丹参中丹参酮ⅡA提取纯化技术研究
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摘要
丹参是我国传统重要中药，具有活血化淤、理气止痛之功效，其各种制剂被广泛用于心脑血管病的治疗。丹参的主要功能成分为脂溶性的丹参酮和水溶性的原儿茶醛、丹参素。丹参酮又包括丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮等。近年来，丹参类药用量增大，市场对丹参的活性成分丹参酮，特别是丹参酮ⅡA的需求量也在不断增大。如何采取先进工艺从丹参中提取纯化丹参酮ⅡA，取得更好的经济效益，已成为相关厂商出资研究的热点。围绕丹参酮ⅡA的提取和纯化，本论文中的研究做了如下工作：
1．采用超临界CO_2流体萃取技术从丹参中萃取丹参酮ⅡA。研究了萃取压力、萃取温度、CO_2流量、夹带剂用量对萃取率的影响；通过正交试验，得到优化的萃取条件：萃取压力：25 MPa，萃取温度45℃，CO2流量30 kg·h~(-1)，夹带剂流量为1.2 mL·min~(-1)，在该条件下，丹参酮ⅡA的萃取率达87.2％，比报道的最高值85.7％提高了1.5％。
2．对萃取丹参酮时使用的夹带剂种类和用量进行了比较研究。分别用不同流量的乙醇(95％，V／V)、丙酮、正辛烷作夹带剂，以3种丹参酮的萃取率为指标，比较3种夹带剂的效果。结果显示，乙醇作夹带剂比丙酮和正辛烷好。
3．通过对吸附剂和洗脱剂的选择，改进了丹参酮ⅡA柱层析纯化方法。用改进的柱层析方法纯化丹参酮粗产品得到纯度为89.15％的丹参酮ⅡA，回收率为30.97％，与同类方法相比，该方法简洁易行，得到的丹参酮ⅡA纯度也较好，但还存在回收率较低的问题。
4．利用结晶重结晶方法进一步对丹参酮ⅡA粗产品进行纯化研究。研究了不同溶剂用量对丹参酮ⅡA纯度和回收率的影响；研究了不同重结晶温度对丹参酮ⅡA纯度和回收率的影响；以丹参酮ⅡA的纯度和回收率为指标，研究得到了用结晶重结晶方法纯化丹参酮ⅡA较佳工艺：用5倍量的溶剂A溶解丹参总酮，1.4倍量的溶剂B滴加，冷藏、过滤、干燥，得产品1，用溶剂C溶解产品1，于25℃—45℃保温析晶，过滤干燥得到的丹参酮ⅡA，纯度最高达96.3％，回收率最高达76.6％。用该方法得到的丹参酮ⅡA纯度高，提取率也较高，且工艺流程短，成本低，周期短，节省能耗，是目前从丹参总酮中纯化丹参酮ⅡA的最好的方法之一。
Tanshin (Salvia Miltiorrhiza Bunge) is one of the most importantChinese traditional medicine. It can activate blood circulation to dissipateblood stasis and regulate the flow of qi to alleviate pain. Lots of itsmedicaments are widely used to heal angiocardiopathy andcerebrovascular disease. Several principal ingredients of Tanshin arefat-soluble Tanshinones, such as Tanshinone-ⅡA, Tanshinone-ⅠandCriptotanshinone, as well as water-soluble Protocatechualdehyde andDanshensu. Demand for Tanshin medicaments has increased, andrelatively demand for TanshinoneⅡ-A, which is one of its key bioactivecomponents, has also increased rapidly in recent years. Therefore,concerned enterprises are engaged in developing advanced technologicalprocess of extraction and purification in word to profit greatly. Followingis a summary of the work performed in my study on the extraction andpurification of TanshinoneⅡ-A from Tanshin.
1. Tanshinone-ⅡA was extracted from Tanshin material bysupercritical CO_2 fluid extraction technology (SCFET). The influencesof extraction pressure, extraction temperature, CO_2 flux and entrainer fluxwere investigated. Optimized parameters of SCFET were obtainedthrough orthogonal experiment. The results were as follows: Theextraction pressure was at 25 MPa, the extraction temperature was at45℃, the CO_2 flux was 30 kg·h~(-1) and the entrainer flux was 1.2 mL·min~(-1). under this condition, the extraction rate of Tanshinone-ⅡA reached to87.2%, higher by 1.5% than 87.2% to which the lectures reported thatreached.
2. The effect of three kinds of entrainers (ethanol, acetone andnomal octane)on Tanshinones were studied. Taking the extraction rate asstandard, three kinds of entrainers were pumped into the equipment tohelp extract TanshinoneⅡ-A at different flux and the effect onTanshinones were compared. The results showed that ethanol is the best.
3. Through choosing the suitable sorbent and eluant, the method ofcolumn chromatography to purify Tanshinone-ⅡA from overallTanshinones was mended, was purifid to obtain pure Tanshinone-ⅡA Bythis method, mended, were choosed by experiment. Solubility ofTanshinones in twelve kinds of solvent was also tested. The purity andrecovery of TanshinoneⅡ-A obtained by the mended method were89.15% and 30.97%, the purify was higher whereas the recovery waslower. Comparing with similar other method, this method is simple andpractical.
4. Tanshinone-ⅡA was purifid from overall Tanshinones to obtainpure Tanshinone-ⅡA by crystal and recrystal means. The influences of theamount of solvent on the purify and recovery of Tanshinone-ⅡA werestudied. The influences of recrystal temperature on the purify andrecovery of Tanshinone-ⅡA were also studied. Taking the purify andrecovery of Tanshinone-ⅡA as standard, the optimized technologicalprocess by which Tanshinone-ⅡA was purified was obtained. Dissolvingoverall Tanshinone by solvent A at material-solvent ratio 1: 5, titrating by 1.4 times of solvent B, refrigerating the solution, filtrating, desiccating,product numble one was obtained. Dissolving product number one bysolvent C, recrystallizing Tanshinone-ⅡA, filtrating, desiccating, productnumber two was obtained, Its purify and recovery of Tanshinone-ⅡAwere up to 96.3% and 76.6%. By this method, both purify and recoveryof Tanshinone-ⅡA are high, and the process was simple, low-cost, energysaving. It is one of the best methods of purifying Tanshinone-ⅡA at thepresent time.
1．采用超临界CO_2流体萃取技术从丹参中萃取丹参酮ⅡA。研究了萃取压力、萃取温度、CO_2流量、夹带剂用量对萃取率的影响；通过正交试验，得到优化的萃取条件：萃取压力：25 MPa，萃取温度45℃，CO2流量30 kg·h~(-1)，夹带剂流量为1.2 mL·min~(-1)，在该条件下，丹参酮ⅡA的萃取率达87.2％，比报道的最高值85.7％提高了1.5％。
2．对萃取丹参酮时使用的夹带剂种类和用量进行了比较研究。分别用不同流量的乙醇(95％，V／V)、丙酮、正辛烷作夹带剂，以3种丹参酮的萃取率为指标，比较3种夹带剂的效果。结果显示，乙醇作夹带剂比丙酮和正辛烷好。
3．通过对吸附剂和洗脱剂的选择，改进了丹参酮ⅡA柱层析纯化方法。用改进的柱层析方法纯化丹参酮粗产品得到纯度为89.15％的丹参酮ⅡA，回收率为30.97％，与同类方法相比，该方法简洁易行，得到的丹参酮ⅡA纯度也较好，但还存在回收率较低的问题。
4．利用结晶重结晶方法进一步对丹参酮ⅡA粗产品进行纯化研究。研究了不同溶剂用量对丹参酮ⅡA纯度和回收率的影响；研究了不同重结晶温度对丹参酮ⅡA纯度和回收率的影响；以丹参酮ⅡA的纯度和回收率为指标，研究得到了用结晶重结晶方法纯化丹参酮ⅡA较佳工艺：用5倍量的溶剂A溶解丹参总酮，1.4倍量的溶剂B滴加，冷藏、过滤、干燥，得产品1，用溶剂C溶解产品1，于25℃—45℃保温析晶，过滤干燥得到的丹参酮ⅡA，纯度最高达96.3％，回收率最高达76.6％。用该方法得到的丹参酮ⅡA纯度高，提取率也较高，且工艺流程短，成本低，周期短，节省能耗，是目前从丹参总酮中纯化丹参酮ⅡA的最好的方法之一。
Tanshin (Salvia Miltiorrhiza Bunge) is one of the most importantChinese traditional medicine. It can activate blood circulation to dissipateblood stasis and regulate the flow of qi to alleviate pain. Lots of itsmedicaments are widely used to heal angiocardiopathy andcerebrovascular disease. Several principal ingredients of Tanshin arefat-soluble Tanshinones, such as Tanshinone-ⅡA, Tanshinone-ⅠandCriptotanshinone, as well as water-soluble Protocatechualdehyde andDanshensu. Demand for Tanshin medicaments has increased, andrelatively demand for TanshinoneⅡ-A, which is one of its key bioactivecomponents, has also increased rapidly in recent years. Therefore,concerned enterprises are engaged in developing advanced technologicalprocess of extraction and purification in word to profit greatly. Followingis a summary of the work performed in my study on the extraction andpurification of TanshinoneⅡ-A from Tanshin.
1. Tanshinone-ⅡA was extracted from Tanshin material bysupercritical CO_2 fluid extraction technology (SCFET). The influencesof extraction pressure, extraction temperature, CO_2 flux and entrainer fluxwere investigated. Optimized parameters of SCFET were obtainedthrough orthogonal experiment. The results were as follows: Theextraction pressure was at 25 MPa, the extraction temperature was at45℃, the CO_2 flux was 30 kg·h~(-1) and the entrainer flux was 1.2 mL·min~(-1). under this condition, the extraction rate of Tanshinone-ⅡA reached to87.2%, higher by 1.5% than 87.2% to which the lectures reported thatreached.
2. The effect of three kinds of entrainers (ethanol, acetone andnomal octane)on Tanshinones were studied. Taking the extraction rate asstandard, three kinds of entrainers were pumped into the equipment tohelp extract TanshinoneⅡ-A at different flux and the effect onTanshinones were compared. The results showed that ethanol is the best.
3. Through choosing the suitable sorbent and eluant, the method ofcolumn chromatography to purify Tanshinone-ⅡA from overallTanshinones was mended, was purifid to obtain pure Tanshinone-ⅡA Bythis method, mended, were choosed by experiment. Solubility ofTanshinones in twelve kinds of solvent was also tested. The purity andrecovery of TanshinoneⅡ-A obtained by the mended method were89.15% and 30.97%, the purify was higher whereas the recovery waslower. Comparing with similar other method, this method is simple andpractical.
4. Tanshinone-ⅡA was purifid from overall Tanshinones to obtainpure Tanshinone-ⅡA by crystal and recrystal means. The influences of theamount of solvent on the purify and recovery of Tanshinone-ⅡA werestudied. The influences of recrystal temperature on the purify andrecovery of Tanshinone-ⅡA were also studied. Taking the purify andrecovery of Tanshinone-ⅡA as standard, the optimized technologicalprocess by which Tanshinone-ⅡA was purified was obtained. Dissolvingoverall Tanshinone by solvent A at material-solvent ratio 1: 5, titrating by 1.4 times of solvent B, refrigerating the solution, filtrating, desiccating,product numble one was obtained. Dissolving product number one bysolvent C, recrystallizing Tanshinone-ⅡA, filtrating, desiccating, productnumber two was obtained, Its purify and recovery of Tanshinone-ⅡAwere up to 96.3% and 76.6%. By this method, both purify and recoveryof Tanshinone-ⅡA are high, and the process was simple, low-cost, energysaving. It is one of the best methods of purifying Tanshinone-ⅡA at thepresent time.
引文
1．郭宝林，冯毓秀，赵杨景．丹参种质资源研究进展[J]．中国中药杂志，2002，27(7)：492-495
2．江苏植物研究所等．新华本草纲要[M]．上海：上海科学技术出版社，1988，462
3．中国科学院北京植物研究所主编．中国高等植物图鉴(第3册)[M]．北京：科学出版社，1985，667～675
4．云南省植物研究所．中国植物志(第66卷)[M]．北京：科学出版社，1977，79～194．
5．江苏新医学院编．中药大辞典(上册)[M]．上海：上海人民出版社，1977，478～482
6．卫生部药典委员会．中国药典(一部)[M]．北京：人民卫生出版社，1995，63～64
7. Hase K, R Kasimu, P Basnet et al. Preventive effect oflithospermate B from Salvia mitiorrhiza on experimental hepatitis induced by carbon tetrachloride or D-galactosamine/lipopolysaccharide[J]. Planta Med, 1997, 63 (2): 62～66
8. Tanaka T, S Morimoto, G Nonaka et al. Magnesium and ammonium-potassium lithospermates B, the active principles having a uremia-preventive effect from Salvia mitiorrhiza [J]. Chem Pharm Bull, 1989, 37 (5): 340～344
9. Arda N, N Goren, A Kuru et al. Saniculoside N from Sanicula europaea L[J]. Nat Prod, 1997, 60 (4): 1170～1173
10．杜冠华，张均田．丹参现代研究概况与进展[J]．医药导报，2004，23(7)：435～438
11．冯玲玲．丹参组织培养的初步研究[D]．华中师范大学硕士学位论文，2004，1～2
12．徐昭玺主编．中草药种植技术指南[M]．北京：中国农业版社，2000，78～79
13．周荣汉主编．中药资源学[M]．北京：中国医药科技出版社，1993，441～442
14．国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草(第七册第十九卷)[M]．上海：上海科学技术出版社，1999，159～194
15．肖小河，方清茂，夏文娟等．药用鼠尾草属数值分类与丹参药材道地性[J]．植物资源与环境，1997，6(2)：17～21
16．徐任生主编．丹参生物学及其应用[M]．北京：科学出版社，1990，78～79
17．中国科学院中国植物志编辑委员会主编．中国植物志(第六十六卷)[M]．北京：科学出版社，1977，786～788
18．舒志明．丹参种质资源的收集评价与品种选育[D]．西北农林科技大学硕士学位论文，2005，3～4
19．王新玲，热娜．鼠尾草属植物化学成分的研究进展[J]．新疆医科大学学报，2002，25(3)：235～237
20．顾文华．鼠尾草属植物的化学成分[J]．中草药，1981，12(2)：41～48
21．常军民，堵年生．鼠尾草属植物化学成分研究进展[J]．中成药，1999，21(9)：480～482
22．李强，匡海学，方东军等．药用鼠尾草花的化学成分研究[J]．中医药学报，1999，(4)：45～46
23．常英姿，梁殿权，王孝铭等．丹参素对氧自由基所致大鼠心肌线粒体H~+—ATP酶损伤的保护作用[J]．1991，1(5)：449～451
24．杨卫东，朱鸿良．丹参的氧自由基清除作用[J]．中国药理学通报，1990，6(2)：118～122
25．阴健．中药现代化研究与临床应用[M]．北京：学苑出版社，1993，174～175
26．顾杨洪，张彩英，黄桂秋．丹参和丹参素对牛内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响[J]．上海第二医科大学学报，1990，10(3)：208～212
27．李承珠，林嘉宝，杨诗春等．丹参素对血小板释放血管收缩物质的影响[J]．中西医结合杂志，1984，4(9)：565～568
28．吁文贵，徐理纳．乙酰丹酚酸A对血小板花生四烯酸代谢的影响[J]．药学学报，1998，33(1)：62～65
29．王世军，李定格，史仁华等．川芎嗪、丹参注射液对正常状态及实验性微循环障碍小鼠脑微循环的影响[J]．中国微循环，2000，4(4)：213～217
30．李焰，郝玉珍，吴莜芳．丹参对暴发性肝衰竭肠系膜微循环改善作用的实验研究[J]．中国冶金工业医学杂志，1998，15(1)：9～12
31．杨怡静，王玲．丹参、藻酸双酯钠、低分子右旋糖酐、甘露醇对红细胞悬浮 液粘弹特性的影响[J]．华西医科大学学报，1993，24(2)：143～146
32．张志伟，吴在德．丹参对大鼠肝缺血后肝再生促进作用的初步观察[J]．同济医科大学学报，1995，24(4)：272～275
33．魏岳斌，李国成．丹参对胃溃疡大鼠血清一氧化氮含量和胃粘膜表皮生长因子受体表达的影响[J]．中国中西医结合消化杂志，2001，9(4)：211～215
34．潘立群，陈荣明．丹参对家兔小肠吻合口组织细胞再生的影响[J]．南京中医药大学学报，2000，16(1)：35～37
35．傅廷亮，王兴华，张祥盛等．丹参、山莨菪碱对小鼠自体移植脾组织再生的影响[J]．滨州医学院学报，1995，18(1)：6～8
36．杨勤，赵朝伟．丹参的药理作用研究现状[J]．中国药业，2003，12(10)：78～79
37. Zhang W H, Wang J S, Zhou Y et al. Gadoliniumchlorid and salvia miltiorrhiza compound ameliorate reperfusion injury in hepatocellular mitochondria[J]. World J Gastr, 2003, 9 (9): 2040～2044
38．叶红军，宋玉芳．抗养化剂丹参对慢性肝病患者及中毒性损伤动物的治疗观察[J]．中华消化杂志，1991，1(2)：87～89
39．黄林邦，熊桂生．复方丹参对效鼠急性重度肝损伤的保护作用[J]．赣南医学院学报，1990，10(4)：215～217
40．邓和军，马学惠，许瑞龄等．丹参护肝机制的研究[[J]．中国中药杂志，1992，17(4)：233～236
41．戚心广，稻垣寰．丹参、赤芍对实验性肝损伤肝细胞保护作用的机制研究[J]．ChinJIntegratedTraditChinWestMed, 1991, 11 (20): 102～104
42．房其年．丹参抗菌有效成份的研究[J]．化学学报，1976，34(3)：97～100
43．石乃玉，董华民，黄海金．丹参酮药理及临床应用[J]．中国医师杂志，2001，3(2)：150～151
44．罗厚蔚，韦苞洋，刘全海等．丹参二萜醌的细胞毒活性及构效关系研究[J]．中国药科大学学报，2002，33(1)：6～13
45. Wu Wu-Lung, Chang Wen-Liang, Chen Chia-Fu. Cytotoxic activities of tanshinone against human eareinomaeell lines [J]. America Journal of Chinese Medicine, 1991, 19 (3/4): 207～216
46．袁淑兰，黄光琦，王修杰等．丹参酮和维甲酸对人宫颈癌细胞株的体外诱导 分化作用[J]．中华肿瘤杂志，1995，17(6)：422～424
47．袁淑兰，黄光琦，黄韧敏等．丹参酮体外诱导分化作用及其机[J]．癌症，1996，15(6)：408～409
48．袁淑兰，黄韧敏，王修杰等．丹参酮对人肝肿瘤细胞某些表型逆转作用[J]．肿瘤，1997，16(5)：268～270
49．梁勇，羊裔明，袁淑兰等．丹参酮ⅡA诱导原代培养人急性杂早幼粒细胞白血病细胞分化[J]．华西医科大学学报，2000，31(2)：207～210
50．何金涛，周清华，袁淑兰等．丹参酮对人肺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理[[J]．中国肺癌杂志，2002，5(2)：123～125
51．秦萍，羊裔明，邓承祺等．丹参酮ⅡA诱导白血病细胞分化前后端粒酶活性变化[J]．华西医科大学学报，2002，33(3)：397～400
52．黄凤鸣，陈幸华．丹参酮ⅡA对肺腺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理[J]．中国肺癌杂志，2001，4(5)：375～377
53．王修杰，袁淑兰，黄韧敏等．Brdu和PCNA标记观察丹参酮对肺癌细胞增殖的影响[J]．华西医科大学学报，1996，27(4)：288～231
54．袁淑兰，黄韧敏，宋毅等．丹参酮ⅡA诱导HL-60细胞凋亡[J]．癌症，1998，17(3)：164～166
55．何金涛，周清华，袁淑兰等．丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理[J]．中国肺癌杂志，2002，5(4)：257～259
56．袁淑兰，王艳萍，陈晓禾等．丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其作用机制的体外实验研究[J]．华西医科大学学报，2002，33(1)：84～86
57．孟文彤，羊裔明，邓承祺等．丹参酮ⅡA诱导NB4细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究[J]．中华血液学杂志，2002，23(6)：297～299
58．程韵枫，羊裔明，邓承祺等．丹参酮ⅡA对NB4细胞促凝活性的影响[J]．华西医科大学学报，2002，33(4)：53～55
59．赵燕，江文，侯京武等．钙过负荷和丹参酮对线粒体脂质过氧化影响[J]．生物化学与生物物理学报，1995，27(6)：610～615
60．王军，邱玉兰．丹参酮对实验性脑梗塞大鼠血液发光学的影响[J]．中药药理与临床，1999，15(4)：29～30
61．顾克显．丹参酮的药理及其在皮肤科临床的应用[J]．皮肤病与性病，1994， 16(3)：11～13
62．王忠永，邱会芳．丹参酮对痤疮患者血清性激素水平的影响及临床疗效观察[J]．中国医师杂志，2001，3(6)：311～312
63．李新梅，董春梅，苑丽华等．丹参酮治疗原发性痛经203例临床分析[J]．中国医师杂志，2001，3(6)：476～477
64．李隆敏，周樱，邵幸署等．丹参酮防治绝经后骨质疏松症[J]．中国骨质疏松杂志，1996，2(21)：78～80
65．北京医学院，北京中医学院主编．中草药成分化学[M]．北京：人民卫生出版社，1980，105～106
66．徐东翔主编．植物资源化学[M]．长沙：湖南科学技术出版社，2004，10～20
67．顾娟，罗海燕，安莲英等．丹参酚酸水提取工艺的研究[J]．天然产物研究与开发，2005，117(6)：781～183
68．张荣泉，王德仁，张蓉．丹参水溶性成分提取工艺研究[J]．中药材，2001，24(11)：818～819
69．周侠，胡谨，王宾．丹参素的提取工艺研究[J]．化工生产与技术，2003，10(6)：23～25
70．崔颖，薛明，史彦斌．甘西鼠尾草脂溶性成分提取工艺的研究[J]．中成药，2003，25(1)：22～23
71．方亮，戈延茹，郭建鹏．用均匀设计法优化丹参提取工艺[J]．延边大学医学学报，1998，21(2)：93～95
72．胡志方，郭慧玲，胡律江．不同提取工艺对丹参酮ⅡA提取率的实验比较[J]．江西中医学院学报，2005，17(1)：45
73．刘家良，崔英德，黄慧民．丹参酮ⅡA的CO_2超临界流体萃取工艺研究[J]．华南理工大学学报(自然科学版)，1998，26(8)：91～93
74．张虹，柳正良，王洪泉．超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究[J]．中草药，2004，35(12)：1360～1362
75．张小帆，王培娜，王文琳．高效液相色谱法测定不同产地丹参中丹参酮ⅡA的含量[J]．河南大学学报(医学科学版)，2003，22(1)：67～68
76．张鉴，王兰，袁成凌等．反相高效液相色谱检测丹参药材中4种丹参酮的含量[J]．分析化学研究简报，2005，(33)：355～358
77．谭生建，王文明，刘刚等．HPLC法测定丹参酮滴耳液中二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量[J]．解放军药学学报，2003，19(4)：269～271
78．甘勇强．薄层扫描法测定冠心丹参片中丹参酮ⅡA的含量[J]．广西中医药，1998，21(3)：44～46
79．孙文基，孟红兵，高海等．固相萃取—分光光度法测定丹参中丹参酮ⅡA的含量[J]．药物分析杂志，1996，16(3)：199-200
80．王卫，杨晓东，王殷英．TLC-UV法测定消炎灵中丹参酮ⅡA的含量[J]．天津药学，1995，7(1)：46～48
81．黄敬群，张秀巧，郭军等．高效液相色谱法测定5种不同产地丹参中丹参素和原儿茶醛含量[J]．安徽中医学院学报，2005，24(1)：37～39
82．黄喜茹，曹冬，樊淑彦等．NaNO_2-Al(NO_3)_3显色测定丹参及其制剂中水溶性酚酸总量[J]．化学试剂，2005，27(12)：745～746
83．陈维扭．超临界流体萃取的原理和应用[M]．北京：化学工业出版社，1998，4～9
84．马君昌．超临界二氧化碳萃取的研究和应用[J]．辽阳石油化工高等专科学校学报，2001，17(3)：16～19
85．高官俊，胡瑞生，杨绪壮等．浅谈超临界二氧化碳流体萃取及其应用[J]．内蒙古石油化工，2004，30(5)：19～20
86．段先志，夏红英，罗平．夹带剂性质对超临界二氧化碳萃取的影响[J]．化工技术与开发，2003，32(6)：23～26
87．于恩平，朱美文，方之蓉等．关于超临界萃取过程中使用夹带剂的研究[J]．化学工程，1989，17(4)：21～24
88．蔡小华，杨志学．中药研究现代化的思索[J]．甘肃中医学院学报，2005，22(3)：47～49
89．王浴生．中药药理与应用(第二版)[M]．北京：人民卫生出版社，1998，190～218
90．杨艺，邓长生．丹参酮药理作用近识[J]．湖北中医杂志，1999，21(6)：284～286
91．李迎春，曾健青，刘莉玫等．丹参中3种丹参酮的超临界二氧化碳萃取及液 相色谱分析[J]．色谱，2002，20(1)：23～27
92．廖传华，黄振仁主编．超临界CO_2流体萃取技术[M]．北京：化学工业出版社，2004，35～40
93．张正，刘家良，崔英德等．丹参酮ⅡA的CO_2超临界流体萃取工艺研究[J]．华南理工大学学报(自然科学版)，1998，26(8)：91～93
94．陆九芳，李总成，包铁竹编著．分离过程化学[M]．北京：清华大学出版社，1993，203～210
95．钱名笙，杨保津，顾文华等．丹参有效成分的研究[J]．化学学报，1978，36(3)：199～201
96．冯宝树，李淑蓉．丹参化学成分的研究[J]．药学通报，1980，16(8)：489～492
2．江苏植物研究所等．新华本草纲要[M]．上海：上海科学技术出版社，1988，462
3．中国科学院北京植物研究所主编．中国高等植物图鉴(第3册)[M]．北京：科学出版社，1985，667～675
4．云南省植物研究所．中国植物志(第66卷)[M]．北京：科学出版社，1977，79～194．
5．江苏新医学院编．中药大辞典(上册)[M]．上海：上海人民出版社，1977，478～482
6．卫生部药典委员会．中国药典(一部)[M]．北京：人民卫生出版社，1995，63～64
7. Hase K, R Kasimu, P Basnet et al. Preventive effect oflithospermate B from Salvia mitiorrhiza on experimental hepatitis induced by carbon tetrachloride or D-galactosamine/lipopolysaccharide[J]. Planta Med, 1997, 63 (2): 62～66
8. Tanaka T, S Morimoto, G Nonaka et al. Magnesium and ammonium-potassium lithospermates B, the active principles having a uremia-preventive effect from Salvia mitiorrhiza [J]. Chem Pharm Bull, 1989, 37 (5): 340～344
9. Arda N, N Goren, A Kuru et al. Saniculoside N from Sanicula europaea L[J]. Nat Prod, 1997, 60 (4): 1170～1173
10．杜冠华，张均田．丹参现代研究概况与进展[J]．医药导报，2004，23(7)：435～438
11．冯玲玲．丹参组织培养的初步研究[D]．华中师范大学硕士学位论文，2004，1～2
12．徐昭玺主编．中草药种植技术指南[M]．北京：中国农业版社，2000，78～79
13．周荣汉主编．中药资源学[M]．北京：中国医药科技出版社，1993，441～442
14．国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草(第七册第十九卷)[M]．上海：上海科学技术出版社，1999，159～194
15．肖小河，方清茂，夏文娟等．药用鼠尾草属数值分类与丹参药材道地性[J]．植物资源与环境，1997，6(2)：17～21
16．徐任生主编．丹参生物学及其应用[M]．北京：科学出版社，1990，78～79
17．中国科学院中国植物志编辑委员会主编．中国植物志(第六十六卷)[M]．北京：科学出版社，1977，786～788
18．舒志明．丹参种质资源的收集评价与品种选育[D]．西北农林科技大学硕士学位论文，2005，3～4
19．王新玲，热娜．鼠尾草属植物化学成分的研究进展[J]．新疆医科大学学报，2002，25(3)：235～237
20．顾文华．鼠尾草属植物的化学成分[J]．中草药，1981，12(2)：41～48
21．常军民，堵年生．鼠尾草属植物化学成分研究进展[J]．中成药，1999，21(9)：480～482
22．李强，匡海学，方东军等．药用鼠尾草花的化学成分研究[J]．中医药学报，1999，(4)：45～46
23．常英姿，梁殿权，王孝铭等．丹参素对氧自由基所致大鼠心肌线粒体H~+—ATP酶损伤的保护作用[J]．1991，1(5)：449～451
24．杨卫东，朱鸿良．丹参的氧自由基清除作用[J]．中国药理学通报，1990，6(2)：118～122
25．阴健．中药现代化研究与临床应用[M]．北京：学苑出版社，1993，174～175
26．顾杨洪，张彩英，黄桂秋．丹参和丹参素对牛内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响[J]．上海第二医科大学学报，1990，10(3)：208～212
27．李承珠，林嘉宝，杨诗春等．丹参素对血小板释放血管收缩物质的影响[J]．中西医结合杂志，1984，4(9)：565～568
28．吁文贵，徐理纳．乙酰丹酚酸A对血小板花生四烯酸代谢的影响[J]．药学学报，1998，33(1)：62～65
29．王世军，李定格，史仁华等．川芎嗪、丹参注射液对正常状态及实验性微循环障碍小鼠脑微循环的影响[J]．中国微循环，2000，4(4)：213～217
30．李焰，郝玉珍，吴莜芳．丹参对暴发性肝衰竭肠系膜微循环改善作用的实验研究[J]．中国冶金工业医学杂志，1998，15(1)：9～12
31．杨怡静，王玲．丹参、藻酸双酯钠、低分子右旋糖酐、甘露醇对红细胞悬浮 液粘弹特性的影响[J]．华西医科大学学报，1993，24(2)：143～146
32．张志伟，吴在德．丹参对大鼠肝缺血后肝再生促进作用的初步观察[J]．同济医科大学学报，1995，24(4)：272～275
33．魏岳斌，李国成．丹参对胃溃疡大鼠血清一氧化氮含量和胃粘膜表皮生长因子受体表达的影响[J]．中国中西医结合消化杂志，2001，9(4)：211～215
34．潘立群，陈荣明．丹参对家兔小肠吻合口组织细胞再生的影响[J]．南京中医药大学学报，2000，16(1)：35～37
35．傅廷亮，王兴华，张祥盛等．丹参、山莨菪碱对小鼠自体移植脾组织再生的影响[J]．滨州医学院学报，1995，18(1)：6～8
36．杨勤，赵朝伟．丹参的药理作用研究现状[J]．中国药业，2003，12(10)：78～79
37. Zhang W H, Wang J S, Zhou Y et al. Gadoliniumchlorid and salvia miltiorrhiza compound ameliorate reperfusion injury in hepatocellular mitochondria[J]. World J Gastr, 2003, 9 (9): 2040～2044
38．叶红军，宋玉芳．抗养化剂丹参对慢性肝病患者及中毒性损伤动物的治疗观察[J]．中华消化杂志，1991，1(2)：87～89
39．黄林邦，熊桂生．复方丹参对效鼠急性重度肝损伤的保护作用[J]．赣南医学院学报，1990，10(4)：215～217
40．邓和军，马学惠，许瑞龄等．丹参护肝机制的研究[[J]．中国中药杂志，1992，17(4)：233～236
41．戚心广，稻垣寰．丹参、赤芍对实验性肝损伤肝细胞保护作用的机制研究[J]．ChinJIntegratedTraditChinWestMed, 1991, 11 (20): 102～104
42．房其年．丹参抗菌有效成份的研究[J]．化学学报，1976，34(3)：97～100
43．石乃玉，董华民，黄海金．丹参酮药理及临床应用[J]．中国医师杂志，2001，3(2)：150～151
44．罗厚蔚，韦苞洋，刘全海等．丹参二萜醌的细胞毒活性及构效关系研究[J]．中国药科大学学报，2002，33(1)：6～13
45. Wu Wu-Lung, Chang Wen-Liang, Chen Chia-Fu. Cytotoxic activities of tanshinone against human eareinomaeell lines [J]. America Journal of Chinese Medicine, 1991, 19 (3/4): 207～216
46．袁淑兰，黄光琦，王修杰等．丹参酮和维甲酸对人宫颈癌细胞株的体外诱导 分化作用[J]．中华肿瘤杂志，1995，17(6)：422～424
47．袁淑兰，黄光琦，黄韧敏等．丹参酮体外诱导分化作用及其机[J]．癌症，1996，15(6)：408～409
48．袁淑兰，黄韧敏，王修杰等．丹参酮对人肝肿瘤细胞某些表型逆转作用[J]．肿瘤，1997，16(5)：268～270
49．梁勇，羊裔明，袁淑兰等．丹参酮ⅡA诱导原代培养人急性杂早幼粒细胞白血病细胞分化[J]．华西医科大学学报，2000，31(2)：207～210
50．何金涛，周清华，袁淑兰等．丹参酮对人肺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理[[J]．中国肺癌杂志，2002，5(2)：123～125
51．秦萍，羊裔明，邓承祺等．丹参酮ⅡA诱导白血病细胞分化前后端粒酶活性变化[J]．华西医科大学学报，2002，33(3)：397～400
52．黄凤鸣，陈幸华．丹参酮ⅡA对肺腺癌细胞株的增殖抑制作用及其分子机理[J]．中国肺癌杂志，2001，4(5)：375～377
53．王修杰，袁淑兰，黄韧敏等．Brdu和PCNA标记观察丹参酮对肺癌细胞增殖的影响[J]．华西医科大学学报，1996，27(4)：288～231
54．袁淑兰，黄韧敏，宋毅等．丹参酮ⅡA诱导HL-60细胞凋亡[J]．癌症，1998，17(3)：164～166
55．何金涛，周清华，袁淑兰等．丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理[J]．中国肺癌杂志，2002，5(4)：257～259
56．袁淑兰，王艳萍，陈晓禾等．丹参酮ⅡA诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其作用机制的体外实验研究[J]．华西医科大学学报，2002，33(1)：84～86
57．孟文彤，羊裔明，邓承祺等．丹参酮ⅡA诱导NB4细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究[J]．中华血液学杂志，2002，23(6)：297～299
58．程韵枫，羊裔明，邓承祺等．丹参酮ⅡA对NB4细胞促凝活性的影响[J]．华西医科大学学报，2002，33(4)：53～55
59．赵燕，江文，侯京武等．钙过负荷和丹参酮对线粒体脂质过氧化影响[J]．生物化学与生物物理学报，1995，27(6)：610～615
60．王军，邱玉兰．丹参酮对实验性脑梗塞大鼠血液发光学的影响[J]．中药药理与临床，1999，15(4)：29～30
61．顾克显．丹参酮的药理及其在皮肤科临床的应用[J]．皮肤病与性病，1994， 16(3)：11～13
62．王忠永，邱会芳．丹参酮对痤疮患者血清性激素水平的影响及临床疗效观察[J]．中国医师杂志，2001，3(6)：311～312
63．李新梅，董春梅，苑丽华等．丹参酮治疗原发性痛经203例临床分析[J]．中国医师杂志，2001，3(6)：476～477
64．李隆敏，周樱，邵幸署等．丹参酮防治绝经后骨质疏松症[J]．中国骨质疏松杂志，1996，2(21)：78～80
65．北京医学院，北京中医学院主编．中草药成分化学[M]．北京：人民卫生出版社，1980，105～106
66．徐东翔主编．植物资源化学[M]．长沙：湖南科学技术出版社，2004，10～20
67．顾娟，罗海燕，安莲英等．丹参酚酸水提取工艺的研究[J]．天然产物研究与开发，2005，117(6)：781～183
68．张荣泉，王德仁，张蓉．丹参水溶性成分提取工艺研究[J]．中药材，2001，24(11)：818～819
69．周侠，胡谨，王宾．丹参素的提取工艺研究[J]．化工生产与技术，2003，10(6)：23～25
70．崔颖，薛明，史彦斌．甘西鼠尾草脂溶性成分提取工艺的研究[J]．中成药，2003，25(1)：22～23
71．方亮，戈延茹，郭建鹏．用均匀设计法优化丹参提取工艺[J]．延边大学医学学报，1998，21(2)：93～95
72．胡志方，郭慧玲，胡律江．不同提取工艺对丹参酮ⅡA提取率的实验比较[J]．江西中医学院学报，2005，17(1)：45
73．刘家良，崔英德，黄慧民．丹参酮ⅡA的CO_2超临界流体萃取工艺研究[J]．华南理工大学学报(自然科学版)，1998，26(8)：91～93
74．张虹，柳正良，王洪泉．超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究[J]．中草药，2004，35(12)：1360～1362
75．张小帆，王培娜，王文琳．高效液相色谱法测定不同产地丹参中丹参酮ⅡA的含量[J]．河南大学学报(医学科学版)，2003，22(1)：67～68
76．张鉴，王兰，袁成凌等．反相高效液相色谱检测丹参药材中4种丹参酮的含量[J]．分析化学研究简报，2005，(33)：355～358
77．谭生建，王文明，刘刚等．HPLC法测定丹参酮滴耳液中二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量[J]．解放军药学学报，2003，19(4)：269～271
78．甘勇强．薄层扫描法测定冠心丹参片中丹参酮ⅡA的含量[J]．广西中医药，1998，21(3)：44～46
79．孙文基，孟红兵，高海等．固相萃取—分光光度法测定丹参中丹参酮ⅡA的含量[J]．药物分析杂志，1996，16(3)：199-200
80．王卫，杨晓东，王殷英．TLC-UV法测定消炎灵中丹参酮ⅡA的含量[J]．天津药学，1995，7(1)：46～48
81．黄敬群，张秀巧，郭军等．高效液相色谱法测定5种不同产地丹参中丹参素和原儿茶醛含量[J]．安徽中医学院学报，2005，24(1)：37～39
82．黄喜茹，曹冬，樊淑彦等．NaNO_2-Al(NO_3)_3显色测定丹参及其制剂中水溶性酚酸总量[J]．化学试剂，2005，27(12)：745～746
83．陈维扭．超临界流体萃取的原理和应用[M]．北京：化学工业出版社，1998，4～9
84．马君昌．超临界二氧化碳萃取的研究和应用[J]．辽阳石油化工高等专科学校学报，2001，17(3)：16～19
85．高官俊，胡瑞生，杨绪壮等．浅谈超临界二氧化碳流体萃取及其应用[J]．内蒙古石油化工，2004，30(5)：19～20
86．段先志，夏红英，罗平．夹带剂性质对超临界二氧化碳萃取的影响[J]．化工技术与开发，2003，32(6)：23～26
87．于恩平，朱美文，方之蓉等．关于超临界萃取过程中使用夹带剂的研究[J]．化学工程，1989，17(4)：21～24
88．蔡小华，杨志学．中药研究现代化的思索[J]．甘肃中医学院学报，2005，22(3)：47～49
89．王浴生．中药药理与应用(第二版)[M]．北京：人民卫生出版社，1998，190～218
90．杨艺，邓长生．丹参酮药理作用近识[J]．湖北中医杂志，1999，21(6)：284～286
91．李迎春，曾健青，刘莉玫等．丹参中3种丹参酮的超临界二氧化碳萃取及液 相色谱分析[J]．色谱，2002，20(1)：23～27
92．廖传华，黄振仁主编．超临界CO_2流体萃取技术[M]．北京：化学工业出版社，2004，35～40
93．张正，刘家良，崔英德等．丹参酮ⅡA的CO_2超临界流体萃取工艺研究[J]．华南理工大学学报(自然科学版)，1998，26(8)：91～93
94．陆九芳，李总成，包铁竹编著．分离过程化学[M]．北京：清华大学出版社，1993，203～210
95．钱名笙，杨保津，顾文华等．丹参有效成分的研究[J]．化学学报，1978，36(3)：199～201
96．冯宝树，李淑蓉．丹参化学成分的研究[J]．药学通报，1980，16(8)：489～492