄素对缺血再灌注大鼠脑组织SOD、MDA和亚硝酸盐含量的影响. 第二军区大学学报，1999，20（6）：386～387
63 徐琪，郭中钰，康劲松，等. 红景天对大鼠脑缺血/再灌注损伤时自由基损伤保护作用的实验研究. 白求恩医科大学学报，1999，25（3）：232～234
64 周兰兰，明亮，江勤，等. 银香叶提取物对反复脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中国中西医结合杂志，2000，20（5）：356～358
65 雷燕，黄启福，王永炎. 复圣散对高脂大鼠缺血再灌后的脑保护作用. 中国中医基础医学杂志，1999，5（12）：22～25
66 周迎春，邵念芳. 脑脉通口服液对兔脑缺血/再灌注损伤保护作用的实验研究. 中国中医急症，1999，8（4）：173～175
67 周文斌，杨志敏，李光涛，等. 益气活血口服液对局灶脑缺血/再灌注模型脑组织中SOD、MDA的影响. 福建中医药，1999，30（5）：37～38
68 冀宏，李澎涛，黄启福. 解毒通络方抗大鼠脑缺血/再灌注后脂质过氧化损伤的实验研究. 北京中医药大学学报，2000，23（6）：21～23
69 刘新峰，金泳清，管亚东. 川芎嗪对急性脑缺血后脑组织Ca2+和Ca2+—Mg2+—ATP酶活性的影响. 南京大学学报（自然科学版），1995，31：91～94
70 胡书群，张光毅，赵文君. 红花对脑缺血Ca2+/cam-PKⅡ活性抑制作用的影响. 徐州医学院学报，1998，15（3）：225～228
71 孙峰，刘天培. 比较粉防己碱和尾卡地平对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的影响. 中国药理学报，1995，16（2）：145～148
72 陈小夏，何冰，杜淇璋. 灯盏花素对缺血再灌注大鼠脑组织ATPase活性的保护作用. 中药新药与临床药理，1998，9（4）：214～216
73 何丽娅，黄察新. 生姜对缺血性脑损伤时过氧化氢酶、Ca2+—ATPase活性及乳酸含量的影响. 医学理论与实践，1999，12（1）：7～9
74 张泓. 脑脉室对大鼠脑缺血/再灌注后脑含水量、钙、钾、镁的影响. 中国中医药科技，1998，5（6）：350～351
75 唐一鹏，赵树民，孙丽萍，等. 抗呆合剂对小鼠缺血再灌注脑内氨基酸、乙酰胆碱酯酶活力的影响.北京中医药大学学报，1999，22（4）：16～18
76 李国安，贺石林，邓长青，等. 补阳还五汤对血管壁抗血栓功能的影响. 中西医结合杂志，1989，9（1）：26～28
77 张继平，李长龄，张玉萍，等. 补阳还五汤对大鼠动脉血栓形成前后动脉血中血小板活化因子含量的影响. 中国中西医结合杂志，1998，18（12）：730～732
78 刘志龙，邓长青，葛金文，等. 补阳还五汤和益气活血方抗脑缺血/再灌注损伤机理的比较研究. 中药药理与临床，1995，11（6）：14～18
邓常青，葛金文，王群，等. 比较黄芪和活血方对兔脑再灌注损伤血栓素A2及前
79 列环素和环核苷酸的影响. 中国中西医结合杂志，1995，15（3）：165～168
80 郑恩榕，陈汝兴. 破瘀通脉散对缺血性脑损伤的保护作用. 医学理论与实践，1999，12（1）：10～12
81 李净，王键，许冠荪. 脉络通对急性脑缺血/再灌注大鼠TXB2、PGI2及TNF含量的影响. 中国中医基础医学杂志，1999，5（9）：20～22
82 刘众，史荫绵，陈达仁，等. 川芎对急性实验性大白鼠血浆中β-TG、PF4及TXB2，6-酮-PGF1α含量的影响. 中国中西医结合杂志，1990，10（9）：543～544
83 肖苏红，葛金文. 川芎嗪对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用. 中国中药杂志，1993，18（7）：435～436
84 雷燕，黄启福，王永炎. 中药复圣散对高脂血症大鼠脑缺血/再灌注后脑内若干神经肽含量的影响. 中国中西医结合杂志，2000，20（3）：205～207
85 李建生，李建国，赵君敏，等. 补肾活血、泻下及开窍活血方药对老龄大鼠脑缺血/再灌注多器官损伤的保护作用. 河南中医，2000，20（3）：13～16
86 王春霞，包仕尧，张志琳，等. 脑缺血/再灌注时bcl-2蛋白的表达及药物干预作用的研究. 卒中与神经疾病杂志，2000，7（1）：7～9
87 王春霞，包仕尧，刘春风，等. 尼莫通和川芎嗪对脑缺血一再灌注时c-fos和bcl-2蛋白的表达的影响. 中国危重病急救医学，1999，11（10）：609～611
88 潘力雄，姚志彬，陈以慈. c-fos蛋白在大鼠脑缺血再灌流海马中的表达及其与黄连素抗脑缺血的关系. 中华实验外科杂志，1996，13（1）：57
89 张君庆，张香阁，张均田. 人参皂甙Rg1抗神经细胞凋亡作用机制的研究. 药学学报，1997，32（6）： 406～410
90 脑缺血后脑组织一氧化碳合成酶基因表达及丹参影响的初步研究. 卒中与神经疾病杂志，1997，4（1）：1～3