木中抗炎镇痛有效部位的药学研究
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摘要
为了探讨木瓜中抗炎镇痛有效部位——木瓜苷(GCS)的最佳制备工艺并制订其质量标准，本文以抗炎镇痛作用为指标，对木瓜中三种提取物进行了药效学初步筛选，并以正交试验对其提取条件进行了优化研究；研究了大孔吸附树脂分离、纯化GCS的工艺条件和参数，并制订了GCS的质量标准。
在药效及提取工艺条件优化试验中，比较研究了木瓜总提物(TECS)、GCS和非木瓜苷(NGCS)的抗炎镇痛作用。采用二甲苯引起的小鼠耳肿胀模型，观察木瓜中三种提取物的抗炎作用；采用热板法测定小鼠的痛阈，观察三种提取物的镇痛作用。以临床常用的具有抗炎镇痛作用的中药制剂——雷公藤多苷(GTW)为阳性对照药，GCS(60，120，240mg·kg~(-1))ig给药，对小鼠耳肿胀均有明显抑制作用，且抑制作用呈剂量相关趋势；NGCS(200，400mg·kg~(-1))无抑制作用。GCS(120，240mg·kg~(-1))ig给药，可以明显升高小鼠的痛阈，且镇痛作用呈剂量相关趋势。结果表明GCS具有抗炎、镇痛作用，确定了GCS为木瓜抗炎镇痛的有效部位。并通过正交设计，采用L_9(3~4)表对GCS提取条件进行优化，以芸香苷对照品标示的OCS含量为质控指标，优选出GCS提取的最佳条件，即以80％乙醇为提取溶剂，用8倍量体积，回流1h，提取3次。
在大孔吸附树脂分离纯化试验中，通过对D_(101)型大孔树脂分离、纯化GCS工艺条件和参数的研究，探索其工艺流程，建立质量控制体系，从而确立了分离、纯化GCS的可行方法。
以正交试验优选的GCS提取条件提取的样品水溶液上大孔树脂柱(R1.5×H16cm，干重4.2±0.02g)，吸附1h后，先用100ml蒸馏水洗脱去除水溶性杂质，然后用100ml 20％乙醇洗脱，再用50％乙醇100ml洗脱出GCS。
利用化学鉴别法和薄层层析法进行鉴别，用比色法测定了GCS含量，平均回收率为99.80％，RSD为1.82％。本方法简便易行，重现性较好，可作为GCS的质控方
安徽医科大学硕士学位论文二__
法。
本实验确定了木瓜中抗炎镇痛的有效部位—GCS，以及优化的提取条件。采
用大孔吸附树脂分离、纯化工艺，得到纯度大于500/0的GCS，所确立的质量标准可
以有效地控制GCS的质量，为GCS及制剂的开发研究奠定了基础，也可为GCS工
业生产提供一定的理论参考。
In order to research the optimum technics of producing glycosides of chaenomeles speciosa(GCS)-the effective anti-inflammatory and analgesic component of chaenomeles speciosa, and to establish the quality standard, the pharmacodynamics experiments of three extracts from chaenomeles speciosa were studied as the parameter of anti-inflammatory and analgesic effect. Meanwhile,different conditions for extracting GCS were analyzed through the orthogonal design experiments with analysis of variance.The technical conditions and parameters of GCS's illustration and purification with macroporus adsorptive resin were investigated. The quality standards of GCS were established.
To compare the anti-inflammatory and analgesic effects of the total extracts of chaenomeles speciosa (TECS), GCS and non-glycosides of chenomeles speciosa (NGCS),the ear swelling in mice with xylene was used. The anti-inflammatory effects of three extracts from chaenomeles speciosa were observed, hot-plate test was used to assess pain threshold in mice, and observed the analgesic effects of three extracts from chaenomeles speciosa. GCS 60,120,240mg kg-1 ig significantly inhibited the acute imflammation induced by xylene,and demonstrated the dose-related inhibitory effect, NGCS 200,400mg . kg-1 had no inhibitory effect. When GCS 120,240mg . kg-1 administered intragastrically , the pain threshold was risen remarkably in mice,and the analgesic effect was dependent on the dosage. GCS had the effect of anti-inflammation and analgesia. GCS is the effective component of anti-inflammation and analgesia from chaenomeles speciosa.
The optimum preparation process of GCS was investigated by the orthogonal design as the GCS content index, which was determined by colormetric method. The optimum alcohol-extracting factors were 8 times of 80% alcohol, refluxing and extracting for Ih, for 3 times.
The technical parameters of GCS's purification with macroporous adsorptive resin were investigated, and the quality control system was established. This technique was a good method to purify GCS.The water solution of the optimum alcohol-extracts was absorbed for Ih with a column of macroporous resin(l.5cm 16cm) and the resin was washed with 100ml of distilled water,then washed with 100ml of 20% alcohol, at last the GCS was eluted from macroporous resin with 100ml of 50% alcohol.
The Chemical indentification and TCL of GCS were carried out. GCS was determined by colormetric method. The average recovery was 99.80%,and RSD was 1.82%. This method was simple, feasible and could be repeated. The method could be used to control the quality.
The whole of the studies got the best technics of producing GCS, which purity exceeded 50%, and established the quality control standard. It will be the foundation for deeper development and research on GCS and the preparation,and supply the theoretical reference for GCS industrial production.
在药效及提取工艺条件优化试验中，比较研究了木瓜总提物(TECS)、GCS和非木瓜苷(NGCS)的抗炎镇痛作用。采用二甲苯引起的小鼠耳肿胀模型，观察木瓜中三种提取物的抗炎作用；采用热板法测定小鼠的痛阈，观察三种提取物的镇痛作用。以临床常用的具有抗炎镇痛作用的中药制剂——雷公藤多苷(GTW)为阳性对照药，GCS(60，120，240mg·kg~(-1))ig给药，对小鼠耳肿胀均有明显抑制作用，且抑制作用呈剂量相关趋势；NGCS(200，400mg·kg~(-1))无抑制作用。GCS(120，240mg·kg~(-1))ig给药，可以明显升高小鼠的痛阈，且镇痛作用呈剂量相关趋势。结果表明GCS具有抗炎、镇痛作用，确定了GCS为木瓜抗炎镇痛的有效部位。并通过正交设计，采用L_9(3~4)表对GCS提取条件进行优化，以芸香苷对照品标示的OCS含量为质控指标，优选出GCS提取的最佳条件，即以80％乙醇为提取溶剂，用8倍量体积，回流1h，提取3次。
在大孔吸附树脂分离纯化试验中，通过对D_(101)型大孔树脂分离、纯化GCS工艺条件和参数的研究，探索其工艺流程，建立质量控制体系，从而确立了分离、纯化GCS的可行方法。
以正交试验优选的GCS提取条件提取的样品水溶液上大孔树脂柱(R1.5×H16cm，干重4.2±0.02g)，吸附1h后，先用100ml蒸馏水洗脱去除水溶性杂质，然后用100ml 20％乙醇洗脱，再用50％乙醇100ml洗脱出GCS。
利用化学鉴别法和薄层层析法进行鉴别，用比色法测定了GCS含量，平均回收率为99.80％，RSD为1.82％。本方法简便易行，重现性较好，可作为GCS的质控方
安徽医科大学硕士学位论文二__
法。
本实验确定了木瓜中抗炎镇痛的有效部位—GCS，以及优化的提取条件。采
用大孔吸附树脂分离、纯化工艺，得到纯度大于500/0的GCS，所确立的质量标准可
以有效地控制GCS的质量，为GCS及制剂的开发研究奠定了基础，也可为GCS工
业生产提供一定的理论参考。
In order to research the optimum technics of producing glycosides of chaenomeles speciosa(GCS)-the effective anti-inflammatory and analgesic component of chaenomeles speciosa, and to establish the quality standard, the pharmacodynamics experiments of three extracts from chaenomeles speciosa were studied as the parameter of anti-inflammatory and analgesic effect. Meanwhile,different conditions for extracting GCS were analyzed through the orthogonal design experiments with analysis of variance.The technical conditions and parameters of GCS's illustration and purification with macroporus adsorptive resin were investigated. The quality standards of GCS were established.
To compare the anti-inflammatory and analgesic effects of the total extracts of chaenomeles speciosa (TECS), GCS and non-glycosides of chenomeles speciosa (NGCS),the ear swelling in mice with xylene was used. The anti-inflammatory effects of three extracts from chaenomeles speciosa were observed, hot-plate test was used to assess pain threshold in mice, and observed the analgesic effects of three extracts from chaenomeles speciosa. GCS 60,120,240mg kg-1 ig significantly inhibited the acute imflammation induced by xylene,and demonstrated the dose-related inhibitory effect, NGCS 200,400mg . kg-1 had no inhibitory effect. When GCS 120,240mg . kg-1 administered intragastrically , the pain threshold was risen remarkably in mice,and the analgesic effect was dependent on the dosage. GCS had the effect of anti-inflammation and analgesia. GCS is the effective component of anti-inflammation and analgesia from chaenomeles speciosa.
The optimum preparation process of GCS was investigated by the orthogonal design as the GCS content index, which was determined by colormetric method. The optimum alcohol-extracting factors were 8 times of 80% alcohol, refluxing and extracting for Ih, for 3 times.
The technical parameters of GCS's purification with macroporous adsorptive resin were investigated, and the quality control system was established. This technique was a good method to purify GCS.The water solution of the optimum alcohol-extracts was absorbed for Ih with a column of macroporous resin(l.5cm 16cm) and the resin was washed with 100ml of distilled water,then washed with 100ml of 20% alcohol, at last the GCS was eluted from macroporous resin with 100ml of 50% alcohol.
The Chemical indentification and TCL of GCS were carried out. GCS was determined by colormetric method. The average recovery was 99.80%,and RSD was 1.82%. This method was simple, feasible and could be repeated. The method could be used to control the quality.
The whole of the studies got the best technics of producing GCS, which purity exceeded 50%, and established the quality control standard. It will be the foundation for deeper development and research on GCS and the preparation,and supply the theoretical reference for GCS industrial production.
引文
1 印联群．中医药治疗类风湿性关节炎进展．湖南中医学院学报，1995：15(4)：66～69
2 徐叔云，魏伟，梁君山．我国抗炎免疫药理研究现状．中国药理学通报，1992；8(3)：161～165
3 徐叔云．抗炎免疫药理研究十年进展．中国药理学通报，1996：12(1)：1～6
4 范祖森，曹容华，张庆殷等．雷公藤多甙对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用和免疫调节作用．中国药理学报，1996：12(6)：527～529
5 王志坚，陈敏珠，徐叔云等．白芍总苷治疗类风湿关节炎的临床药理研究．中国药理学通报，1994：10(2)：117～121
6 张玲玲，戴敏，沈玉先等．几种中成药有效部位抗炎作用的比较．安徽医科大学学报，2002：37(6)：423～425
7 戴敏，魏伟，沈玉先等．木瓜总苷对免疫性关节炎大鼠血液流变性的影响．中国中医药信息杂志，2002：12(9)：20～21
8 戴敏，魏伟，汪倪萍等．木瓜苷对佐剂性关节炎的治疗作用．中国药理学通报，2003：19(3)：340～343
9 Chen Q, Wei W. Effects and mechanisms of glucosides of chaenomeles speciosa on Collagen-induced arthritis in rats. International Immunopharmacol. 2003;3:539～608
10 中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典一部．北京：化学工业出版社，2000：45
11 江苏新医学院．中药大辞典．上海：上海人民出版社，1997：349
12 Yamahara J, Yamada T, Kitani T, et al. Antianoxic action and active constituents of evidiae Fructus. Chem Pharm Bull, 1989:37(7):1820
13 郭学敏，洪永福，章玲等．皱皮木瓜成分的研究．中草药，1997：28(10)：584～
585
14 郭学敏，章玲，金山丛等．皱皮木瓜中三萜化合物的分离鉴定．中国中药杂志，1998：23(9)：546～547
15 Talapatra SK, Sarkar AC, Talapatra B. Two pentacyclie triterpenes from rubia cordifolia. Phytochemistry, 1981:20(8):1923～1924
16 Guangyi L, Gray A, Waterman PG, et al. Pentacyclic triterpenes from the fruits of Rosa sterilis. J Nat Prod, 1989;52(1):62～63
17 罗景方．木瓜中齐墩果酸分离和鉴定．中草药，1983；14(11)：48
18 都述虎，饶金华，耿武松．薄层扫描法测定木瓜中齐墩果酸的含量．中草药，2003：34(1)：35～37
19 Kanikas GA, Euerby MR, Waigh RD, et al. Constituents of the stems of Arbutus unedo. Planta Med, 1987;53(2):223～224
20 孙连娜，郭学敏，郭美丽等．三种木瓜的乙醚提取部位的气相色谱-质谱分析．第二军医大学学报，2000：21(6)：749～752
21 高诚伟，康勇，雷泽模等．皱皮木瓜中有机酸的研究．云南大学学报，1999；21(4)：319～321
22 陈日来，吴廷俊，戴跃进．四种木瓜主要化学成分比较．华西药学杂志，2000：15(16)：38～39
23 王昭美，何照范，郁建平．木瓜营养成分分析．营养学报，2000：22(2)：190～192
24 陈奇．中药药理实验方法．北京：人民卫生出版社，1994：7071，108～109
25 沈阳药学院．高等数学(下册)．第一版．上海：上海科技出版社，1979：404～435
26 金丕焕．医用统计学．第三版．北京：北京科技出版社，1998：85～99
27 石玉山，张宏，杜秀兰等．复方马钱子片治疗类风湿性关节炎双盲观察．中医杂志，1997：38(7)：411～413
28 丁长海，徐叔云．抗炎实验法．见徐叔云，卞如濂，陈修主编．药理实验方法学．第三版．北京：人民卫生出版社，2002：885，911
29 徐吉民．正交法在医学科研中的应用．第一版．北京：中国医药科技出版社，1987：10～103
30 中国医学科学院药物研究所植化室．大孔吸附树脂在中草药化学成分提取分离中的一些应用．中草药，1989：11(3)：138-141
31 李伯庭，王湘，李小进．大孔吸附树脂在天然产物分离中应用．中成药，1990：21(8)：42-44
32 薛玉梅，黄萍，裴月梅．木瓜中有机酸和黄酮类成分的含量测定．基层中药杂志，1994：8(4)：27～28
33 郭锡勇，唐修静，郭莉莉．木瓜不同炮制品总黄酮含量测定．贵州中医学院学报，2000：22(4)：61～62
34 孙越，曹喜红，潘艳丽．大孔吸附树脂在中草药研究中的应用．中医药信息，2002：19(2)：23～24
35 王继峰，薛冬，藏晶．大孔吸附树脂在分离提纯中药有效成分中的应用．湖南中医药导报，2001；7(3)：125～126
36 蔡雄，刘中秋，王培训等．大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷工艺．中成药，2001；23(9)：631-634
37 刘中秋，蔡雄，赖小平等．大孔吸附树脂富集纯化三七总皂苷工艺研究．中国实验方剂学杂志，2001；7(3)：4-6
38 肖祟厚．中药化学．上海：上海科学技术出版社，1997：163～190，265～329
39 中国科学院上海药物研究所．中草药有效成份提取与分离．上海：上海科学技术出版社，1983：319～326
40 廖清江．有机化学．第三版．北京：人民卫生出版社，1998：219
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26 金丕焕．医用统计学．第三版．北京：北京科技出版社，1998：85～99
27 石玉山，张宏，杜秀兰等．复方马钱子片治疗类风湿性关节炎双盲观察．中医杂志，1997：38(7)：411～413
28 丁长海，徐叔云．抗炎实验法．见徐叔云，卞如濂，陈修主编．药理实验方法学．第三版．北京：人民卫生出版社，2002：885，911
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34 孙越，曹喜红，潘艳丽．大孔吸附树脂在中草药研究中的应用．中医药信息，2002：19(2)：23～24
35 王继峰，薛冬，藏晶．大孔吸附树脂在分离提纯中药有效成分中的应用．湖南中医药导报，2001；7(3)：125～126
36 蔡雄，刘中秋，王培训等．大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷工艺．中成药，2001；23(9)：631-634
37 刘中秋，蔡雄，赖小平等．大孔吸附树脂富集纯化三七总皂苷工艺研究．中国实验方剂学杂志，2001；7(3)：4-6
38 肖祟厚．中药化学．上海：上海科学技术出版社，1997：163～190，265～329
39 中国科学院上海药物研究所．中草药有效成份提取与分离．上海：上海科学技术出版社，1983：319～326
40 廖清江．有机化学．第三版．北京：人民卫生出版社，1998：219