霍山石斛杂交种（F_1）及其亲本生长生理与药效成分的研究
|
摘要
霍山石斛与铜皮石斛是安徽省霍山县主要产有的两种石斛，前者为中药石斛中的上品，品质较后者好，但生长量很低，而后者生长量大。为改良霍山石斛种质，前人以霍山石斛为父本，铜皮石斛为母本培育出杂交石斛（F1代）。本文通过生长、生理指标及主要有效成分含量测定对杂交石斛与其亲本进行了全面比较并分析了杂交石斛的超亲优势；同时提取纯化了杂交石斛及其亲本的重要药效成分石斛多糖，并进行了理化性质鉴定，紫外、红外光谱分析，单糖组成气相色谱分析，蛋白质含量及氨基酸组成分析；还对三种石斛多糖的体外抗氧化作用进行了初步研究。结果如下：
1.霍山石斛杂交种（杂交石斛）生长量积累表现为近铜皮石斛的特性，有效成分含量积累则表现为近霍山石斛的特性，在生长和有效成分积累方面结合了两个亲本之间的优势，具有很大的开发利用前景。
2.杂交石斛及其亲本新茎的生长高峰期是5-8月，此后生长减缓；8月中旬茎粗最高，后稍有下降。在此期间杂交石斛的茎长、节数、节间长、叶数、叶面积、单株鲜重和干重等生长指标与铜皮石斛相近，明显高于霍山石斛。与一年茎相比，霍山石斛基本不再生长，但铜皮石斛、杂交石斛还有生长。一年与二年生杂交石斛的茎长、节数、单株鲜重和干重均比亲本有明显的优势；三年生杂交石斛除茎粗稍有优势，茎长、节数、节间长、单株鲜重和干重均不及铜皮石斛，但较霍山石斛仍有极大优势，单株鲜重接近其5倍，单株干重是其6.2倍。
3.杂交石斛及其亲本新茎生长期中叶片叶绿素含量5月较低，6月明显增高，7月到8月初稍有降低，11月初最高。其间杂交石斛叶绿素含量一直低于霍山石斛，11月初才开始高于霍山石斛；但从8月中旬开始就极显著高于铜皮石斛。一年生杂交石斛叶绿素含量、吸收光谱峰值处的吸光度以及光合速率均极显著高于两亲本。
4.多糖含量均为二年茎最高，三年茎下降较大；杂交石斛二年茎与三年茎多糖含量与霍山石斛接近，低于铜皮石斛。生物碱含量在三年中均为逐年增高，杂交石斛二年茎与三年茎生物碱含量与霍山石斛接近，极显著高于铜皮石斛。杂交石斛二年茎可溶性蛋白质含量极显著高于两亲本，三年茎可溶性蛋白质含量接近霍山石斛，极显著高于铜皮石斛。其中霍山石斛三年茎可溶性蛋白质含量增加很多，较二年茎增长2.5倍。
5.三种石斛多糖的理化性质及组成分析结果为：三种多糖为白色絮状固体，均溶于水，不溶于高浓度的乙醇、丙酮等有机溶剂；鉴定反应呈现多糖的特征颜色反应；为非淀粉类中性多糖，不含还原糖。紫外光谱分析均未发现260nm和280nm附近核酸和蛋白质的特征吸收峰，红外光谱分析3500~2800cm-1及1400~1200 cm-1的一些吸
收峰表明为糖类化合物。
霍山石斛、铜皮石斛及杂交石斛多糖的单糖组成及摩尔比分别为L-鼠李糖—L-阿拉伯糖—D-甘露糖—D-葡萄糖=0.087：1：102：79.5，L-鼠李糖—L-阿拉伯糖—D-木糖—D-甘露糖—D-葡萄糖=0.4：1：1.51：63.0：35.4，L-鼠李糖—L-阿拉伯糖—D-甘露糖—D-葡萄糖=0.17：1：81.9：52.1；三种多糖中蛋白质含量低于0.6%，含有16种常见氨基酸，各种氨基酸相对百分含量有所不同。
6.体外抗氧化作用初步研究结果为：在实验浓度范围内（分别为0.5~6 mg/ml、0.1~4 mg/ml），三种石斛多糖对·OH及O2˙ˉ均表现出一定的抑制作用，其作用随着浓度的增加而增大。经计算霍山石斛、铜皮石斛及杂交石斛多糖对·OH的半数清除浓度分别为6.79、 6.75和 7.09mg/ml，对O2˙ˉ的半数抑制浓度分别为3.04、 3.44和 3.02mg/ml。1 mg/ml甘露醇对·OH的清除率为7.64%，1 mg/ml维生素C对O2˙ˉ的抑制率为20.87%，均低于同等浓度霍山石斛、铜皮石斛及杂交石斛多糖对·OH的清除率和对O2˙ˉ的抑制率。说明三种多糖均有较强的·OH 和O2˙ˉ清除能力。
此外三种石斛多糖对体外温育和Vc-Fe2+系统诱导的肝匀浆的脂质过氧化均有一定的抑制作用，但未表现出剂量效应；并可减轻Vc-Fe2+系统诱导所致小鼠肝线粒体氧化损伤程度，且表现出一定的剂量效应。
D. huoshanense and D. moniliforme is the main species of dendrobium producted in Huoshan County, Anhui Province. D. huoshanense is the best among various dendrobium, its character is better, but its growth is greatly lower than D. moniliforme. To improve dendrobium species in Huoshan, researchers breeded hybrid through interspecific hybridization (D. huoshanense as male parent, and D. moniliforme as female parent). This article fully compares hybrid and its parents by growing, physiologic index and content measuring of effective components, and analyses over-parent heterosis of hybrid. Meanwhile purify and analyze their important medicinal components—polysaccharides through ultraviolet and infrared spectrum, physical and chemical properties determining, gas chromatograph analysis of sugar composing, protein content measuring and chromatogram analysis of amino acids. Besides we have an initial research on anti-oxidation actions of three kinds of dendrobium polysaccharides. Results are as follows: 1. The growth of hybrid is close to D. moniliforme, the accumulation of effective components of hybrid is close to D. huoshanense. The hybrid integrates superiority of parents on growth and accumulation of effective components，having vast vistas for development and utilization.
2. The growth peek of new stem of hybrid and its parents is from May to August, after that their growth slows down. The stem perimeter reaches the highest in the middle ten days of August, and then it drops a little. In the period, the stem length, the stem paragraphs, the length of stem paragraph, the leaf number, the leaf area, the fresh and net weight of each plant all are close to D. moniliforme, and apparently higher than D. huoshanense. Compared to one-year-stem, D. huoshanense almost stops growing, but D. moniliforme and hybrid still grows.
As to one-year-hybrid and two-year-hybrid, the stem length, the stem paragraphs, the fresh and net weight of each plant all have an apparent advantage over its parents. But as to three-year-hybrid, except for the stem perimeter, the stem length, the stem paragraphs, the length of each stem paragraph, and the fresh and net weight of each plant all are inferior to D. moniliform, but they still have extreme advantage over D. huoshanens, the fresh weight of each plant is about five times, and the net weight of each plant is 6.2 times.
3. As to the chlorophyll content of leave during the growth of new stem, it is lower in May, increases in June, decreases a little in summer, and reaches the highest in November. In the
period, the chlorophyll content of hybrid is lower than D. huoshanense until November, but apparently higher than D. moniliform from the middle ten days of August. As to one-year-hybrid, the chlorophyll content, A value at the peak of its absorption spectrum and the photosynthesis rate all are markly higher than its parents.
4. As to the content of polysaccharides, the two-year-stem all reach the highest, and the content all decrease much the third year. The content in two-year-stem and three-year-stem of hybrid is close to D. huoshanense, lower than D. moniliforme.
As to the content of alkaloids, they all increase year by year in three years. The content in two-year-stem and three-year-stem of hybrid is close to D. huoshanense, and markly higher than D. moniliforme.
And as to soluble protein content, the two-year-stem of hybrid is higher than its parents, the three-year-stem of hybrid is close to D. huoshanense, markly higher than D. moniliforme. The content in three-year-stem of D. huoshanense increases a lot, reaching 2.5 times as much as two-year-stem.
5. The analysis results of three kinds of dendrobium polysaccharides are as follows: They are white solid, soluble in water, not soluble in organic solvent such as ethanol, et al. And they all have characteristic colour reactions of polysaccharides. They are neutral polysaccharides, containing no starch, no reductive sugar. In ultraviolet spectrum there isn’t absorption peak of nucleic acid and protein, and the abs
1.霍山石斛杂交种（杂交石斛）生长量积累表现为近铜皮石斛的特性，有效成分含量积累则表现为近霍山石斛的特性，在生长和有效成分积累方面结合了两个亲本之间的优势，具有很大的开发利用前景。
2.杂交石斛及其亲本新茎的生长高峰期是5-8月，此后生长减缓；8月中旬茎粗最高，后稍有下降。在此期间杂交石斛的茎长、节数、节间长、叶数、叶面积、单株鲜重和干重等生长指标与铜皮石斛相近，明显高于霍山石斛。与一年茎相比，霍山石斛基本不再生长，但铜皮石斛、杂交石斛还有生长。一年与二年生杂交石斛的茎长、节数、单株鲜重和干重均比亲本有明显的优势；三年生杂交石斛除茎粗稍有优势，茎长、节数、节间长、单株鲜重和干重均不及铜皮石斛，但较霍山石斛仍有极大优势，单株鲜重接近其5倍，单株干重是其6.2倍。
3.杂交石斛及其亲本新茎生长期中叶片叶绿素含量5月较低，6月明显增高，7月到8月初稍有降低，11月初最高。其间杂交石斛叶绿素含量一直低于霍山石斛，11月初才开始高于霍山石斛；但从8月中旬开始就极显著高于铜皮石斛。一年生杂交石斛叶绿素含量、吸收光谱峰值处的吸光度以及光合速率均极显著高于两亲本。
4.多糖含量均为二年茎最高，三年茎下降较大；杂交石斛二年茎与三年茎多糖含量与霍山石斛接近，低于铜皮石斛。生物碱含量在三年中均为逐年增高，杂交石斛二年茎与三年茎生物碱含量与霍山石斛接近，极显著高于铜皮石斛。杂交石斛二年茎可溶性蛋白质含量极显著高于两亲本，三年茎可溶性蛋白质含量接近霍山石斛，极显著高于铜皮石斛。其中霍山石斛三年茎可溶性蛋白质含量增加很多，较二年茎增长2.5倍。
5.三种石斛多糖的理化性质及组成分析结果为：三种多糖为白色絮状固体，均溶于水，不溶于高浓度的乙醇、丙酮等有机溶剂；鉴定反应呈现多糖的特征颜色反应；为非淀粉类中性多糖，不含还原糖。紫外光谱分析均未发现260nm和280nm附近核酸和蛋白质的特征吸收峰，红外光谱分析3500~2800cm-1及1400~1200 cm-1的一些吸
收峰表明为糖类化合物。
霍山石斛、铜皮石斛及杂交石斛多糖的单糖组成及摩尔比分别为L-鼠李糖—L-阿拉伯糖—D-甘露糖—D-葡萄糖=0.087：1：102：79.5，L-鼠李糖—L-阿拉伯糖—D-木糖—D-甘露糖—D-葡萄糖=0.4：1：1.51：63.0：35.4，L-鼠李糖—L-阿拉伯糖—D-甘露糖—D-葡萄糖=0.17：1：81.9：52.1；三种多糖中蛋白质含量低于0.6%，含有16种常见氨基酸，各种氨基酸相对百分含量有所不同。
6.体外抗氧化作用初步研究结果为：在实验浓度范围内（分别为0.5~6 mg/ml、0.1~4 mg/ml），三种石斛多糖对·OH及O2˙ˉ均表现出一定的抑制作用，其作用随着浓度的增加而增大。经计算霍山石斛、铜皮石斛及杂交石斛多糖对·OH的半数清除浓度分别为6.79、 6.75和 7.09mg/ml，对O2˙ˉ的半数抑制浓度分别为3.04、 3.44和 3.02mg/ml。1 mg/ml甘露醇对·OH的清除率为7.64%，1 mg/ml维生素C对O2˙ˉ的抑制率为20.87%，均低于同等浓度霍山石斛、铜皮石斛及杂交石斛多糖对·OH的清除率和对O2˙ˉ的抑制率。说明三种多糖均有较强的·OH 和O2˙ˉ清除能力。
此外三种石斛多糖对体外温育和Vc-Fe2+系统诱导的肝匀浆的脂质过氧化均有一定的抑制作用，但未表现出剂量效应；并可减轻Vc-Fe2+系统诱导所致小鼠肝线粒体氧化损伤程度，且表现出一定的剂量效应。
D. huoshanense and D. moniliforme is the main species of dendrobium producted in Huoshan County, Anhui Province. D. huoshanense is the best among various dendrobium, its character is better, but its growth is greatly lower than D. moniliforme. To improve dendrobium species in Huoshan, researchers breeded hybrid through interspecific hybridization (D. huoshanense as male parent, and D. moniliforme as female parent). This article fully compares hybrid and its parents by growing, physiologic index and content measuring of effective components, and analyses over-parent heterosis of hybrid. Meanwhile purify and analyze their important medicinal components—polysaccharides through ultraviolet and infrared spectrum, physical and chemical properties determining, gas chromatograph analysis of sugar composing, protein content measuring and chromatogram analysis of amino acids. Besides we have an initial research on anti-oxidation actions of three kinds of dendrobium polysaccharides. Results are as follows: 1. The growth of hybrid is close to D. moniliforme, the accumulation of effective components of hybrid is close to D. huoshanense. The hybrid integrates superiority of parents on growth and accumulation of effective components，having vast vistas for development and utilization.
2. The growth peek of new stem of hybrid and its parents is from May to August, after that their growth slows down. The stem perimeter reaches the highest in the middle ten days of August, and then it drops a little. In the period, the stem length, the stem paragraphs, the length of stem paragraph, the leaf number, the leaf area, the fresh and net weight of each plant all are close to D. moniliforme, and apparently higher than D. huoshanense. Compared to one-year-stem, D. huoshanense almost stops growing, but D. moniliforme and hybrid still grows.
As to one-year-hybrid and two-year-hybrid, the stem length, the stem paragraphs, the fresh and net weight of each plant all have an apparent advantage over its parents. But as to three-year-hybrid, except for the stem perimeter, the stem length, the stem paragraphs, the length of each stem paragraph, and the fresh and net weight of each plant all are inferior to D. moniliform, but they still have extreme advantage over D. huoshanens, the fresh weight of each plant is about five times, and the net weight of each plant is 6.2 times.
3. As to the chlorophyll content of leave during the growth of new stem, it is lower in May, increases in June, decreases a little in summer, and reaches the highest in November. In the
period, the chlorophyll content of hybrid is lower than D. huoshanense until November, but apparently higher than D. moniliform from the middle ten days of August. As to one-year-hybrid, the chlorophyll content, A value at the peak of its absorption spectrum and the photosynthesis rate all are markly higher than its parents.
4. As to the content of polysaccharides, the two-year-stem all reach the highest, and the content all decrease much the third year. The content in two-year-stem and three-year-stem of hybrid is close to D. huoshanense, lower than D. moniliforme.
As to the content of alkaloids, they all increase year by year in three years. The content in two-year-stem and three-year-stem of hybrid is close to D. huoshanense, and markly higher than D. moniliforme.
And as to soluble protein content, the two-year-stem of hybrid is higher than its parents, the three-year-stem of hybrid is close to D. huoshanense, markly higher than D. moniliforme. The content in three-year-stem of D. huoshanense increases a lot, reaching 2.5 times as much as two-year-stem.
5. The analysis results of three kinds of dendrobium polysaccharides are as follows: They are white solid, soluble in water, not soluble in organic solvent such as ethanol, et al. And they all have characteristic colour reactions of polysaccharides. They are neutral polysaccharides, containing no starch, no reductive sugar. In ultraviolet spectrum there isn’t absorption peak of nucleic acid and protein, and the abs
引文
[1]杨显志,邵华,周成,等.生物技术在药用石斛研究中的应用.中草药,2002,33(2):173
[2]张纪立,何锦丽. 石斛药理研究进展. 时珍国医国药，2000，11（5）：469
[3]高建平,金若敏,吴耀平,等.铁皮石斛原球茎与原药材免疫调节作用的比较研究.中药材,2002
,25(7)：487-488
[4]徐红，刘峻，王峥涛，等.5种石斛及其组织培养物对活性氧的清除作用.植物资源与环境学报,2001,10(2):35-37
[5]Lee YH，Bark JD, Baek NI，et al. In vitro and in vivo antitumoral phenanthrenes from the aerial parts of Dendrobium nobile. Planta Med，1995，61(2):178
[6]张洁，李祥，鲁润龙，等.铜皮石斛水提液诱导细胞凋亡的研究.癌症,2001,20(9):956-960
[7]王天山，陆跃鸣，马国祥. 鼓槌石斛中化学成分对肿瘤细胞株生长抑制作用体外试验. 天然产物研究与开发，1997，9（2）：1
[8]Katsuhiko O，et al. Differential inhibitory effects of various herb extracts on the activities of reverse
transcriptase and various deoxyribonucleic acid(DNA) polymerases. Chem Pharm Bull，1989,37:
1810
[9]陈少夫,李宇权,吴亚丽. 石斛对胃酸分泌及血清胃泌素、血浆生长抑制素浓度的影响. 中国
中药杂志，1995，20（3）；181
[10]杨涛,梁康，张昌颖. 四种中草药对大鼠半乳糖性白内障防治效用的研究. 北京医药大学学报，1991，23（2）：97
[11]杨涛,梁康,侯伟敏. 四种中草药对醛糖还原酶和脂类过氧化的抑制作用. 生物化学杂志，1992，8（2）：169
[12]方泰惠. 石斛对大鼠肠系膜的动脉血管的作用.南京中医药学报，1991，7（2）：100
[13]陈云龙,张铭,何国庆,等.细叶石斛有效成分分析及其水溶性提取物的血管舒张活性.植物资源与环境学报,2003,12(1)：6-9
[14] Chen C C，et al. Antiplatelet aggregation principles of Dendribium loddigesii.J Nat Prod，1994,57(9):1271
[15]袁国顺.清咽护嗓良药-石斛. 中国药师，1998，1（1）
[16]Fu K C，Lian S C，Feng D Q，et al. Application and exploit of Dendrobium candidum. Chin Tradit Herb Drugs，1999(9):708-711
[17]马雪梅,章萍,于苏萍. 云南石仙桃及石斛总生物碱和多糖含量的分析. 中草药，1997，28
（12）：561
[18]徐建华,李莉,陈立钻. 铁皮石斛与西洋参的养阴生津作用研究. 中草药，1995，26（2）：79
[19]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部).北京:化学工业出版社,2000:70
[20]包雪声,顺庆生,陈立钻.中国药用石斛彩色图谱.上海:上海医科大学出版社、复旦大学出版社,2001：6-12
[21]丁亚平,吴庆生,于力文.铁皮石斛最佳采收期的理论探讨.中国中药杂志,1998,23(8):458
[22]王宪楷,赵同芳.石斛属植物的化学成分与中药石斛.药学通报,1986,21(11):666
[23]卢炯林，高立献. 河南石斛属植物的调查研究[J]. 武汉植物学研究，1991，9（2）：148-152
[24]吉占和. 中国石斛属的初步研究[J]. 植物分类学报，1980，18（4）：427-449
[25]李满飞，徐国均. 商品石斛的调查及鉴定（Ⅱ）.中草药，1991，22（4）：173
[26]马国祥，徐国均，徐珞珊等. 商品石斛的调查及鉴定（III）.中草药，1995，6（7）：370
[27]胡世林.中国道地药材论丛.北京:中国古籍出版社,1997:7
[28]肖小河，夏文娟，陈善墉.中国道地药材概论.中国中药杂志,1995,20(6):323
[29]唐振缁,程式君. 中药“霍山石斛”原植物的研究. 植物研究，1984，4（3）：141
[30]清·赵学敏著.本草纲目拾遗.北京：人民卫生出版社影印，1957：83
[31]梁·陶弘景集.名医别录辑校本. 北京：人民卫生出版社，1986：29
[32]袁超,张立,马庆.霍山石斛组培基质的探讨.安徽科技，2002，（6）：44
[33]包雪声，顺庆生，周根余，等.中华仙草之最—霍山石斛.上海：上海科学技术文献出版社，2003：1
[34]袁超. 亟待保护与开发的濒危中草药—霍山石斛. 安徽科技，2001，9（21）
[35]王旭红,余国奠. 中国兰科植物药用植物. 中国野生植物资源，1993，（4）：21
[36]Vellupillai M, Swarup S, Chong Jingoh. Histological and Protein Chang During Early Stages of Seed Germination in the Orchid, Dendrobium Erumenatum. Journal of Horticultural.Science，1997,726:941
[37]方积年.多糖研究的现状.药学通报,1986,21(12):944-950
[38]李建恒,张杏红.抗肿瘤中药多糖研究进展.医药学报,1998,(4):46-48
[39]苗明三.中药多糖的研究概况.河南中医药学刊,1999,14(3):64-66
[40]朱德志,郑显明.中药多糖抗肿瘤研究进展.云南中医杂志,1999,20(1):38-41
[41]刘超,刘增义.中药多糖降血糖研究进展.安徽中医学院学报,1999,18(5):52-53
[42]张倩,江萍,秦礼康,等.多糖功能的研究进展.贵州农业科学,1998,26(4):59-60
[43]Zhou M，Chen Y，Ouyang Q，et al. Reduction of the oxidative injury to the rabbits with established atherosclerosis by protein bound polysaccharide from coriolus vesicolor. Am J Chin Med，2000，28（2）：239
[44]黄桂宽,曾麒燕.银杏叶多糖的化学研究.中草药,1997,28(8):459-461
[45]王海宽,赵新淮.枸杞有效成分分离及其对自由基的清除能力.江苏食品与发酵,2001,6(2):
12-14
[46]王建华,张民,张声华.枸杞多糖组分3对羟自由基所致损伤的作用.营养学报,2001,23(3):
279-281
[47]黄民权,蔡体育,刘庆伦.铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞数和淋巴细胞移动抑制因子的影响.天然产物研究与开发,1996，8(3):39
[48]罗慧玲,蔡体育,陈巧伦,等.石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究.癌症,2000,19(12):1124
[49]王世林,郑光植,何静波,等. 黑节草多糖的研究. 云南植物研究，1988，10（4）：389
[50]赵永灵,王世林,李晓玉.兜唇石斛多糖的研究.云南植物研究,1994,16(4):392
[51]Haq Q N, Hannan A, Akanda B K. Studies on polysaccharides from the stems of Dendrobium aggregatum (Bengali:Isharmul).Bangladesh J Sci Ind Res，1980,15(14):1-6
[52]黄民权,黄步汉,蔡体育,等. 铁皮石斛多糖的提取、分离和分析. 中草药，1994，25（3）：128-129
[53]黄民权,阮金月. 6种石斛属植物水溶性多糖的单糖组分分析. 中国中药杂志，1997，22（2）：74，115
[54]张宪政,陈凤玉,王荣富主编.植物生理学实验技术.沈阳：辽宁科学技术出版社，1994：67-68
[55]李满飞，徐国钧,平田义正,等.中药石斛类多糖的含量测定.中草药,1990,21(10):10-12
[56]王强,陈绥清,张志华,等.枸杞子中多糖的含量测定.中草药,1991,22(2)：67
[57]丁亚平,杨道麒,吴庆生,等.安徽霍山三种石斛总生物碱的测定及其分布规律研究.安徽农业大学学报,1994,21(4):503-506
[58]李亚芳,张晓华,孙国明.石斛中总生物碱和多糖的含量测定.中国药事,2002,16(7)：426-428
[59]徐宁.石斛中总生物碱的含量测定方法研究.基层中药杂志，2001，15（3）：24
[60]李如亮主编.生物化学实验.武汉：武汉大学出版社,1998:57
[61]倪立坚，蒋小平，陈东红.石斛中石斛多糖提取工艺的优选.海峡药学,2000,12(4):41-42
[62]于荣敏,马文霞,张辉,等.银杏细胞培养物多糖与银杏叶多糖的研究.中国生化药物杂志,1999,20(5):217
[63]师勤,马果玉,徐珞珊,等.比色法测定蒺藜中多糖的含量.中国药科大学学报,1997,28(5)：
291-293
[64]陈云龙,张铭,华允芬,等.细茎石斛不同部位有效成分及分布规律研究.中国中药杂志,2001,26(10):709-710
[65]张惟杰主编.糖复合物生化研究技术第二版.杭州：浙江大学出版社,1994:271
[66]孙玉军,陈彦,吴佳静,等.草乌多糖的分离纯化和组成性质研究.中国药学杂志,2000,35(11):732
[67]张惟杰主编.糖复合物生化研究技术第二版.杭州：浙江大学出版社,1994:61-63
[68]黄荣清,王作华,马成禹.红景天多糖的组成及摩尔比分析.现代应用药学,1997,14(1):33-34
[69]鲁纯素,赵会英,史录文.丝裂霉素促进活性氧自由基生成的研究.生物化学杂
志,1985,5(6):532-534
[70]王巨存,邢国胜,胡文铎,等.有机锗Ge-132对氧自由基和羟自由基诱发的脂质过氧化反应的影响.中国药学杂志,1994,29(1):23
[71]边晓丽，王晓理，李金娜,等.6种抗衰老中药清除氧自由基和抗脂质过氧化作用的测定.西北药学杂志,2001,16(2):68-69
[72]莫简主编.医用自由基生物学导论.北京:人民卫生出版社,1989:214-219
[73]李小定.灰树花多糖的结构及其生物活性：[博士学位论文]. 武汉：华中农业大学，2002
[74]李信民,程小丽,赖红梅,等.组织中过氧化脂质测定方法的改良.西安医科大学学报,18(4):536-537
[75]龚国清,刘同征,李立文,等.西红花酸的体外抗氧化作用的研究.中国药科大学学报,2001,32(4):306-309
[76]张光浓，毕志明，王峥涛，等.石斛属植物化学成分研究进展.中草药，2003，34（6）：附6-7
[77]石若夫，李建国，李洪艳等.从栀子细胞培养物中分离多糖最佳工艺条件的研究.生物技术,2000,10(5):13-15
[78]邵春林，齐藤真弘，余增亮.电离辐射诱导DNA链断裂的动力学研究.生物化学与生物物理学报,2000,32(4)：379-382
[79]Marx, J L. Oxygen free radicals linked to many diseases. Science,1987,235：529-531
[80]娄宁，周玫，陈瑗.云芝多糖对小鼠肝、脾、肾和红细胞抗氧化能力的影响.中国药理学通报，1996，12（5）：425
[81]Yen TC, King KL, Lee HC，et al. Age-dependent increase of mitochondrial DNA deletions together with lipid peroxides and superoxide dismutase in human liver mitochondria. Free Radical Biology and Medicine,1994,16(2)：207
[82]钦传光，周军，赵文，等.泥鳅多糖清除活性氧和保护DNA链的作用.生物化学与生物物理学报,2001,33(2)：215-218
[83]边晓丽,靳菊情,丁东宁,等.长松萝多糖清除氧自由基和抗脂质过氧化反应的研究.中药材,2002,25(3):189
[2]张纪立,何锦丽. 石斛药理研究进展. 时珍国医国药，2000，11（5）：469
[3]高建平,金若敏,吴耀平,等.铁皮石斛原球茎与原药材免疫调节作用的比较研究.中药材,2002
,25(7)：487-488
[4]徐红，刘峻，王峥涛，等.5种石斛及其组织培养物对活性氧的清除作用.植物资源与环境学报,2001,10(2):35-37
[5]Lee YH，Bark JD, Baek NI，et al. In vitro and in vivo antitumoral phenanthrenes from the aerial parts of Dendrobium nobile. Planta Med，1995，61(2):178
[6]张洁，李祥，鲁润龙，等.铜皮石斛水提液诱导细胞凋亡的研究.癌症,2001,20(9):956-960
[7]王天山，陆跃鸣，马国祥. 鼓槌石斛中化学成分对肿瘤细胞株生长抑制作用体外试验. 天然产物研究与开发，1997，9（2）：1
[8]Katsuhiko O，et al. Differential inhibitory effects of various herb extracts on the activities of reverse
transcriptase and various deoxyribonucleic acid(DNA) polymerases. Chem Pharm Bull，1989,37:
1810
[9]陈少夫,李宇权,吴亚丽. 石斛对胃酸分泌及血清胃泌素、血浆生长抑制素浓度的影响. 中国
中药杂志，1995，20（3）；181
[10]杨涛,梁康，张昌颖. 四种中草药对大鼠半乳糖性白内障防治效用的研究. 北京医药大学学报，1991，23（2）：97
[11]杨涛,梁康,侯伟敏. 四种中草药对醛糖还原酶和脂类过氧化的抑制作用. 生物化学杂志，1992，8（2）：169
[12]方泰惠. 石斛对大鼠肠系膜的动脉血管的作用.南京中医药学报，1991，7（2）：100
[13]陈云龙,张铭,何国庆,等.细叶石斛有效成分分析及其水溶性提取物的血管舒张活性.植物资源与环境学报,2003,12(1)：6-9
[14] Chen C C，et al. Antiplatelet aggregation principles of Dendribium loddigesii.J Nat Prod，1994,57(9):1271
[15]袁国顺.清咽护嗓良药-石斛. 中国药师，1998，1（1）
[16]Fu K C，Lian S C，Feng D Q，et al. Application and exploit of Dendrobium candidum. Chin Tradit Herb Drugs，1999(9):708-711
[17]马雪梅,章萍,于苏萍. 云南石仙桃及石斛总生物碱和多糖含量的分析. 中草药，1997，28
（12）：561
[18]徐建华,李莉,陈立钻. 铁皮石斛与西洋参的养阴生津作用研究. 中草药，1995，26（2）：79
[19]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典(一部).北京:化学工业出版社,2000:70
[20]包雪声,顺庆生,陈立钻.中国药用石斛彩色图谱.上海:上海医科大学出版社、复旦大学出版社,2001：6-12
[21]丁亚平,吴庆生,于力文.铁皮石斛最佳采收期的理论探讨.中国中药杂志,1998,23(8):458
[22]王宪楷,赵同芳.石斛属植物的化学成分与中药石斛.药学通报,1986,21(11):666
[23]卢炯林，高立献. 河南石斛属植物的调查研究[J]. 武汉植物学研究，1991，9（2）：148-152
[24]吉占和. 中国石斛属的初步研究[J]. 植物分类学报，1980，18（4）：427-449
[25]李满飞，徐国均. 商品石斛的调查及鉴定（Ⅱ）.中草药，1991，22（4）：173
[26]马国祥，徐国均，徐珞珊等. 商品石斛的调查及鉴定（III）.中草药，1995，6（7）：370
[27]胡世林.中国道地药材论丛.北京:中国古籍出版社,1997:7
[28]肖小河，夏文娟，陈善墉.中国道地药材概论.中国中药杂志,1995,20(6):323
[29]唐振缁,程式君. 中药“霍山石斛”原植物的研究. 植物研究，1984，4（3）：141
[30]清·赵学敏著.本草纲目拾遗.北京：人民卫生出版社影印，1957：83
[31]梁·陶弘景集.名医别录辑校本. 北京：人民卫生出版社，1986：29
[32]袁超,张立,马庆.霍山石斛组培基质的探讨.安徽科技，2002，（6）：44
[33]包雪声，顺庆生，周根余，等.中华仙草之最—霍山石斛.上海：上海科学技术文献出版社，2003：1
[34]袁超. 亟待保护与开发的濒危中草药—霍山石斛. 安徽科技，2001，9（21）
[35]王旭红,余国奠. 中国兰科植物药用植物. 中国野生植物资源，1993，（4）：21
[36]Vellupillai M, Swarup S, Chong Jingoh. Histological and Protein Chang During Early Stages of Seed Germination in the Orchid, Dendrobium Erumenatum. Journal of Horticultural.Science，1997,726:941
[37]方积年.多糖研究的现状.药学通报,1986,21(12):944-950
[38]李建恒,张杏红.抗肿瘤中药多糖研究进展.医药学报,1998,(4):46-48
[39]苗明三.中药多糖的研究概况.河南中医药学刊,1999,14(3):64-66
[40]朱德志,郑显明.中药多糖抗肿瘤研究进展.云南中医杂志,1999,20(1):38-41
[41]刘超,刘增义.中药多糖降血糖研究进展.安徽中医学院学报,1999,18(5):52-53
[42]张倩,江萍,秦礼康,等.多糖功能的研究进展.贵州农业科学,1998,26(4):59-60
[43]Zhou M，Chen Y，Ouyang Q，et al. Reduction of the oxidative injury to the rabbits with established atherosclerosis by protein bound polysaccharide from coriolus vesicolor. Am J Chin Med，2000，28（2）：239
[44]黄桂宽,曾麒燕.银杏叶多糖的化学研究.中草药,1997,28(8):459-461
[45]王海宽,赵新淮.枸杞有效成分分离及其对自由基的清除能力.江苏食品与发酵,2001,6(2):
12-14
[46]王建华,张民,张声华.枸杞多糖组分3对羟自由基所致损伤的作用.营养学报,2001,23(3):
279-281
[47]黄民权,蔡体育,刘庆伦.铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞数和淋巴细胞移动抑制因子的影响.天然产物研究与开发,1996，8(3):39
[48]罗慧玲,蔡体育,陈巧伦,等.石斛多糖增强脐带血和肿瘤病人外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究.癌症,2000,19(12):1124
[49]王世林,郑光植,何静波,等. 黑节草多糖的研究. 云南植物研究，1988，10（4）：389
[50]赵永灵,王世林,李晓玉.兜唇石斛多糖的研究.云南植物研究,1994,16(4):392
[51]Haq Q N, Hannan A, Akanda B K. Studies on polysaccharides from the stems of Dendrobium aggregatum (Bengali:Isharmul).Bangladesh J Sci Ind Res，1980,15(14):1-6
[52]黄民权,黄步汉,蔡体育,等. 铁皮石斛多糖的提取、分离和分析. 中草药，1994，25（3）：128-129
[53]黄民权,阮金月. 6种石斛属植物水溶性多糖的单糖组分分析. 中国中药杂志，1997，22（2）：74，115
[54]张宪政,陈凤玉,王荣富主编.植物生理学实验技术.沈阳：辽宁科学技术出版社，1994：67-68
[55]李满飞，徐国钧,平田义正,等.中药石斛类多糖的含量测定.中草药,1990,21(10):10-12
[56]王强,陈绥清,张志华,等.枸杞子中多糖的含量测定.中草药,1991,22(2)：67
[57]丁亚平,杨道麒,吴庆生,等.安徽霍山三种石斛总生物碱的测定及其分布规律研究.安徽农业大学学报,1994,21(4):503-506
[58]李亚芳,张晓华,孙国明.石斛中总生物碱和多糖的含量测定.中国药事,2002,16(7)：426-428
[59]徐宁.石斛中总生物碱的含量测定方法研究.基层中药杂志，2001，15（3）：24
[60]李如亮主编.生物化学实验.武汉：武汉大学出版社,1998:57
[61]倪立坚，蒋小平，陈东红.石斛中石斛多糖提取工艺的优选.海峡药学,2000,12(4):41-42
[62]于荣敏,马文霞,张辉,等.银杏细胞培养物多糖与银杏叶多糖的研究.中国生化药物杂志,1999,20(5):217
[63]师勤,马果玉,徐珞珊,等.比色法测定蒺藜中多糖的含量.中国药科大学学报,1997,28(5)：
291-293
[64]陈云龙,张铭,华允芬,等.细茎石斛不同部位有效成分及分布规律研究.中国中药杂志,2001,26(10):709-710
[65]张惟杰主编.糖复合物生化研究技术第二版.杭州：浙江大学出版社,1994:271
[66]孙玉军,陈彦,吴佳静,等.草乌多糖的分离纯化和组成性质研究.中国药学杂志,2000,35(11):732
[67]张惟杰主编.糖复合物生化研究技术第二版.杭州：浙江大学出版社,1994:61-63
[68]黄荣清,王作华,马成禹.红景天多糖的组成及摩尔比分析.现代应用药学,1997,14(1):33-34
[69]鲁纯素,赵会英,史录文.丝裂霉素促进活性氧自由基生成的研究.生物化学杂
志,1985,5(6):532-534
[70]王巨存,邢国胜,胡文铎,等.有机锗Ge-132对氧自由基和羟自由基诱发的脂质过氧化反应的影响.中国药学杂志,1994,29(1):23
[71]边晓丽，王晓理，李金娜,等.6种抗衰老中药清除氧自由基和抗脂质过氧化作用的测定.西北药学杂志,2001,16(2):68-69
[72]莫简主编.医用自由基生物学导论.北京:人民卫生出版社,1989:214-219
[73]李小定.灰树花多糖的结构及其生物活性：[博士学位论文]. 武汉：华中农业大学，2002
[74]李信民,程小丽,赖红梅,等.组织中过氧化脂质测定方法的改良.西安医科大学学报,18(4):536-537
[75]龚国清,刘同征,李立文,等.西红花酸的体外抗氧化作用的研究.中国药科大学学报,2001,32(4):306-309
[76]张光浓，毕志明，王峥涛，等.石斛属植物化学成分研究进展.中草药，2003，34（6）：附6-7
[77]石若夫，李建国，李洪艳等.从栀子细胞培养物中分离多糖最佳工艺条件的研究.生物技术,2000,10(5):13-15
[78]邵春林，齐藤真弘，余增亮.电离辐射诱导DNA链断裂的动力学研究.生物化学与生物物理学报,2000,32(4)：379-382
[79]Marx, J L. Oxygen free radicals linked to many diseases. Science,1987,235：529-531
[80]娄宁，周玫，陈瑗.云芝多糖对小鼠肝、脾、肾和红细胞抗氧化能力的影响.中国药理学通报，1996，12（5）：425
[81]Yen TC, King KL, Lee HC，et al. Age-dependent increase of mitochondrial DNA deletions together with lipid peroxides and superoxide dismutase in human liver mitochondria. Free Radical Biology and Medicine,1994,16(2)：207
[82]钦传光，周军，赵文，等.泥鳅多糖清除活性氧和保护DNA链的作用.生物化学与生物物理学报,2001,33(2)：215-218
[83]边晓丽,靳菊情,丁东宁,等.长松萝多糖清除氧自由基和抗脂质过氧化反应的研究.中药材,2002,25(3):189