苏云金芽孢杆菌NU-1、NU-2毒力提高与保护的研究
|
摘要
本实验研究了苏云金杆菌NU-1、NU-2毒力的提高与保护。
研究了NU-1、NU-2的菌种培养、种子培养，筛选了适宜的培养条件；出于工业化生产的目的，利用正交方法优化筛选了发酵培养基，并测定了晶体蛋白含量。结论为：菌种培养72h，采用1号种子培养基，4％接种量，种子培养7h，NU-1在2号、10号发酵培养基上，NU-2在4号发酵培养基上发酵结果最高。NU-1在2号培养基上发酵40h，菌数达85.5×10~8个／ml，pH8.2，晶体蛋白含量为6.320mg/ml，在10号培养基上的生长情况与其相似；NU-2在4号培养基上发酵42h，菌数达到78.0×10~8个／ml，pH8.1，晶体蛋白含量为6.085mg／ml。为了进一步研究NU-1、NU-2的生长情况，还测定了其生长和pH曲线。
筛选出两种添加剂，试验了它们对Bt发酵的影响。结果表明：添加剂1号和添加剂2号都能提高Bt的发酵菌数并缩短发酵时间。
采用不同防腐剂处理Bt制剂，研究了防腐剂的防腐效果。试验结果表明防腐剂1号，2号都是良好的防腐剂，防腐剂1号用量0.15％，防腐剂2号用量0.04％就可取得理想的防腐效果。
用SDS-PAGE、酶活测定、电镜观察等方法研究了紫外线照射对Bt的破坏，并初步探寻了保护方法。结果表明：紫外线照射能破坏晶体蛋白的表面结构和形态，照射24h后，酶活性几乎全部丧失，SDS-PAGE显示晶体蛋白几乎完全不溶。添加0.5％苋菜红做保护剂，再经紫外线照射后，酶活降低较小，电泳显示伴孢晶体碱溶产生的135KD和65KD原毒素蛋白几乎无变化，证明染料类是较好的保护剂。
The main topic of the paper is the increase and protection of toxicity of two Strains , NU-1 and NU-2, of Bacillus thuringiensis.
The culture of strains and seeds of NU-1, NU-2 was researched to screen out the suitable culture condition. The orthogonal experiment was tested to select the best fermentation medium. The crystal protein was purified and its density was measured. Result showed: when the No1 seed medium, the inoculation of 4%, 72 hours' culture of strain and 7 hours' culture of seed were used, the fermentation of NU-1 in No2 and No10 fermentation media were highest and fermentation of NU-2 in No.4 fermentation medium get the best effect. In No.2 fermentation medium of NU-1, the quantum reached 85.8 X 108/ml, and the density of crystal protein was 6.320mg/ml after 40 hours. The result of NU-1 in No. 10 fermentation medium was similar to No.2. In No4 fermentation media of NU-2, the quantum reached 78.0X108/ml, and the density of crystal protein was 6.085mg/ml after 42 hours. The curves of growth and pH were tested.
Chemical additives were used to enhance the activity of Bt. The results indicated that No.l and No.2 additives both increased the quantum of strains and shortened the time of fermentation.
Experiments were designed to treat Bt with different preservations. Results showed that No. 1 and No.2 restrained strongly the sprouting of spores and the growth ofBt within 0-96 hours.
The Ultraviolet-mediated impairment and protection of NU-1 and NU-2 were studied by the means of SDS-PAGE, test of enzyme activities and SEM. Results showed: the morphology and surface of PC were damaged by UV rays; the activities of enzymes and the solubility of parasporal crystal were almost lost after 24h radiation. Bt suspension with 0.5% amaranth exhibited the good solubility and retained most activities of enzymes after UV radiation. It was proved that Bt suspension with amaranth showed strong anti-ultraviolet effect.
研究了NU-1、NU-2的菌种培养、种子培养，筛选了适宜的培养条件；出于工业化生产的目的，利用正交方法优化筛选了发酵培养基，并测定了晶体蛋白含量。结论为：菌种培养72h，采用1号种子培养基，4％接种量，种子培养7h，NU-1在2号、10号发酵培养基上，NU-2在4号发酵培养基上发酵结果最高。NU-1在2号培养基上发酵40h，菌数达85.5×10~8个／ml，pH8.2，晶体蛋白含量为6.320mg/ml，在10号培养基上的生长情况与其相似；NU-2在4号培养基上发酵42h，菌数达到78.0×10~8个／ml，pH8.1，晶体蛋白含量为6.085mg／ml。为了进一步研究NU-1、NU-2的生长情况，还测定了其生长和pH曲线。
筛选出两种添加剂，试验了它们对Bt发酵的影响。结果表明：添加剂1号和添加剂2号都能提高Bt的发酵菌数并缩短发酵时间。
采用不同防腐剂处理Bt制剂，研究了防腐剂的防腐效果。试验结果表明防腐剂1号，2号都是良好的防腐剂，防腐剂1号用量0.15％，防腐剂2号用量0.04％就可取得理想的防腐效果。
用SDS-PAGE、酶活测定、电镜观察等方法研究了紫外线照射对Bt的破坏，并初步探寻了保护方法。结果表明：紫外线照射能破坏晶体蛋白的表面结构和形态，照射24h后，酶活性几乎全部丧失，SDS-PAGE显示晶体蛋白几乎完全不溶。添加0.5％苋菜红做保护剂，再经紫外线照射后，酶活降低较小，电泳显示伴孢晶体碱溶产生的135KD和65KD原毒素蛋白几乎无变化，证明染料类是较好的保护剂。
The main topic of the paper is the increase and protection of toxicity of two Strains , NU-1 and NU-2, of Bacillus thuringiensis.
The culture of strains and seeds of NU-1, NU-2 was researched to screen out the suitable culture condition. The orthogonal experiment was tested to select the best fermentation medium. The crystal protein was purified and its density was measured. Result showed: when the No1 seed medium, the inoculation of 4%, 72 hours' culture of strain and 7 hours' culture of seed were used, the fermentation of NU-1 in No2 and No10 fermentation media were highest and fermentation of NU-2 in No.4 fermentation medium get the best effect. In No.2 fermentation medium of NU-1, the quantum reached 85.8 X 108/ml, and the density of crystal protein was 6.320mg/ml after 40 hours. The result of NU-1 in No. 10 fermentation medium was similar to No.2. In No4 fermentation media of NU-2, the quantum reached 78.0X108/ml, and the density of crystal protein was 6.085mg/ml after 42 hours. The curves of growth and pH were tested.
Chemical additives were used to enhance the activity of Bt. The results indicated that No.l and No.2 additives both increased the quantum of strains and shortened the time of fermentation.
Experiments were designed to treat Bt with different preservations. Results showed that No. 1 and No.2 restrained strongly the sprouting of spores and the growth ofBt within 0-96 hours.
The Ultraviolet-mediated impairment and protection of NU-1 and NU-2 were studied by the means of SDS-PAGE, test of enzyme activities and SEM. Results showed: the morphology and surface of PC were damaged by UV rays; the activities of enzymes and the solubility of parasporal crystal were almost lost after 24h radiation. Bt suspension with 0.5% amaranth exhibited the good solubility and retained most activities of enzymes after UV radiation. It was proved that Bt suspension with amaranth showed strong anti-ultraviolet effect.
引文
[1] 荣一兵．苏云金杆菌研究的历史和现状．黄石高等专科学校学报．2000，16(3)：33-35．
[2] 雷进海．生物杀虫剂Bt研究开发进展．四川化工与腐蚀控制．1999，2(1)：42-44．
[3] Cécile Rang, Lawrence A, Lacey R. The Crystal Proteins from Bacillus thuringiensis subsp. thompsoni Display a Synergistic Activity Against the Codling Moth. FEMS Microbiology Letters, 2000, 40(3):200-204.
[4] Boctor L.Z.,H.S.Satama. Effect of Bacillus thuringiensis on the liquid content and composition of Bpodaptem littoralis. Invent pathol, 1983,41:381-384.
[5] Cheung W.W.K.,Y.T.Lan. Histochemical studies on normal and Bacillus thuringiensis -infect Pirris carrid iniarval inidgut.Bull.Inst.Zool., Academia Siniea. 1993 32(1): 12-22.
[6] 戴莲韵．苏云金芽孢杆菌研究进展．北京：科学出版社，1997．1～137．
[7] 张宏宇．苏云金芽孢杆菌遗传多样性．遗传学报，2000，22(2)：125～127．
[8] 陈云鹏．Bt毒蛋白基因在转基因抗虫植物中的应用．生物学通报，2000，35(5)：15～16．
[9] 刘静宇，余建秀，汤慕瑾等．苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白及其特性．生物化工进展，2002，22(2)：44-47．
[10] 邵宗泽，喻子牛．苏云金芽孢杆菌辅助蛋白的研究进展．微生物学通报，2001，28(1)：77～81．
[11] 潘映红，张杰，黄大防，几种微生物杀虫蛋白基因研究进展．生物技术通报．1999．31(2)：1-4．
[12] Asano S. Cloning of novel enterotoxin genes fome Bacillus cereus and B. thuringinesis. Apply Environ Mierobiol, 1997,63(2): 1054-1058.
[13] Rajamohan F, Lee MK, Dean D H. Bacillus thuringinesis insecticidal proteins: molecular mode of action. Prog Nucleic Acid Res Mol Bio, 1998,160:1-27.
[14] Stackebrandt E. Liesack Nudeic W. Acid sand classification. Handbook of new bacteria lsestematics. Goodfellow M, Donnell AGO, eds. London: Academic press,1993.151～194.
[15] Priest F G. DNA homology in the Bacillus. In the Aerobic Endosperm forming Bacteria: classification and identification. Berleley RCW, Goodfellow ,eds. London: Academic press, 1981.37～57.
[16] 张宏宇．转苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫植物的研究与商品化．生物技术通报，1997，(3)：13～15．
[17] 吴继星．苏云金轩杆菌79007发酵上清液对棉铃虫的毒力作用．微生物学通报，1997，24(1)：35～36．
[18] 彭可凡．苏云金杆菌遗传工程杀虫剂．生物学通报，2001，36(2)：36．
[19] 樊中堂．抗虫棉的特性与种植．适用技术市场，2001，(2)：51．
[20] 杨崇良．农业转基因工程及其产品安全性检测研究现状．山东农业科学，2000，(5)：24～26．
[21] 夏兰芹．Bt杀虫基因在转基因双价抗虫棉中的整合与遗传稳定性．科学通报，2001，46(7)：565～568．
[22] 张厚忠．世界首例三抗棉在我国育出．农业科技开发，2000，(11)：39～40．
[23] 李汝忠．转Bt基因抗虫棉杂交后代的抗性表现与抗虫育种策略．山东农业科学，2000，(5)：7～9．
[24] 贾士荣．转基因作物安全性争论及其对策．生物技术通报，1999，15(6)：6～10．
[25] 潭声江．昆虫对Bt毒素的抗性和机理研究进展．昆虫知识，2001，38(1)：28～32．
[26] 顾真荣，马承铸，张繁琴等．苏云金杆菌HD-1菌株“空胞”现象及其高毒力菌株的选育，杀虫微生物，1994，4：98-102．
[27] 喻子牛，邱立友，李泽营．生物防治通报．1990，增刊：60-64．
[28] 陈月华，刘立新，梁凤来等．第六届全国杀虫微生物学术讨论会论文摘要．1995，17．
[29] 吴继星，陈在佴，谢天健等，苏云金杆菌无芽孢突变株的选育．生物防治通报，1993，9(1)：5-8．
[30] 吴继星，陈在佴，谢天健等．一株对棉铃虫高效的苏云金杆菌．1995，22(4)：195-197．
[31] 喻子牛，沈菊群，熊春树．生物防治通报．1990，增刊54-59．
[32] 吴继星，陈在佴，谢天健等．苏云金杆菌高效培养基优选模型的研究．生物防治通报，1994，10(3)：110-113．
[33] 金玉来．苏云金杆菌7216菌株的摇瓶发酵试验．工业微生物，1994，24(3)：35-40．
[34] 林同香．苏云金杆菌和培养基氨基酸的比较分析．福建农业大学学报．1995，24(1)：45-48．
[35] 郭爱莲，刘诗峰．利用工业废料摇瓶培养苏云金杆菌．微生物通报，1995，22(2)：83-85．
[36] 刘海滨，杨加华．大麦芽根发酵培养苏云金杆菌的初步研究．中国生物防治．1995，11(3)：111-113．
[37] 梁凤来，任改新，赵刚等．杀虫微生物．1994，4：197-198．
[38] 刘序章，余敦寿．杀虫微生物．1994，4：197-198．
[39] 马天良，谢辛珠，谢天健等．华东化工学院学报．1993，19(5)：573-576．
[40] 丁秋梅．湖北农业科学．1993，(12)：5-8
[41] 马天良，谢辛珠，谢天健等．苏云金杆菌发酵水平与溶氧关系的影响．华东化工学院学报．1993，19(1)：5-12．
[42] 杨自文，岳书奎，王开梅等．中国有害生物综合治理论文集．1996，1185
[43] 陈在佴，吴继星，张志刚等．我国苏云金杆菌液体深层发酵研究十年进展．中国生物防治，2002，18(1)：33-35．
[441 Juan Fene. Resistance in mosiquitoea : research on new chemicals and techniques for management. In : Moequito control research, annual report university of California, J Invertebr Pathol, 1991,12:234-238.
[45] Morris O N. Effect of some chemical insecticides on the germination and replication of commercial Bacillus thuringiensis. J Invertebr Patnol. 1983,26:199-204.
[46] 申继忠，钱传范．苏云金杆菌杀虫增效途径研究进展．生物防治通报，1994，10(3)：135-140．
[47] 顾真荣．苏云金杆菌液剂与杀虫双混用对稻纵卷叶螟的增效作用．生物防治通报，1993，9(4)：18-21．
[48] 鲁晓知，洪华珠．昆虫对苏云金杆菌的抗性研究进展．生物防治通报，1993，9(1)：36-39．
[49] 王道明，君心明，郭线茹等．无机盐对Bt制剂防治棉铃虫的增效作用．河南农业大学学报，1999，33(2)：186-189．
[50] 崔云龙，田明，邵宗泽．紫外线使苏云金杆菌伴孢晶体失活机理的研究．微生物学通报，1993，20(4)：193-195．
[51] Ignoffo C M, Hostetter D L, Silkorowski P P et al. Inactivation of representative species of entomo-pathogenic viruses, a bacterium, fungus, and protoaom by an ultraviolet light
source. Environ Entormol., 1977,6 (3): 411-415.
[52] 王碧琴，闵伟，安莉．苏云金杆菌菌体保护剂和增效剂的筛选．江西科学，1996，14(3)：167-171．
[53] Salama H S, Fod M S, Sharaby A. Novel biochemical avenues for enhancing Bacillus thuringiensis endotoxin potency against Spodoptera littoralis (Lep.:Nocttuidae). Entomophaga,1984,29(2):171-178.
[54] Salama H S, Fod M S, Sharaby A. Potential of some chemicals to increase the effectiveness of Bacillus thuringiensis Berl. Against Spodoptera littoralis Boisd. Zeitchrift fur Angewandte Entomnlogie,1985,100 (5): 425-433.
[55] Salama H S, Fod M S, Sharaby A. Role of feeding stimulants in increasing the efficiency of Bacillus thuringiensis versus Spodoptera littoralis(Lep.:Nocttuidae). Entomologia Generalis, 1985,10(2): 111-119.
[56] Salama H S, Abd-El-Baset M S, Ragaei M. Mode of action of chemical additives in enhancing the potency of Bacillus thuringiensis against lepidopterous insects. Journal of Applied Entomology, 1992,114(2):167-173.
[57] El-Moursy A, Aboul Ela R, Salama H S, et al. Chemical additives that affect the potency of endotoxin of Bacillus thuringiensis against Plodia interpunctella. Insect Science and Its Application, 1992,13(6):775-779.
[58] 吴继星．论苏云金杆菌制剂的增效措施．湖北植保，1995，6：25-26．
[59] 彭昌文．Bt研究概况及进展．曲阜师范大学学报，2002，28(3)：85-88．
[60] 李春喜，王文林．生物统计学．北京：科学出版社，1998．113-121
[61] 郑用熙．分析化学中的数理统计方法．北京：科学出版社，1986．180-220．
[62] 王瑛，白成．苏云金杆菌晶体与芽孢分离的研究．微生物学报，1980，20(3)：285-288．
[63] 顾真荣，彭中允．苏云金芽孢杆菌发酵液中晶体蛋白定量测定方法的探讨．微生物学通报，1992，19(4)：197-200．
[64] 邱思鑫，黄志鹏，黄必旺等．添加剂对苏云金杆菌发酵液杀虫效果的影响．中国生物防治，2002，18(5)：62-66．
[65] 马立安．防腐剂对苏云金杆菌制剂活力及毒力测定的影响．微生物学杂志，2000，20(3)：37-39．
[66] 马立安，陈启武．苏云金杆菌制剂生物测定饲料防腐剂的选择．湖北农学院学报，1999，19(4)：332-334．
[67] 王文军，钱传范，审继忠等．活性氧对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的损伤作用．微生物学宝，1999，39(5)：469-474．
[68] 王文军，钱传范，审继忠等．紫外线对Bt伴孢晶体的损伤和腐殖酸的保护作用．植物保护学报，2001，28(1)：49-54．
[69] Joshi S., Kozlowski M., Richens S. et al. Chitinase and chitobiase production during fermentation of genetically improved Serratia liquefaciens. Enzyme Microbiol. Technol., 1989,11:289-296.
[70] 李建屋，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法．北京大学出版社，1997，168-170．
[71] 李多伟，尉亚辉，王义潮等．生物技术试验与仪器操作指南．西北大学出版社，1996，16-19．
[72] 郭尧君．蛋白质电泳实验技术．科学出版社，1999：123-161．
[73] 陈月华，任改新，梁风来等．中国Bt Ken-Ag最佳发酵培养基的优选及其发酵生理学研究．微生物学通报，1995，22(3)：135-138．
[74] Schxeph F, Grickmore N, Van R J, et al, Bacillus thuringiensis and Its persticidal crystal portents. Microbiol Mol Biol Rev, 1998,62(2):775-806.
[75] 邱思鑫．利用酒精糟液培养苏云金芽孢杆菌的研究．无锡轻工业大学，2001，5：21-23．
[76] 余建秀，汤慕瑾，徐建敏等．苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究．中国生物防治，2002，18(1)：17-20．
[77] 朱雪峰，陈崇顺，郁志芳．植物几丁质酶的生理功能．生命的化学，2000，20(1)：36-37．
[78] 邱立友．微生物几丁质酶与害虫防治．河南农业大学学报，1995，29(2)：184-191．
[79] 张益，王建英．苏云金杆菌杀虫剂残效期的研究．微生物学通报，1984，11(2)：49-50．
[2] 雷进海．生物杀虫剂Bt研究开发进展．四川化工与腐蚀控制．1999，2(1)：42-44．
[3] Cécile Rang, Lawrence A, Lacey R. The Crystal Proteins from Bacillus thuringiensis subsp. thompsoni Display a Synergistic Activity Against the Codling Moth. FEMS Microbiology Letters, 2000, 40(3):200-204.
[4] Boctor L.Z.,H.S.Satama. Effect of Bacillus thuringiensis on the liquid content and composition of Bpodaptem littoralis. Invent pathol, 1983,41:381-384.
[5] Cheung W.W.K.,Y.T.Lan. Histochemical studies on normal and Bacillus thuringiensis -infect Pirris carrid iniarval inidgut.Bull.Inst.Zool., Academia Siniea. 1993 32(1): 12-22.
[6] 戴莲韵．苏云金芽孢杆菌研究进展．北京：科学出版社，1997．1～137．
[7] 张宏宇．苏云金芽孢杆菌遗传多样性．遗传学报，2000，22(2)：125～127．
[8] 陈云鹏．Bt毒蛋白基因在转基因抗虫植物中的应用．生物学通报，2000，35(5)：15～16．
[9] 刘静宇，余建秀，汤慕瑾等．苏云金杆菌Cyt类杀虫晶体蛋白及其特性．生物化工进展，2002，22(2)：44-47．
[10] 邵宗泽，喻子牛．苏云金芽孢杆菌辅助蛋白的研究进展．微生物学通报，2001，28(1)：77～81．
[11] 潘映红，张杰，黄大防，几种微生物杀虫蛋白基因研究进展．生物技术通报．1999．31(2)：1-4．
[12] Asano S. Cloning of novel enterotoxin genes fome Bacillus cereus and B. thuringinesis. Apply Environ Mierobiol, 1997,63(2): 1054-1058.
[13] Rajamohan F, Lee MK, Dean D H. Bacillus thuringinesis insecticidal proteins: molecular mode of action. Prog Nucleic Acid Res Mol Bio, 1998,160:1-27.
[14] Stackebrandt E. Liesack Nudeic W. Acid sand classification. Handbook of new bacteria lsestematics. Goodfellow M, Donnell AGO, eds. London: Academic press,1993.151～194.
[15] Priest F G. DNA homology in the Bacillus. In the Aerobic Endosperm forming Bacteria: classification and identification. Berleley RCW, Goodfellow ,eds. London: Academic press, 1981.37～57.
[16] 张宏宇．转苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫植物的研究与商品化．生物技术通报，1997，(3)：13～15．
[17] 吴继星．苏云金轩杆菌79007发酵上清液对棉铃虫的毒力作用．微生物学通报，1997，24(1)：35～36．
[18] 彭可凡．苏云金杆菌遗传工程杀虫剂．生物学通报，2001，36(2)：36．
[19] 樊中堂．抗虫棉的特性与种植．适用技术市场，2001，(2)：51．
[20] 杨崇良．农业转基因工程及其产品安全性检测研究现状．山东农业科学，2000，(5)：24～26．
[21] 夏兰芹．Bt杀虫基因在转基因双价抗虫棉中的整合与遗传稳定性．科学通报，2001，46(7)：565～568．
[22] 张厚忠．世界首例三抗棉在我国育出．农业科技开发，2000，(11)：39～40．
[23] 李汝忠．转Bt基因抗虫棉杂交后代的抗性表现与抗虫育种策略．山东农业科学，2000，(5)：7～9．
[24] 贾士荣．转基因作物安全性争论及其对策．生物技术通报，1999，15(6)：6～10．
[25] 潭声江．昆虫对Bt毒素的抗性和机理研究进展．昆虫知识，2001，38(1)：28～32．
[26] 顾真荣，马承铸，张繁琴等．苏云金杆菌HD-1菌株“空胞”现象及其高毒力菌株的选育，杀虫微生物，1994，4：98-102．
[27] 喻子牛，邱立友，李泽营．生物防治通报．1990，增刊：60-64．
[28] 陈月华，刘立新，梁凤来等．第六届全国杀虫微生物学术讨论会论文摘要．1995，17．
[29] 吴继星，陈在佴，谢天健等，苏云金杆菌无芽孢突变株的选育．生物防治通报，1993，9(1)：5-8．
[30] 吴继星，陈在佴，谢天健等．一株对棉铃虫高效的苏云金杆菌．1995，22(4)：195-197．
[31] 喻子牛，沈菊群，熊春树．生物防治通报．1990，增刊54-59．
[32] 吴继星，陈在佴，谢天健等．苏云金杆菌高效培养基优选模型的研究．生物防治通报，1994，10(3)：110-113．
[33] 金玉来．苏云金杆菌7216菌株的摇瓶发酵试验．工业微生物，1994，24(3)：35-40．
[34] 林同香．苏云金杆菌和培养基氨基酸的比较分析．福建农业大学学报．1995，24(1)：45-48．
[35] 郭爱莲，刘诗峰．利用工业废料摇瓶培养苏云金杆菌．微生物通报，1995，22(2)：83-85．
[36] 刘海滨，杨加华．大麦芽根发酵培养苏云金杆菌的初步研究．中国生物防治．1995，11(3)：111-113．
[37] 梁凤来，任改新，赵刚等．杀虫微生物．1994，4：197-198．
[38] 刘序章，余敦寿．杀虫微生物．1994，4：197-198．
[39] 马天良，谢辛珠，谢天健等．华东化工学院学报．1993，19(5)：573-576．
[40] 丁秋梅．湖北农业科学．1993，(12)：5-8
[41] 马天良，谢辛珠，谢天健等．苏云金杆菌发酵水平与溶氧关系的影响．华东化工学院学报．1993，19(1)：5-12．
[42] 杨自文，岳书奎，王开梅等．中国有害生物综合治理论文集．1996，1185
[43] 陈在佴，吴继星，张志刚等．我国苏云金杆菌液体深层发酵研究十年进展．中国生物防治，2002，18(1)：33-35．
[441 Juan Fene. Resistance in mosiquitoea : research on new chemicals and techniques for management. In : Moequito control research, annual report university of California, J Invertebr Pathol, 1991,12:234-238.
[45] Morris O N. Effect of some chemical insecticides on the germination and replication of commercial Bacillus thuringiensis. J Invertebr Patnol. 1983,26:199-204.
[46] 申继忠，钱传范．苏云金杆菌杀虫增效途径研究进展．生物防治通报，1994，10(3)：135-140．
[47] 顾真荣．苏云金杆菌液剂与杀虫双混用对稻纵卷叶螟的增效作用．生物防治通报，1993，9(4)：18-21．
[48] 鲁晓知，洪华珠．昆虫对苏云金杆菌的抗性研究进展．生物防治通报，1993，9(1)：36-39．
[49] 王道明，君心明，郭线茹等．无机盐对Bt制剂防治棉铃虫的增效作用．河南农业大学学报，1999，33(2)：186-189．
[50] 崔云龙，田明，邵宗泽．紫外线使苏云金杆菌伴孢晶体失活机理的研究．微生物学通报，1993，20(4)：193-195．
[51] Ignoffo C M, Hostetter D L, Silkorowski P P et al. Inactivation of representative species of entomo-pathogenic viruses, a bacterium, fungus, and protoaom by an ultraviolet light
source. Environ Entormol., 1977,6 (3): 411-415.
[52] 王碧琴，闵伟，安莉．苏云金杆菌菌体保护剂和增效剂的筛选．江西科学，1996，14(3)：167-171．
[53] Salama H S, Fod M S, Sharaby A. Novel biochemical avenues for enhancing Bacillus thuringiensis endotoxin potency against Spodoptera littoralis (Lep.:Nocttuidae). Entomophaga,1984,29(2):171-178.
[54] Salama H S, Fod M S, Sharaby A. Potential of some chemicals to increase the effectiveness of Bacillus thuringiensis Berl. Against Spodoptera littoralis Boisd. Zeitchrift fur Angewandte Entomnlogie,1985,100 (5): 425-433.
[55] Salama H S, Fod M S, Sharaby A. Role of feeding stimulants in increasing the efficiency of Bacillus thuringiensis versus Spodoptera littoralis(Lep.:Nocttuidae). Entomologia Generalis, 1985,10(2): 111-119.
[56] Salama H S, Abd-El-Baset M S, Ragaei M. Mode of action of chemical additives in enhancing the potency of Bacillus thuringiensis against lepidopterous insects. Journal of Applied Entomology, 1992,114(2):167-173.
[57] El-Moursy A, Aboul Ela R, Salama H S, et al. Chemical additives that affect the potency of endotoxin of Bacillus thuringiensis against Plodia interpunctella. Insect Science and Its Application, 1992,13(6):775-779.
[58] 吴继星．论苏云金杆菌制剂的增效措施．湖北植保，1995，6：25-26．
[59] 彭昌文．Bt研究概况及进展．曲阜师范大学学报，2002，28(3)：85-88．
[60] 李春喜，王文林．生物统计学．北京：科学出版社，1998．113-121
[61] 郑用熙．分析化学中的数理统计方法．北京：科学出版社，1986．180-220．
[62] 王瑛，白成．苏云金杆菌晶体与芽孢分离的研究．微生物学报，1980，20(3)：285-288．
[63] 顾真荣，彭中允．苏云金芽孢杆菌发酵液中晶体蛋白定量测定方法的探讨．微生物学通报，1992，19(4)：197-200．
[64] 邱思鑫，黄志鹏，黄必旺等．添加剂对苏云金杆菌发酵液杀虫效果的影响．中国生物防治，2002，18(5)：62-66．
[65] 马立安．防腐剂对苏云金杆菌制剂活力及毒力测定的影响．微生物学杂志，2000，20(3)：37-39．
[66] 马立安，陈启武．苏云金杆菌制剂生物测定饲料防腐剂的选择．湖北农学院学报，1999，19(4)：332-334．
[67] 王文军，钱传范，审继忠等．活性氧对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的损伤作用．微生物学宝，1999，39(5)：469-474．
[68] 王文军，钱传范，审继忠等．紫外线对Bt伴孢晶体的损伤和腐殖酸的保护作用．植物保护学报，2001，28(1)：49-54．
[69] Joshi S., Kozlowski M., Richens S. et al. Chitinase and chitobiase production during fermentation of genetically improved Serratia liquefaciens. Enzyme Microbiol. Technol., 1989,11:289-296.
[70] 李建屋，余瑞元，袁明秀等．生物化学实验原理和方法．北京大学出版社，1997，168-170．
[71] 李多伟，尉亚辉，王义潮等．生物技术试验与仪器操作指南．西北大学出版社，1996，16-19．
[72] 郭尧君．蛋白质电泳实验技术．科学出版社，1999：123-161．
[73] 陈月华，任改新，梁风来等．中国Bt Ken-Ag最佳发酵培养基的优选及其发酵生理学研究．微生物学通报，1995，22(3)：135-138．
[74] Schxeph F, Grickmore N, Van R J, et al, Bacillus thuringiensis and Its persticidal crystal portents. Microbiol Mol Biol Rev, 1998,62(2):775-806.
[75] 邱思鑫．利用酒精糟液培养苏云金芽孢杆菌的研究．无锡轻工业大学，2001，5：21-23．
[76] 余建秀，汤慕瑾，徐建敏等．苏云金杆菌小试生产发酵影响因子的研究．中国生物防治，2002，18(1)：17-20．
[77] 朱雪峰，陈崇顺，郁志芳．植物几丁质酶的生理功能．生命的化学，2000，20(1)：36-37．
[78] 邱立友．微生物几丁质酶与害虫防治．河南农业大学学报，1995，29(2)：184-191．
[79] 张益，王建英．苏云金杆菌杀虫剂残效期的研究．微生物学通报，1984，11(2)：49-50．