大米中对硫磷残留量免疫学快速检测方法的研究
摘要
对硫磷残留是大米安全卫生的重要检测项目之一，鉴于目前大米中对硫磷残留的测定方法(主要有气相色谱法等)不便于基层单位对大米中对硫磷残留进行大批次、低成本的快速、有效监测，本研究参考国外先进技术，依据抗原与抗体可发生特异性反应的特点，人工制备了抗对硫磷抗体，运用便捷、灵敏、准确的ELISA技术定量检测大米中的对硫磷残留，取得满意结果。摘要如下：
1、本研究采用重氮化法，将对硫磷分别与BSA和OVA偶联，经提纯并以紫外光谱扫描等鉴定，成功地制备了2种对硫磷完全抗原，其中对硫磷-BSA结合物作为免疫原，对硫磷-OVA结合物作为包被抗原。将免疫原接种新西兰兔，适时提取抗血清，以对硫磷-OVA结合物包被微量反应条，采用间接ELISA测试，发现采用对硫磷-BSA结合物免疫所获的抗血清效价＞1：409600。以此抗血清作为试验用抗体。
2、通过条件试验，确定了所获抗血清和包被抗原的最佳工作浓度分别为1：6000和1：25600。以此工作浓度，采用间接ELIsA抑制试验测试，显示当对硫磷标液浓度由39ng／ml倍比递增至5000ng／ml时，抑制反应呈现较好的线性关系，其标准抑制曲线的相关系数为0.993，表明所获抗血清可与对硫磷发生特异性结合。从而初步确定了以间接ELIsA抑制试验来定量检测对硫磷的方法。
3、为考证方法的可靠性，还采用如下试验进行了验证：
(1)特异性试验：用本方法测试其他有关化合物的交叉反应，显示对硫磷抗血清与还原对硫磷有强反应，但该化合物是合成对硫磷—BSA时的中间产物，自然界并不存在。与甲基对硫磷和对氧磷有轻度交叉，但在浓度分别为0.1 mg／ml和0.2 mg／ml时交叉反应仅2.5％。与对硝基酚、马拉硫磷、杀螟硫磷、乐果无交叉反应。
(2)准确度试验：将添加有0ng／g-5000ng／g系列浓度对硫磷标准品的大米样品共5份经简单处理，以本法测试，4小时可获结果，其回收率为81-103％，平均为89.3％。将上述样品共5份，委托外单位以高效气相色谱法检测，显示本法所获结果与色谱法结果的符合率为76-100％，平均为89.8％。
(3)精密度试验：将添加有0ng／g-5.0ug／g系列浓度对硫磷标准品的大米样品共5份进行7次测试，经数理统计分析，其结果的平均批间误差为6.1％。再分别在一
大米中对硫磷残留量免疫学快速检测方法的研究
个实验室由3名操作人员进行测试，其结果的室内变异系数平均为5.2%.
试验显示，本方法简便、快速、灵敏、准确，适用于大米中对硫磷残留的检测。
查新表明，本方法属国内首创。
Parathion residue is one of the important detecting items of safety in rice. However, routine detection methods for parathion residues of rice (including HPGC etc.) is not fit for rapid & available inspection of parathion residues of numbers of rice. Therefore, we, consulting advanced technology overseas on the study, according as peculiarity of specific reaction between antigen and antibody, preparing anti-parathion antibody, detecting parathion residues of rice with imply, sensitivity and precise ELISA technology, and obtained satisfactory results as follows:
1 , Parathion were coupled to carried protein BSA or OVA by means of the "-N=N-" respectively. By purification and identify with scanning of UV-VIS spectra, two kinds of complete antigen were preparing. Therein, parathion-BSA conjugate are acted as immunogen, and parathion-OVA conjugate as coated antigen. The antiserum was collected from the New Zealand rabbits immunized with above immunogen at an appropriate time, and measured with indirect ELISA on microtiter wells coated with parathion-OVA conjugate. The liters of antiserum from one the rabbits immunized with parathion -BSA conjugate are over 1:409600. This antiserum is used as antibody on study.
2, The best concentration of the antiserum and the coated antigen were fixed on 1:6000 and 1:25600 by tests on condition, respectively. With inhibitory assay of indirect ELISA in the concentration, the inhibitory reaction is the better liner with the series of the concentration of parathion standard solutions from 39ng/ml to 5000ng/ml in double time. The correlative coefficient of standard inhibitory curve is 0.993,which show specific reaction between antiserum and parathion. Thereby, with inhibitory assay of indirect ELISA, the quantitative methods detecting parathion was set up.
3 >. In order to validating the reliability of the methods, following tests were made.
(1) Specificity test: Measuring other drugs with the methods, the antiserum cross-reactivity with reducing parathion, methyl-parathion and paraoxon are 100%, 2.5% and 2.5%, respectively. But the antiserum could not react with p-nitrophenol, malathion, fenitrothion and dimethoate.
(2) Accuracy test: 5 samples of rice were spiked with parathion standard from 0ng/ml to
5000ng/ml in double time, respectively, prepared simply. The results were obtained with the methods in 4 hours, and the recovery is from 81% to 103%, the average recovery is 89.3%. 5 samples of rice were measure with HPGC in other laboratories, and the coincidence rate comparing of the methods and HPGC are from 76% to 100%, the average coincidence rate is 89.8%.
(3) Precision test: 5 samples of rice were spiked with parathion standard from Ong/rnl to 5000ng/ml and were measured on 7 test lots, with statistical treatment, the between-assay average percent coefficient of variations is 6.1%. 5 samples of rice were measured by 3 people at the same laboratory, the within-laboratory average percent coefficient of variations is 5.2%.
Above tests showed that the method is simple, rapid, sensitive and precise, it fit for determination of parathion residues in rice. The results of looking related date base showed that this method is set up at first time in China.
1、本研究采用重氮化法，将对硫磷分别与BSA和OVA偶联，经提纯并以紫外光谱扫描等鉴定，成功地制备了2种对硫磷完全抗原，其中对硫磷-BSA结合物作为免疫原，对硫磷-OVA结合物作为包被抗原。将免疫原接种新西兰兔，适时提取抗血清，以对硫磷-OVA结合物包被微量反应条，采用间接ELISA测试，发现采用对硫磷-BSA结合物免疫所获的抗血清效价＞1：409600。以此抗血清作为试验用抗体。
2、通过条件试验，确定了所获抗血清和包被抗原的最佳工作浓度分别为1：6000和1：25600。以此工作浓度，采用间接ELIsA抑制试验测试，显示当对硫磷标液浓度由39ng／ml倍比递增至5000ng／ml时，抑制反应呈现较好的线性关系，其标准抑制曲线的相关系数为0.993，表明所获抗血清可与对硫磷发生特异性结合。从而初步确定了以间接ELIsA抑制试验来定量检测对硫磷的方法。
3、为考证方法的可靠性，还采用如下试验进行了验证：
(1)特异性试验：用本方法测试其他有关化合物的交叉反应，显示对硫磷抗血清与还原对硫磷有强反应，但该化合物是合成对硫磷—BSA时的中间产物，自然界并不存在。与甲基对硫磷和对氧磷有轻度交叉，但在浓度分别为0.1 mg／ml和0.2 mg／ml时交叉反应仅2.5％。与对硝基酚、马拉硫磷、杀螟硫磷、乐果无交叉反应。
(2)准确度试验：将添加有0ng／g-5000ng／g系列浓度对硫磷标准品的大米样品共5份经简单处理，以本法测试，4小时可获结果，其回收率为81-103％，平均为89.3％。将上述样品共5份，委托外单位以高效气相色谱法检测，显示本法所获结果与色谱法结果的符合率为76-100％，平均为89.8％。
(3)精密度试验：将添加有0ng／g-5.0ug／g系列浓度对硫磷标准品的大米样品共5份进行7次测试，经数理统计分析，其结果的平均批间误差为6.1％。再分别在一
大米中对硫磷残留量免疫学快速检测方法的研究
个实验室由3名操作人员进行测试，其结果的室内变异系数平均为5.2%.
试验显示，本方法简便、快速、灵敏、准确，适用于大米中对硫磷残留的检测。
查新表明，本方法属国内首创。
Parathion residue is one of the important detecting items of safety in rice. However, routine detection methods for parathion residues of rice (including HPGC etc.) is not fit for rapid & available inspection of parathion residues of numbers of rice. Therefore, we, consulting advanced technology overseas on the study, according as peculiarity of specific reaction between antigen and antibody, preparing anti-parathion antibody, detecting parathion residues of rice with imply, sensitivity and precise ELISA technology, and obtained satisfactory results as follows:
1 , Parathion were coupled to carried protein BSA or OVA by means of the "-N=N-" respectively. By purification and identify with scanning of UV-VIS spectra, two kinds of complete antigen were preparing. Therein, parathion-BSA conjugate are acted as immunogen, and parathion-OVA conjugate as coated antigen. The antiserum was collected from the New Zealand rabbits immunized with above immunogen at an appropriate time, and measured with indirect ELISA on microtiter wells coated with parathion-OVA conjugate. The liters of antiserum from one the rabbits immunized with parathion -BSA conjugate are over 1:409600. This antiserum is used as antibody on study.
2, The best concentration of the antiserum and the coated antigen were fixed on 1:6000 and 1:25600 by tests on condition, respectively. With inhibitory assay of indirect ELISA in the concentration, the inhibitory reaction is the better liner with the series of the concentration of parathion standard solutions from 39ng/ml to 5000ng/ml in double time. The correlative coefficient of standard inhibitory curve is 0.993,which show specific reaction between antiserum and parathion. Thereby, with inhibitory assay of indirect ELISA, the quantitative methods detecting parathion was set up.
3 >. In order to validating the reliability of the methods, following tests were made.
(1) Specificity test: Measuring other drugs with the methods, the antiserum cross-reactivity with reducing parathion, methyl-parathion and paraoxon are 100%, 2.5% and 2.5%, respectively. But the antiserum could not react with p-nitrophenol, malathion, fenitrothion and dimethoate.
(2) Accuracy test: 5 samples of rice were spiked with parathion standard from 0ng/ml to
5000ng/ml in double time, respectively, prepared simply. The results were obtained with the methods in 4 hours, and the recovery is from 81% to 103%, the average recovery is 89.3%. 5 samples of rice were measure with HPGC in other laboratories, and the coincidence rate comparing of the methods and HPGC are from 76% to 100%, the average coincidence rate is 89.8%.
(3) Precision test: 5 samples of rice were spiked with parathion standard from Ong/rnl to 5000ng/ml and were measured on 7 test lots, with statistical treatment, the between-assay average percent coefficient of variations is 6.1%. 5 samples of rice were measured by 3 people at the same laboratory, the within-laboratory average percent coefficient of variations is 5.2%.
Above tests showed that the method is simple, rapid, sensitive and precise, it fit for determination of parathion residues in rice. The results of looking related date base showed that this method is set up at first time in China.
引文
1．张一宾等．农药．中国物资出版社，1997，66
2．GB 5127食品中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷最大残留限量标准．1998
3．各国食品和饲料中农药兽药残留限量大全．国家商检局．1995
4. Ercegovich, C.D. et al. J. Agric. Food Chem.,1981,29,559-563
5. Vallejo R.P. et al, J. Agric. Food Chem. 1982,30,572-580
6. Ibrahim M.A. et al. Food & Agricultural Immunology(1994) 6,23-30
7. P.S. Chen et al. Analytical Chem.,1956
8. Yalow R Set al, Nature, 1959,184:1648-1653
9. Engvall E et al. Immunochem, 1971,8:871-874
10. Ercegovich, C. D. Adv. Chem. Ser. 1971, No. 104,162
11. Hammock, B. D.; Mumma, R. O. ACS Symp. Ser. 1980, No. 136,321-352
12. Van Emon J M et al. Immunochemical methods for environmental analysis. Washington, D C: American Chemical Society, 1990
13. Vanderlaan M et al. Immunoassays for trace chemical analysis: montoring toxic chemicals in humans, food, and the environment. Washington, D C: American Chemical Society, 1991
14. Ross C. Beier; Larry H. Stanker Immunoassays for residue analysis: food safety. American Chemical Society, Washington, D C 1996
15. United States Department of Agriculture et al. List of Rapid Tests, August 1991
16．李俊锁等，梨中Avermectin B1残留的酶联免疫吸附测定，植物保护学报 1996，Vol．23 No．4 333-337
17．潘荣生等，出口鳗鱼及制品中恶喹酸的ELISA快速检测方法的研究，畜牧与兽医1999，Vol．31增刊11-13
18．扬利国等 《酶免疫测定技术》南京大学出版社 南京 1998年
19．SN 0133-92 出口粮谷中二嗪磷、倍硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、稻丰散、苯硫磷残留量检验方法．国家进出口商品检验局
20．蒋木庚 免疫化学技术及其在农化分析中的应用 江苏农药 96年 第一期P9
21．洪孝庄 孙曼霁主编 蛋白连接技术 中国医学科技出版社 北京 1993
22．毕爱华等主编 医学免疫学 人民军医出版社 北京 2002
23．杜念兴主编 兽医免疫学 中国农业出版社，1997
24. Vanderlaan M et al. Immunochemical techniques in trace residue analysis. ACS Symp.
25. Ser. 1991, No. 451, 2-13; 17 ref.
26. Robert O. H. Et al. Hapten synthesis for pesticide immunoassay development. ACS Symp. Ser. 1991, No. 451,14-27
27. Prithipal Singh et al. J. Agric. Food. Chem.,1989,37:109-114
28．SN／T 0001-1995 出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定．国家进出口商品检验局
29．SN 0132-92 出口粮谷中对硫磷残留量检验方法．国家进出口商品检验局
30．SN 0214-93 出口肉及肉制品中敌敌畏、二嗪磷、皮蝇磷、毒死蜱、杀螟硫磷、对硫磷、乙硫磷、蝇毒磷残留量检验方法．国家进出口商品检验局
31．郭爱珍等，牛奶孕酮酶免疫测定及其在奶牛繁殖上的应用，中国奶牛 1989，(5)：39
32．郭爱珍等，奶牛乳汁孕酮EIA快速诊断试剂盒研制与应用，上海畜牧兽医通讯 1991，(6)：29
33．朱培坤等，用酶标试纸检测青菜叶片肉的车前花叶病毒，科学通报 1982，27(4)：242
34．徐伟军等，用酶联免疫测定法检测大白菜灰心病毒，自然杂志，1982，(5)：799
35．徐文俊等，脱落酸(ABA)的放射免疫测定法，南京农业大学学报，1988，11(4)增：32
36．张能刚等，吲哚乙酸间接酶联免疫法的测定(建立)，南京农业大学学报，1990，13(1)：116
37．杨利国等，孕酮辣根过氧化物酶标记物的制备与鉴定，南京农业大学学报 1986，(3)：127
38．杨利国等，孕酮酶免疫测定试剂盒的制备及其在家畜繁殖上的应用，南京农业大学学报，1988，(4)：61
39．石放雄等，孕酮酶免疫测试盒与奶牛繁殖，中国奶牛，1990，(4)：36
40．吴子伟等，孕酮酶标试剂盒在杭州地区的应用，中国奶牛，1990，(2)：48
41．杨利国等，水牛超排处理后血请PMSG残留量的酶免疫吸附测定，畜牧兽医学报，1991，22(1)：9，(AGRINDEX，VOLXIX，NO．5，93-04123)
42．杨利国等，GNRH酶免疫测定方法的建立，黑龙江动物繁殖，1993，(3)：15
43．汪兴生等，褪黑激素酶免疫测定方法的建立与应用，[学位论文]南京：南京农业大学，1995
44．夏银等，褪黑激素抗原抗体制备的研究，南农动物科学系，畜物科技进展，1994，177
45．胡铁军，ELISA及其在食品蛋白质研究中的应用，中国畜产与食品，1995，2(6)：264
46．骆家理等，辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的简易方法，生物化学与生物物理学报，1981，13：1
47．姚连生，辣根过氧化物酶一雌二醇结合物的制备，生物化学与生物物理学报，1985，17：601
48．刘胜江等，胶固素酶联免疫吸附试验的建立及其在血清学诊断上的应用，[学位论文]南京：南京农业大学动物医学院，1985
49．顾志香等，应用斑点酶联免疫吸附试验检测猪病病毒抗体的试验，中国兽学科技，1988，(11)：59
50．玄学南，斑点酶联免疫吸附试验简介，中国兽医科技，1987，(12)：51
51．邝明慧等，斑点酶联免疫吸附试验方法简介，中国兽医科技，1988，(2)：62
52．杨树民，斑点试验在寄生虫病免疫诊断学中的运用，中国兽医科技，1988，(2)：63
53．董宗祈等，图片法ELISA检测腹泻患儿粪便中轮状病毒抗原的研究，中国人兽共患病杂志，1987，(2)：8
54．王振国等，食品中霉菌毒素残留免疫学检测技术，中国畜产与食品，1997，Vol．4 No．2
55．家畜及饲料中克伦特罗等 β-兴奋剂的检测与确证技术近况，现代商检科技，1998，5
56．出口鸡肉食品中庆大霉素硫酸盐残留量生物学检测方法的探讨，现代商检科技，1997，3
57．蜂胶中四环素族抗生素残留的测定，现代商检科技，1998，3
58．荧光光度法快速检测食品中黄曲霉毒素，检验检疫科学，1999，6
59．畜、水产食品中的残留物质检验方法 国家商检局检验处，1991
60．陈炳卿 孙长璟主编 食品污染与健康 化学工业出版社，2002
61．王秉栋主编 食品卫生检验手册 上海科学技术出版社，2003
62．毕爱华等主编 医学免疫学 人民军医出版社 北京 2002
63．王秀茹 主编 预防医学微生物学及检验技术 人民卫生出版社 北京 2002年4月
64．王晶等主编 食品安全快速检测技术 化学工业出版社 北京 2002年11月
65．徐宜为编著 免疫检测技术 科学出版社 北京 1997年6月
66．朱迅主编 免疫学进展 人民卫生出版社 北京 2002年
67．周艺炎主编 免疫学原理 上海科学技术文献出版社 上海 2000年
68．于善谦等编 免疫学导论 高等教育出版社 施普林格出版社 北京 1999年
2．GB 5127食品中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷最大残留限量标准．1998
3．各国食品和饲料中农药兽药残留限量大全．国家商检局．1995
4. Ercegovich, C.D. et al. J. Agric. Food Chem.,1981,29,559-563
5. Vallejo R.P. et al, J. Agric. Food Chem. 1982,30,572-580
6. Ibrahim M.A. et al. Food & Agricultural Immunology(1994) 6,23-30
7. P.S. Chen et al. Analytical Chem.,1956
8. Yalow R Set al, Nature, 1959,184:1648-1653
9. Engvall E et al. Immunochem, 1971,8:871-874
10. Ercegovich, C. D. Adv. Chem. Ser. 1971, No. 104,162
11. Hammock, B. D.; Mumma, R. O. ACS Symp. Ser. 1980, No. 136,321-352
12. Van Emon J M et al. Immunochemical methods for environmental analysis. Washington, D C: American Chemical Society, 1990
13. Vanderlaan M et al. Immunoassays for trace chemical analysis: montoring toxic chemicals in humans, food, and the environment. Washington, D C: American Chemical Society, 1991
14. Ross C. Beier; Larry H. Stanker Immunoassays for residue analysis: food safety. American Chemical Society, Washington, D C 1996
15. United States Department of Agriculture et al. List of Rapid Tests, August 1991
16．李俊锁等，梨中Avermectin B1残留的酶联免疫吸附测定，植物保护学报 1996，Vol．23 No．4 333-337
17．潘荣生等，出口鳗鱼及制品中恶喹酸的ELISA快速检测方法的研究，畜牧与兽医1999，Vol．31增刊11-13
18．扬利国等 《酶免疫测定技术》南京大学出版社 南京 1998年
19．SN 0133-92 出口粮谷中二嗪磷、倍硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、稻丰散、苯硫磷残留量检验方法．国家进出口商品检验局
20．蒋木庚 免疫化学技术及其在农化分析中的应用 江苏农药 96年 第一期P9
21．洪孝庄 孙曼霁主编 蛋白连接技术 中国医学科技出版社 北京 1993
22．毕爱华等主编 医学免疫学 人民军医出版社 北京 2002
23．杜念兴主编 兽医免疫学 中国农业出版社，1997
24. Vanderlaan M et al. Immunochemical techniques in trace residue analysis. ACS Symp.
25. Ser. 1991, No. 451, 2-13; 17 ref.
26. Robert O. H. Et al. Hapten synthesis for pesticide immunoassay development. ACS Symp. Ser. 1991, No. 451,14-27
27. Prithipal Singh et al. J. Agric. Food. Chem.,1989,37:109-114
28．SN／T 0001-1995 出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定．国家进出口商品检验局
29．SN 0132-92 出口粮谷中对硫磷残留量检验方法．国家进出口商品检验局
30．SN 0214-93 出口肉及肉制品中敌敌畏、二嗪磷、皮蝇磷、毒死蜱、杀螟硫磷、对硫磷、乙硫磷、蝇毒磷残留量检验方法．国家进出口商品检验局
31．郭爱珍等，牛奶孕酮酶免疫测定及其在奶牛繁殖上的应用，中国奶牛 1989，(5)：39
32．郭爱珍等，奶牛乳汁孕酮EIA快速诊断试剂盒研制与应用，上海畜牧兽医通讯 1991，(6)：29
33．朱培坤等，用酶标试纸检测青菜叶片肉的车前花叶病毒，科学通报 1982，27(4)：242
34．徐伟军等，用酶联免疫测定法检测大白菜灰心病毒，自然杂志，1982，(5)：799
35．徐文俊等，脱落酸(ABA)的放射免疫测定法，南京农业大学学报，1988，11(4)增：32
36．张能刚等，吲哚乙酸间接酶联免疫法的测定(建立)，南京农业大学学报，1990，13(1)：116
37．杨利国等，孕酮辣根过氧化物酶标记物的制备与鉴定，南京农业大学学报 1986，(3)：127
38．杨利国等，孕酮酶免疫测定试剂盒的制备及其在家畜繁殖上的应用，南京农业大学学报，1988，(4)：61
39．石放雄等，孕酮酶免疫测试盒与奶牛繁殖，中国奶牛，1990，(4)：36
40．吴子伟等，孕酮酶标试剂盒在杭州地区的应用，中国奶牛，1990，(2)：48
41．杨利国等，水牛超排处理后血请PMSG残留量的酶免疫吸附测定，畜牧兽医学报，1991，22(1)：9，(AGRINDEX，VOLXIX，NO．5，93-04123)
42．杨利国等，GNRH酶免疫测定方法的建立，黑龙江动物繁殖，1993，(3)：15
43．汪兴生等，褪黑激素酶免疫测定方法的建立与应用，[学位论文]南京：南京农业大学，1995
44．夏银等，褪黑激素抗原抗体制备的研究，南农动物科学系，畜物科技进展，1994，177
45．胡铁军，ELISA及其在食品蛋白质研究中的应用，中国畜产与食品，1995，2(6)：264
46．骆家理等，辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的简易方法，生物化学与生物物理学报，1981，13：1
47．姚连生，辣根过氧化物酶一雌二醇结合物的制备，生物化学与生物物理学报，1985，17：601
48．刘胜江等，胶固素酶联免疫吸附试验的建立及其在血清学诊断上的应用，[学位论文]南京：南京农业大学动物医学院，1985
49．顾志香等，应用斑点酶联免疫吸附试验检测猪病病毒抗体的试验，中国兽学科技，1988，(11)：59
50．玄学南，斑点酶联免疫吸附试验简介，中国兽医科技，1987，(12)：51
51．邝明慧等，斑点酶联免疫吸附试验方法简介，中国兽医科技，1988，(2)：62
52．杨树民，斑点试验在寄生虫病免疫诊断学中的运用，中国兽医科技，1988，(2)：63
53．董宗祈等，图片法ELISA检测腹泻患儿粪便中轮状病毒抗原的研究，中国人兽共患病杂志，1987，(2)：8
54．王振国等，食品中霉菌毒素残留免疫学检测技术，中国畜产与食品，1997，Vol．4 No．2
55．家畜及饲料中克伦特罗等 β-兴奋剂的检测与确证技术近况，现代商检科技，1998，5
56．出口鸡肉食品中庆大霉素硫酸盐残留量生物学检测方法的探讨，现代商检科技，1997，3
57．蜂胶中四环素族抗生素残留的测定，现代商检科技，1998，3
58．荧光光度法快速检测食品中黄曲霉毒素，检验检疫科学，1999，6
59．畜、水产食品中的残留物质检验方法 国家商检局检验处，1991
60．陈炳卿 孙长璟主编 食品污染与健康 化学工业出版社，2002
61．王秉栋主编 食品卫生检验手册 上海科学技术出版社，2003
62．毕爱华等主编 医学免疫学 人民军医出版社 北京 2002
63．王秀茹 主编 预防医学微生物学及检验技术 人民卫生出版社 北京 2002年4月
64．王晶等主编 食品安全快速检测技术 化学工业出版社 北京 2002年11月
65．徐宜为编著 免疫检测技术 科学出版社 北京 1997年6月
66．朱迅主编 免疫学进展 人民卫生出版社 北京 2002年
67．周艺炎主编 免疫学原理 上海科学技术文献出版社 上海 2000年
68．于善谦等编 免疫学导论 高等教育出版社 施普林格出版社 北京 1999年