刚地弓浆虫无性生殖及弓浆虫病病理学研究
摘要
作者采用涂片、染色的经典生物学方法,结合SDS-PAGE技术、RAPD技术、RT-PCR技术对RH株弓浆虫在鼠体内无性生殖的过程进行了考察,从个体水平、蛋白质水平、DNA水平、RNA水平对虫体无性生殖过程中一系列生物学变化进行了描述,同时采用石蜡切片技术对鼠弓浆虫病的病理学作了研究,以期为弓浆虫病的防治提供科学的依据,现将研究结果报告如下:
1、不同的感染方式对鼠活力有不同的影响。弓浆虫RH株速殖子对宿主鼠的急性感染,导致鼠的死亡,但鼠的存活期随感染方式的不同而存在差异,腹腔感染的小鼠死亡时间最早,口腔感染的小鼠次之,S.D.治疗的小鼠存活期明显延长,但不能避免宿主的死亡,第1代液氮冻存复苏的虫体感染力弱,鼠存活期较长,子1代虫体感染力恢复,腹腔感染后鼠在第4天死亡。
2、不同的宿主细胞,虫体在其中增殖的能力不同,以来源于小鼠的巨噬细胞、脾细胞、肾细胞作为宿主细胞,虫体在巨噬细胞中的增殖能力最强,在脾细胞中的增殖能力次之,在肾细胞中的增殖能力最弱;不同发育阶段的虫体,感染力不同,实验结果表明,处于增殖期的虫体,其感染力低,而处于发育成熟期的虫体,感染力强,成熟后突破宿主细胞膜后散出的虫体,感染力最强;处于同一增殖发育阶段的虫体,对不同宿主细胞的感染力也不相同,对鼠巨噬细胞的感染力最大,脾细胞次之,肾细胞的感染力最低;小牛血清的有无对虫体的侵袭力和增殖都有一定的影响,10%的小牛血清可增加虫体的侵袭力,也可增加虫体在宿主细胞内的增殖,未加入小牛血清时,未纯化的速殖子在体外宿主细胞内仍可增殖,但增殖力明显不如加小牛血清组。
3、弓浆虫无性生殖的方式有二裂殖、出芽生殖、裂殖生殖等方式,其中裂殖生殖是最常见的生殖方式,巨噬细胞、肝细胞、脾细胞及心肌细胞中的虫体都可进行裂殖生殖,细胞内和细胞外的虫体也都可进行裂殖生殖。弓浆虫无性生殖时常形成群落,作者所观察到的群落有环型、半环型、玫瑰花
The asexual proliferation of Toxoplasma gondii (RH strain ,international standard strain)in mice were studied with stain technique,SDS-PAGE technique,RAPD technique and RT-PCR technique.The changes in individual level ,protein level,DNA level and RNA level were elabrated in this article.At the same time the pathology of mice toxoplasmosis was studied too.The result showed as follows:1 .The various infection ways affected the life of the mices.The tachyzoites of Toxoplasma gondii (RH strain) always led to the death of the mices.But the ways of infection led to the differences of the mice life .The infected mice with peritoneumly injection died firstly,the mice infectd with mouth innocation died secondly and S.D. could prolong the days of mice life ,but couldn't avoid the death.The infection ability of tachyzoites preserved by liquid Nitric was decreased..2.The proliferation ability of toxoplasma gondii changed with the host cells.It was most strong in M φ and weakest in kedney cells.The infection ability changed with the various maturing stages of Toxoplasma gondii.The tachyzoites in mature stage had the most strong infection ability, could increase the infection ability and proliferation ability of Toxoplasma gondii.3.The production ways of Toxoplasma gondii included binary fission,budding, schizogony.Among these ways schizogony was the most common way and it could be conducted in Mφ s, liver cells,spleen cells and heart cells.Clones were always formed during the asexual production and five pattern clones were oberserved .The characteristic of clone's distributionrelated to the host cells. 4.The tachyzoites could avoid the immune inhibition and proliferated in M φ .The tachyzoites developted after infection and mutured at 72h after infection in the pseudocysts.Matured and free tachyzoites moved actively .
1、不同的感染方式对鼠活力有不同的影响。弓浆虫RH株速殖子对宿主鼠的急性感染,导致鼠的死亡,但鼠的存活期随感染方式的不同而存在差异,腹腔感染的小鼠死亡时间最早,口腔感染的小鼠次之,S.D.治疗的小鼠存活期明显延长,但不能避免宿主的死亡,第1代液氮冻存复苏的虫体感染力弱,鼠存活期较长,子1代虫体感染力恢复,腹腔感染后鼠在第4天死亡。
2、不同的宿主细胞,虫体在其中增殖的能力不同,以来源于小鼠的巨噬细胞、脾细胞、肾细胞作为宿主细胞,虫体在巨噬细胞中的增殖能力最强,在脾细胞中的增殖能力次之,在肾细胞中的增殖能力最弱;不同发育阶段的虫体,感染力不同,实验结果表明,处于增殖期的虫体,其感染力低,而处于发育成熟期的虫体,感染力强,成熟后突破宿主细胞膜后散出的虫体,感染力最强;处于同一增殖发育阶段的虫体,对不同宿主细胞的感染力也不相同,对鼠巨噬细胞的感染力最大,脾细胞次之,肾细胞的感染力最低;小牛血清的有无对虫体的侵袭力和增殖都有一定的影响,10%的小牛血清可增加虫体的侵袭力,也可增加虫体在宿主细胞内的增殖,未加入小牛血清时,未纯化的速殖子在体外宿主细胞内仍可增殖,但增殖力明显不如加小牛血清组。
3、弓浆虫无性生殖的方式有二裂殖、出芽生殖、裂殖生殖等方式,其中裂殖生殖是最常见的生殖方式,巨噬细胞、肝细胞、脾细胞及心肌细胞中的虫体都可进行裂殖生殖,细胞内和细胞外的虫体也都可进行裂殖生殖。弓浆虫无性生殖时常形成群落,作者所观察到的群落有环型、半环型、玫瑰花
The asexual proliferation of Toxoplasma gondii (RH strain ,international standard strain)in mice were studied with stain technique,SDS-PAGE technique,RAPD technique and RT-PCR technique.The changes in individual level ,protein level,DNA level and RNA level were elabrated in this article.At the same time the pathology of mice toxoplasmosis was studied too.The result showed as follows:1 .The various infection ways affected the life of the mices.The tachyzoites of Toxoplasma gondii (RH strain) always led to the death of the mices.But the ways of infection led to the differences of the mice life .The infected mice with peritoneumly injection died firstly,the mice infectd with mouth innocation died secondly and S.D. could prolong the days of mice life ,but couldn't avoid the death.The infection ability of tachyzoites preserved by liquid Nitric was decreased..2.The proliferation ability of toxoplasma gondii changed with the host cells.It was most strong in M φ and weakest in kedney cells.The infection ability changed with the various maturing stages of Toxoplasma gondii.The tachyzoites in mature stage had the most strong infection ability, could increase the infection ability and proliferation ability of Toxoplasma gondii.3.The production ways of Toxoplasma gondii included binary fission,budding, schizogony.Among these ways schizogony was the most common way and it could be conducted in Mφ s, liver cells,spleen cells and heart cells.Clones were always formed during the asexual production and five pattern clones were oberserved .The characteristic of clone's distributionrelated to the host cells. 4.The tachyzoites could avoid the immune inhibition and proliferated in M φ .The tachyzoites developted after infection and mutured at 72h after infection in the pseudocysts.Matured and free tachyzoites moved actively .
引文
1、于恩庶等 1992 弓形虫病学 福建科学技术出版社。
2、刘约翰 1988 寄生虫病化学治疗 西南师范大学出版社。
3、高兴政等 1996 学寄生虫学 北京/协和医科大学联合出版社。
4、[美]D.W.金等1988 病理生物学 人民卫生出版社。
5、赵辉元等 1998 人兽共患寄生虫病 东北朝鲜民族教育出版社。
6、龚志锦等 1993 病理组织制片核染色技术 上海科学技术出版社。
7、姜泊等 1996 分子生物学常用实验方法 人民军医出版社。
8、谢霖崇等 1995 弓形虫在动物宿主的体液和组织涂片中的形态 广东寄生虫学会年报84-85。
9、陈观今等 1995 分离弓形虫及检测弓形虫感染的系列研究 广东寄生虫学会年报 12-16。
10、杨惠珍等 1995 弓形虫人源、畜源分离株的生化特性研究 中国人兽共患病杂志,11(3)16-18。
11、沈继龙等 1993 弓形虫表膜主要分子抗原的免疫印迹分析 中国人兽共患病杂志,9(4):2-3。
12、林爱芬等 1997 弓形虫的部分理化性质研究 中国人兽共患病杂志,13(6):20-22。
13、林爱芬等 1996 脑脊液中弓形虫循环抗原的组分分析 中国寄生虫病防治杂志,9(1):50-52。
14:杨惠珍等 1998 不同毒力株弓形虫对绿猴肾细胞侵袭及增殖的研究中国寄生虫学与寄生虫病杂志,16(3):185-188。
15、蒋早立等 1994 急性弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞功能的变化 中国人兽共患病杂志,10(3):17-18。
16、吴杰 1996 松萝酸抗弓形虫速殖子作用的体外实验和电镜观察 中国寄生虫与寄生虫病杂志,14(1):58-62。
17、李永华等 1996 重组白细胞介素2抗弓形虫作用的实验研究 中国寄生虫病防治杂志,9(2):89-92。
18、夏爱娣等 1996 弓形虫cDNA文库的构建 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,14(2):124-127。
19、陈晓光等 1994 应用聚合酶链反应技术建立弓形虫表面抗原基因的克隆及其序列测定 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,12(2):129。
20、陈观今等 1995 应用地高辛素标记弓形虫DNA探针的制备及在产前诊断中的应用 中国人兽共患病杂志,11(5):7-8。
21、谭若等 1998 IL-4,TNF-α及IFN-r诱导的小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫的作用 中国人兽共患病杂志,14(6):28-32。
22、杨婷婷等 1997 抗弓形虫主要外膜蛋白单克隆抗体的分析与鉴定中国人兽共患病杂志,13(5)17-18。
23、郑春福等 1998 L-精氨酸和L-瓜胺酸在体外火花巨噬细胞抗弓形虫感染中的作用 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,16(5)326-330。
24、陈晓光等 1996 弓形虫分子生物学进展 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,14(2):149-152。
25、沈继龙等 1993 弓形虫感染小鼠腹水中虫体分泌/排泄抗原的免疫印迹分析 中国人兽共患病杂志,9(5):5-7。
26、严延生等 1997 弓形虫主要抗原基因在昆虫细胞中表达的研究中国人兽共患病杂志,13(6):16-19。
27、沈继龙等 1991 组织内弓形虫病原体的分离纯化 中国人兽共患病杂志,7(5):2-3。
28、卢慎等 1991 弓形虫在病理切片组织中的形态学研究 中国人兽共患病杂志,7(5):43-44。
29、章少秋 1991 弓形虫在伪囊内裂殖生殖的形态观察 中国人兽共患病杂志,7(5):49。
30、沈继龙等 1991 隐性弓形虫感染的复发及包囊的形成 中国人兽共患病杂志,7(5):49-50。
31、古钦民等 1991 不同血清学方法诊断弓形虫病的比较 中国人兽共患病杂志,7(5)50-51。
32、中华医学杂志编委会 1991 弓形虫病防治专题座谈会纪要 中华医学杂志,71(3):122-128。
33、杨秀珍等 1997 三株弓形虫速殖子体外培养形成包囊的研究 中国人兽共患病杂志,13(5):6-9。
34、陈晓光等 1996 弓形虫巢式PCR体系的建立及其对人、鼠弓形虫病的检测 中国寄生虫病防治杂志,9(1):53-56。
35、杨旭明等 1997 弓形虫速殖子分离、纯化方法比较 中国人兽共患病杂志,13(3):64-65。
36、刘翠梅等 1993 间接免疫酶法检测淋巴结病理组织中的弓形虫中国人兽共患病杂志,13(5):54-55。
37、杨元清等 1986 三种利什曼原虫的组织化学观察 动物学报,33(2):151-154。
38、韦相才等1993聚合酶链反应技术检测弓形虫核酸的研究 广东寄生虫学会年报,14～15:43。
39、陈有贵等1993裸小鼠弓形虫病的病理学观察广东寄生虫学会年报,14～15:58-59。
40、陈观今等1993 随机引物聚合酶链反应技术鉴别弓形虫虫株的研究广东寄生虫学会年报,14～15:49。
41、Ferguson, D.J.P.,et al 1972 Comparison of the methods of asexual multiplication undergone by Toxoplasma gondii British Society for Parasitology:proceeding,xiii.
42、Thomas,C.J.,et al 1973 Multiplication of Toxoplasma gondii in Enucleate Fibroblasts Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,142:1268-1271.
43、Chinchilla, M.,et al 1982 Lack of multiplication of Toxoplasma gondii in Macrophages of Rats in Vitro J.Parasitol.,68(5):952-955.
44、Grimwood,J.,et al 1991 Kinetics of the growth and variation in infectivity of Toxoplasma gondii in mice Annals.Trop.Med.Parasitol.,85(6):659-611.
45、Kazuyuki,J.,et al 1980 Multiplicatioon of Toxoplasma gondii in Maturing Erythroid Cells J.General.Microbio,118:45-49.
46, Borges,J.S.,et al 1975 Inhibition of multiplicatioon of Toxoplasma gondii by human monocytes exposed to T-lymphocyte products J.Exper.Med., 141:483-496.
47 , Tanabe,K.,et al 1978 Toxoplasma gondii:penetration into differentiating Friend erythroleukemia cells Exper.Parasitol.,46:72-82.
48 , Tanabe,K,et al 1979 Penetration of maturing red blood cells by Toxoplasma gondii J.General.Microbio.,113:433-437.
49 , Mcleod,R.,et al 1991 Toxoplasma gondii—New advances in cellular and molecular biology Exp.Parasitol.,72:109.
50, Nichols,BA.,et al 1983 Secretion from the rhoptries of Toxoplasma gondii during host-cell invasion J.Ultrastr.Res.,83:85-87. 51, Johnson,AM.,et al 1986 Characterization and in vitro translation of Toxoplasma gondii ribonucleic acid Mol.Biochem.Parasitol.,18:313.
52 , Yong,RA.,et al 1983 Efficient isolation of genes using antibody probes Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80:1194.
53 , Bulow,R., et al 1991 Protection of mice from fatal Toxoplasma infection by immunization with P30 antigen in liposomes J.Immunol,147:3496-3500.
54, Daubener,W.,et al 1995 Establishment of T-helper type 1 and T-help typer 2 like human Toxoplasma antigen-specific T-cell clones Immunol.,86:79.
55 , Roberts,OW.,et al 1996 Different roles for IL-4 during the course of Toxoplasma gondii infection Infect.Immun.,64:897.
56, Langermans,JAM.,et al 1992 IFN-r induced dependent toxoplasmastatic activity in murine perotoneal macrophages is mediated by endogenous tumor necros's factor- α J.Immunol.,148:568.
57, Suzuki, Y.,et al 1988 Interferon-r: the major mediator of resistance against Toxoplasma gondii Science,240:516-519.
58, Couverer,G. 1988 Surface antigens of Toxoplasma gondii Parasitol,97:1-10.
59 , Wain GL.et al 1995 Nuleic acids : vaccines of the future Parasitol Today,10:113-116.
60 , Sibley LD,et al 1992 Virulent strains of Toxoplasma gondii comprise a single clonal linage Nature,359:82-85.
61, Abbas,AMA. 1971 Morphological appearance of Toxoplasma gondii in Tissue Cultures and Tissues of various host cell Tran Roy Soc Trop Med Hyg ,65(3):334-335.
62, Stahl,W.,et al 1997 Pathogenesis of murine toxoplasmic hydrocephalus Parasitol.,114:219-229.
63 , Windeck,T.,et al 1996 Toxoplasma —Strain-specific transcript levels of SAG1 and their association with virulence Parasitol.Res.,82:715-719.
64 , Angus CS,et al 1996 Nucleic acid vaccination against Toxoplasma gondii in mice J Euk Microbiol, 10:117S.
65 , Burg,JL.,et al 1988 Molecular Analysis of the gene encoding the major surface antigen of Toxoplasma gondii J.Immunol.141(10):3584-3591.
66 , Bala,S., et al 1994 Toxoplasma Soluble Products Induce Cytokine Secretion by Macrophages and Potentiate in Vitro Replication of a Monotropic Strain of HIV J.Euk.Microbiol.,41(5):7S.
67 , Choromanski,L., 1994 Safety aspects of a vaccine for Cats Containing a Toxoplasma mutant strain J.Euk.Microbiol.,41 (5):8S.
68, Gazzinelli,RT., 1994 Role of IL-12 in the iniation of cell mediated immunity by Toxoplasma and its regulation by IL-10 and Nitric Oxide J.Euk.Microbiol.,41 (5):9S.
69, Champs,C.De.,et al 1997 Toxoplasma gondii :In vitro and in vivo cystogenesis of the virulent RH strain J.Parasitol.,83(1): 152-155.
70 , Mondragon,R., 1998 Genotype Anaiysis of Toxoplasma gondii Isolates from Pigs J.Parasitol.,84(3):639-641.
71, Mineo,JR.,et al 1993 Antibodies to Toxoplasma godii major surface protain(SAG1,P30) inhibit infection of host cells and are produced in murine intestine after peroral infection J Immunol,150:3951-3964.
2、刘约翰 1988 寄生虫病化学治疗 西南师范大学出版社。
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6、龚志锦等 1993 病理组织制片核染色技术 上海科学技术出版社。
7、姜泊等 1996 分子生物学常用实验方法 人民军医出版社。
8、谢霖崇等 1995 弓形虫在动物宿主的体液和组织涂片中的形态 广东寄生虫学会年报84-85。
9、陈观今等 1995 分离弓形虫及检测弓形虫感染的系列研究 广东寄生虫学会年报 12-16。
10、杨惠珍等 1995 弓形虫人源、畜源分离株的生化特性研究 中国人兽共患病杂志,11(3)16-18。
11、沈继龙等 1993 弓形虫表膜主要分子抗原的免疫印迹分析 中国人兽共患病杂志,9(4):2-3。
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14:杨惠珍等 1998 不同毒力株弓形虫对绿猴肾细胞侵袭及增殖的研究中国寄生虫学与寄生虫病杂志,16(3):185-188。
15、蒋早立等 1994 急性弓形虫感染小鼠腹腔巨噬细胞功能的变化 中国人兽共患病杂志,10(3):17-18。
16、吴杰 1996 松萝酸抗弓形虫速殖子作用的体外实验和电镜观察 中国寄生虫与寄生虫病杂志,14(1):58-62。
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24、陈晓光等 1996 弓形虫分子生物学进展 中国寄生虫学与寄生虫病杂志,14(2):149-152。
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29、章少秋 1991 弓形虫在伪囊内裂殖生殖的形态观察 中国人兽共患病杂志,7(5):49。
30、沈继龙等 1991 隐性弓形虫感染的复发及包囊的形成 中国人兽共患病杂志,7(5):49-50。
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37、杨元清等 1986 三种利什曼原虫的组织化学观察 动物学报,33(2):151-154。
38、韦相才等1993聚合酶链反应技术检测弓形虫核酸的研究 广东寄生虫学会年报,14～15:43。
39、陈有贵等1993裸小鼠弓形虫病的病理学观察广东寄生虫学会年报,14～15:58-59。
40、陈观今等1993 随机引物聚合酶链反应技术鉴别弓形虫虫株的研究广东寄生虫学会年报,14～15:49。
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48 , Tanabe,K,et al 1979 Penetration of maturing red blood cells by Toxoplasma gondii J.General.Microbio.,113:433-437.
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57, Suzuki, Y.,et al 1988 Interferon-r: the major mediator of resistance against Toxoplasma gondii Science,240:516-519.
58, Couverer,G. 1988 Surface antigens of Toxoplasma gondii Parasitol,97:1-10.
59 , Wain GL.et al 1995 Nuleic acids : vaccines of the future Parasitol Today,10:113-116.
60 , Sibley LD,et al 1992 Virulent strains of Toxoplasma gondii comprise a single clonal linage Nature,359:82-85.
61, Abbas,AMA. 1971 Morphological appearance of Toxoplasma gondii in Tissue Cultures and Tissues of various host cell Tran Roy Soc Trop Med Hyg ,65(3):334-335.
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