归术益坤汤治疗多囊卵巢综合征的临床与实验研究
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摘要
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)又称为Stein-Leventhal综合征,是以发病多因性、临床症状呈多态性为主要特征的一种内分泌综合征。其病因复杂,涉及范围广泛,至今病因尚不明确,一直以来是国内外众多学者努力完善的课题之一。其典型的临床表现为卵巢多囊性改变、高雄激素血症和黄体生成素(LH)/促卵泡激素(FSH)比值增高,不同程度的月经异常(月经稀发、量少、闭经、功能失调性子宫出血)、不孕、多毛、痤疮、肥胖等,并常伴有胰岛素抵抗或高胰岛素血症和高脂血症。根据其症状,中医学可归于“闭经”、“崩漏”“癥瘕”的病症范畴,古代医家和现代中医学者辨证论治,收到了很好的疗效,显示了中医药在治疗PCOS领域中的巨大潜力。因此,探寻PCOS的病因病机和有效治疗方法,是当前临床研究的重大课题,具有重要社会意义和临床价值。本研究从临床和实验两方面探索PCOS的治疗规律和作用机制,为中医药治疗PCOS贡献力量。
1临床研究
1.1 PCOS患者舌象的研究
1.1.1目的：从中医四诊中最有特色及客观化的舌诊角度探讨PCOS的中医证候规律性,探讨PCOS舌象特征与数字化舌图的运用。
1.1.2方法：利用数码相机拍摄101例PCOS患者的舌象照片,通过图像统一化处理,运用统计学方法,对舌象的颜色、形态、舌苔等多方面进行分析,总结规律。
1.1.3结果：舌色可分为3类：淡紫舌占34.65%,淡舌占45.54%,紫红舌占19.80%；胖大舌、齿痕舌、嫩舌出现的比例高,且常合并出现,舌苔以腻苔和滑苔多见。
1.1.4结论：临床所见PCOS患者以脾肾不足多见,可同时出现血瘀、痰湿的病理产物。
1.2归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效观察
1.2.1目的：探索临床常见的脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的有效治疗方法。
1.2.2方法：通过对比用药前后妊娠率、临床症状评分、BMI指数、激素水平、B超等方面,评价有补肾健脾、养血通利作用的归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效。
1.2.3结果：归术益坤汤在对改善PCOS患者临床症状、高雄激素水平、卵巢增大等方面,疗效极为显著。就PCOS最典型的月经后错或闭经、月经量少、肥胖、痤疮、多毛等症状而言,治疗6个月后症状均明显改善。治疗6个月内妊娠率为10.2%,治疗12个月内妊娠率为37.5%。
1.2.4结论：归术益坤汤能够有效改善脾肾不足、湿浊结聚型PCOS患者的临床症状和实验室指标,促进排卵,提高妊娠率。
2实验研究
2.1归术益坤汤对PCOS大鼠血清激素水平和组织学的影响2.1.1目的：通过动物实验,从血清激素和卵巢组织学方面检验归术益坤汤治疗PCOS的疗效。
2.1.2方法：利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,灌服归术益坤汤给予治疗,以氯米芬为阳性对照组,检测大鼠用药后正常对照组、模型对照组、阳性对照组、中药组之间激素水平、卵巢结构的变化。
2.1.3结果：模型组大鼠血清睾酮(T)的含量明显升高,与正常组、中药组、阳性药组之间均有显著差异(P<0.05),正常组、中药组、阳性药组之间均无组间差异(P>0.05)。模型组的促黄体生成素(LH)水平与阳性药组相比有显著差异(P<0.05),其他各组间差异不明显。而各组间雌二醇(E2)与促卵泡生成素(FSH)之间的差异不明显。模型组大鼠卵泡多数成囊性扩张,可见囊性窦卵泡,颗粒细胞层数减少,黄体组织数量减少。中药组卵巢可见少许囊性窦卵泡的出现,可见成熟卵泡,颗粒细胞数较模型组明显增加,为多层,可见黄体。氯米芬阳性药组亦可见部分囊性窦卵泡,颗粒细胞为多层,排列比较整齐,黄体组织较少。
2.1.4结论：归术益坤汤能够有效改善大鼠内分泌,可恢复卵巢卵泡结构,使颗粒细胞增殖,促进卵泡发育。
2.2归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬的影响
2.2.1目的：通过观察归术益坤汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞自噬发生的影响,发现PCOS颗粒细胞减少的新机制,探索中药治疗PCOS的相关作用机制。
2.2.2方法：实验利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,灌服归术益坤汤给予治疗,以氯米芬为阳性对照组,用药后提取大鼠卵巢颗粒细胞,应用MDC荧光染色及流式细胞术测定鼠颗粒细胞自噬率。采用western blot方法测定各组动物颗粒细胞中自噬特异性标志LC3和自噬相关蛋白Bclin-1的表达,验证各组间自噬发生的差异。
2.2.3结果：MDC荧光染色后荧光强度测定：模型组>阳性药组>中药组>正常组。组间两两比较,模型组与正常组、中药组、阳性药组之间均存在显著性差异(P<0.05),而正常组、中药组、阳性药组无组间差异。正常对照组LC3Ⅰ和Ⅱ、Bclin-1蛋白的表达量均较低,PCOS模型组的LC3、Bclin-1呈现高表达(与正常组比较P<0.01)。经中药作用后可见LC3、Bclin-1平呈明显降低趋势(与模型组比较P<0.05),但仍高于阳性药组。
2.2.4结论：PCOS模型大鼠的卵巢颗粒细胞确实存在有自噬高发的现象,与PCOS颗粒细胞减少相关。归术益坤汤可以显著降低细胞自噬的发生,有效保护了颗粒细胞,从而对卵巢功能起到了维护作用。
2.3归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬PI3k/Akt通路的调节作用
2.3.1目的：通过检测归术益坤汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞PI3K、AKT和mTOR的磷酸化蛋白表达水平的影响,对中药干预PCOS卵巢颗粒细胞自噬的信号转导通路加以研究。
2.3.2方法：实验利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,将动物灌服归术益坤汤给予疗,以氯米芬为阳性对照组,用药后取各组实验大鼠卵巢颗粒细胞,提取蛋白后进行蛋白定量,采用western blot方法测定PI3K、Akt、mTOR的蛋白表达。
2.3.3结果：模型组PI3K、Akt、mTOR的表达均明显降低,中药与阳性药干预后PI3K、AktmTOR表达明显提高。
2.3.4结论：归术益坤汤可有效调节PI3K的活性,提高其蛋白表达量,从而影响mTOR的表达,对自噬发挥了负向调控的作用。
Polycystic ovary syndrome, PCOS, also known as Stein-Leventhal syndrome, Is a kind of endocrine syndrome with the main characteristics is caused by Polygenetic, clinical symptoms is polymorphism. The etiology is complex and wide, so far still unclear, and is one of task for world researchers try to improve. The typical clinical manifestations is polycystic ovarian changes in hyperandrogenism and luteinizing hormone (LH)/follicle-stimulating hormone (FSH) ratio increased. Varying degrees of abnormal menstruation (menstrual thin hair, less, amenorrhea, dysfunctional uterine bleeding), infertility, hirsutism, acne, obesity, etc. And of ten accompanied by the emergence with ages insulin resistance or hyperinsulinemia, and hyperlipidemia. According to their symptoms, the Traditional Chinese Medicine can be attributed to "amenorrhea", "bleeding", "Zheng Jia" of the disease areas. The ancient and modern Chinese medicine scholars'diagnosis and treatment has received good results, showing great potential of Chinese medicine in the treatment of PCOS. Therefore, to explore the etiology and pathogenesis of PCOS and effective treatment methods is a major topic of current clinical research with great social significance and clinical value. This thesis from both clinical and experimental to explore the treatment of PCOS and mechanisms, and contribute to Chinese medicine of PCOS.
Clinical Research 1
1.1 Research of PCOS patients'tongue
1.1.1 Objective:From Chinese medicine four diagnostic's features and with the objective point of view of the tongue to study the PCOS regularity, Study the features of PCOS tongue and tongue map digital usage.
1.1.2 Methods:By study 101 PCOS patients'tongue digital camera photos, through a unified image processing method then using statistical methods to analyze tongue color, shape, tongue, and many other features to sum up the rule.
1.1.3 Results:The tongue can be divided into three categories:purple tongue,34.65%, pale tongue 45.54%, purple tongue 19.80%; fat, large tongue, tongue indentation, tender tongue ratio appears high, and of ten appear together. The tongue coating mostly is greasy and slippery.
1.1.4 Conclusion: The clinical findings of PCOS patients more common with spleen deficiency, which can occur and blood stasis, phlegm in the pathological product. 1.2 Use Gui Zhu Jian Kun Tang to cure the PCOS patients with yang deficiency of spleen and kidney and phlegm-dampness in body. To compare the differents between the symptoms before and after the treatment.
1.2.1 Objective: To explore the effective treatment for PCOS with yang deficiency of spleen and kidney and phlegm-dampness in body.
1.2.2 Methods:By comparing the pregnancy rate, clinical score, BMI index, hormone levels, type-B ultrasonic before and after treatment.
1.2.3 Results:Gui Zhu Jian Kun Tang can improving clinical of PCOS patients symptoms, androgen levels, ovarian increases, etc., the effect is extremely significant. For the most typical PCOS symptoms e.g. late menstruation or amenorrhea, less menstruation, obesity, acne, hirsutism, after treatment 6 months the symptoms were significantly improved. Pregnancy rate within 6 months of treatment was 10.2%, pregnancy rate within 12 months of treatment was 37.5%.
1.2.4 Conclusion: Gui Zhu Jian Kun Tang can improve the spleen and kidney deficiency, yang deficiency of spleen and kidney and phlegm-dampness type PCOS patients with clinical symptoms and laboratory indicators improved, to promote ovulation and improve the pregnancy rate.
2 Experimental Study
2.1 Gui Zhu Jian Kun Tang impact to PCOS rats on serum hormone levels and histological
2.1.1 Objective: Through animal experiments, from the serum hormone and ovarian histology verify the efficacy of Gui Zhu Jian Kun Tang treatment on PCOS.
2.1.2 Methods:Setup PCOS rat model by letrozole induced, fed animals with Gui Zhu Jian Kun Tang, compare with clomiphene as a positive control group, analyze hormone levels and ovarian changes within normal treatment control group, model control group, positive control group, Chinese medicines group.
2.1.3 Results:The model control group rats serum testosterone (T) were significantly increased, compare with the normal group, Chinese medicines group and the positive drug group the difference was significantly between groups (P<0.05), normal group, Chinese medicines group, positive medicine group no differences between each groups (P> 0.05). On model group the luteinizing hormone (LH) levels was significantly different with positive drug group (P<0.05), no significant difference between the other groups. The estradiol (E2) and follicle-stimulating EPO (FSH) no significant difference betweer each groups. Most of model rats the follicles were cystic expansion, showing cystic antral follicles, granulosa cell layer decreased, luteal tissue decreased. Chinese medicines group showing a few Graafianfollicle, shows mature follicles, granulosa cells were significantly increased compared with the model group, was multi-layer and luteal visible. Clomiphene group has also seen some Graafian follicle, granulosa cells is multi-layer, arranged orderly, less luteal tissue visible.
2.1.4 Conclusion:Gui Zhu Jian Kun Tang can improve the Rat Endocrinology, restore ovarian follicle structure, make the granulosa cell proliferation and follicular development.
2.2 Gui Zhu Jian Kun Tang impact to PCOS rats granulosa cells autophagy rate. ovarian morphology and granulosa cell autophagy to explore the role of traditional Chinese medicine treatment of PCOS related mechanisms.
2.2.2 Methods:The experiment setup PCOS rat model by using letrozole induce, fed animals with Gui Zhu Jian Kun Tang, use clomiphene as a positive control group, extract rats ovarian granule cells after treatment, apply with MDC fluorescence staining and flow cytometry methord check rat granulosa cells autophagy difference. Use western blot to test animal'sdeliverance of LC3 and Bclin-1, verify the autophagy difference of each groups.
2.2.3 Results:MDC measured fluorescence intensity after staining: the model group> positive drug group> Chinese medicine group> normal group. Between any two groups, model group and normal group, Chinese medicine group and the positive drug groups all have significantly difference (P<0.05). While the normal group, Chinese medicine group, positive medicine group had no difference. Normal control group LC3ⅠandⅡ, Bclin-1 protein expression levels low, On PCOS model group, LC3, Bclin-1 shows high expression (compared with normal group P<0.01). After treatment by Chinese medicine the LC3, Bclin-1 level had significantly lower trend (compared with model group P<0.05), but still higher than the positive drug group.
2.2.4 Conclusion: PCOS rat model the ovarian granulosa cells exist a high incidence of the autophagy, associated with PCOS granulosa cells reduced. Gui Zhu Jian Kun Tang can significantly reduce the occurrence of autophagy, have effective protection of the granule cells, and thus piay a maintenance role for ovarian function.
2.3 Gui Zhu Jian Kun Tang regulate PCOS rat granulosa cells autophagy pathway PI3k/Akt
2.3.1 Objective: To analysis the Gui Zhu Jian Kun Tang impact to PCOS rat ovarian tissue PI3K I, AKT and mTOR phosphorylation level of protein expression and study the Chinese medicine intervention in PCOS ovaries autophagy signaling pathway.
2.3.2 Methods:The experiment setup PCOS rat model by using letrozole induce, fed animals with Gui Zhu Jian Kun Tang, use clomiphene as a positive control group, extract rats ovarian granule cells after treatment, carry on protein quantification after extracted proteins, determined by western blot PI3K, Akt, mTOR protein.
2.3.3 Result:The model group PI3K, Akt, mTOR expression was significantly decreased, after the intervention of traditional Chinese medicine and positive drug the PI3K, Akt, mTOR expression was significantly increased.
2.3.4 Conclusion: Gui Zhu Jian Kun Tang can regulate the activity of PI3K to increase their protein expression, thus affecting the expression of mTOR and plays a negative regulatory role to autophagy.
1临床研究
1.1 PCOS患者舌象的研究
1.1.1目的：从中医四诊中最有特色及客观化的舌诊角度探讨PCOS的中医证候规律性,探讨PCOS舌象特征与数字化舌图的运用。
1.1.2方法：利用数码相机拍摄101例PCOS患者的舌象照片,通过图像统一化处理,运用统计学方法,对舌象的颜色、形态、舌苔等多方面进行分析,总结规律。
1.1.3结果：舌色可分为3类：淡紫舌占34.65%,淡舌占45.54%,紫红舌占19.80%；胖大舌、齿痕舌、嫩舌出现的比例高,且常合并出现,舌苔以腻苔和滑苔多见。
1.1.4结论：临床所见PCOS患者以脾肾不足多见,可同时出现血瘀、痰湿的病理产物。
1.2归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效观察
1.2.1目的：探索临床常见的脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的有效治疗方法。
1.2.2方法：通过对比用药前后妊娠率、临床症状评分、BMI指数、激素水平、B超等方面,评价有补肾健脾、养血通利作用的归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效。
1.2.3结果：归术益坤汤在对改善PCOS患者临床症状、高雄激素水平、卵巢增大等方面,疗效极为显著。就PCOS最典型的月经后错或闭经、月经量少、肥胖、痤疮、多毛等症状而言,治疗6个月后症状均明显改善。治疗6个月内妊娠率为10.2%,治疗12个月内妊娠率为37.5%。
1.2.4结论：归术益坤汤能够有效改善脾肾不足、湿浊结聚型PCOS患者的临床症状和实验室指标,促进排卵,提高妊娠率。
2实验研究
2.1归术益坤汤对PCOS大鼠血清激素水平和组织学的影响2.1.1目的：通过动物实验,从血清激素和卵巢组织学方面检验归术益坤汤治疗PCOS的疗效。
2.1.2方法：利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,灌服归术益坤汤给予治疗,以氯米芬为阳性对照组,检测大鼠用药后正常对照组、模型对照组、阳性对照组、中药组之间激素水平、卵巢结构的变化。
2.1.3结果：模型组大鼠血清睾酮(T)的含量明显升高,与正常组、中药组、阳性药组之间均有显著差异(P<0.05),正常组、中药组、阳性药组之间均无组间差异(P>0.05)。模型组的促黄体生成素(LH)水平与阳性药组相比有显著差异(P<0.05),其他各组间差异不明显。而各组间雌二醇(E2)与促卵泡生成素(FSH)之间的差异不明显。模型组大鼠卵泡多数成囊性扩张,可见囊性窦卵泡,颗粒细胞层数减少,黄体组织数量减少。中药组卵巢可见少许囊性窦卵泡的出现,可见成熟卵泡,颗粒细胞数较模型组明显增加,为多层,可见黄体。氯米芬阳性药组亦可见部分囊性窦卵泡,颗粒细胞为多层,排列比较整齐,黄体组织较少。
2.1.4结论：归术益坤汤能够有效改善大鼠内分泌,可恢复卵巢卵泡结构,使颗粒细胞增殖,促进卵泡发育。
2.2归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬的影响
2.2.1目的：通过观察归术益坤汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞自噬发生的影响,发现PCOS颗粒细胞减少的新机制,探索中药治疗PCOS的相关作用机制。
2.2.2方法：实验利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,灌服归术益坤汤给予治疗,以氯米芬为阳性对照组,用药后提取大鼠卵巢颗粒细胞,应用MDC荧光染色及流式细胞术测定鼠颗粒细胞自噬率。采用western blot方法测定各组动物颗粒细胞中自噬特异性标志LC3和自噬相关蛋白Bclin-1的表达,验证各组间自噬发生的差异。
2.2.3结果：MDC荧光染色后荧光强度测定：模型组>阳性药组>中药组>正常组。组间两两比较,模型组与正常组、中药组、阳性药组之间均存在显著性差异(P<0.05),而正常组、中药组、阳性药组无组间差异。正常对照组LC3Ⅰ和Ⅱ、Bclin-1蛋白的表达量均较低,PCOS模型组的LC3、Bclin-1呈现高表达(与正常组比较P<0.01)。经中药作用后可见LC3、Bclin-1平呈明显降低趋势(与模型组比较P<0.05),但仍高于阳性药组。
2.2.4结论：PCOS模型大鼠的卵巢颗粒细胞确实存在有自噬高发的现象,与PCOS颗粒细胞减少相关。归术益坤汤可以显著降低细胞自噬的发生,有效保护了颗粒细胞,从而对卵巢功能起到了维护作用。
2.3归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬PI3k/Akt通路的调节作用
2.3.1目的：通过检测归术益坤汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞PI3K、AKT和mTOR的磷酸化蛋白表达水平的影响,对中药干预PCOS卵巢颗粒细胞自噬的信号转导通路加以研究。
2.3.2方法：实验利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,将动物灌服归术益坤汤给予疗,以氯米芬为阳性对照组,用药后取各组实验大鼠卵巢颗粒细胞,提取蛋白后进行蛋白定量,采用western blot方法测定PI3K、Akt、mTOR的蛋白表达。
2.3.3结果：模型组PI3K、Akt、mTOR的表达均明显降低,中药与阳性药干预后PI3K、AktmTOR表达明显提高。
2.3.4结论：归术益坤汤可有效调节PI3K的活性,提高其蛋白表达量,从而影响mTOR的表达,对自噬发挥了负向调控的作用。
Polycystic ovary syndrome, PCOS, also known as Stein-Leventhal syndrome, Is a kind of endocrine syndrome with the main characteristics is caused by Polygenetic, clinical symptoms is polymorphism. The etiology is complex and wide, so far still unclear, and is one of task for world researchers try to improve. The typical clinical manifestations is polycystic ovarian changes in hyperandrogenism and luteinizing hormone (LH)/follicle-stimulating hormone (FSH) ratio increased. Varying degrees of abnormal menstruation (menstrual thin hair, less, amenorrhea, dysfunctional uterine bleeding), infertility, hirsutism, acne, obesity, etc. And of ten accompanied by the emergence with ages insulin resistance or hyperinsulinemia, and hyperlipidemia. According to their symptoms, the Traditional Chinese Medicine can be attributed to "amenorrhea", "bleeding", "Zheng Jia" of the disease areas. The ancient and modern Chinese medicine scholars'diagnosis and treatment has received good results, showing great potential of Chinese medicine in the treatment of PCOS. Therefore, to explore the etiology and pathogenesis of PCOS and effective treatment methods is a major topic of current clinical research with great social significance and clinical value. This thesis from both clinical and experimental to explore the treatment of PCOS and mechanisms, and contribute to Chinese medicine of PCOS.
Clinical Research 1
1.1 Research of PCOS patients'tongue
1.1.1 Objective:From Chinese medicine four diagnostic's features and with the objective point of view of the tongue to study the PCOS regularity, Study the features of PCOS tongue and tongue map digital usage.
1.1.2 Methods:By study 101 PCOS patients'tongue digital camera photos, through a unified image processing method then using statistical methods to analyze tongue color, shape, tongue, and many other features to sum up the rule.
1.1.3 Results:The tongue can be divided into three categories:purple tongue,34.65%, pale tongue 45.54%, purple tongue 19.80%; fat, large tongue, tongue indentation, tender tongue ratio appears high, and of ten appear together. The tongue coating mostly is greasy and slippery.
1.1.4 Conclusion: The clinical findings of PCOS patients more common with spleen deficiency, which can occur and blood stasis, phlegm in the pathological product. 1.2 Use Gui Zhu Jian Kun Tang to cure the PCOS patients with yang deficiency of spleen and kidney and phlegm-dampness in body. To compare the differents between the symptoms before and after the treatment.
1.2.1 Objective: To explore the effective treatment for PCOS with yang deficiency of spleen and kidney and phlegm-dampness in body.
1.2.2 Methods:By comparing the pregnancy rate, clinical score, BMI index, hormone levels, type-B ultrasonic before and after treatment.
1.2.3 Results:Gui Zhu Jian Kun Tang can improving clinical of PCOS patients symptoms, androgen levels, ovarian increases, etc., the effect is extremely significant. For the most typical PCOS symptoms e.g. late menstruation or amenorrhea, less menstruation, obesity, acne, hirsutism, after treatment 6 months the symptoms were significantly improved. Pregnancy rate within 6 months of treatment was 10.2%, pregnancy rate within 12 months of treatment was 37.5%.
1.2.4 Conclusion: Gui Zhu Jian Kun Tang can improve the spleen and kidney deficiency, yang deficiency of spleen and kidney and phlegm-dampness type PCOS patients with clinical symptoms and laboratory indicators improved, to promote ovulation and improve the pregnancy rate.
2 Experimental Study
2.1 Gui Zhu Jian Kun Tang impact to PCOS rats on serum hormone levels and histological
2.1.1 Objective: Through animal experiments, from the serum hormone and ovarian histology verify the efficacy of Gui Zhu Jian Kun Tang treatment on PCOS.
2.1.2 Methods:Setup PCOS rat model by letrozole induced, fed animals with Gui Zhu Jian Kun Tang, compare with clomiphene as a positive control group, analyze hormone levels and ovarian changes within normal treatment control group, model control group, positive control group, Chinese medicines group.
2.1.3 Results:The model control group rats serum testosterone (T) were significantly increased, compare with the normal group, Chinese medicines group and the positive drug group the difference was significantly between groups (P<0.05), normal group, Chinese medicines group, positive medicine group no differences between each groups (P> 0.05). On model group the luteinizing hormone (LH) levels was significantly different with positive drug group (P<0.05), no significant difference between the other groups. The estradiol (E2) and follicle-stimulating EPO (FSH) no significant difference betweer each groups. Most of model rats the follicles were cystic expansion, showing cystic antral follicles, granulosa cell layer decreased, luteal tissue decreased. Chinese medicines group showing a few Graafianfollicle, shows mature follicles, granulosa cells were significantly increased compared with the model group, was multi-layer and luteal visible. Clomiphene group has also seen some Graafian follicle, granulosa cells is multi-layer, arranged orderly, less luteal tissue visible.
2.1.4 Conclusion:Gui Zhu Jian Kun Tang can improve the Rat Endocrinology, restore ovarian follicle structure, make the granulosa cell proliferation and follicular development.
2.2 Gui Zhu Jian Kun Tang impact to PCOS rats granulosa cells autophagy rate. ovarian morphology and granulosa cell autophagy to explore the role of traditional Chinese medicine treatment of PCOS related mechanisms.
2.2.2 Methods:The experiment setup PCOS rat model by using letrozole induce, fed animals with Gui Zhu Jian Kun Tang, use clomiphene as a positive control group, extract rats ovarian granule cells after treatment, apply with MDC fluorescence staining and flow cytometry methord check rat granulosa cells autophagy difference. Use western blot to test animal'sdeliverance of LC3 and Bclin-1, verify the autophagy difference of each groups.
2.2.3 Results:MDC measured fluorescence intensity after staining: the model group> positive drug group> Chinese medicine group> normal group. Between any two groups, model group and normal group, Chinese medicine group and the positive drug groups all have significantly difference (P<0.05). While the normal group, Chinese medicine group, positive medicine group had no difference. Normal control group LC3ⅠandⅡ, Bclin-1 protein expression levels low, On PCOS model group, LC3, Bclin-1 shows high expression (compared with normal group P<0.01). After treatment by Chinese medicine the LC3, Bclin-1 level had significantly lower trend (compared with model group P<0.05), but still higher than the positive drug group.
2.2.4 Conclusion: PCOS rat model the ovarian granulosa cells exist a high incidence of the autophagy, associated with PCOS granulosa cells reduced. Gui Zhu Jian Kun Tang can significantly reduce the occurrence of autophagy, have effective protection of the granule cells, and thus piay a maintenance role for ovarian function.
2.3 Gui Zhu Jian Kun Tang regulate PCOS rat granulosa cells autophagy pathway PI3k/Akt
2.3.1 Objective: To analysis the Gui Zhu Jian Kun Tang impact to PCOS rat ovarian tissue PI3K I, AKT and mTOR phosphorylation level of protein expression and study the Chinese medicine intervention in PCOS ovaries autophagy signaling pathway.
2.3.2 Methods:The experiment setup PCOS rat model by using letrozole induce, fed animals with Gui Zhu Jian Kun Tang, use clomiphene as a positive control group, extract rats ovarian granule cells after treatment, carry on protein quantification after extracted proteins, determined by western blot PI3K, Akt, mTOR protein.
2.3.3 Result:The model group PI3K, Akt, mTOR expression was significantly decreased, after the intervention of traditional Chinese medicine and positive drug the PI3K, Akt, mTOR expression was significantly increased.
2.3.4 Conclusion: Gui Zhu Jian Kun Tang can regulate the activity of PI3K to increase their protein expression, thus affecting the expression of mTOR and plays a negative regulatory role to autophagy.
引文
PCOS不孕患者采用腹腔镜下卵巢打孔术和卵巢楔形切除术,术后LH和T水平较术前显著下降,差异有统计学意义,排卵率为84%,排除干扰因素的妊娠率为65%,月经情况较术前均有明显改善。说明腹腔镜手术是治疗难治性PCOS的优选方法,可提高患者的排卵率、妊娠率和对药物的敏感性。浮艳红 观察比较腹腔镜下卵巢打孔术与二甲双胍及氯米酚治疗PCOS的疗效,结果发现：LH、T、Fins治疗前后差异有统计学意义(P<0.01),FSH、E2、FG差异无统计学意义(P>0.05),两组比较月经恢复及排卵情况差异无统计学意义,但妊娠率差异有统计学意义(P<0.01)。证实腹腔镜手术与药物治疗在改善月经、排卵等方面作用相似,但腹腔镜联合药物组妊娠率更高。
3.3.2经阴道微创手术治疗(1)经阴道卵泡穿刺术：经阴道卵泡穿刺术即通过阴道实时超声引导下穿刺未成熟的卵泡,抽吸卵泡液达到治疗的目的。其治疗机制尚不清楚,可能与腹腔镜下卵巢打孔术类似,但与腹腔镜下卵巢电凝打孔比较,操作更为简便,损伤更小,恢复更快,粘连更小的优点,并且费用低廉,腹部不留瘢痕,更易为患者所接受。近年来国内外学者报道此法治疗难治性PCOS的效果可与腹腔镜下卵巢打孔术和IVF媲美,术后患者内分泌状况明显改善,排卵率及妊娠率明显升高。(2)阴道超声下部分小卵泡穿刺抽吸术：采用在药物刺激周期卵泡发育至10～12mm左右时穿刺,可降低技术难度,可在早期去除大部分卵泡,减少促排卵药物的用量,有利于优势卵泡的发育,减少OHSS发生的风险,并且抽吸大部分卵泡使卵巢的张力下降,改善内分泌环境,提高了排卵率和妊娠率,节省了治疗时间,降低了治疗费用,是难治性PCOS的一种有效的治疗方法。
3.4辅助生殖技术
近年来,随着辅助生殖技术的迅速发展,PCOS患者不孕的问题有了新的解决途径。王庆玲等比较IVF治疗中的202个PCOS患者周期、134个PCO患者周期和150个正常对照患者周期的临床妊娠率无明显差异；PCOS组LH值、T值增加,早期自然流产率明显高于PCO组与对照组；PCOS组与PCO组的促性腺激素用量少、卵巢过度刺激(OHSS)发生率显著增加。因此PCOS患者进行IVF治疗虽能获得与正常对照患者相同的临床妊娠率,但其早期自然流产和OHSS的发生风险会增加。应用卵母细胞体外成熟(IVM)技术治疗多囊卵巢综合征不孕症,可降低OHSS的发生。林典梁等对23例PCOS患者中的152个未成熟卵母细胞进行体外培养,成熟后行单精子卵胞浆内注射,受精后取优质胚胎移植,得出卵子成熟率69.1%,受精率92%,周期妊娠率27.8%。但此类方法价格较高,有些家庭尚不能承受。
[1]Teede H, Hutehison S,Zoungas S, etal. Insulin resistance, the metabolic syndrome,diabetes,and cardiovascular disease risk in women with PCOS[J].Endoerine,2006,30(1)：45-53.
[2]杨业洲,韩字研,李秀钧.多囊卵巢综合征与胰岛素抵抗-内分泌代谢疾病(4).新医学,2003,34(7)：458-460。
[3]Kahsar-MillerMD, NixonC, BootsLR, etal. Prevalence of Polyeystie ovary syndrome(PCOS) in first-degree relatives of Patients with PCOS. Fertil Steril.2001; 75 (1):53-8.
[4]Jerome F.Strauss III,Robert L. Barbieri原著,林守清主译。生殖内分泌学.北京：人民卫生出版社,2006。
[5]曹云霞,庄广伦.家族性多囊卵巢综合征的染色体研究.中国优生与遗传杂志,2001,9(4)：37-38。
[6]王颖,毛文伟,陈咏健,李美芝,乔杰,王丽娜.中华妇产科杂志,2001,11(42)：756-760。
[7]Westberg L, Baghaei F, Rosmond R, el al. Polymorphisms of the androgen receotor gene and the estrogen receptor beta gene are associated with androgen levels in women. J Clin Endocrinol Metab,2001,86(6: 2562-2568.
[8]Mifsud A,Ramirez S,Yong EL. Androgen receptor gene CAG trinucleotide repeats in anovulatory infertility and polycystic ovaries. J ClinEndocrinol Metab,2000,8:3484-3488.
[9]Cousin P, Calemard-Miehel L, Lejeune H, etal.Influenee of SHBG gene pentanueleotide TAAAA repeat and D327N polymorphism on serum sex hormone-binding globulin concentration in hirsute women. J Clin Endoerinol Metab,2004,89 (2):917-924.
[10]Gharani N, Waterworth DM, Batty S,et al. Association of the steroid synthesis gene CYPlla with polycystic ovary syndrome and hyperan drogenism. Hum Mol Genet,1997,6:397-402.
[11]Petry Cj,Ong KK,Michelmore KF,et al.Associations between common variation in the aromatase gene promoter region and testosterone concentration in two young female population. J Steroid Biochem Mol,2006,98(4-5):199-206.
[12]Liao WX, Roy AC, Chan C, etal. A new molecular variant of luteinizing hormone associated with female infertility. Fertil Steril,1998, 69(1):102-106.
[13]Yan T, Wu XL, Roy AC,et al. Association of Ace I polymorphism in the FSH β gene with PCOS. Fertil Steril,2000,74 (5):233-236.
[14]Waterworth DM, Bennett ST, Gharan i N.et al.Linkage and association of insulin gene VNTR regulatitory polymorphism with polycystic ovary syndrome.Lancet,1997,349(9067):1771-1772.
[15]金丽,黄荷风,金帆等.多囊卵巢综合征胰岛素受体基因外显子17的多态性研究.中华妇产科杂志,2005,40(5)：323-326。
[16]Witchel SF, Smith R,TombocM,et al.Candidate gene analysis in premature pubarche and adolescent hyperandrogenism. Fertil Steril,2001,75 (4):724-730
[17]San Millan JL Cor ton M, Vitluendas G, et al. Association of the polycystic ovary syndrome with genomic variants related to insulin resistance, type2 diabetes mellitus, and obesity.Clin Endocrinol Metab,2004,89(6):2640-2646.
[18]Escobar-Morreale HF, Peral B, Villuendas G, et al. Common s ingle nucleotide polymorphisms in intron 3 of the calpain-10 gene influence hirsutism.FertilSteril,2002,77(3)：581-587.
[19]周晓梅,刘萍,陈沛林,刘小乐,郑彤云.血清白介素-18在PCOS患者的表达及临床意义.现代妇产科进展,2009,5(18)：378-379。
[20]赵淑萍,汤秀明,邵冬红等.醛固酮合成酶基因多态性与多囊卵巢综合征相关性的研究.中华妇产科杂志,2003,38(2)：94-97。
[21]曹云霞,汪云,周平等.多囊卵巢综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性与肾素-血管紧张素系统关系的探讨.中国实用妇科与产科杂志,2002,28(18)：665。
[22]冷雯.多囊卵巢综合征(PCOS)血中高雄激素来源分析.江苏中医,1994,20(11)：593-595。
[23]刘丽丽.瘦素及其受体在多囊卵巢综合征卵巢的表达及意义.中国煤炭工业医学杂志,2008,3(11)：300-302。
[24]王玉霞,孙永玉.脂肪内分泌与PCOS胰岛素抵抗的研究进展.国外医学·妇产科学分册,2004,31(5)：291。
[25]Considine RV, SinhaMK, Heiman HL, et al. Serum immu-noreactive-lep tin concentrations in normal-weight and obese human. N Eng J Med,1995, 334 (5):292.
[26]Cataldo NA, Dumesic DA, Goldsmith PC, et al. Immunol oca lizat ion of Fas and Fas ligand inovaries of women with polycystic ovary syndrome:relationship to apoptosis.Hum Reprod,2000,15 (9):1889-1897.
[27]张娟,朱桂金,王昕荣,胡琳莉,徐蓓.多囊卵巢综合征模型鼠颗粒细胞凋亡及TRAIL蛋白的表达[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2007,3(19)。
[28]Eppig JJ. Growth and development of the mammalian oo-cyte-granulosa cell complex in culture[A].In Trounson AO, Gosden RG(eds). Biology and pathology of oocyte Cambridge Cambridge University Press,2003:273-282.
[29]Coffey S, Mason H. The effect of polycystic ovary syndrom on health-related quality of life [J]. Gynecol Endocrinol,2003,17(5):379-86.
[30]Hahn S, Janssen O E, Tan S, et al. Cl inical and psychological cor-relates of quality-of life in polycystic ovary syndrome. Eur J Endocrinol,2005,153 (6):853-60.
[31]王玉蓉,曹云霞,潘发明,吴健春.73例多囊卵巢综合征患者的人格调查与分析.安徽医科大学学报,2009,44(3)：403-404。
[32]曹泽毅主编.中华妇产科学.人民卫生出版社,1999年,2177-2196。
[33]AzzizR, CarminaE, DewaillyD, Diamanti-KandarakisE,et al. Position statement criteria fordefining polycystic ovary syndrome as a predominantly hyperandrogenic syndrome: anAndrogen ExcessSociety guideline. JClin EndocrinolMetab,2006,91:4237-4245
[34]李天舒.多囊卵巢综合征早诊有了中国标准.健康报,2010,9月2日,第1版
[35]郭华娟,张凯.炔雌醇环丙孕酮治疗多囊卵巢综合征42例疗效观察.中国优生优育,2009,2(15)：95-96。
[36]王蔼明,孙影,白桂芳,李美芝.甲福明改善对氯米芬抵抗的多囊卵巢综合征病人的排卵.海军总医院学报,2002,4(15)：209-211。
[37]郑志群,李美芝,林益川,马炎辉.罗格列酮对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗研究.中华妇产科杂志,2002,5(37)：271-273。
[38]霍琰,田丽,张惠英,于风华.二甲双胍对PCOS合并胰岛素抵抗患者内分泌及代谢的影响.中国优生与遗传杂志,2009,3(17)：33-34。
[39]Geisthevel F, F rorath B, Brabant G. A carbose Reduces Elevated Testoserone Serum Concentrations in Hyperinsulinaemic Premenopausal Women: A Pilot Study. Human Rep roduction,1996,11 (2):2377-2381.
[40]罗丽兰主编.不孕与不育.第1版.北京：人民卫生出版社,1998.250。
[41]乔杰,李美芝,李留霞.多囊卵巢综合征的促排卵治疗.北京医科大学学报,1997,29：190-192。
[42]Begum MR, Begum A. Letrozole vs Clomiphene Citrate in induction of ovulation in polycystic ovarian disease (PCOS). Fertil Steril,2006,86(2):S408.
[43]Sohrabvand F, Ansari SH, Bagheri M. Efficacy of combined Metformin-Letrozole in comparison with Metformin-Clomiphene Citrate in Clomiphene-resistant infertile women with polycystic ovarian disease. Hum Reprod,2006,21(6)：1432-1435
[44]黄学惠,廖翌,马方.两种促排卵方案在多囊卵巢综合征不孕患者中的临床观察.中国医药导报,2009,18(6)：9-11
[45]任小青,苏胜红.腹腔镜手术治疗难治性多囊卵巢综合征不孕25例.广西医学,2009,4(31)：490-491。
[46]浮艳红.腹腔镜治疗多囊卵巢综合征与药物治疗的比较.Journal of Medical Forum,2009,8(30)： 57-59。
[47]王庆玲,宋娟等.体外受精治疗多囊卵巢综合征与仅多囊卵巢不孕患者的临床特征的治疗结局分析.南方医科大学学报,2009,38(5)：962-965
[48]林典梁,张小燕等.卵母细胞体外成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症.海峡预防医学杂志,2008,14(1)：8-10 因及各症之间的相互影响,更应该在中医中药治疗上发挥祖国传统医学的优势,努力做到中医与西医融合,发挥各自优势,积极探索。
参考文献：
[1]陈子江,刘嘉茵.多囊卵巢综合征基础与临床.人民卫生出版社,2009,78
[2]朱辉,倪江,姚兰春,等.大鼠多囊卵巢动物模型的实验研究.哈尔滨医科大学学报,1999,33(3)：187
[3]朱亮,邢福祺,全松,等.两种SD大鼠多囊卵巢综合征模型的比较研究.中国优生与遗传杂志,2009,17(3)：79
[4]闫美荣,闫晓红,刘秀兰,等.大鼠多囊卵巢动物模型卵泡及子宫内膜bcl-2蛋白的表达.内蒙古医学院学报,2006,28(6)：517
[5]夏燕,王惠仔,郑建淮.多囊卵巢综合征大鼠模型诱导的实验研究.中国优生与遗传杂志,2010,18(7)：124
[6]贾莉婷,荣守华,李肖甫,等.来曲哇诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的实验研究.中华医学会第八灰全国检验医学学术会议,PO-118：73
[7]张娟,朱桂金,王昕荣,等.硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠多囊卵巢综合征动物模型的实验研究.中国优生与遗传杂志,2007,15(2)：83
[8]杨正望,周芳,谈珍瑜,等.不同造模方法对大鼠多囊卵巢综合征模型的影响.中国实验动物学报,2010,18(1)：16
[9]王蔼明,李美芝,乔杰,等.多囊卵巢综合征病人高雄激素血症与高胰岛素和高黄体生成素血症关系的探讨.海军总医院学报年2001,14(3)：132-135
[10]杨池荪,李美芝,乔杰,等.多囊卵巢综合征雄激素的变化.北京医学1998;20(2)：87-89
[11]李琳,陈晓莉,陈亚肖,等.苗勒管激素与多囊卵巢综合征相关性分析.中国实用妇科与产科杂志2009,25(4)：283-286
[12]宋翠淼,杜惠兰,马惠荣,等.雄激素致无排卵大鼠卵巢转化生长因子β1及其受体的变化.生殖与避孕2006,26(12)：717-721
[13]李小永,郑桂英,张世红.多囊卵巢综合征患者胰岛素、胰岛素样生长因子及其受体的表达.生殖与避孕2004,24(5)：274-277
[14]朱亮,邢福祺,全松等.多囊卵巢综合征大鼠模型LHR、INSR和AR基因甲基化的变化.基础医学与临床2010,30(1)：63-66
[15]郑建淮,曹缵孙,陈晓燕等.多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗与雄激素和糖代谢变化的关系.西安交通大学学报(医学版)2002,23(6)：572-588
[16]梁晓燕,庄广伦,方群等.胰岛素与类胰岛素生长因子1对多囊卵巢综合征患者雄激素产生的作用.中华医学杂1997,77(4)：266-269
[17]张艳芳,韩玉崑,张慧英,等.多囊卵巢综合征患者血清脂联素与胰岛素抵抗相关性研究].中国妇幼保健2009：2140-2142
[18]陶弢,刘伟,郑俊等.多囊卵巢综合征患者C反应蛋白浓度与胰岛素抵抗的相关性.上海交通大学学报(医学版),2006,26(9)：984-986.
[19]龚衍,李尚为,樊伟.胰岛素促进体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞增殖.四川生理科学杂志2008,30(2)：64-65
[20]周冬梅,余进进,胡瑜等.多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗与纤溶系统的相关性.中国妇幼保健2007,22：2624-2626
[21]郑志群,李美芝,林益川等.罗格列酮对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗研究.中华妇产科杂志2002,37(5)：271-273
[22]余进进,陈小平,陆英华等.罗格列酮对多囊卵巢综合症患者胰岛素抵抗状态及血脂、性激素和排卵的影响.中国血液流变学杂志2005,15(2)：286-288
[23]Brzachffa PR, Jakimiuk AJ, Agarwal SK, et al. Serum immunoreactive lept in concentrations in women with polycystic ovary syndrome. Clin Endocrinol Metab,1996,81 (11):4166
[24]Kolaczynski JW, Nyce MR, Considine RV, et al. Acute and chronic effects of insulin on leptin production in humans:Studies in vivo and in vitro. Diabetes,1996,45 (5):699
[25]李坤,秦三海,粱利军等.多囊卵巢综合征患者血清瘦素水平测定的临床意义.山东医药2009,49(19)：105-105
[26]许良智,李蓉,孙志君等.瘦素、胰岛素样生长因子2-1与多囊卵巢综合征高胰岛素血症的关系.四川大学学报(医学版)2006,37(6)：882-885
[27]杨雪峰,任芬若,封全灵等.多囊卵巢综合征患者血清瘦素水平的测定及意义.中国实用妇科与产科杂志2002,18(5)：297-298
[28]张宁,陈子江,石玉华等.血清脂联素水平测定在多囊卵巢综合征中的意义.实用妇产科杂志2007,23(3)：154-156
[29]王蔼明,卢春华,乔杰等.促卵泡生成素、黄体生成素和胰岛素对多囊卵巢病人颗粒细胞甾体激素分泌的影响.中华医学杂志1998,78(11)：830-832
[30]梁竹巍,王蕊,李春霞等.多囊卵巢综合征子宫内膜生存素和Ki 67的表达及临床特征研究.中国妇幼保健2009,24：2414-2416
[31]梁竹巍,王蕊,李春霞等.多囊卵巢综合征子宫内膜胰岛素受体和胰岛素样生长因子-1的表达与临床特征研究.中国妇幼保健,2009,24：2560-2563
[32]王玮,沈鸿敏,李晓冬等.多囊卵巢综合征患者促排卵治疗后子宫内膜组织GLUT4的表达及意义.中国妇幼保健2009,24：2814-2817
[33]艾芳,丘彦.雌激素受体α、β亚型在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜中的表达及意义.重庆医科大学学报,2009,34(3)：273-276
[34]王勇,曲军卫,吴效科等.绒毛膜促性腺激素刺激对多囊卵巢综合征患者血管活性因子的影响.南京大学学报(自然科学),2006,42(2)：220-224
[35]王滟,梁占光,杨业洲.多囊卵巢综合症患者血浆及卵泡液血管内皮生长因子的测定及其与血清胰岛素水平的相关性研究.华西医学,2007,22(4)：764-766
[36]孟瑞琳,刘芳兰,马晓慧等.多囊卵巢综合征与HLA-DRB基因相关性研究.华南预防医学,2009,35(3)：54-55
[37]李蓉,许良智,熊冬梅.Calpain210基因多态性与PCOS患者遗传易感性的相关性研究.四川大学学报(医学版),2010,41(2)：337 339
[38]熊彬,谢桂珍,周卓秀.调经固冲汤联合克罗米芬对多囊卵巢综合征的实验研究.实用医技杂志,2008,15(18)：2348-2349
[39]杨正望,张曾玲,文炯.补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达的影响.湖南中医药大学学报,2009,29(2)：17-31
[40]伍娟娟,付灵梅,尤昭玲.补肾活血方对PCOS大鼠模型卵巢中PAI-1mRNA表达的影响.湖南中医药大学学报,2009,29(2)：20-22
[41]姜晓琳,王翠霞,陈莹等.补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠FSH、LH及T的影响.辽宁中医药大学学报,2009,11(4)：199-200
[42]邓阿黎,周忠明,张亚兵,等.补肾化痰祛瘀类中药对PCOS模型大鼠生殖内分泌系统影响的实验研究.河南中医2009,29(6)：551-553
[43]王翠霞,陈莹.补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠血清瘦素水平的影响.中华中医药学刊,2009,27(6)：1298-1299
[44]王翠霞,杨逸尘,姜晓琳.补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢功能的影响.中华中医药学刊,2009,27(7)：1533-1534
[45]徐鸿毅,张昌军,罗清炳等.葛根素对多囊卵巢综合症大鼠血清性激素的影响.郧阳医学院学报,2010,29(2)：129-132
[46]戴春秀,程泾.益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征大鼠性激素影响的实验研究.中华中医药学刊,2009,29(10)：2185-2188
[47]李翠萍,黄霞,牛丽丽,等.补肾调周法对PCO大鼠排卵障碍干预的实验研究.山西中医,2008,24(5)：46-50
[48]倪晓容.补肾活血促排汤调节多囊卵巢综合征的实验研究.四川中医,2010,28(3)：21-22
[49]尤昭玲.中西医结合妇产科学.中国中医药出版社,2006,462-467 虚,无力推动血液运行,则日久生瘀,舌色淡紫；肝气郁结,郁热化火,则导致气血运行不畅,舌质紫红。由此可见,本研究中101例的PCOS患者的舌色分布与临床常见证型相符,其中虚证患者居多,为气血亏虚或阳气不足,舌色表现为淡舌；实证占少数,表现为瘀血内阻或血热,仅为19.8%,舌色紫红；而34.65%的患者舌色淡紫,提示气血不足或阳气不足的基础上存在瘀血阻滞,属本虚标实。2.PCOS患者的舌形、舌苔特征分析
中医理论认为舌质代表五脏的病变为主,侧重血分,舌苔代表六腑病变为主,侧重气分。章虚谷说： “舌苔由胃中生气所现,而胃气由心脾发生。故无病之人常有薄苔,是胃中之生气,如地上之微草也。” (《伤寒论本旨·辨舌苔》)祖国医学认为,舌苔为胃气所蒸化,舌为脾胃之外候,舌象不但能够反应出疾病的寒热虚实,而且能够反应出病变的性质,程度及转归。
本研究中,对101例PCOS患者的舌形规律进行统计,发现以胖大舌、齿痕舌、嫩舌的比例较高,同样提示PCOS患者多以虚证居多。其中,部分舌象有交叉部分,可能同时存在。其中,舌质嫩,有齿痕的患者占6.93%；舌质嫩或舌有齿痕,同时表出现舌体胖大的患者占24.75%；舌质嫩、有齿痕、舌体胖大三者同时存在的占16.83%；舌质嫩、舌体瘦薄同时存在的情况占6.93%。舌质的老嫩是病证虚实的标志之一,舌嫩者提示体虚。舌体胖大多因津液输布失常所致,是体内水湿内停的表现；如同见齿痕,则提示脾虚,水湿运化失常,而致湿浊凝滞。舌体瘦薄也表示体虚,多为气血不足,舌失濡养。因此通过舌体形态的观察,不难发现,PCOS患者多由脾肾虚,气血不足,运化失司,导致水湿输布失常,日久痰湿内停。
通过对101例PCOS患者舌苔的观察,以腻苔和滑苔多见,可表现为薄白腻(滑)、薄黄腻(滑)、白厚腻(滑)或黄厚腻(滑)。腻苔和滑胎在中医基础理论中均提示有湿邪,其中白苔多于黄苔,可见PCOS患者当中,热象不明显。这与舌色和舌体的结果紧密结合,相互印证。
[1]Kolvunen R, Lastikainan T, Tomes C, et al, The prevalence of polycystic ovarien in bealtlry women. Act a Obetct Gynecol Scornd,1999,78:137-141
[2]吴效科、周珊英、苏延华.多囊卵巢综合征患者的胰岛素抵抗.中华妇产科杂志,1999,34(11)：698 701
[3]王爱民、赵忠旭、沈兰荪.中医舌象自动分析中舌色、苔色分类方法的研究.北京生物医学工程,2000,19(3)：136-142
[4]朱文锋.中医诊断学.上海科学技术出版社,1995,35-50
[5]陈松鹤、梁嵘、王召平.清末前诊舌色的含义及其概念的演变.辽宁中医杂志,2008,35(12)：1839-184 标。方中佐以茜草凉血行血、去瘀生新,推动气血运行；丝瓜络祛风通络,解毒化湿,引经至胞脉。全方共凑补肾健脾、养血通利之功,独创从肺、脾、肾三脏共同论治,达到标本兼治。
本研究通过对62例脾肾不足、湿浊结聚型PCOS患者的用药前后疗效观察,发现补肾健脾、养血通利中药疗效显著。在39例要求妊娠的患者当中,治疗6个月内妊娠率为10.2%,在32例继续治疗的患者中,妊娠率增加至37.5%。有研究表明,于月经周期第5天服克罗米芬(CC)100 mg/d×5天,妊娠率仅为15%,对于克罗米芬抵抗的PCOS患者,应用二甲双胍或高纯度卵泡刺激素(metrodin-HP即FSH-HP)治疗的妊娠率也在15%,而联合二甲双胍和FSH-HP治疗的妊娠率可达到23.5%。就妊娠率而言,补肾健脾、养血通利中药的妊娠率高于应用CC、FSH-HP、甚至二甲双胍联合FSH-HP治疗的妊娠率,且副作用小,无卵巢过度刺激(OHSS)的风险,但相对治疗时间较长。
归术益坤汤在对改善PCOS患者临床症状、高雄激素水平、卵巢增大等方面,疗效极为显著。就PCOS最典型的月经后错或闭经、月经量少、肥胖、痤疮、多毛等症状而言,治疗6个月后症状均明显改善。通过对62例患者的证候调查发现,腰骶酸痛及神疲乏力的症状最为突出,符合脾肾不足的辨证,治疗后均有明显好转。目前临床上使用最多的体重测量法是QUETELET指数法,也称作Body Mass Index,我们简称为BMI指数,它是通过计算人身高与体重之间的比值大小来判断是否发生肥胖的一种方法。计算公式为BMI=体重(kg)／身高的平方(m2)。对比62例患者治疗前后BMI体重指数,疗后有明显下降,有力的证明了归术益坤汤改善PCOS肥胖状态的有效性。另外,实验室指标和B超检查均能客观的表现治疗前后的变化,证实疗效显著。
[1]阮时宝、谭峰、陈学习.白术的历代应用研究.福建中医学院学报,2007,17(4)：43-45
[2]顾正田、黄燕冰、陶莉莉等.二甲双胍联合促排卵药治疗多囊卵巢综合征的疗效观察.中国误诊学杂志,2004,4(3)：360-362
[3]赵军招、叶碧绿、林金菊等.二甲双胍治疗耐克罗米芬的多囊卵巢综合征40例分析.中国实用妇产科与产科杂志,2003,19(4)：222-224
[1]吴效科,周珊英,苏延华.多囊卵巢综合征患者的胰岛素抵抗.中华妇产科杂志,1999,34(11)：698-701
[2]张娟,朱桂金.多囊卵巢综合征模型鼠颗粒细胞凋亡及TRAIL蛋白的表达.中国组织化学与细胞化学杂志,2007,16(3)：352-356
[3]胡颜霞,张展.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的研究.中国妇幼保健,2006,21(7)：957-959
[4]张萌,连方.多囊卵巢综合征动物模型的研究分析.中国现代医药杂志,2008,10(4)：137-138
[5]胡颜霞,张展,贾莉婷.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的研究.中国妇幼保健,2006,21(7)：957-959
[6]郭澄,翰公羽,苏中武.南方菟丝子化学成分的研究.中国药学,1997,32(1)：8-11
[7]Kwon YS. Steroids constituents from Cuscuta chinensis. Nat Prod Sci,2000,6(3):135-138
[8]Anis E,Anis I, Ahmed S, et al. Alpha-glucosidase inhibitory constituents from Cuscuta. Chem Pharm Bull,2002,50(1):112-115
[9]Xiang SX. The chemical constituents from the seeds of Cuscuta ja-ponica. Chin J Chem,2001,19(3):282-285
[10]Bao X, Wang Z, Fang J, et al. Structural features of an immunostimulat-ing and antioxidant acidic polysaccharide from the seeds of Cuscuta chinensis. Planta Med,2002,68(3):237-239
[11]柯江维,王建红,赵宏.菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体-卵巢轴性激素受体的影响.中草药,2006,37(1)：90-92
[12]武彦芳.关于白术的研究进展.大同职业技术学院学报,2005,19(4)：79-83
[13]王芳,李东.当归的化学及药理研究.中国药房,2003,14(10)：630-631
[14]李春红,李泱,李新芳等.南沙参多糖对小鼠和果蝇性活力的影响.生殖医学杂志,2002,11(4)：213-217
[15]贾丹兵等.车前草的药理研究.中草药,1990,21(1)：24
[16]王素敏,黎燕峰等.Regulation of plantain seed on lipid metabolism and its antioxidation.中国临床康复,2005,105(31)：248-250
[17]王素敏,杨更亮等Effect of plantain seed on the lipid peroxidation in rats with hyperlipidemia.中国临床康复,2006,67(19)：184-186
[18]吴煜秋,张荣平.中药小红参的研究概况.中国民族民间医药杂志,2003,3(5)：259-310
[19]康白,张义军,李华洲.丝瓜络的药理作用初探.潍坊医学院学报,1993,15(3)：180-183
[20]杨艳,胡卫红,乔杰等.ILlra、TNFα、US—CRP与多囊卵巢综合征发病的相关性研究.中国优生与遗传杂志,2007,15(5)：35-37 LC3Ⅱ是代表自噬作用的主要指标。本研究中,PCOS模型组大鼠卵巢颗粒细胞的LC3Ⅱ表达量明显高于正常水平,经中药干预后LC3 Ⅱ的蛋白水平显著降低,自噬作用被明显抑制。
自噬基因Beclin-1是哺乳动物中最早发现的一个自噬基因,主要通过与磷酸肌醇三磷酸激酶Ⅲ型PIK(PI3K)形成复合体来调控其他自噬蛋白定位到自噬前体的结构中,而调节自噬活性。Beclin-1是参与自噬调控的重要基因,其表达强度与自噬活性密切相关。本研究表明,PCOS大鼠Beclin-1蛋白呈现高表达,较正常组增高1倍多。归术益坤汤可在一定程度上降低蛋白的表达(P<0.05),抑制自噬的发生。
综上所述,本研究通过分离大鼠卵巢颗粒细胞进行MDC染色、对卵巢颗粒细胞自噬特异性标志分子LC3和自噬相关蛋白Bclin-1的蛋白表达水平进行检测,证明了PCOS模型大鼠的卵巢组织颗粒细胞确实存在有自噬高发的现象。自噬现象的过度发生使得为卵泡的成熟、发育提供营养的颗粒细胞减少,从而使大多数卵泡停滞在窦卵泡阶段而不能继续发育；并且颗粒细胞的减少可阻止睾酮转变为雌激素,导致雄激素累积,而过多的雄激素又会加重颗粒细胞的凋亡,形成恶性循环。归术益坤汤可以显著降低细胞自噬的发生,有效保护了颗粒细胞,从而对卵巢功能起到了维护作用。
[1]胡颜霞,张展.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的研究.中国妇幼保健,2006,21(7)： 957-959
[2]Lockshin RA, ZakeriZ. Apoptosis autophagy andmore. Int J Biochem Cell Biol,2004,36(12):2405-2419
[3]黄勤欢,黄瑾.人外周血T淋巴细胞自噬现象的观察.中国免疫学杂志,2007,23(6)：500-503
[4]黄洁,严文华,吕海涛等.自噬基因Beclin-1和微管相关蛋白LC3在大鼠阿霉素心肌病中的表达及其意义.临床儿科杂志,2010,28(1)：76-80
[5]杨聚荣,洪权,蔡广研等.miR234a调控HEK293细胞自噬作用的初步研究.解放军医学杂志,2010,35(2)：166-168
[6]KabeyaY, Mizushima N, Ueno T, et al. LC3, a mam-malian homologue of yeast Apg8p is localized in autophagosomemembranes after processing. EMBOJ,2000, 19 (21):5720-5728. 发生率要高于正常水平；经归术益坤汤治疗后mTOR的表达有所增加,但仍不及阳性药枸橼酸氯米芬对mTOR的上调作用,说明中药可在一定程度上通过增加mTOR的蛋白表达而抑制细胞自噬的发生,但其作用不及西药阳性药。
mTOR的上游信号转导途径也是比较复杂的,目前较为明确的是PI3K-Akt通路。PI3K家族分为三型：class Ⅰ-Ⅲ,这三类PI3K均参与自噬的调节。class Ⅱ被认为是其中分子量较大的一个,它的特征是C端包含有一个C2结构域,除此以外对该型PI3K的研究非常少。classⅢPI3K是酵母Vps34的类似物,它及其产物磷脂酰肌醇也与自噬信号通路有关,但主要通过非依赖mTOR途径形成Beclinl复合体而发挥促进自噬的作用。而与mTOR调节通路密切相关的是class Ⅰ PI3K。
class I PI3K是由催化亚基p110和调节亚基p85构成的。活化的生长因子受体可通过直接结合的方式来激活下游的class Ⅰ PI3K；也可通过生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2, GRB2)-SOS (son of sevenless)介导激活RAS(rat sarcoma),再由RAS间接激活Ⅰ型PI3K。但无论采用哪种方式,激活Ⅰ型PI3K从而触发mTOR通路是必不可少的环节,因此通过对Ⅰ型PI3K的调控就可起到对自噬进行调控的作用。在本研究中,我们对Ⅰ型PI3K的催化亚基p110α的蛋白表达水平进行了检测,结果显示,PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞的PI3K p110α呈现极低的表达,经中药干预后蛋白水平有所上调。说明,低水平的PI3K可能使得mTOR的活化降低,从而促进了自噬发生率的增加；而归术益坤汤可有效调节PI3K的活性,提高其蛋白表达量,从而影响mTOR的表达,对自噬发挥了负向调控的作用。
激活的class I PI3K可使磷脂酰肌醇3位磷酸化生成磷脂酰肌醇-3-磷酸(PIP3),PIP3与Akt的PH区域连接导致Akt转位至浆膜,从而与磷酸肌醇依赖性激酶1(phosphoinosi tide dependent kinase-1, PDK1)结合,激活Akt。Akt对mTOR的激活主要通过以下两种方式：一种是直接磷酸化mTOR而激活它；另一种是磷酸化并抑制结节性硬化复合物TSC1/TSC2二聚体,TSC1/TSC2二聚体通过抑制一种小分子鸟苷三磷酸酶Rheb阻止mTOR的活化,而后作用于下游效应器。Akt和PI3K在功能上属于原癌基因,抑癌基因PTEN可抑制class Ⅰ PI3K介导的自噬,PTEN突变导致Akt通路过度激活和自噬抑制,这说明classⅠPI3K/Akt通路对自噬的调节起重要作用。本实验结果表明,PCOS模型大鼠颗粒细胞的Akt蛋白表达量低于正常水平(与正常组比较P<0.01),相应的自噬率处于高发水平；归术益坤汤治疗后,Akt的表达量明显增加,自噬现象明显抑制,且与阳性药枸橼酸氯米芬片的作用相当。
综上所述,本研究通过对自噬相关信号转导通路PI3K-Akt中的关键节点激酶PI3K、Akt,及其下游分子mTOR蛋白表达水平的检测,证明了归术益坤汤可以通过调控PI3K、Akt及mTOR的蛋白表达水平,从而调控自噬的发生,揭示了中药治疗PCOS的分子生物学机制,为其临床应用提供分子水平的依据。
[1]郭德玉,孙慧勤.自噬及其与肿瘤关系的研究进展.现代肿瘤医学,2010,18(6)：1247-1250.
[2]Glick D, BarthS, Macleod KF. Autophagy: cellular and molecular mechanism. J Pathol,2010,221(1):3-12.
[3]Mehrpou M, Esclatine A, Beau I, etal. Overview of macroautophagy regulation in mammalian cells.Cell Res,2010,20(7):748-762.
[4]叶青.自噬的分子机制与病理生理意义.国际病理科学与临床杂志,2007,27(4)：358-362.
[5]Rosenfeldt MT, Ryan KM. The role of autophagy in tumour development and cancer therapy. Exp Rev Mol Med,2009,11:e36.
[6]张秀春,李丹妮,李丰.自噬的调控通路和肿瘤.生命科学,2011,23(1)：19-25.
[7]段振玲,彭芝兰,王赞宏.上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究.四川大学学报(医学版),2007,38(2)：239-242.
[8]Petiot A, OgierDenis E, Blommaart EFC, et al. Distinct classes of phosphatidylinositol 3-kinases are involved in signaling pathways that control macroautophagy in HT-29 cells. J Biol Chem,2000,275 (2):992-998.
[9]伍静,赵勇,师长宏,等.自噬的形态特征及分子调控.现代生物医学进展,2010,10(20)：3941-3944.
[10]杨鹏宇.mTOR抑制剂治疗胶质瘤的研究进展.国际神经病学神经外科学杂志,2009,36(6)：548-551.
[11]Arico S, Petiot A, Bauvy C, et al. The tumor suppressor PTEN positively regulates macroautophagy by inhibitingthe phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B pathway. J Biol Chem,2001,276(38):35243-35246.
3.3.2经阴道微创手术治疗(1)经阴道卵泡穿刺术：经阴道卵泡穿刺术即通过阴道实时超声引导下穿刺未成熟的卵泡,抽吸卵泡液达到治疗的目的。其治疗机制尚不清楚,可能与腹腔镜下卵巢打孔术类似,但与腹腔镜下卵巢电凝打孔比较,操作更为简便,损伤更小,恢复更快,粘连更小的优点,并且费用低廉,腹部不留瘢痕,更易为患者所接受。近年来国内外学者报道此法治疗难治性PCOS的效果可与腹腔镜下卵巢打孔术和IVF媲美,术后患者内分泌状况明显改善,排卵率及妊娠率明显升高。(2)阴道超声下部分小卵泡穿刺抽吸术：采用在药物刺激周期卵泡发育至10～12mm左右时穿刺,可降低技术难度,可在早期去除大部分卵泡,减少促排卵药物的用量,有利于优势卵泡的发育,减少OHSS发生的风险,并且抽吸大部分卵泡使卵巢的张力下降,改善内分泌环境,提高了排卵率和妊娠率,节省了治疗时间,降低了治疗费用,是难治性PCOS的一种有效的治疗方法。
3.4辅助生殖技术
近年来,随着辅助生殖技术的迅速发展,PCOS患者不孕的问题有了新的解决途径。王庆玲等比较IVF治疗中的202个PCOS患者周期、134个PCO患者周期和150个正常对照患者周期的临床妊娠率无明显差异；PCOS组LH值、T值增加,早期自然流产率明显高于PCO组与对照组；PCOS组与PCO组的促性腺激素用量少、卵巢过度刺激(OHSS)发生率显著增加。因此PCOS患者进行IVF治疗虽能获得与正常对照患者相同的临床妊娠率,但其早期自然流产和OHSS的发生风险会增加。应用卵母细胞体外成熟(IVM)技术治疗多囊卵巢综合征不孕症,可降低OHSS的发生。林典梁等对23例PCOS患者中的152个未成熟卵母细胞进行体外培养,成熟后行单精子卵胞浆内注射,受精后取优质胚胎移植,得出卵子成熟率69.1%,受精率92%,周期妊娠率27.8%。但此类方法价格较高,有些家庭尚不能承受。
[1]Teede H, Hutehison S,Zoungas S, etal. Insulin resistance, the metabolic syndrome,diabetes,and cardiovascular disease risk in women with PCOS[J].Endoerine,2006,30(1)：45-53.
[2]杨业洲,韩字研,李秀钧.多囊卵巢综合征与胰岛素抵抗-内分泌代谢疾病(4).新医学,2003,34(7)：458-460。
[3]Kahsar-MillerMD, NixonC, BootsLR, etal. Prevalence of Polyeystie ovary syndrome(PCOS) in first-degree relatives of Patients with PCOS. Fertil Steril.2001; 75 (1):53-8.
[4]Jerome F.Strauss III,Robert L. Barbieri原著,林守清主译。生殖内分泌学.北京：人民卫生出版社,2006。
[5]曹云霞,庄广伦.家族性多囊卵巢综合征的染色体研究.中国优生与遗传杂志,2001,9(4)：37-38。
[6]王颖,毛文伟,陈咏健,李美芝,乔杰,王丽娜.中华妇产科杂志,2001,11(42)：756-760。
[7]Westberg L, Baghaei F, Rosmond R, el al. Polymorphisms of the androgen receotor gene and the estrogen receptor beta gene are associated with androgen levels in women. J Clin Endocrinol Metab,2001,86(6: 2562-2568.
[8]Mifsud A,Ramirez S,Yong EL. Androgen receptor gene CAG trinucleotide repeats in anovulatory infertility and polycystic ovaries. J ClinEndocrinol Metab,2000,8:3484-3488.
[9]Cousin P, Calemard-Miehel L, Lejeune H, etal.Influenee of SHBG gene pentanueleotide TAAAA repeat and D327N polymorphism on serum sex hormone-binding globulin concentration in hirsute women. J Clin Endoerinol Metab,2004,89 (2):917-924.
[10]Gharani N, Waterworth DM, Batty S,et al. Association of the steroid synthesis gene CYPlla with polycystic ovary syndrome and hyperan drogenism. Hum Mol Genet,1997,6:397-402.
[11]Petry Cj,Ong KK,Michelmore KF,et al.Associations between common variation in the aromatase gene promoter region and testosterone concentration in two young female population. J Steroid Biochem Mol,2006,98(4-5):199-206.
[12]Liao WX, Roy AC, Chan C, etal. A new molecular variant of luteinizing hormone associated with female infertility. Fertil Steril,1998, 69(1):102-106.
[13]Yan T, Wu XL, Roy AC,et al. Association of Ace I polymorphism in the FSH β gene with PCOS. Fertil Steril,2000,74 (5):233-236.
[14]Waterworth DM, Bennett ST, Gharan i N.et al.Linkage and association of insulin gene VNTR regulatitory polymorphism with polycystic ovary syndrome.Lancet,1997,349(9067):1771-1772.
[15]金丽,黄荷风,金帆等.多囊卵巢综合征胰岛素受体基因外显子17的多态性研究.中华妇产科杂志,2005,40(5)：323-326。
[16]Witchel SF, Smith R,TombocM,et al.Candidate gene analysis in premature pubarche and adolescent hyperandrogenism. Fertil Steril,2001,75 (4):724-730
[17]San Millan JL Cor ton M, Vitluendas G, et al. Association of the polycystic ovary syndrome with genomic variants related to insulin resistance, type2 diabetes mellitus, and obesity.Clin Endocrinol Metab,2004,89(6):2640-2646.
[18]Escobar-Morreale HF, Peral B, Villuendas G, et al. Common s ingle nucleotide polymorphisms in intron 3 of the calpain-10 gene influence hirsutism.FertilSteril,2002,77(3)：581-587.
[19]周晓梅,刘萍,陈沛林,刘小乐,郑彤云.血清白介素-18在PCOS患者的表达及临床意义.现代妇产科进展,2009,5(18)：378-379。
[20]赵淑萍,汤秀明,邵冬红等.醛固酮合成酶基因多态性与多囊卵巢综合征相关性的研究.中华妇产科杂志,2003,38(2)：94-97。
[21]曹云霞,汪云,周平等.多囊卵巢综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性与肾素-血管紧张素系统关系的探讨.中国实用妇科与产科杂志,2002,28(18)：665。
[22]冷雯.多囊卵巢综合征(PCOS)血中高雄激素来源分析.江苏中医,1994,20(11)：593-595。
[23]刘丽丽.瘦素及其受体在多囊卵巢综合征卵巢的表达及意义.中国煤炭工业医学杂志,2008,3(11)：300-302。
[24]王玉霞,孙永玉.脂肪内分泌与PCOS胰岛素抵抗的研究进展.国外医学·妇产科学分册,2004,31(5)：291。
[25]Considine RV, SinhaMK, Heiman HL, et al. Serum immu-noreactive-lep tin concentrations in normal-weight and obese human. N Eng J Med,1995, 334 (5):292.
[26]Cataldo NA, Dumesic DA, Goldsmith PC, et al. Immunol oca lizat ion of Fas and Fas ligand inovaries of women with polycystic ovary syndrome:relationship to apoptosis.Hum Reprod,2000,15 (9):1889-1897.
[27]张娟,朱桂金,王昕荣,胡琳莉,徐蓓.多囊卵巢综合征模型鼠颗粒细胞凋亡及TRAIL蛋白的表达[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2007,3(19)。
[28]Eppig JJ. Growth and development of the mammalian oo-cyte-granulosa cell complex in culture[A].In Trounson AO, Gosden RG(eds). Biology and pathology of oocyte Cambridge Cambridge University Press,2003:273-282.
[29]Coffey S, Mason H. The effect of polycystic ovary syndrom on health-related quality of life [J]. Gynecol Endocrinol,2003,17(5):379-86.
[30]Hahn S, Janssen O E, Tan S, et al. Cl inical and psychological cor-relates of quality-of life in polycystic ovary syndrome. Eur J Endocrinol,2005,153 (6):853-60.
[31]王玉蓉,曹云霞,潘发明,吴健春.73例多囊卵巢综合征患者的人格调查与分析.安徽医科大学学报,2009,44(3)：403-404。
[32]曹泽毅主编.中华妇产科学.人民卫生出版社,1999年,2177-2196。
[33]AzzizR, CarminaE, DewaillyD, Diamanti-KandarakisE,et al. Position statement criteria fordefining polycystic ovary syndrome as a predominantly hyperandrogenic syndrome: anAndrogen ExcessSociety guideline. JClin EndocrinolMetab,2006,91:4237-4245
[34]李天舒.多囊卵巢综合征早诊有了中国标准.健康报,2010,9月2日,第1版
[35]郭华娟,张凯.炔雌醇环丙孕酮治疗多囊卵巢综合征42例疗效观察.中国优生优育,2009,2(15)：95-96。
[36]王蔼明,孙影,白桂芳,李美芝.甲福明改善对氯米芬抵抗的多囊卵巢综合征病人的排卵.海军总医院学报,2002,4(15)：209-211。
[37]郑志群,李美芝,林益川,马炎辉.罗格列酮对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗研究.中华妇产科杂志,2002,5(37)：271-273。
[38]霍琰,田丽,张惠英,于风华.二甲双胍对PCOS合并胰岛素抵抗患者内分泌及代谢的影响.中国优生与遗传杂志,2009,3(17)：33-34。
[39]Geisthevel F, F rorath B, Brabant G. A carbose Reduces Elevated Testoserone Serum Concentrations in Hyperinsulinaemic Premenopausal Women: A Pilot Study. Human Rep roduction,1996,11 (2):2377-2381.
[40]罗丽兰主编.不孕与不育.第1版.北京：人民卫生出版社,1998.250。
[41]乔杰,李美芝,李留霞.多囊卵巢综合征的促排卵治疗.北京医科大学学报,1997,29：190-192。
[42]Begum MR, Begum A. Letrozole vs Clomiphene Citrate in induction of ovulation in polycystic ovarian disease (PCOS). Fertil Steril,2006,86(2):S408.
[43]Sohrabvand F, Ansari SH, Bagheri M. Efficacy of combined Metformin-Letrozole in comparison with Metformin-Clomiphene Citrate in Clomiphene-resistant infertile women with polycystic ovarian disease. Hum Reprod,2006,21(6)：1432-1435
[44]黄学惠,廖翌,马方.两种促排卵方案在多囊卵巢综合征不孕患者中的临床观察.中国医药导报,2009,18(6)：9-11
[45]任小青,苏胜红.腹腔镜手术治疗难治性多囊卵巢综合征不孕25例.广西医学,2009,4(31)：490-491。
[46]浮艳红.腹腔镜治疗多囊卵巢综合征与药物治疗的比较.Journal of Medical Forum,2009,8(30)： 57-59。
[47]王庆玲,宋娟等.体外受精治疗多囊卵巢综合征与仅多囊卵巢不孕患者的临床特征的治疗结局分析.南方医科大学学报,2009,38(5)：962-965
[48]林典梁,张小燕等.卵母细胞体外成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症.海峡预防医学杂志,2008,14(1)：8-10 因及各症之间的相互影响,更应该在中医中药治疗上发挥祖国传统医学的优势,努力做到中医与西医融合,发挥各自优势,积极探索。
参考文献：
[1]陈子江,刘嘉茵.多囊卵巢综合征基础与临床.人民卫生出版社,2009,78
[2]朱辉,倪江,姚兰春,等.大鼠多囊卵巢动物模型的实验研究.哈尔滨医科大学学报,1999,33(3)：187
[3]朱亮,邢福祺,全松,等.两种SD大鼠多囊卵巢综合征模型的比较研究.中国优生与遗传杂志,2009,17(3)：79
[4]闫美荣,闫晓红,刘秀兰,等.大鼠多囊卵巢动物模型卵泡及子宫内膜bcl-2蛋白的表达.内蒙古医学院学报,2006,28(6)：517
[5]夏燕,王惠仔,郑建淮.多囊卵巢综合征大鼠模型诱导的实验研究.中国优生与遗传杂志,2010,18(7)：124
[6]贾莉婷,荣守华,李肖甫,等.来曲哇诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的实验研究.中华医学会第八灰全国检验医学学术会议,PO-118：73
[7]张娟,朱桂金,王昕荣,等.硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠多囊卵巢综合征动物模型的实验研究.中国优生与遗传杂志,2007,15(2)：83
[8]杨正望,周芳,谈珍瑜,等.不同造模方法对大鼠多囊卵巢综合征模型的影响.中国实验动物学报,2010,18(1)：16
[9]王蔼明,李美芝,乔杰,等.多囊卵巢综合征病人高雄激素血症与高胰岛素和高黄体生成素血症关系的探讨.海军总医院学报年2001,14(3)：132-135
[10]杨池荪,李美芝,乔杰,等.多囊卵巢综合征雄激素的变化.北京医学1998;20(2)：87-89
[11]李琳,陈晓莉,陈亚肖,等.苗勒管激素与多囊卵巢综合征相关性分析.中国实用妇科与产科杂志2009,25(4)：283-286
[12]宋翠淼,杜惠兰,马惠荣,等.雄激素致无排卵大鼠卵巢转化生长因子β1及其受体的变化.生殖与避孕2006,26(12)：717-721
[13]李小永,郑桂英,张世红.多囊卵巢综合征患者胰岛素、胰岛素样生长因子及其受体的表达.生殖与避孕2004,24(5)：274-277
[14]朱亮,邢福祺,全松等.多囊卵巢综合征大鼠模型LHR、INSR和AR基因甲基化的变化.基础医学与临床2010,30(1)：63-66
[15]郑建淮,曹缵孙,陈晓燕等.多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗与雄激素和糖代谢变化的关系.西安交通大学学报(医学版)2002,23(6)：572-588
[16]梁晓燕,庄广伦,方群等.胰岛素与类胰岛素生长因子1对多囊卵巢综合征患者雄激素产生的作用.中华医学杂1997,77(4)：266-269
[17]张艳芳,韩玉崑,张慧英,等.多囊卵巢综合征患者血清脂联素与胰岛素抵抗相关性研究].中国妇幼保健2009：2140-2142
[18]陶弢,刘伟,郑俊等.多囊卵巢综合征患者C反应蛋白浓度与胰岛素抵抗的相关性.上海交通大学学报(医学版),2006,26(9)：984-986.
[19]龚衍,李尚为,樊伟.胰岛素促进体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞增殖.四川生理科学杂志2008,30(2)：64-65
[20]周冬梅,余进进,胡瑜等.多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗与纤溶系统的相关性.中国妇幼保健2007,22：2624-2626
[21]郑志群,李美芝,林益川等.罗格列酮对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗及高雄激素血症的治疗研究.中华妇产科杂志2002,37(5)：271-273
[22]余进进,陈小平,陆英华等.罗格列酮对多囊卵巢综合症患者胰岛素抵抗状态及血脂、性激素和排卵的影响.中国血液流变学杂志2005,15(2)：286-288
[23]Brzachffa PR, Jakimiuk AJ, Agarwal SK, et al. Serum immunoreactive lept in concentrations in women with polycystic ovary syndrome. Clin Endocrinol Metab,1996,81 (11):4166
[24]Kolaczynski JW, Nyce MR, Considine RV, et al. Acute and chronic effects of insulin on leptin production in humans:Studies in vivo and in vitro. Diabetes,1996,45 (5):699
[25]李坤,秦三海,粱利军等.多囊卵巢综合征患者血清瘦素水平测定的临床意义.山东医药2009,49(19)：105-105
[26]许良智,李蓉,孙志君等.瘦素、胰岛素样生长因子2-1与多囊卵巢综合征高胰岛素血症的关系.四川大学学报(医学版)2006,37(6)：882-885
[27]杨雪峰,任芬若,封全灵等.多囊卵巢综合征患者血清瘦素水平的测定及意义.中国实用妇科与产科杂志2002,18(5)：297-298
[28]张宁,陈子江,石玉华等.血清脂联素水平测定在多囊卵巢综合征中的意义.实用妇产科杂志2007,23(3)：154-156
[29]王蔼明,卢春华,乔杰等.促卵泡生成素、黄体生成素和胰岛素对多囊卵巢病人颗粒细胞甾体激素分泌的影响.中华医学杂志1998,78(11)：830-832
[30]梁竹巍,王蕊,李春霞等.多囊卵巢综合征子宫内膜生存素和Ki 67的表达及临床特征研究.中国妇幼保健2009,24：2414-2416
[31]梁竹巍,王蕊,李春霞等.多囊卵巢综合征子宫内膜胰岛素受体和胰岛素样生长因子-1的表达与临床特征研究.中国妇幼保健,2009,24：2560-2563
[32]王玮,沈鸿敏,李晓冬等.多囊卵巢综合征患者促排卵治疗后子宫内膜组织GLUT4的表达及意义.中国妇幼保健2009,24：2814-2817
[33]艾芳,丘彦.雌激素受体α、β亚型在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜中的表达及意义.重庆医科大学学报,2009,34(3)：273-276
[34]王勇,曲军卫,吴效科等.绒毛膜促性腺激素刺激对多囊卵巢综合征患者血管活性因子的影响.南京大学学报(自然科学),2006,42(2)：220-224
[35]王滟,梁占光,杨业洲.多囊卵巢综合症患者血浆及卵泡液血管内皮生长因子的测定及其与血清胰岛素水平的相关性研究.华西医学,2007,22(4)：764-766
[36]孟瑞琳,刘芳兰,马晓慧等.多囊卵巢综合征与HLA-DRB基因相关性研究.华南预防医学,2009,35(3)：54-55
[37]李蓉,许良智,熊冬梅.Calpain210基因多态性与PCOS患者遗传易感性的相关性研究.四川大学学报(医学版),2010,41(2)：337 339
[38]熊彬,谢桂珍,周卓秀.调经固冲汤联合克罗米芬对多囊卵巢综合征的实验研究.实用医技杂志,2008,15(18)：2348-2349
[39]杨正望,张曾玲,文炯.补肾化瘀方对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞FSHR、LHR蛋白表达的影响.湖南中医药大学学报,2009,29(2)：17-31
[40]伍娟娟,付灵梅,尤昭玲.补肾活血方对PCOS大鼠模型卵巢中PAI-1mRNA表达的影响.湖南中医药大学学报,2009,29(2)：20-22
[41]姜晓琳,王翠霞,陈莹等.补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠FSH、LH及T的影响.辽宁中医药大学学报,2009,11(4)：199-200
[42]邓阿黎,周忠明,张亚兵,等.补肾化痰祛瘀类中药对PCOS模型大鼠生殖内分泌系统影响的实验研究.河南中医2009,29(6)：551-553
[43]王翠霞,陈莹.补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠血清瘦素水平的影响.中华中医药学刊,2009,27(6)：1298-1299
[44]王翠霞,杨逸尘,姜晓琳.补肾化痰方对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢功能的影响.中华中医药学刊,2009,27(7)：1533-1534
[45]徐鸿毅,张昌军,罗清炳等.葛根素对多囊卵巢综合症大鼠血清性激素的影响.郧阳医学院学报,2010,29(2)：129-132
[46]戴春秀,程泾.益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征大鼠性激素影响的实验研究.中华中医药学刊,2009,29(10)：2185-2188
[47]李翠萍,黄霞,牛丽丽,等.补肾调周法对PCO大鼠排卵障碍干预的实验研究.山西中医,2008,24(5)：46-50
[48]倪晓容.补肾活血促排汤调节多囊卵巢综合征的实验研究.四川中医,2010,28(3)：21-22
[49]尤昭玲.中西医结合妇产科学.中国中医药出版社,2006,462-467 虚,无力推动血液运行,则日久生瘀,舌色淡紫；肝气郁结,郁热化火,则导致气血运行不畅,舌质紫红。由此可见,本研究中101例的PCOS患者的舌色分布与临床常见证型相符,其中虚证患者居多,为气血亏虚或阳气不足,舌色表现为淡舌；实证占少数,表现为瘀血内阻或血热,仅为19.8%,舌色紫红；而34.65%的患者舌色淡紫,提示气血不足或阳气不足的基础上存在瘀血阻滞,属本虚标实。2.PCOS患者的舌形、舌苔特征分析
中医理论认为舌质代表五脏的病变为主,侧重血分,舌苔代表六腑病变为主,侧重气分。章虚谷说： “舌苔由胃中生气所现,而胃气由心脾发生。故无病之人常有薄苔,是胃中之生气,如地上之微草也。” (《伤寒论本旨·辨舌苔》)祖国医学认为,舌苔为胃气所蒸化,舌为脾胃之外候,舌象不但能够反应出疾病的寒热虚实,而且能够反应出病变的性质,程度及转归。
本研究中,对101例PCOS患者的舌形规律进行统计,发现以胖大舌、齿痕舌、嫩舌的比例较高,同样提示PCOS患者多以虚证居多。其中,部分舌象有交叉部分,可能同时存在。其中,舌质嫩,有齿痕的患者占6.93%；舌质嫩或舌有齿痕,同时表出现舌体胖大的患者占24.75%；舌质嫩、有齿痕、舌体胖大三者同时存在的占16.83%；舌质嫩、舌体瘦薄同时存在的情况占6.93%。舌质的老嫩是病证虚实的标志之一,舌嫩者提示体虚。舌体胖大多因津液输布失常所致,是体内水湿内停的表现；如同见齿痕,则提示脾虚,水湿运化失常,而致湿浊凝滞。舌体瘦薄也表示体虚,多为气血不足,舌失濡养。因此通过舌体形态的观察,不难发现,PCOS患者多由脾肾虚,气血不足,运化失司,导致水湿输布失常,日久痰湿内停。
通过对101例PCOS患者舌苔的观察,以腻苔和滑苔多见,可表现为薄白腻(滑)、薄黄腻(滑)、白厚腻(滑)或黄厚腻(滑)。腻苔和滑胎在中医基础理论中均提示有湿邪,其中白苔多于黄苔,可见PCOS患者当中,热象不明显。这与舌色和舌体的结果紧密结合,相互印证。
[1]Kolvunen R, Lastikainan T, Tomes C, et al, The prevalence of polycystic ovarien in bealtlry women. Act a Obetct Gynecol Scornd,1999,78:137-141
[2]吴效科、周珊英、苏延华.多囊卵巢综合征患者的胰岛素抵抗.中华妇产科杂志,1999,34(11)：698 701
[3]王爱民、赵忠旭、沈兰荪.中医舌象自动分析中舌色、苔色分类方法的研究.北京生物医学工程,2000,19(3)：136-142
[4]朱文锋.中医诊断学.上海科学技术出版社,1995,35-50
[5]陈松鹤、梁嵘、王召平.清末前诊舌色的含义及其概念的演变.辽宁中医杂志,2008,35(12)：1839-184 标。方中佐以茜草凉血行血、去瘀生新,推动气血运行；丝瓜络祛风通络,解毒化湿,引经至胞脉。全方共凑补肾健脾、养血通利之功,独创从肺、脾、肾三脏共同论治,达到标本兼治。
本研究通过对62例脾肾不足、湿浊结聚型PCOS患者的用药前后疗效观察,发现补肾健脾、养血通利中药疗效显著。在39例要求妊娠的患者当中,治疗6个月内妊娠率为10.2%,在32例继续治疗的患者中,妊娠率增加至37.5%。有研究表明,于月经周期第5天服克罗米芬(CC)100 mg/d×5天,妊娠率仅为15%,对于克罗米芬抵抗的PCOS患者,应用二甲双胍或高纯度卵泡刺激素(metrodin-HP即FSH-HP)治疗的妊娠率也在15%,而联合二甲双胍和FSH-HP治疗的妊娠率可达到23.5%。就妊娠率而言,补肾健脾、养血通利中药的妊娠率高于应用CC、FSH-HP、甚至二甲双胍联合FSH-HP治疗的妊娠率,且副作用小,无卵巢过度刺激(OHSS)的风险,但相对治疗时间较长。
归术益坤汤在对改善PCOS患者临床症状、高雄激素水平、卵巢增大等方面,疗效极为显著。就PCOS最典型的月经后错或闭经、月经量少、肥胖、痤疮、多毛等症状而言,治疗6个月后症状均明显改善。通过对62例患者的证候调查发现,腰骶酸痛及神疲乏力的症状最为突出,符合脾肾不足的辨证,治疗后均有明显好转。目前临床上使用最多的体重测量法是QUETELET指数法,也称作Body Mass Index,我们简称为BMI指数,它是通过计算人身高与体重之间的比值大小来判断是否发生肥胖的一种方法。计算公式为BMI=体重(kg)／身高的平方(m2)。对比62例患者治疗前后BMI体重指数,疗后有明显下降,有力的证明了归术益坤汤改善PCOS肥胖状态的有效性。另外,实验室指标和B超检查均能客观的表现治疗前后的变化,证实疗效显著。
[1]阮时宝、谭峰、陈学习.白术的历代应用研究.福建中医学院学报,2007,17(4)：43-45
[2]顾正田、黄燕冰、陶莉莉等.二甲双胍联合促排卵药治疗多囊卵巢综合征的疗效观察.中国误诊学杂志,2004,4(3)：360-362
[3]赵军招、叶碧绿、林金菊等.二甲双胍治疗耐克罗米芬的多囊卵巢综合征40例分析.中国实用妇产科与产科杂志,2003,19(4)：222-224
[1]吴效科,周珊英,苏延华.多囊卵巢综合征患者的胰岛素抵抗.中华妇产科杂志,1999,34(11)：698-701
[2]张娟,朱桂金.多囊卵巢综合征模型鼠颗粒细胞凋亡及TRAIL蛋白的表达.中国组织化学与细胞化学杂志,2007,16(3)：352-356
[3]胡颜霞,张展.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的研究.中国妇幼保健,2006,21(7)：957-959
[4]张萌,连方.多囊卵巢综合征动物模型的研究分析.中国现代医药杂志,2008,10(4)：137-138
[5]胡颜霞,张展,贾莉婷.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的研究.中国妇幼保健,2006,21(7)：957-959
[6]郭澄,翰公羽,苏中武.南方菟丝子化学成分的研究.中国药学,1997,32(1)：8-11
[7]Kwon YS. Steroids constituents from Cuscuta chinensis. Nat Prod Sci,2000,6(3):135-138
[8]Anis E,Anis I, Ahmed S, et al. Alpha-glucosidase inhibitory constituents from Cuscuta. Chem Pharm Bull,2002,50(1):112-115
[9]Xiang SX. The chemical constituents from the seeds of Cuscuta ja-ponica. Chin J Chem,2001,19(3):282-285
[10]Bao X, Wang Z, Fang J, et al. Structural features of an immunostimulat-ing and antioxidant acidic polysaccharide from the seeds of Cuscuta chinensis. Planta Med,2002,68(3):237-239
[11]柯江维,王建红,赵宏.菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体-卵巢轴性激素受体的影响.中草药,2006,37(1)：90-92
[12]武彦芳.关于白术的研究进展.大同职业技术学院学报,2005,19(4)：79-83
[13]王芳,李东.当归的化学及药理研究.中国药房,2003,14(10)：630-631
[14]李春红,李泱,李新芳等.南沙参多糖对小鼠和果蝇性活力的影响.生殖医学杂志,2002,11(4)：213-217
[15]贾丹兵等.车前草的药理研究.中草药,1990,21(1)：24
[16]王素敏,黎燕峰等.Regulation of plantain seed on lipid metabolism and its antioxidation.中国临床康复,2005,105(31)：248-250
[17]王素敏,杨更亮等Effect of plantain seed on the lipid peroxidation in rats with hyperlipidemia.中国临床康复,2006,67(19)：184-186
[18]吴煜秋,张荣平.中药小红参的研究概况.中国民族民间医药杂志,2003,3(5)：259-310
[19]康白,张义军,李华洲.丝瓜络的药理作用初探.潍坊医学院学报,1993,15(3)：180-183
[20]杨艳,胡卫红,乔杰等.ILlra、TNFα、US—CRP与多囊卵巢综合征发病的相关性研究.中国优生与遗传杂志,2007,15(5)：35-37 LC3Ⅱ是代表自噬作用的主要指标。本研究中,PCOS模型组大鼠卵巢颗粒细胞的LC3Ⅱ表达量明显高于正常水平,经中药干预后LC3 Ⅱ的蛋白水平显著降低,自噬作用被明显抑制。
自噬基因Beclin-1是哺乳动物中最早发现的一个自噬基因,主要通过与磷酸肌醇三磷酸激酶Ⅲ型PIK(PI3K)形成复合体来调控其他自噬蛋白定位到自噬前体的结构中,而调节自噬活性。Beclin-1是参与自噬调控的重要基因,其表达强度与自噬活性密切相关。本研究表明,PCOS大鼠Beclin-1蛋白呈现高表达,较正常组增高1倍多。归术益坤汤可在一定程度上降低蛋白的表达(P<0.05),抑制自噬的发生。
综上所述,本研究通过分离大鼠卵巢颗粒细胞进行MDC染色、对卵巢颗粒细胞自噬特异性标志分子LC3和自噬相关蛋白Bclin-1的蛋白表达水平进行检测,证明了PCOS模型大鼠的卵巢组织颗粒细胞确实存在有自噬高发的现象。自噬现象的过度发生使得为卵泡的成熟、发育提供营养的颗粒细胞减少,从而使大多数卵泡停滞在窦卵泡阶段而不能继续发育；并且颗粒细胞的减少可阻止睾酮转变为雌激素,导致雄激素累积,而过多的雄激素又会加重颗粒细胞的凋亡,形成恶性循环。归术益坤汤可以显著降低细胞自噬的发生,有效保护了颗粒细胞,从而对卵巢功能起到了维护作用。
[1]胡颜霞,张展.来曲唑诱导多囊卵巢综合征大鼠模型的研究.中国妇幼保健,2006,21(7)： 957-959
[2]Lockshin RA, ZakeriZ. Apoptosis autophagy andmore. Int J Biochem Cell Biol,2004,36(12):2405-2419
[3]黄勤欢,黄瑾.人外周血T淋巴细胞自噬现象的观察.中国免疫学杂志,2007,23(6)：500-503
[4]黄洁,严文华,吕海涛等.自噬基因Beclin-1和微管相关蛋白LC3在大鼠阿霉素心肌病中的表达及其意义.临床儿科杂志,2010,28(1)：76-80
[5]杨聚荣,洪权,蔡广研等.miR234a调控HEK293细胞自噬作用的初步研究.解放军医学杂志,2010,35(2)：166-168
[6]KabeyaY, Mizushima N, Ueno T, et al. LC3, a mam-malian homologue of yeast Apg8p is localized in autophagosomemembranes after processing. EMBOJ,2000, 19 (21):5720-5728. 发生率要高于正常水平；经归术益坤汤治疗后mTOR的表达有所增加,但仍不及阳性药枸橼酸氯米芬对mTOR的上调作用,说明中药可在一定程度上通过增加mTOR的蛋白表达而抑制细胞自噬的发生,但其作用不及西药阳性药。
mTOR的上游信号转导途径也是比较复杂的,目前较为明确的是PI3K-Akt通路。PI3K家族分为三型：class Ⅰ-Ⅲ,这三类PI3K均参与自噬的调节。class Ⅱ被认为是其中分子量较大的一个,它的特征是C端包含有一个C2结构域,除此以外对该型PI3K的研究非常少。classⅢPI3K是酵母Vps34的类似物,它及其产物磷脂酰肌醇也与自噬信号通路有关,但主要通过非依赖mTOR途径形成Beclinl复合体而发挥促进自噬的作用。而与mTOR调节通路密切相关的是class Ⅰ PI3K。
class I PI3K是由催化亚基p110和调节亚基p85构成的。活化的生长因子受体可通过直接结合的方式来激活下游的class Ⅰ PI3K；也可通过生长因子受体结合蛋白2(growth factor receptor-bound protein 2, GRB2)-SOS (son of sevenless)介导激活RAS(rat sarcoma),再由RAS间接激活Ⅰ型PI3K。但无论采用哪种方式,激活Ⅰ型PI3K从而触发mTOR通路是必不可少的环节,因此通过对Ⅰ型PI3K的调控就可起到对自噬进行调控的作用。在本研究中,我们对Ⅰ型PI3K的催化亚基p110α的蛋白表达水平进行了检测,结果显示,PCOS模型大鼠卵巢颗粒细胞的PI3K p110α呈现极低的表达,经中药干预后蛋白水平有所上调。说明,低水平的PI3K可能使得mTOR的活化降低,从而促进了自噬发生率的增加；而归术益坤汤可有效调节PI3K的活性,提高其蛋白表达量,从而影响mTOR的表达,对自噬发挥了负向调控的作用。
激活的class I PI3K可使磷脂酰肌醇3位磷酸化生成磷脂酰肌醇-3-磷酸(PIP3),PIP3与Akt的PH区域连接导致Akt转位至浆膜,从而与磷酸肌醇依赖性激酶1(phosphoinosi tide dependent kinase-1, PDK1)结合,激活Akt。Akt对mTOR的激活主要通过以下两种方式：一种是直接磷酸化mTOR而激活它；另一种是磷酸化并抑制结节性硬化复合物TSC1/TSC2二聚体,TSC1/TSC2二聚体通过抑制一种小分子鸟苷三磷酸酶Rheb阻止mTOR的活化,而后作用于下游效应器。Akt和PI3K在功能上属于原癌基因,抑癌基因PTEN可抑制class Ⅰ PI3K介导的自噬,PTEN突变导致Akt通路过度激活和自噬抑制,这说明classⅠPI3K/Akt通路对自噬的调节起重要作用。本实验结果表明,PCOS模型大鼠颗粒细胞的Akt蛋白表达量低于正常水平(与正常组比较P<0.01),相应的自噬率处于高发水平；归术益坤汤治疗后,Akt的表达量明显增加,自噬现象明显抑制,且与阳性药枸橼酸氯米芬片的作用相当。
综上所述,本研究通过对自噬相关信号转导通路PI3K-Akt中的关键节点激酶PI3K、Akt,及其下游分子mTOR蛋白表达水平的检测,证明了归术益坤汤可以通过调控PI3K、Akt及mTOR的蛋白表达水平,从而调控自噬的发生,揭示了中药治疗PCOS的分子生物学机制,为其临床应用提供分子水平的依据。
[1]郭德玉,孙慧勤.自噬及其与肿瘤关系的研究进展.现代肿瘤医学,2010,18(6)：1247-1250.
[2]Glick D, BarthS, Macleod KF. Autophagy: cellular and molecular mechanism. J Pathol,2010,221(1):3-12.
[3]Mehrpou M, Esclatine A, Beau I, etal. Overview of macroautophagy regulation in mammalian cells.Cell Res,2010,20(7):748-762.
[4]叶青.自噬的分子机制与病理生理意义.国际病理科学与临床杂志,2007,27(4)：358-362.
[5]Rosenfeldt MT, Ryan KM. The role of autophagy in tumour development and cancer therapy. Exp Rev Mol Med,2009,11:e36.
[6]张秀春,李丹妮,李丰.自噬的调控通路和肿瘤.生命科学,2011,23(1)：19-25.
[7]段振玲,彭芝兰,王赞宏.上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究.四川大学学报(医学版),2007,38(2)：239-242.
[8]Petiot A, OgierDenis E, Blommaart EFC, et al. Distinct classes of phosphatidylinositol 3-kinases are involved in signaling pathways that control macroautophagy in HT-29 cells. J Biol Chem,2000,275 (2):992-998.
[9]伍静,赵勇,师长宏,等.自噬的形态特征及分子调控.现代生物医学进展,2010,10(20)：3941-3944.
[10]杨鹏宇.mTOR抑制剂治疗胶质瘤的研究进展.国际神经病学神经外科学杂志,2009,36(6)：548-551.
[11]Arico S, Petiot A, Bauvy C, et al. The tumor suppressor PTEN positively regulates macroautophagy by inhibitingthe phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B pathway. J Biol Chem,2001,276(38):35243-35246.