西黄丸含药血清抗人乳腺癌和人卵巢癌作用的研究
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摘要
西黄丸，又名犀黄丸，方出清—王洪绪所著《外科证治全生集》，为治疗“乳岩”、“瘰疬”、“痰核”、“肺痈”之名方。现代药理学研究表明，西黄丸具有抗肿瘤、增强免疫功能、抗菌及抗炎作用等活性，临床上主要用于多种恶性肿瘤(如肝癌、白血病、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌等)，尤其适用于晚期恶性肿瘤、和乳腺增生等良性疾病的治疗。在国内中成药抗癌药物中是一个较理想的中药制剂。
尽管该方剂临床治疗效果尤其抗肿瘤作用已得到了肯定，但是其抗肿瘤的靶点和其作用的分子机制尚未阐明。本研究选择两种严重威胁妇女健康的恶性肿瘤——乳腺癌和卵巢癌瘤株，采用血清药理学方法通过体外肿瘤细胞培养，以肿瘤细胞抑制率为指标，观察西黄丸含药血清对人乳腺癌和人卵巢癌两种肿瘤细胞生长抑制作用以及细胞周期的影响。力求从细胞水平探讨其抗乳腺癌和卵巢癌细胞的作用机制。
我们将西黄丸制成水溶液，按一定的剂量给CV级SD大鼠灌胃。按照血清药理学实验方法，获取西黄丸含药血清，将含药血清稀释成几种浓度。取人乳腺癌和卵巢癌细胞传代培养，待细胞培养成功后，将几种浓度的血清分别作用于人乳腺癌和卵巢癌细胞细胞。培养24小时和48小时后，用MTT比色法，测各组细胞的光密度值(OD值)计算癌细胞生长抑制率。流式细胞术，测定各组细胞的细胞凋亡率并进行细胞周期分析。
实验结果显示西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)有较强抑制作用，其抑制率与含药血清浓度线性相关。经西黄丸含药血清处理24小时后，乳腺癌细胞系(MCF-7)S期细胞比例增加，G_(2/M)期细胞减少；处理48h后，G_(0/1)期细胞增多，S期细胞减少。西黄丸含药血清对人卵巢癌细胞(SK-OV-3)也具有较强的抑制作用，其抑制率也与含药血清浓度呈正相关。经西黄丸含药血清处理72h，S期细胞比例增加，G_(2/M)期细胞减少，G_(0/1)期细胞减少。
由此得出如此下结论：
1．西黄丸能够明显抑制乳腺癌(MCF-7)细胞的增殖，其血清浓度与抑制率呈现正相关。
2．西黄丸含药血清可抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞生长，并可干扰其细胞周期。因西黄丸含药血清早期主要影响细胞进入G_(2/M)期，后期主要使细胞停滞于G_(0/1)期。由于大部分细胞停滞在DNA合成前期，抑制了癌细胞的增殖而导致其发生凋亡，因此，推断干扰细胞周期可能是其抗癌作用的重要机制。
3．西黄丸能够明显抑制人卵巢癌(SK-OV-3)细胞的增殖，其血清浓度与抑制率呈现正相关。
4．西黄丸通过对卵巢癌SK-OV-3细胞周期的显著影响，将其阻滞于S期并抑制其增殖最终导致卵巢癌SK-OV-3细胞的凋亡是其治疗人类卵巢癌的重要机制。
Objective: To investigate the effects of Xihuang pill drug serum on the growthand the cell cycle of breast carcinoma cell (MCF-7) and ovary carcinoma cell(SK-OV-3). Method: activity of tumor cell was detected by MIT and cell cycle wasanalyzed by flow cytometry. Result: Xihuang pill drug serum had an inhibitory effecton breast carcinoma cell (MCF-7) and, ovary carcinoma cell (SK-OV-3) which waspositively related with the drug content. Typital morphological changes of apoptosiswere observed under the transmission electron microscope. FCM showed that the cellcycle treated with Xihuang pill drug serum for 24h, the ration of cells in S phaseincreased, while that in G_(2/M) phase decreased; after 48h treatment, the ratio of cells inG_(0/1) phase increased, and S phase decreased. Based on these data, we can concludethat Xihuang pill drug serum can inhibit the growth of breast carcinoma cell(MCF-7)and its cell cycle in vitro.
And the typital morphological changes of apoptosis were also observed under thetransmission electron microscope. Cell cycle analyzed by FCM indicated that 72hafter Xihuang pill serum treated, the ration of cells in S phase increased and that inG_2/M phase decreased. The conclusion resulted from the data related above is thatXihuang pill serum inhibit the growth and cell cycle of ovary carcinomacell(SK-OV-3) in vitro.Cell cycle analyzed by FCM indicated that 72h after Xihuangpill serum treated, the ration of cells in S phase increased and that in G_(2/M) phasedecreased.
尽管该方剂临床治疗效果尤其抗肿瘤作用已得到了肯定，但是其抗肿瘤的靶点和其作用的分子机制尚未阐明。本研究选择两种严重威胁妇女健康的恶性肿瘤——乳腺癌和卵巢癌瘤株，采用血清药理学方法通过体外肿瘤细胞培养，以肿瘤细胞抑制率为指标，观察西黄丸含药血清对人乳腺癌和人卵巢癌两种肿瘤细胞生长抑制作用以及细胞周期的影响。力求从细胞水平探讨其抗乳腺癌和卵巢癌细胞的作用机制。
我们将西黄丸制成水溶液，按一定的剂量给CV级SD大鼠灌胃。按照血清药理学实验方法，获取西黄丸含药血清，将含药血清稀释成几种浓度。取人乳腺癌和卵巢癌细胞传代培养，待细胞培养成功后，将几种浓度的血清分别作用于人乳腺癌和卵巢癌细胞细胞。培养24小时和48小时后，用MTT比色法，测各组细胞的光密度值(OD值)计算癌细胞生长抑制率。流式细胞术，测定各组细胞的细胞凋亡率并进行细胞周期分析。
实验结果显示西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系(MCF-7)有较强抑制作用，其抑制率与含药血清浓度线性相关。经西黄丸含药血清处理24小时后，乳腺癌细胞系(MCF-7)S期细胞比例增加，G_(2/M)期细胞减少；处理48h后，G_(0/1)期细胞增多，S期细胞减少。西黄丸含药血清对人卵巢癌细胞(SK-OV-3)也具有较强的抑制作用，其抑制率也与含药血清浓度呈正相关。经西黄丸含药血清处理72h，S期细胞比例增加，G_(2/M)期细胞减少，G_(0/1)期细胞减少。
由此得出如此下结论：
1．西黄丸能够明显抑制乳腺癌(MCF-7)细胞的增殖，其血清浓度与抑制率呈现正相关。
2．西黄丸含药血清可抑制人乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞生长，并可干扰其细胞周期。因西黄丸含药血清早期主要影响细胞进入G_(2/M)期，后期主要使细胞停滞于G_(0/1)期。由于大部分细胞停滞在DNA合成前期，抑制了癌细胞的增殖而导致其发生凋亡，因此，推断干扰细胞周期可能是其抗癌作用的重要机制。
3．西黄丸能够明显抑制人卵巢癌(SK-OV-3)细胞的增殖，其血清浓度与抑制率呈现正相关。
4．西黄丸通过对卵巢癌SK-OV-3细胞周期的显著影响，将其阻滞于S期并抑制其增殖最终导致卵巢癌SK-OV-3细胞的凋亡是其治疗人类卵巢癌的重要机制。
Objective: To investigate the effects of Xihuang pill drug serum on the growthand the cell cycle of breast carcinoma cell (MCF-7) and ovary carcinoma cell(SK-OV-3). Method: activity of tumor cell was detected by MIT and cell cycle wasanalyzed by flow cytometry. Result: Xihuang pill drug serum had an inhibitory effecton breast carcinoma cell (MCF-7) and, ovary carcinoma cell (SK-OV-3) which waspositively related with the drug content. Typital morphological changes of apoptosiswere observed under the transmission electron microscope. FCM showed that the cellcycle treated with Xihuang pill drug serum for 24h, the ration of cells in S phaseincreased, while that in G_(2/M) phase decreased; after 48h treatment, the ratio of cells inG_(0/1) phase increased, and S phase decreased. Based on these data, we can concludethat Xihuang pill drug serum can inhibit the growth of breast carcinoma cell(MCF-7)and its cell cycle in vitro.
And the typital morphological changes of apoptosis were also observed under thetransmission electron microscope. Cell cycle analyzed by FCM indicated that 72hafter Xihuang pill serum treated, the ration of cells in S phase increased and that inG_2/M phase decreased. The conclusion resulted from the data related above is thatXihuang pill serum inhibit the growth and cell cycle of ovary carcinomacell(SK-OV-3) in vitro.Cell cycle analyzed by FCM indicated that 72h after Xihuangpill serum treated, the ration of cells in S phase increased and that in G_(2/M) phasedecreased.
引文
[1] 方文贤．中医名方临床秘用．中国中医药出版社，1993：375
[2] 谢鸣．中医方剂现代研究．第1版．1997：1611
[3] 刘春安，等．抗癌中药大辞典．湖北科学技术出版社，1994：200
[4] 张民庆，等．抗肿瘤中药的临床应用．第1版．人民卫生出版社，1998：276
[5] Bayer BM, et al J Pharmacol Exp Ther 1979, 210(1): 106
[6] Demarcq C ,et al Cell Growth Differ.1994, 5(9): 983
[7] 李仪奎．中药血清药理学实验方法的若干问题．中药新药与临床药理，1999，10(2)： 951
[8] 李杰，刘玉琴．MTT法在肿瘤研究中的改良及应用进展．中国肿瘤临床，1998，25(4)： 312
[9] Hiroko Iwama, Sakae Amagaya, Yukio Ogihara. Effect of shosaikoto, a Japanese and Chinese herbal medicinal mixture, on the mitogenic a ctivityof Lipopolysaccharide. A new pharmacological testing method[J].Ethnopharma-cology, 1987, 211(1): 45-48
[10] 田代真一“血清药理学血消药化学”——汉方药理学始药物血中浓度测定新世界．TDM研究，1988，7(5)：54-55
[11] 崔晓兰，贺玉琢，高英杰，等．中药复方血清药理研究方法学探讨—Ⅰ[J]．中国实验方剂学杂志，1998，4(2)：15—18
[12] Sakae Amagaya, Kazumichi, Akira Miyake, et al. A new pharmacologicaltesting method-different effects of levamisok and serum of orally treatedwith levamisole on mitogenic activity of lipoplysaccharide[J].Chem AharmBull, 1989,37(4):1117-1125
[13] 崔晓兰，贺玉琢，高英杰，等．中药复方血清药理研究方法学探讨—Ⅳ[J]中国实验方剂学杂志，2000，6(2)：13-15
[14] 刘成海．中药复方药理研究的几点思考[J]，中西医结合学报，2003，1(2)：86-88
[15] 薛岚．近年中药药理研究进展[J]．中药药理与临床，2000，16(1)：46—48
[16] 闰怀忠．血清药理学在中医药研究中的应用(J]．实用医技杂志，2003， 10(8)：882-885
[17] 包金风．中药血清药理学的方法研究概述[J]．药学进展，1998，4(2)：89-92
[18] 程珠炉，洪浩．中药血清药理学研究方法几点思考[J]．安徽中医学院学报，2001，20(2)：53-55
[19] 王力倩，李仪奎．血清药理学方法研究探索[J]．中药药理与临床，1997，13(3)：29-31
[20] 韩克起，凌昌全．中药体外抗肿瘤效应血清药理学研究现状与前景[J]．中国中西医结合杂志，2003，23(9)：717-719
[21] Thompson C. B.. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease[J]. Sciense, 1995, 267(1): 1456-1463.
[22] WalkerC., RobertsonL., MyskowM., etal. Expressiono ft heBcl-2 protein in normal and dy sp las tic bronchialepithelium and in lung carcinomas[J]. Br J Cancer, 1995, 72(1): 164-169.
[23] Nakopoulou L, Stefanaki K., Vourlakou C., et al, Bcl-2 protein expression in acute and chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellularcarcinoma. Pathol Res Pract, 1999, 195(1): 19-24
[24] Si nghB.B., ChandlerF.W., Whit a kerS.B., etal. Immunohistochemicalevaluation of 6cl-2 oncoprotein in oral dysplasia and carcinoma[J]. OralPathol, 1998, 85(1): 692-698
[25] Fioren6no M., Errco A-A ltimariA., et al. High levels orb CL-2 messenger RNA detected by in situ hybridization in human hepatocellular andcholangiocellular carcinomas[J]. Diagn Mol Pathol, 1999, 8(1): 189-194.
[26] Li H. L., ChenD. D, LiX. H, etal. Changeso fp53, Bcl-2a ndc aspase in a poptosisi nducedb yJ TE-522i nh umang astrica denocarcinomac elll ineiGScel ls[J]. WorldJ G astroenterol, 2002; 8 (2): 431-435
[27] Cu i R.T., CaiG., YinZ.B., eta 1. Transr etinoicacidi nhibitsr atsg astricep ithelial dysplasia induced by N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine: inf luenceso nc ella poptosisa nde xpressiono fi tsr egulatoryg enes[J]WorldJ G astroenterol, 2001,7(1): 394-398
[28] Ch ia C. T., Yeh T.S , Hsu J.C., et al. Expression of B cl-2f amily mod ulatedt hroughp 53-dependentP athwayi nh umanh epatocellularc arcinoma[J].Science, 2003,48(4):670-676
[29] Gr eenD.R, ReedJ.C..M itochondriaa nda poptosis[J]. Science, 1998,281
[30] Pe zzella F-GatterK.What is they alueo fb cl-2p roteind etection for histopathologists[J]. Histopathology, 1995,26(1):89-93
[31] Ya ngI, LiuX., BhallaK., etal. P reventiono fapoptosisb yB ci-2 :release of cytochrome from mitochondria blocked[J].Science, 1997,275(5303):1129-1131
[32] 刘长利，吴苏东，王慧川，等．中药复方“参臼胶直”对肝癌细胞抑制作用的实验研究．肿瘤研究与临床[J]．2002，14(3)：147-151
[33] 李艳荣，刘云鹏．蟾蛤毒素的抗肿瘤作用．国外医学中医中药分册[J]．2002，24(3)：152-155．
[34] 李秀荣，张丹，齐元富，等．消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究[J]．中国中西医结合杂志，2001，21(9)：684-687
[35] 罗俊卿，刘况．氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究[J]．中国现代医学杂志，2003，20(6)：30-31
[36] GreenD. R. Apoptotsis:Deathd eceiver[J].Nature, 1998,396(17):629-630.
[37] MedrederA.E., JohnsenA.C., HauxJ., etal. Regulationo fF asa ndF asligand expression in NK cell by cytokine and the involvement of Fas ligandin NK/LAK cell mediatiated ctyotoxicity[J]. Cytokine, 1997,96(6):394-404.
[38] Higaki K., Yano H., Kijito M.. Fasantigen expressionand its relationship with apoptosis in human hepatocellular carcinoma and non-canceroustissues[J]. Am J Pathol,1996,149(2):429-437
[39] Strand S., Hofmann WJ., Hug H., et al. lymphocyteapoptosis induced by CD95(Apo-1/Fas) ligand-expressing, tumor cells:A mechanism of immune version[J]. Nature Med, 1996,2(12):1361-1366
[40] ZhangC, AoZ., SethA., eta l. Am itochondrialm embrancep rotein de fined by a novel monoclonal antibody is preferentially detected inapoptotic cells[J]. Immunology, 1996,57(1):3980-3987.
[41] Metivier D.,Dallaporta B., Zamzamin., eta l. Cy tofluorometricd etectionof Mitochondrial alterations in early CDve/Fas/APO-1 trigered apoptosis ofJurkat T lymphoma cells. Co mparesio n of seven mitochondrians Spe~ificfluorochromes[J]. Immunology, 1998, 61(2): 157-163
[1] 杨传标，徐克成．中药的抗肿瘤作用．国际医药卫生导报，2004，10(18)：9—12．
[2] 韩玉英，丰平，文朝阳．抗癌中草药研究进展[J]．北京中医杂志，2003，22 (2) ：45．
[3] 汪红，王强，余国奠．近十年抗肿瘤中药的研究进展[J]．中国野生植物资源，1999，19(3)：7-10．
[4] 孙访宪．抗肿瘤转移治疗研究进展．国外医学肿瘤分册，1996，23(4)：203—206．
[5] 程晓东．中药扶正方对小鼠Lewis肺癌的疗效及其免疫学机理的研究．中国中西医结合杂志，1997，17(2)：88—90．
[6] 何赛萍．中药抗肿瘤研究思路．浙江中医学院学报，25(4)：61—62．
[7] 原志庆，高冀辉，张春光，等．六味中药阻断食管上皮癌变的实验研究[J]．河南肿瘤学杂志，1998，11(5)：396—397．
[8] 刘晨江，赵志鸿．冬凌草的研究进展[J]．中国药学杂志，1998，33 (10)：577-581．
[9] 孙六合，曹健美．抗癌膏穴贴及内服中药对荷瘤小鼠脾LAK细胞活性和SIL-2R水平的影响[J]．河南中医，2001，21(3)：15-17．
[10] 曾元璋．10种有毒中草药抗肿瘤作用浅析[J]．湖南中医药导报，1988，4 (5) ：8．
[11] 赵培荣，田爱琴，马湘玲，等．山豆根对人食管癌细胞株(Eca-109)杀伤、抑制及脱氧氢酶类的影响[J]，河南肿瘤学杂志，1998，11(2)：87-89．
[12] 侯俊民，束永前，赵志泉．紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响[J]．南京医科大学学报，2001，21(3)：235-238．
[13] Iwama H. Effector of Shosaikoto, a Japanese and Chinese traditional herbal medicinal mixture on the mitogenic activity of lipopolysaccharide: A new pharmacology testing methord [J]. J E thnopharmacal, 1987, 211: 45.
[14] 刘胜，吴雪卿，陆德铭，等．温肾活血中药对乳腺癌细胞株MCF-7细胞株体 内外生长的影响[J]．中国中医基础医学杂志，2001，7(1)：54-57．
[15] 孟志强，郭伟剑，于尔辛，等．健脾理气方药物血清对肝癌细胞端粒酶活性及凋亡的影响[J]．世界华人消化杂志，2000，8(8)：879-882．
[16] 徐立春，陈平，孙振华，等．SC及NDV修饰的瘤苗治疗胃癌的实验疗效研究[J]．肿瘤防治杂志，2002，9(4)：368-370．
[17] 秦善文，郑玉玲．抗肿瘤中药实验研究进展．河南中医，2005，25(2)：76—78．
[18] 张永清，黄高异，刘红娟，等．苦参碱诱导K562细胞分化向的研究．肿瘤学杂志，2004，10(1)：25-27．
[19] 刘杰麟，费樱．粉被虫草提取物对巨噬纭沦百笠功能及CTL活性的影响．贵阳医学院学报，1998，23(4)：346～348．
[20] 张庆，雷从生，杨淑琴，等．大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其RNA表达的影响．第一军医大学学报，2001，21(8)：592～594．
[21] 程晓东，郭峰，刘嘉湘，等．中药扶正方对小鼠Lew is肺癌的疗效及其免疫学机理的研究．中国中西医结合杂志，1997，17(2)：88～90．
[22] 张丽，严宣佐，周勇，等．凯息平口服液对H’22小鼠的抑瘤作用及抑瘤机理探讨．北京中医药大学学报，1999，22(5)：60～63．
[23] 胡芳，刘伯阳，姚淑娟．小柴胡汤对荷疤．I．Y53免疫功能的影响，中国药业，2003，12(4)：42～43．
[24] 李际君．启隔散抗肿瘤和免疫调节作用的实验研究．河北医科大学硕士研究生毕业论文，2004．
[25] 朱世杰，李佩文，贾立群．平肺口服液对荷瘤小鼠细胞增殖的双向调节作用，中西医结合学报，2003，1(3)：202～204．
[26] 金和箔，曹颖林，程秀娟，等．复方木鸡冲剂的抑瘤、保肝降酶作用的研究．时珍国医药研究，1996，7(2)：87～88．
[27] 茅敏，黄秀深，贾波．小柴胡汤诱导单核细胞产生肿瘤坏死因子的实验研究．成都中医药大学学报，2003，26(4)：35～36．
[28] 谷善青．复方白龙片对人胃癌细胞两条信号通路的调控．中国中西医结合杂志，1997，17(7)：404-407．
[29] 李笑弓．鸦胆子油静脉乳剂对人肾癌影响的实验研究．临床泌尿外科杂志， 1998，13(2)：82-84．
[30] 李杰．中药狼毒抗癌作用研究进展．中医研究，1996，9(5)：44-45．
[31] 曾小莉，涂植光．人参皂贰Rh2对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用。癌症，2004，23(8)：879-884．
[32] 董倩，姜达．实体瘤诱导分化治疗现状．肿瘤学杂志，2004，10(6)：443-446．
[33] 杨骅，王仙平，郁琳琳，等．榄香烯抗肿瘤作用与诱发肿瘤细胞凋亡．中华肿瘤杂志，1996，18(3)：169
[34] 曾郁敏，顾立刚，王月齐，等．白首乌甙诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究．中国中医药信息杂志，2000，7(6)：25
[35] Chert GQ, Zhu J, Shi XG, et al. In vitro studies oncellular and molecular mechanisms of arsenic trioxide(AS203) in the treatment of acute prom yeolcyticleukemia: AS203 induces NB4 cell apoptosm with downregulation of bcl-2 expression and modulation of PMLEARd/PML proteins, 1996; 88(3): 1052
[36] 齐振华，谭柏林，钟美佐，等．乳香提取物与化疗药物联合治疗急性非淋巴细胞性白血病临床研究．湖南中医学院学报，1999，19(3)：37
[37] Folkman J. Clinical applications of research onangiogenesis. N Eng/J Med 1995, 333: 1775
[38] 刘重贞．结直肠癌患者肿瘤血管形成的临床病理意义初探．临床消化病杂志，2000，11(4)：175
[39] 陈瑞东．对癌症有效的中药方剂．北京：中国医药出版社，1992：317
[40] 李家琦，夏英．中药诱导干扰素作用的探索．上海中医药杂志1994，(1)：34
[41] Lee DY, Yasuda M, Yamamoto T, et al. Bufalininhibits endothelial cell proliferation and angiogenesisin vitro. Life Sci. 1997, 60(2): 127
[42] 姜晓玲．薏苡仁注射液对血管生成的影响．肿瘤，2000，20(4)：313
[43] 华海清，秦叔逵，王锦鸿，等．三氧化二砷抗肿瘤血管形成研究．世界华人消化杂志，2004，12(1)：27
[44] 许文林，敖忠芳，陈玉心，等．汉防己甲素对柔红霉素和长春新碱增效作用的实验研究．中华血液学杂志，1994，15(5)：256-257．
[45] 敖忠芳，夏薇．汉防己甲素逆转白血病细胞耐药的研究．中华血液学杂志，1995，16(5)：235-237．
[46] 胡凯文，陈信义．中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外筛选研究．中国医药学报，1998，13(2)：10-12．
[47] 巧胡凯文，郑洪霞，齐静，等．浙贝母碱逆转白血病细胞多药耐药的研究．中华血液学杂志，1999，20(12)：650-651．
[48] 蔡宇．补骨脂素逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的研究．肿瘤，2004，24(3)：240-241．
[49] 袁静．槲皮素抗肿瘤作用研究进展．国外医学中医中药分册，1996，18(4)：3-5．
[50] 谷善青．复方白龙片对人胃癌细胞两条信号通路的调控．中国中西医结合杂志，1997，17(7)：404-407．
[51] 孙桂芝，王桂绵，唐文秀等．加味西黄丸治疗晚期恶性肿瘤157例临床观察[J]．中成药，1990，10(2)：44．
[52] 尹龙，徐亮，胡格，索占伟，段慧琴，杨佐君，高立云，穆祥．抗肿瘤中药及其有效成分的作用研究现状[J]．动物医学进展，2006，27(1)：39243．
[53] 卢雯平．晚期乳腺癌的综合治疗[J]．中国肿瘤，1999，8(10)：445．
[54] 杨宇飞．晚期非小细胞肺癌中西医治疗[J]．中国临床医生，2001，29(12)：9-13．
[55] 曾立志，丁章森．西黄丸配合他莫昔芬治疗乳腺增生症132例临床观察[J]．中国基层医药，2003，10(2)：171．
[56] 史青春，许丽杰，孙本林．四神丸合西黄丸治疗溃疡性结肠炎68例[J]．实用中医内科杂志，1994，8(1)：23．
[57] 司雁菱，武秀文．西黄丸治疗疣状胃炎20例[J]．中成药，1996，18(4)：52．
[58] 苗后清，陈恩华．西黄丸治疗急性下肢丹毒11例[J]．河北中医，1993，15(6)：28．
[59] 李桂秋，刘亚林，许建文等．西黄丸治疗带状疱疹[J]．中成 药，1995，17(3)：48．
[60] 孙刚，姚健．西黄丸治疗非化脓性肋软骨炎38例[J]．中西医结合杂志，1990，10(4)：202．
[61] 李桂清，韩玉莉．西黄丸治疗舌下肿块3例[J]．中医药信息，1994，11(3)：46．
[62] 崔景朝，陈玉兴，周瑞玲．清胃散单煎与合煎药理作用比较[J]．中国药理与临床，1998，13(2)：26．
[63] 陈玉兴，简雪芹，孙兰，等．逍遥散分煎与合煎药理作用比较研究[J]．中国实验方剂学杂志，2000，6(4)：36．
[64] 乐江，程军，汪晖等．少腹逐瘀汤分煎与合煎药理作用对比研究[J]．中成药，2002，24(11)：888．
[65] 丘晨波编著．中药提取制剂技术和质量监控[M]．中国医学科技出版社 1995
[66] 马凤友．西黄丸外用一得[J]．中成药，1991，13(12)：45．
[67] 熊鹰，孔小云，陈如山，刘新民，金庆文．复方西黄丸含药血清体外抗癌作用研究．中国中西医结合消化杂志第9卷第4期．
[68] 李仪奎．血清药理学实验方法的若干问题[J]．中药新药与临床药理，1999，10(2)：951
[69] 李杰，刘玉琴．MTT法在肿瘤研究中的改良及应用进展[J]．中国肿瘤临床，1998，25(4)：312．
[70] O' Reilly, M. S. et al. Endo stat in: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor grow th. Cell, 1997, 88: 277～285.
[71] 成军主编．程序化细胞死亡与疾病．北京：北京医科大学与中国协和医科大学联合出版社．1997．2～5．
[72] Coopman QJP, et al. The SYK tyro sine Kinase supp ressesM alignant grow th of human breast cancer cells, nature, 2000, 17:742～746.
[2] 谢鸣．中医方剂现代研究．第1版．1997：1611
[3] 刘春安，等．抗癌中药大辞典．湖北科学技术出版社，1994：200
[4] 张民庆，等．抗肿瘤中药的临床应用．第1版．人民卫生出版社，1998：276
[5] Bayer BM, et al J Pharmacol Exp Ther 1979, 210(1): 106
[6] Demarcq C ,et al Cell Growth Differ.1994, 5(9): 983
[7] 李仪奎．中药血清药理学实验方法的若干问题．中药新药与临床药理，1999，10(2)： 951
[8] 李杰，刘玉琴．MTT法在肿瘤研究中的改良及应用进展．中国肿瘤临床，1998，25(4)： 312
[9] Hiroko Iwama, Sakae Amagaya, Yukio Ogihara. Effect of shosaikoto, a Japanese and Chinese herbal medicinal mixture, on the mitogenic a ctivityof Lipopolysaccharide. A new pharmacological testing method[J].Ethnopharma-cology, 1987, 211(1): 45-48
[10] 田代真一“血清药理学血消药化学”——汉方药理学始药物血中浓度测定新世界．TDM研究，1988，7(5)：54-55
[11] 崔晓兰，贺玉琢，高英杰，等．中药复方血清药理研究方法学探讨—Ⅰ[J]．中国实验方剂学杂志，1998，4(2)：15—18
[12] Sakae Amagaya, Kazumichi, Akira Miyake, et al. A new pharmacologicaltesting method-different effects of levamisok and serum of orally treatedwith levamisole on mitogenic activity of lipoplysaccharide[J].Chem AharmBull, 1989,37(4):1117-1125
[13] 崔晓兰，贺玉琢，高英杰，等．中药复方血清药理研究方法学探讨—Ⅳ[J]中国实验方剂学杂志，2000，6(2)：13-15
[14] 刘成海．中药复方药理研究的几点思考[J]，中西医结合学报，2003，1(2)：86-88
[15] 薛岚．近年中药药理研究进展[J]．中药药理与临床，2000，16(1)：46—48
[16] 闰怀忠．血清药理学在中医药研究中的应用(J]．实用医技杂志，2003， 10(8)：882-885
[17] 包金风．中药血清药理学的方法研究概述[J]．药学进展，1998，4(2)：89-92
[18] 程珠炉，洪浩．中药血清药理学研究方法几点思考[J]．安徽中医学院学报，2001，20(2)：53-55
[19] 王力倩，李仪奎．血清药理学方法研究探索[J]．中药药理与临床，1997，13(3)：29-31
[20] 韩克起，凌昌全．中药体外抗肿瘤效应血清药理学研究现状与前景[J]．中国中西医结合杂志，2003，23(9)：717-719
[21] Thompson C. B.. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease[J]. Sciense, 1995, 267(1): 1456-1463.
[22] WalkerC., RobertsonL., MyskowM., etal. Expressiono ft heBcl-2 protein in normal and dy sp las tic bronchialepithelium and in lung carcinomas[J]. Br J Cancer, 1995, 72(1): 164-169.
[23] Nakopoulou L, Stefanaki K., Vourlakou C., et al, Bcl-2 protein expression in acute and chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellularcarcinoma. Pathol Res Pract, 1999, 195(1): 19-24
[24] Si nghB.B., ChandlerF.W., Whit a kerS.B., etal. Immunohistochemicalevaluation of 6cl-2 oncoprotein in oral dysplasia and carcinoma[J]. OralPathol, 1998, 85(1): 692-698
[25] Fioren6no M., Errco A-A ltimariA., et al. High levels orb CL-2 messenger RNA detected by in situ hybridization in human hepatocellular andcholangiocellular carcinomas[J]. Diagn Mol Pathol, 1999, 8(1): 189-194.
[26] Li H. L., ChenD. D, LiX. H, etal. Changeso fp53, Bcl-2a ndc aspase in a poptosisi nducedb yJ TE-522i nh umang astrica denocarcinomac elll ineiGScel ls[J]. WorldJ G astroenterol, 2002; 8 (2): 431-435
[27] Cu i R.T., CaiG., YinZ.B., eta 1. Transr etinoicacidi nhibitsr atsg astricep ithelial dysplasia induced by N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine: inf luenceso nc ella poptosisa nde xpressiono fi tsr egulatoryg enes[J]WorldJ G astroenterol, 2001,7(1): 394-398
[28] Ch ia C. T., Yeh T.S , Hsu J.C., et al. Expression of B cl-2f amily mod ulatedt hroughp 53-dependentP athwayi nh umanh epatocellularc arcinoma[J].Science, 2003,48(4):670-676
[29] Gr eenD.R, ReedJ.C..M itochondriaa nda poptosis[J]. Science, 1998,281
[30] Pe zzella F-GatterK.What is they alueo fb cl-2p roteind etection for histopathologists[J]. Histopathology, 1995,26(1):89-93
[31] Ya ngI, LiuX., BhallaK., etal. P reventiono fapoptosisb yB ci-2 :release of cytochrome from mitochondria blocked[J].Science, 1997,275(5303):1129-1131
[32] 刘长利，吴苏东，王慧川，等．中药复方“参臼胶直”对肝癌细胞抑制作用的实验研究．肿瘤研究与临床[J]．2002，14(3)：147-151
[33] 李艳荣，刘云鹏．蟾蛤毒素的抗肿瘤作用．国外医学中医中药分册[J]．2002，24(3)：152-155．
[34] 李秀荣，张丹，齐元富，等．消瘤平移合剂含药血清诱导肝癌H-7402细胞凋亡的实验研究[J]．中国中西医结合杂志，2001，21(9)：684-687
[35] 罗俊卿，刘况．氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究[J]．中国现代医学杂志，2003，20(6)：30-31
[36] GreenD. R. Apoptotsis:Deathd eceiver[J].Nature, 1998,396(17):629-630.
[37] MedrederA.E., JohnsenA.C., HauxJ., etal. Regulationo fF asa ndF asligand expression in NK cell by cytokine and the involvement of Fas ligandin NK/LAK cell mediatiated ctyotoxicity[J]. Cytokine, 1997,96(6):394-404.
[38] Higaki K., Yano H., Kijito M.. Fasantigen expressionand its relationship with apoptosis in human hepatocellular carcinoma and non-canceroustissues[J]. Am J Pathol,1996,149(2):429-437
[39] Strand S., Hofmann WJ., Hug H., et al. lymphocyteapoptosis induced by CD95(Apo-1/Fas) ligand-expressing, tumor cells:A mechanism of immune version[J]. Nature Med, 1996,2(12):1361-1366
[40] ZhangC, AoZ., SethA., eta l. Am itochondrialm embrancep rotein de fined by a novel monoclonal antibody is preferentially detected inapoptotic cells[J]. Immunology, 1996,57(1):3980-3987.
[41] Metivier D.,Dallaporta B., Zamzamin., eta l. Cy tofluorometricd etectionof Mitochondrial alterations in early CDve/Fas/APO-1 trigered apoptosis ofJurkat T lymphoma cells. Co mparesio n of seven mitochondrians Spe~ificfluorochromes[J]. Immunology, 1998, 61(2): 157-163
[1] 杨传标，徐克成．中药的抗肿瘤作用．国际医药卫生导报，2004，10(18)：9—12．
[2] 韩玉英，丰平，文朝阳．抗癌中草药研究进展[J]．北京中医杂志，2003，22 (2) ：45．
[3] 汪红，王强，余国奠．近十年抗肿瘤中药的研究进展[J]．中国野生植物资源，1999，19(3)：7-10．
[4] 孙访宪．抗肿瘤转移治疗研究进展．国外医学肿瘤分册，1996，23(4)：203—206．
[5] 程晓东．中药扶正方对小鼠Lewis肺癌的疗效及其免疫学机理的研究．中国中西医结合杂志，1997，17(2)：88—90．
[6] 何赛萍．中药抗肿瘤研究思路．浙江中医学院学报，25(4)：61—62．
[7] 原志庆，高冀辉，张春光，等．六味中药阻断食管上皮癌变的实验研究[J]．河南肿瘤学杂志，1998，11(5)：396—397．
[8] 刘晨江，赵志鸿．冬凌草的研究进展[J]．中国药学杂志，1998，33 (10)：577-581．
[9] 孙六合，曹健美．抗癌膏穴贴及内服中药对荷瘤小鼠脾LAK细胞活性和SIL-2R水平的影响[J]．河南中医，2001，21(3)：15-17．
[10] 曾元璋．10种有毒中草药抗肿瘤作用浅析[J]．湖南中医药导报，1988，4 (5) ：8．
[11] 赵培荣，田爱琴，马湘玲，等．山豆根对人食管癌细胞株(Eca-109)杀伤、抑制及脱氧氢酶类的影响[J]，河南肿瘤学杂志，1998，11(2)：87-89．
[12] 侯俊民，束永前，赵志泉．紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响[J]．南京医科大学学报，2001，21(3)：235-238．
[13] Iwama H. Effector of Shosaikoto, a Japanese and Chinese traditional herbal medicinal mixture on the mitogenic activity of lipopolysaccharide: A new pharmacology testing methord [J]. J E thnopharmacal, 1987, 211: 45.
[14] 刘胜，吴雪卿，陆德铭，等．温肾活血中药对乳腺癌细胞株MCF-7细胞株体 内外生长的影响[J]．中国中医基础医学杂志，2001，7(1)：54-57．
[15] 孟志强，郭伟剑，于尔辛，等．健脾理气方药物血清对肝癌细胞端粒酶活性及凋亡的影响[J]．世界华人消化杂志，2000，8(8)：879-882．
[16] 徐立春，陈平，孙振华，等．SC及NDV修饰的瘤苗治疗胃癌的实验疗效研究[J]．肿瘤防治杂志，2002，9(4)：368-370．
[17] 秦善文，郑玉玲．抗肿瘤中药实验研究进展．河南中医，2005，25(2)：76—78．
[18] 张永清，黄高异，刘红娟，等．苦参碱诱导K562细胞分化向的研究．肿瘤学杂志，2004，10(1)：25-27．
[19] 刘杰麟，费樱．粉被虫草提取物对巨噬纭沦百笠功能及CTL活性的影响．贵阳医学院学报，1998，23(4)：346～348．
[20] 张庆，雷从生，杨淑琴，等．大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其RNA表达的影响．第一军医大学学报，2001，21(8)：592～594．
[21] 程晓东，郭峰，刘嘉湘，等．中药扶正方对小鼠Lew is肺癌的疗效及其免疫学机理的研究．中国中西医结合杂志，1997，17(2)：88～90．
[22] 张丽，严宣佐，周勇，等．凯息平口服液对H’22小鼠的抑瘤作用及抑瘤机理探讨．北京中医药大学学报，1999，22(5)：60～63．
[23] 胡芳，刘伯阳，姚淑娟．小柴胡汤对荷疤．I．Y53免疫功能的影响，中国药业，2003，12(4)：42～43．
[24] 李际君．启隔散抗肿瘤和免疫调节作用的实验研究．河北医科大学硕士研究生毕业论文，2004．
[25] 朱世杰，李佩文，贾立群．平肺口服液对荷瘤小鼠细胞增殖的双向调节作用，中西医结合学报，2003，1(3)：202～204．
[26] 金和箔，曹颖林，程秀娟，等．复方木鸡冲剂的抑瘤、保肝降酶作用的研究．时珍国医药研究，1996，7(2)：87～88．
[27] 茅敏，黄秀深，贾波．小柴胡汤诱导单核细胞产生肿瘤坏死因子的实验研究．成都中医药大学学报，2003，26(4)：35～36．
[28] 谷善青．复方白龙片对人胃癌细胞两条信号通路的调控．中国中西医结合杂志，1997，17(7)：404-407．
[29] 李笑弓．鸦胆子油静脉乳剂对人肾癌影响的实验研究．临床泌尿外科杂志， 1998，13(2)：82-84．
[30] 李杰．中药狼毒抗癌作用研究进展．中医研究，1996，9(5)：44-45．
[31] 曾小莉，涂植光．人参皂贰Rh2对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用。癌症，2004，23(8)：879-884．
[32] 董倩，姜达．实体瘤诱导分化治疗现状．肿瘤学杂志，2004，10(6)：443-446．
[33] 杨骅，王仙平，郁琳琳，等．榄香烯抗肿瘤作用与诱发肿瘤细胞凋亡．中华肿瘤杂志，1996，18(3)：169
[34] 曾郁敏，顾立刚，王月齐，等．白首乌甙诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究．中国中医药信息杂志，2000，7(6)：25
[35] Chert GQ, Zhu J, Shi XG, et al. In vitro studies oncellular and molecular mechanisms of arsenic trioxide(AS203) in the treatment of acute prom yeolcyticleukemia: AS203 induces NB4 cell apoptosm with downregulation of bcl-2 expression and modulation of PMLEARd/PML proteins, 1996; 88(3): 1052
[36] 齐振华，谭柏林，钟美佐，等．乳香提取物与化疗药物联合治疗急性非淋巴细胞性白血病临床研究．湖南中医学院学报，1999，19(3)：37
[37] Folkman J. Clinical applications of research onangiogenesis. N Eng/J Med 1995, 333: 1775
[38] 刘重贞．结直肠癌患者肿瘤血管形成的临床病理意义初探．临床消化病杂志，2000，11(4)：175
[39] 陈瑞东．对癌症有效的中药方剂．北京：中国医药出版社，1992：317
[40] 李家琦，夏英．中药诱导干扰素作用的探索．上海中医药杂志1994，(1)：34
[41] Lee DY, Yasuda M, Yamamoto T, et al. Bufalininhibits endothelial cell proliferation and angiogenesisin vitro. Life Sci. 1997, 60(2): 127
[42] 姜晓玲．薏苡仁注射液对血管生成的影响．肿瘤，2000，20(4)：313
[43] 华海清，秦叔逵，王锦鸿，等．三氧化二砷抗肿瘤血管形成研究．世界华人消化杂志，2004，12(1)：27
[44] 许文林，敖忠芳，陈玉心，等．汉防己甲素对柔红霉素和长春新碱增效作用的实验研究．中华血液学杂志，1994，15(5)：256-257．
[45] 敖忠芳，夏薇．汉防己甲素逆转白血病细胞耐药的研究．中华血液学杂志，1995，16(5)：235-237．
[46] 胡凯文，陈信义．中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外筛选研究．中国医药学报，1998，13(2)：10-12．
[47] 巧胡凯文，郑洪霞，齐静，等．浙贝母碱逆转白血病细胞多药耐药的研究．中华血液学杂志，1999，20(12)：650-651．
[48] 蔡宇．补骨脂素逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的研究．肿瘤，2004，24(3)：240-241．
[49] 袁静．槲皮素抗肿瘤作用研究进展．国外医学中医中药分册，1996，18(4)：3-5．
[50] 谷善青．复方白龙片对人胃癌细胞两条信号通路的调控．中国中西医结合杂志，1997，17(7)：404-407．
[51] 孙桂芝，王桂绵，唐文秀等．加味西黄丸治疗晚期恶性肿瘤157例临床观察[J]．中成药，1990，10(2)：44．
[52] 尹龙，徐亮，胡格，索占伟，段慧琴，杨佐君，高立云，穆祥．抗肿瘤中药及其有效成分的作用研究现状[J]．动物医学进展，2006，27(1)：39243．
[53] 卢雯平．晚期乳腺癌的综合治疗[J]．中国肿瘤，1999，8(10)：445．
[54] 杨宇飞．晚期非小细胞肺癌中西医治疗[J]．中国临床医生，2001，29(12)：9-13．
[55] 曾立志，丁章森．西黄丸配合他莫昔芬治疗乳腺增生症132例临床观察[J]．中国基层医药，2003，10(2)：171．
[56] 史青春，许丽杰，孙本林．四神丸合西黄丸治疗溃疡性结肠炎68例[J]．实用中医内科杂志，1994，8(1)：23．
[57] 司雁菱，武秀文．西黄丸治疗疣状胃炎20例[J]．中成药，1996，18(4)：52．
[58] 苗后清，陈恩华．西黄丸治疗急性下肢丹毒11例[J]．河北中医，1993，15(6)：28．
[59] 李桂秋，刘亚林，许建文等．西黄丸治疗带状疱疹[J]．中成 药，1995，17(3)：48．
[60] 孙刚，姚健．西黄丸治疗非化脓性肋软骨炎38例[J]．中西医结合杂志，1990，10(4)：202．
[61] 李桂清，韩玉莉．西黄丸治疗舌下肿块3例[J]．中医药信息，1994，11(3)：46．
[62] 崔景朝，陈玉兴，周瑞玲．清胃散单煎与合煎药理作用比较[J]．中国药理与临床，1998，13(2)：26．
[63] 陈玉兴，简雪芹，孙兰，等．逍遥散分煎与合煎药理作用比较研究[J]．中国实验方剂学杂志，2000，6(4)：36．
[64] 乐江，程军，汪晖等．少腹逐瘀汤分煎与合煎药理作用对比研究[J]．中成药，2002，24(11)：888．
[65] 丘晨波编著．中药提取制剂技术和质量监控[M]．中国医学科技出版社 1995
[66] 马凤友．西黄丸外用一得[J]．中成药，1991，13(12)：45．
[67] 熊鹰，孔小云，陈如山，刘新民，金庆文．复方西黄丸含药血清体外抗癌作用研究．中国中西医结合消化杂志第9卷第4期．
[68] 李仪奎．血清药理学实验方法的若干问题[J]．中药新药与临床药理，1999，10(2)：951
[69] 李杰，刘玉琴．MTT法在肿瘤研究中的改良及应用进展[J]．中国肿瘤临床，1998，25(4)：312．
[70] O' Reilly, M. S. et al. Endo stat in: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor grow th. Cell, 1997, 88: 277～285.
[71] 成军主编．程序化细胞死亡与疾病．北京：北京医科大学与中国协和医科大学联合出版社．1997．2～5．
[72] Coopman QJP, et al. The SYK tyro sine Kinase supp ressesM alignant grow th of human breast cancer cells, nature, 2000, 17:742～746.