牛蒡子微生物发酵转化的研究
|
摘要
随着越来越多的关于牛蒡子中主要药理药效成分研究报道表明：牛蒡子中起主要药效作用的主要成分是牛蒡子苷元。但牛蒡子苷元在牛蒡子中的含量并不高，只有0.19％左右，而作为其前体物质的牛蒡子苷含量则达到3-5％，因此如何提高牛蒡子苷元的含量成为当今乃至今后研究的重点。
目前提高牛蒡子中牛蒡子苷元含量的方法有两种，分别为化学水解法及酶解法，但两者均存在一些缺陷，未能应用于实际生产。本论文通过微生物发酵法实现对牛蒡子苷的转化，在转化过程中即没有强烈的酸碱反应发生，又无需将酶及牛蒡子苷提纯，因此有效的避免了上述两种方法存在的缺陷。本论文的主要研究内容及结果如下：
Ⅰ、菌种筛选及菌种诱变
根据牛蒡子苷糖苷键类型，结合微生物筛菌技术，建立有效的菌株筛选模型。利用建立的筛选模型筛选能够分泌特异性的作用于牛蒡子苷糖苷键的酶的菌株---β-葡萄糖苷酶高产菌。并对筛选到的菌株进行分离、纯化，将之命名为HB—2。
Ⅱ、发酵条件优化
以发酵后牛蒡子苷元含量(％)为指标，分别从对温度、料水比、装液量、转速、发酵时间等几方面进行实验，确定牛蒡子苷转化的最佳发酵条件，使牛蒡子苷最大程度的转化为牛蒡子苷元。该发酵条件为：牛蒡子粉粒度20目、发酵温度28℃、料水比7.5：100、装液量40％、转速200rpm、发酵时间120h。
Ⅲ、牛蒡子苷元的分离纯化
Fructus Arctii, the seeds of Arctium lappa L (Compositae), is one of the familiar Chinese traditional medicine. The chief effectual components of Fructus Arctii are arctigenin(ACT) and arctiin. The pharmacokinetic study of Fructus Arctii shows that arctiin changes to de-methyl arctigenin quickly in vitro by human intestinal flora. This de-methyl arctigenin becomes arctigenin (ACT) by COMT in the liver. Then arctigenin is taken by blood from head to foot. Actually arctigenin is the chief effectual component of Fructus Arctii. Arctigenin(ACT) has obvious effects such as anti-cancer, anti-virus, calcium antagonist actions and PAF(platelet activating factor) antagonist activity. But the content of the arctigenin (ACT) in Fructus Arctii was very low, only about 0.19%. SO, how to heighten the content of arctigenin (ACT), becomes a hotspot in currently study.
Arctiin is one kind of lignin, which will be isomerous with the reaction of acid or alkali, and the activity will be changed. So the Chemistry method to transform arctiin is imperfect. Enzyme method has been reported too, but it' s also imperfect for its costliness. Now we adopt microorganism to transform arctigenin(ACT), utilize the enzyme excreted by microorganism to decompose arctiin. It will solve the problems of the chemistry and enzyme methods.
Microbe can produce abundant enzymes which have the great ability of transformation. So the microbial transformation of the Chinese
目前提高牛蒡子中牛蒡子苷元含量的方法有两种，分别为化学水解法及酶解法，但两者均存在一些缺陷，未能应用于实际生产。本论文通过微生物发酵法实现对牛蒡子苷的转化，在转化过程中即没有强烈的酸碱反应发生，又无需将酶及牛蒡子苷提纯，因此有效的避免了上述两种方法存在的缺陷。本论文的主要研究内容及结果如下：
Ⅰ、菌种筛选及菌种诱变
根据牛蒡子苷糖苷键类型，结合微生物筛菌技术，建立有效的菌株筛选模型。利用建立的筛选模型筛选能够分泌特异性的作用于牛蒡子苷糖苷键的酶的菌株---β-葡萄糖苷酶高产菌。并对筛选到的菌株进行分离、纯化，将之命名为HB—2。
Ⅱ、发酵条件优化
以发酵后牛蒡子苷元含量(％)为指标，分别从对温度、料水比、装液量、转速、发酵时间等几方面进行实验，确定牛蒡子苷转化的最佳发酵条件，使牛蒡子苷最大程度的转化为牛蒡子苷元。该发酵条件为：牛蒡子粉粒度20目、发酵温度28℃、料水比7.5：100、装液量40％、转速200rpm、发酵时间120h。
Ⅲ、牛蒡子苷元的分离纯化
Fructus Arctii, the seeds of Arctium lappa L (Compositae), is one of the familiar Chinese traditional medicine. The chief effectual components of Fructus Arctii are arctigenin(ACT) and arctiin. The pharmacokinetic study of Fructus Arctii shows that arctiin changes to de-methyl arctigenin quickly in vitro by human intestinal flora. This de-methyl arctigenin becomes arctigenin (ACT) by COMT in the liver. Then arctigenin is taken by blood from head to foot. Actually arctigenin is the chief effectual component of Fructus Arctii. Arctigenin(ACT) has obvious effects such as anti-cancer, anti-virus, calcium antagonist actions and PAF(platelet activating factor) antagonist activity. But the content of the arctigenin (ACT) in Fructus Arctii was very low, only about 0.19%. SO, how to heighten the content of arctigenin (ACT), becomes a hotspot in currently study.
Arctiin is one kind of lignin, which will be isomerous with the reaction of acid or alkali, and the activity will be changed. So the Chemistry method to transform arctiin is imperfect. Enzyme method has been reported too, but it' s also imperfect for its costliness. Now we adopt microorganism to transform arctigenin(ACT), utilize the enzyme excreted by microorganism to decompose arctiin. It will solve the problems of the chemistry and enzyme methods.
Microbe can produce abundant enzymes which have the great ability of transformation. So the microbial transformation of the Chinese
引文
[1] 施巧琴，吴松刚．工业微生物育种学(第二版)．北京：科学出版社，2003．
[2] 曹军卫，马辉文．微生物工程．北京：科学出版社，2003．
[3] 吴小刚，曾莹，周丽明，李彦，何平．米曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究(J)．食品科技，2005，6：11-13．
[4] 李平，等．黑曲霉葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质[J]．安徽农业大学学报，1998，25(3)：304-309
[5] 吴志梅，梁华正，李佳春，李媛．产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及发酵栀子蓝色素的研究[J]．现代食品科技，2005，(3)．53-55
[6] 李平，宛晓春，陶文沂，丁霄霖．微生物发酵生产β-葡萄糖苷酶[J]．安徽农业大学学报(自然科学版)，2000，(2)．196-198
[7] 陈军杰，张玲，姚卫蓉，钱和．β-葡萄糖苷酶产生菌的诱变育种[J]．中国调味品，2005，(1)．21-25
[8] 李远华．β-葡萄糖苷酶的研究进展(综述)[J]．安徽农业大学学报，2002，(4)．421-425
[9] Nose M, FujimotoT,TakedaT,etal.Structural transformation of lignan compound sinratgastroin test inaltract [J]. Planta Med, 1992, 58(6):520-3.
[10] 徐朝晖，杨松松，康廷国．等中药牛蒡子质量标准规范化研究．辽宁中医学院，83-91．
[11] 王海燕，杨岐山．牛蒡子化学成分的研究．药学学报，1993，28(12)：911—917．
[12] 施巧琴，吴松刚．工业微生物育种学(第二版)．北京：科学出版社，2003．
[13] 曹军卫，马辉文．微生物工程．北京：科学出版社，2003．
[14] 何晨，金钊，冯志华，白家峰，田天丽，张兴宇，孙启玲．芽孢杆菌发酵炮制中药红花增强溶血栓药效研究[J]．中国中药杂志，2005，30(5)：340-344．
[15] 张龙翔，张庭芳，李令媛．生化实验方法和技术．北京，高等教育出版社，1981．
[16] 周文化，钟秋平，陈文学．甘蔗糖蜜发酵合成茁霉多糖及其发酵动力学[J]． 湖南农业大学学报(自然科学版)，2005，(2)．215-218．
[17] 韩润林，陈洪章，李佐虎．枯草杆菌溶栓酶恒溶氧发酵动力学参数估计[J]．过程工程学报，2002，(1)．
[18] 孙文基，等．牛蒡子中牛蒡子苷及其苷元薄层扫描内标法测定(J)．药物分析杂志，1993，13：178．
[19] 李慧义，罗淑荣．牛蒡子中木脂素的薄层扫描测定．色谱(J)．1995，13(4)：277、278
[20] 李慧义，罗淑荣．RP—HPLC法测定牛蒡子中木脂素的含量(J)．药学学报，1995，30(1)：41-45．
[21] 程新苹，戴涌，孙文基．牛蒡子中牛蒡苷的含量考察(J)．西北药学杂志，1998，13(3)：139．
[22] 孙文基，等．牛蒡子中牛蒡子苷及其苷元反相高效液相色谱法测定(J)．药学学报，1992，27：549．
[23] 林启寿．中草药成分化学．科学出版社．1977，104～113．
[24] 任玉琳，杨岐山．二苄基丁内酯型木脂素类化合物光谱规律分析(J)．波谱学杂志，2002，19(1)：16-24．
[25] 赵华，王劲，杨松松．药用植物牛蒡化学成分和药理活性研究述要．辽宁中医学院学报，2005，7(2)：1289-129．
[26] 魏瑞兰．牛蒡活性成分研究进展．中国中医药信息杂志，1997，4(5)：22．
[27] 郑云枫，彭国平．牛蒡的化学研究进展．时珍国医国药，2005，12(2)：153-156．
[28] 冯卫生，郑晓珂，王彦志，毕跃峰．马尾松松针中木脂素类成分的分离与鉴定．药学学报，2003，38(12)：927-930．
[29] 任常，朱庆玲．牛蒡子的研究概况．中国民族医药杂志．2003(12)：36-39．
[30] 吴炳新，牛纪江，孙筱林，董立山．中药发酵制药技术[J]．山东中医杂志，2001，(3)．179-180
[31] 王兴红，李祺德，曹秋娥．微生物发酵中药应成为中药研究的新内容[J]． 中草药，2001，(3)．267-268
[32] 戴万生，赵荣华．发酵法对大黄葸醌类成分含量的影响[J]．云南中医中药杂志，2005，(1)．
[33] 赵广荣，向志军，元英进，郭治昕．中药现代化研究的生物技术．中草药，2004，481-484
[34] 钦传光，李世杰，丁焰，林向东．发酵工程在医药研究和生产中的应用．湖北工学院学报，2000，67-70．
[35] 曾庆文，曹军．中药发酵的研究进展[J]．齐齐哈尔医学院学报，2005，(5)．545-548．
[36] 张冬青，揭广川．现代发酵技术在提高中药药用效能方面的作用[J]．广东轻工职业技术学院学报，2005，(1)．34-38．
[37] 米靖宇，宋纯清．牛蒡子中木脂素类化合物的抗肿瘤及免疫活性(J)．时珍国医国药，2002，13(3)：168-169．
[38] 高阳，董雪，康廷国，等．牛蒡子苷元体外抗流感病毒活性[J)．中草药，2002，33(8)：724-726．
[39] 张民庆，龚惠明．抗肿瘤中药的临床应用．北京．人民卫生出版社，1998，9：90．
[40] 贺学林，章素云，陈以平，等．牛蒡子防治STZ糖尿病大鼠早期肾脏病变的实验研究1J2．浙江中医杂志，2003，02：88-90．
[41] Takasaki M, Konoshima T, Komatsu K, Tokuda H, et al. Anti tumor-promoting activity of lignans from the aerial part of Saus surea medusa[J].CancerLett, 2000, 158(1): 53-9.
[42] Hirose M, Yamaguchi T, Lin C, et al. Effects of arctiin on PhIP induced mammary, colon and pancreatic carcinogenesis in female Sprague-Dawley rats and MeIQx-induced hepatocarc inogenesisi in male F344 rats[J].Cancer Lett, 2000, 155(1):79-88.
[43] Kato T, Hirose M, Takahashi S, et al. Effects of the lignan, arctiin, on 17-betaethinylestradiol promotion of preneoplastic liver cell loci development in rats [J].AnticancerRes, 1998, 18(2A):1053-7.
[44] Moritani S, Nomura M, TakedaY, et al. Cytotoxic components of bardanae fructus (goboshi) [J]. Biol Pharm Bull, 1996 Nov, 19 (11): 1515-7.
[45] Hirano T, Gotoh M, Oka K Natural flavonoids and lignans are potent cytostatic agents against human leukemic HL-60 cells [J] LifeSci,1994,55(13): 1061-9.
[46] Cho JY , Kim AR , Yoo ES , et al. Immunomodulatory effect arctigenin, a lignan compound, on tumournecrosis factor-alp and nitric oxide production, and lymphocyte proliferation [J] PharmPharmacol,1999Nov, 51(11):1267-73.
[47] UmeharaK, NakamuraM, MiyaseT, et al. Studies on differenation inducers. VI. Lignan derivatives from Arctium fructus. (2) [J].Chem Pharm Bull(Tokyo), 1996, 44(12):2300-4.
[48] VlietinckAJ, DeBruyneT, ApersS, etal. Plant-derive dleading compounds for chemotherapy of humanism munode ficiencyvirus(HIV) infection[J].PlantaMed, 1998, 64(2):97-109.
[49] Eich E, Pertz H, Kaloga M, etal. (-)-Arctigenin as alead linte-grase[J]. JMedChem, 1996, 39(1):86-95
[50] ZSchroderHC, MerzH, SteffenR, etal. Differen tialinvi troanti-HIV ac tivityo fnatural lignans[J]. Naturforsch[C], 1990 Nov-Dec, 45(11-12):1215-21.
[1] 南北朝·《名医别录》卷二，北京：人民卫生出版社，1986．
[2] 南北朗·雷致．《雷公饱炙论》卷中．1932年成都益生堂刻本．
[3] 唐·孙思超《千金翼方》卷二．北京：人民卫生出版社，1955．
[4] 元·忽思慧．《饮膳正要》卷二．涵芬楼据明景泰刻本影印四部丛刊本．
[5] 宋·苏颂．《本草图经》卷七．安徽：安徽科学技术出版社，1994．
[6] 明·社文燮《药鉴》卷二．上海：上海人民出版社，1975
[7] 明·李中梓．《本草征要》》卷二．清光绪善成堂刻医宗必读本．
[8] 清·汪昂．《本草备要》草部．海：上海广益书局石印本．1935．
[9] 清·叶挂．《本草经解》卷二．清光绪十四年戊子潘wei刻本．
[10] 宋·王怀隐．《太平圣惠方》卷九十五．北京：人民卫生出版社，1958．
[11] 宋·张锐．《鸡峰晋济方》卷八．道光八年汪士钟覆南宋刻本艺荟书台藏版．
[12] 明·胡滢．《卫生易简方》卷四．北京：人民卫生出版社，1984．
[13] 明·刘文泰．《本草品汇精要》卷之十．北京：人民卫生出版社，1982．
[14] 国家药典委员会编．中华人民共和国药典．一部．北京：化学工业出版社，2000，24．
[15] 吴兰成主编．中国中医药学主题词表．北京：中医古籍出版社，1996，290．
[16] 雷敦．雷公炮炙论．上海：上海中医药大学出版社，1986．65．
[17] 孟诜．食疗本草．上海：大东书局，1934．10．
[18] 王怀隐．重修证和经史证类备用本草．北京：人民卫生出版社，1957．218．
[19] 唐慎微．博济方．北京：商务印书馆，1959．273．
[20] 张子和．儒门事亲．沈阳：辽宁科学技术出版社，1999．123．
[21] 方贤．奇效良方．北京：商务印书馆，1959．39．
[22] 朱棣．普济方．北京：人民卫生出版社，1959．370．
[23] 王肯堂．证治准绳．上海：中国中医出版社，1997．662．
[24] 张景岳．景岳全书．上海：上海科技出版社，1964．923．
[25] 王昂．本草备要．沈阳：辽宁科技出版社，1999．35．
[26] 江苏新医学院．中药大辞典．上海：上海科技出版社，1977．430．
[27] 李正民．牛蒡子引起过敏反应报告．实用中医内科杂志，1994，8(3)：37．
[28] 张涛．牛蒡子不同炮制品中牛蒡苷含量的HPLC测定．中草药，2004，35(4)：406．
[29] 高阳，康廷国．牛蒡苷元体外抗流感病毒活性．中草药，2002，33(8)：724．
[30] 徐朝晖．中药牛蒡子质量标准规范化研究[D]．辽宁中医学院，2000．6-16．
[31] 毕葳．牛蒡子虎杖化学成分及质量标准研究[D]．2005．19-33．
[32] 颜正华．中药学[M]．北京：人民卫生出版社，1995，89．
[33] 李家实，贾敏如，等．中药鉴定学[M]．上海：上海科技出版社，1996，5：453-454．
[34] 王·额尔敦，包景荣，安·巴特尔，等．希伯)乌布斯．内蒙古蒙药材标准[M]．1987，377．
[35] 中国医学科学院药物研究所．中药志(Ⅲ)1M2．北京：人民卫生出版社，1984．23．
[36] Takasaki M, Konoshima T, Komatsu K, Tokuda H, et al. Anti tumor-promoting activity of lignans from the aerial part of Saus sureamedusa[J].CancerLett, 2000, 158(1): 53-9.
[37] Hirose M, Yamaguchi T, Lin C, et al. Effects of arctiin on PhIP induced mammary, colon and pancreatic carcinogenesis in female Sprague-Dawley rats and MeIQx-induced hepatocarc inogenesisi in male F344 rats[J].Cancer Lett, 2000, 155(1):79-88.
[38] Kato T, Hirose M, Takahashi S, et al. Effects of the lignan, arc tiin, on 17-betaethinylestradiol promotion of preneoplastic liver cell foci development in rats [J].AnticancerRes, 1998, 18(2A): 1053-7.
[39] Moritani S, Nomura M, Takeda Y, et al. Cytotoxic components of bardanae fructus (goboshi) [J]. Biol Pharm Bull, 1996 Nov, 19 (11):1515-7.
[40] Hirano T, Gotoh M, Oka K Natural flavonoids and lignans are potentcytostatic agents against human leukemic HL-60 cells[J] LifeSci, 1994, 55(13):1061-9.
[41] Cho JY , Kim AR , Yoo ES, et al. Immunomodulatory effect arctigenin, a lignan compound, on tumoumecrosis factor-alp and nitric oxide production, and lymphocyte proliferation [J] PharmPharrnacol, 1999Nov, 51(11):1267-73.
[42] Umehara K, Nakamura M, Miyase T, et al. Studies on differenation inducers. Ⅵ. Lignan derivatives from Arctium fructus. (2) [J].Chem Pharm Bull(Tokyo), 1996, 44(12):2300-4.
[43] VlietinckAJ, DeBruyneT, ApersS, etal. Plant-derive dleading compounds for chemotherapy of human immunode ficiencyvirus(HIV)infection[J]. Planta Med, 1998, 64(2): 97-109.
[44] Eich E, Pertz H, Kaloga M, etal. (-)-Arctigenin as aleadstruc-turefor inhibitors of human immunodeficiencyvirus type- 1 inte-grase[J]. JMedChem, 1996, 39(1): 86-95.
[45] ZSchroder HC, Merz H, Steffen R, etal. Different ialinvitroan-ti-HIV activity of natural lignans[J]. Naturforsch[C], 1990 Nov-Dec, 45(11-12): 1215-21.
[46] Nose M, Fujimoto T, Takeda T, etal. Structural transformation of lignan compounds inratgastrointestinaltract[J]. Planta Med, 1992, 58(6): 520-3.
[47] 米靖宇，宋纯清．牛蒡子中木脂素类化合物的抗肿瘤及免疫活性[J]．时珍国医国药，2002，13(3)：168-169．
[48] 贺学林，章素云，陈以平，等．牛蒡子防治STZ糖尿病大鼠早期肾脏病变的实验研究[J]．浙江中医杂志，2003，02：88-90．
[49] 陈铁宏，黄迪．牛蒡子对Epstein-Barr病毒抗表达的抑制作用[J]．中华实验和临床病毒学杂志，1994，8(4)：323-326．
[50] 韩晓平．牛蒡子治疗椎体结核[J]．中医杂志，1997，38(12)：709-710．
[51] 薛伟先，程术芹．牛蒡子临床应用[J]．时珍国医国药，1999，10(10)：784．
[52] 李晓三，朱树宽，牛效清，等．专题笔谈牛蒡子[J]．中医杂志，1997，11：645-647．
[53] 牛效清．牛蒡子通鼻窍有殊功[J]．中医杂志，1997，38(11)：645．
[54] 陈智远．牛蒡子擅通便[J]．中医杂志，1997，38(12)：710-711．
[55] 姜辉，王柱林．牛蒡子治疗扁平疣[J]．四川中医，1999，09：35-36．
[2] 曹军卫，马辉文．微生物工程．北京：科学出版社，2003．
[3] 吴小刚，曾莹，周丽明，李彦，何平．米曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究(J)．食品科技，2005，6：11-13．
[4] 李平，等．黑曲霉葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质[J]．安徽农业大学学报，1998，25(3)：304-309
[5] 吴志梅，梁华正，李佳春，李媛．产β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及发酵栀子蓝色素的研究[J]．现代食品科技，2005，(3)．53-55
[6] 李平，宛晓春，陶文沂，丁霄霖．微生物发酵生产β-葡萄糖苷酶[J]．安徽农业大学学报(自然科学版)，2000，(2)．196-198
[7] 陈军杰，张玲，姚卫蓉，钱和．β-葡萄糖苷酶产生菌的诱变育种[J]．中国调味品，2005，(1)．21-25
[8] 李远华．β-葡萄糖苷酶的研究进展(综述)[J]．安徽农业大学学报，2002，(4)．421-425
[9] Nose M, FujimotoT,TakedaT,etal.Structural transformation of lignan compound sinratgastroin test inaltract [J]. Planta Med, 1992, 58(6):520-3.
[10] 徐朝晖，杨松松，康廷国．等中药牛蒡子质量标准规范化研究．辽宁中医学院，83-91．
[11] 王海燕，杨岐山．牛蒡子化学成分的研究．药学学报，1993，28(12)：911—917．
[12] 施巧琴，吴松刚．工业微生物育种学(第二版)．北京：科学出版社，2003．
[13] 曹军卫，马辉文．微生物工程．北京：科学出版社，2003．
[14] 何晨，金钊，冯志华，白家峰，田天丽，张兴宇，孙启玲．芽孢杆菌发酵炮制中药红花增强溶血栓药效研究[J]．中国中药杂志，2005，30(5)：340-344．
[15] 张龙翔，张庭芳，李令媛．生化实验方法和技术．北京，高等教育出版社，1981．
[16] 周文化，钟秋平，陈文学．甘蔗糖蜜发酵合成茁霉多糖及其发酵动力学[J]． 湖南农业大学学报(自然科学版)，2005，(2)．215-218．
[17] 韩润林，陈洪章，李佐虎．枯草杆菌溶栓酶恒溶氧发酵动力学参数估计[J]．过程工程学报，2002，(1)．
[18] 孙文基，等．牛蒡子中牛蒡子苷及其苷元薄层扫描内标法测定(J)．药物分析杂志，1993，13：178．
[19] 李慧义，罗淑荣．牛蒡子中木脂素的薄层扫描测定．色谱(J)．1995，13(4)：277、278
[20] 李慧义，罗淑荣．RP—HPLC法测定牛蒡子中木脂素的含量(J)．药学学报，1995，30(1)：41-45．
[21] 程新苹，戴涌，孙文基．牛蒡子中牛蒡苷的含量考察(J)．西北药学杂志，1998，13(3)：139．
[22] 孙文基，等．牛蒡子中牛蒡子苷及其苷元反相高效液相色谱法测定(J)．药学学报，1992，27：549．
[23] 林启寿．中草药成分化学．科学出版社．1977，104～113．
[24] 任玉琳，杨岐山．二苄基丁内酯型木脂素类化合物光谱规律分析(J)．波谱学杂志，2002，19(1)：16-24．
[25] 赵华，王劲，杨松松．药用植物牛蒡化学成分和药理活性研究述要．辽宁中医学院学报，2005，7(2)：1289-129．
[26] 魏瑞兰．牛蒡活性成分研究进展．中国中医药信息杂志，1997，4(5)：22．
[27] 郑云枫，彭国平．牛蒡的化学研究进展．时珍国医国药，2005，12(2)：153-156．
[28] 冯卫生，郑晓珂，王彦志，毕跃峰．马尾松松针中木脂素类成分的分离与鉴定．药学学报，2003，38(12)：927-930．
[29] 任常，朱庆玲．牛蒡子的研究概况．中国民族医药杂志．2003(12)：36-39．
[30] 吴炳新，牛纪江，孙筱林，董立山．中药发酵制药技术[J]．山东中医杂志，2001，(3)．179-180
[31] 王兴红，李祺德，曹秋娥．微生物发酵中药应成为中药研究的新内容[J]． 中草药，2001，(3)．267-268
[32] 戴万生，赵荣华．发酵法对大黄葸醌类成分含量的影响[J]．云南中医中药杂志，2005，(1)．
[33] 赵广荣，向志军，元英进，郭治昕．中药现代化研究的生物技术．中草药，2004，481-484
[34] 钦传光，李世杰，丁焰，林向东．发酵工程在医药研究和生产中的应用．湖北工学院学报，2000，67-70．
[35] 曾庆文，曹军．中药发酵的研究进展[J]．齐齐哈尔医学院学报，2005，(5)．545-548．
[36] 张冬青，揭广川．现代发酵技术在提高中药药用效能方面的作用[J]．广东轻工职业技术学院学报，2005，(1)．34-38．
[37] 米靖宇，宋纯清．牛蒡子中木脂素类化合物的抗肿瘤及免疫活性(J)．时珍国医国药，2002，13(3)：168-169．
[38] 高阳，董雪，康廷国，等．牛蒡子苷元体外抗流感病毒活性[J)．中草药，2002，33(8)：724-726．
[39] 张民庆，龚惠明．抗肿瘤中药的临床应用．北京．人民卫生出版社，1998，9：90．
[40] 贺学林，章素云，陈以平，等．牛蒡子防治STZ糖尿病大鼠早期肾脏病变的实验研究1J2．浙江中医杂志，2003，02：88-90．
[41] Takasaki M, Konoshima T, Komatsu K, Tokuda H, et al. Anti tumor-promoting activity of lignans from the aerial part of Saus surea medusa[J].CancerLett, 2000, 158(1): 53-9.
[42] Hirose M, Yamaguchi T, Lin C, et al. Effects of arctiin on PhIP induced mammary, colon and pancreatic carcinogenesis in female Sprague-Dawley rats and MeIQx-induced hepatocarc inogenesisi in male F344 rats[J].Cancer Lett, 2000, 155(1):79-88.
[43] Kato T, Hirose M, Takahashi S, et al. Effects of the lignan, arctiin, on 17-betaethinylestradiol promotion of preneoplastic liver cell loci development in rats [J].AnticancerRes, 1998, 18(2A):1053-7.
[44] Moritani S, Nomura M, TakedaY, et al. Cytotoxic components of bardanae fructus (goboshi) [J]. Biol Pharm Bull, 1996 Nov, 19 (11): 1515-7.
[45] Hirano T, Gotoh M, Oka K Natural flavonoids and lignans are potent cytostatic agents against human leukemic HL-60 cells [J] LifeSci,1994,55(13): 1061-9.
[46] Cho JY , Kim AR , Yoo ES , et al. Immunomodulatory effect arctigenin, a lignan compound, on tumournecrosis factor-alp and nitric oxide production, and lymphocyte proliferation [J] PharmPharmacol,1999Nov, 51(11):1267-73.
[47] UmeharaK, NakamuraM, MiyaseT, et al. Studies on differenation inducers. VI. Lignan derivatives from Arctium fructus. (2) [J].Chem Pharm Bull(Tokyo), 1996, 44(12):2300-4.
[48] VlietinckAJ, DeBruyneT, ApersS, etal. Plant-derive dleading compounds for chemotherapy of humanism munode ficiencyvirus(HIV) infection[J].PlantaMed, 1998, 64(2):97-109.
[49] Eich E, Pertz H, Kaloga M, etal. (-)-Arctigenin as alead linte-grase[J]. JMedChem, 1996, 39(1):86-95
[50] ZSchroderHC, MerzH, SteffenR, etal. Differen tialinvi troanti-HIV ac tivityo fnatural lignans[J]. Naturforsch[C], 1990 Nov-Dec, 45(11-12):1215-21.
[1] 南北朝·《名医别录》卷二，北京：人民卫生出版社，1986．
[2] 南北朗·雷致．《雷公饱炙论》卷中．1932年成都益生堂刻本．
[3] 唐·孙思超《千金翼方》卷二．北京：人民卫生出版社，1955．
[4] 元·忽思慧．《饮膳正要》卷二．涵芬楼据明景泰刻本影印四部丛刊本．
[5] 宋·苏颂．《本草图经》卷七．安徽：安徽科学技术出版社，1994．
[6] 明·社文燮《药鉴》卷二．上海：上海人民出版社，1975
[7] 明·李中梓．《本草征要》》卷二．清光绪善成堂刻医宗必读本．
[8] 清·汪昂．《本草备要》草部．海：上海广益书局石印本．1935．
[9] 清·叶挂．《本草经解》卷二．清光绪十四年戊子潘wei刻本．
[10] 宋·王怀隐．《太平圣惠方》卷九十五．北京：人民卫生出版社，1958．
[11] 宋·张锐．《鸡峰晋济方》卷八．道光八年汪士钟覆南宋刻本艺荟书台藏版．
[12] 明·胡滢．《卫生易简方》卷四．北京：人民卫生出版社，1984．
[13] 明·刘文泰．《本草品汇精要》卷之十．北京：人民卫生出版社，1982．
[14] 国家药典委员会编．中华人民共和国药典．一部．北京：化学工业出版社，2000，24．
[15] 吴兰成主编．中国中医药学主题词表．北京：中医古籍出版社，1996，290．
[16] 雷敦．雷公炮炙论．上海：上海中医药大学出版社，1986．65．
[17] 孟诜．食疗本草．上海：大东书局，1934．10．
[18] 王怀隐．重修证和经史证类备用本草．北京：人民卫生出版社，1957．218．
[19] 唐慎微．博济方．北京：商务印书馆，1959．273．
[20] 张子和．儒门事亲．沈阳：辽宁科学技术出版社，1999．123．
[21] 方贤．奇效良方．北京：商务印书馆，1959．39．
[22] 朱棣．普济方．北京：人民卫生出版社，1959．370．
[23] 王肯堂．证治准绳．上海：中国中医出版社，1997．662．
[24] 张景岳．景岳全书．上海：上海科技出版社，1964．923．
[25] 王昂．本草备要．沈阳：辽宁科技出版社，1999．35．
[26] 江苏新医学院．中药大辞典．上海：上海科技出版社，1977．430．
[27] 李正民．牛蒡子引起过敏反应报告．实用中医内科杂志，1994，8(3)：37．
[28] 张涛．牛蒡子不同炮制品中牛蒡苷含量的HPLC测定．中草药，2004，35(4)：406．
[29] 高阳，康廷国．牛蒡苷元体外抗流感病毒活性．中草药，2002，33(8)：724．
[30] 徐朝晖．中药牛蒡子质量标准规范化研究[D]．辽宁中医学院，2000．6-16．
[31] 毕葳．牛蒡子虎杖化学成分及质量标准研究[D]．2005．19-33．
[32] 颜正华．中药学[M]．北京：人民卫生出版社，1995，89．
[33] 李家实，贾敏如，等．中药鉴定学[M]．上海：上海科技出版社，1996，5：453-454．
[34] 王·额尔敦，包景荣，安·巴特尔，等．希伯)乌布斯．内蒙古蒙药材标准[M]．1987，377．
[35] 中国医学科学院药物研究所．中药志(Ⅲ)1M2．北京：人民卫生出版社，1984．23．
[36] Takasaki M, Konoshima T, Komatsu K, Tokuda H, et al. Anti tumor-promoting activity of lignans from the aerial part of Saus sureamedusa[J].CancerLett, 2000, 158(1): 53-9.
[37] Hirose M, Yamaguchi T, Lin C, et al. Effects of arctiin on PhIP induced mammary, colon and pancreatic carcinogenesis in female Sprague-Dawley rats and MeIQx-induced hepatocarc inogenesisi in male F344 rats[J].Cancer Lett, 2000, 155(1):79-88.
[38] Kato T, Hirose M, Takahashi S, et al. Effects of the lignan, arc tiin, on 17-betaethinylestradiol promotion of preneoplastic liver cell foci development in rats [J].AnticancerRes, 1998, 18(2A): 1053-7.
[39] Moritani S, Nomura M, Takeda Y, et al. Cytotoxic components of bardanae fructus (goboshi) [J]. Biol Pharm Bull, 1996 Nov, 19 (11):1515-7.
[40] Hirano T, Gotoh M, Oka K Natural flavonoids and lignans are potentcytostatic agents against human leukemic HL-60 cells[J] LifeSci, 1994, 55(13):1061-9.
[41] Cho JY , Kim AR , Yoo ES, et al. Immunomodulatory effect arctigenin, a lignan compound, on tumoumecrosis factor-alp and nitric oxide production, and lymphocyte proliferation [J] PharmPharrnacol, 1999Nov, 51(11):1267-73.
[42] Umehara K, Nakamura M, Miyase T, et al. Studies on differenation inducers. Ⅵ. Lignan derivatives from Arctium fructus. (2) [J].Chem Pharm Bull(Tokyo), 1996, 44(12):2300-4.
[43] VlietinckAJ, DeBruyneT, ApersS, etal. Plant-derive dleading compounds for chemotherapy of human immunode ficiencyvirus(HIV)infection[J]. Planta Med, 1998, 64(2): 97-109.
[44] Eich E, Pertz H, Kaloga M, etal. (-)-Arctigenin as aleadstruc-turefor inhibitors of human immunodeficiencyvirus type- 1 inte-grase[J]. JMedChem, 1996, 39(1): 86-95.
[45] ZSchroder HC, Merz H, Steffen R, etal. Different ialinvitroan-ti-HIV activity of natural lignans[J]. Naturforsch[C], 1990 Nov-Dec, 45(11-12): 1215-21.
[46] Nose M, Fujimoto T, Takeda T, etal. Structural transformation of lignan compounds inratgastrointestinaltract[J]. Planta Med, 1992, 58(6): 520-3.
[47] 米靖宇，宋纯清．牛蒡子中木脂素类化合物的抗肿瘤及免疫活性[J]．时珍国医国药，2002，13(3)：168-169．
[48] 贺学林，章素云，陈以平，等．牛蒡子防治STZ糖尿病大鼠早期肾脏病变的实验研究[J]．浙江中医杂志，2003，02：88-90．
[49] 陈铁宏，黄迪．牛蒡子对Epstein-Barr病毒抗表达的抑制作用[J]．中华实验和临床病毒学杂志，1994，8(4)：323-326．
[50] 韩晓平．牛蒡子治疗椎体结核[J]．中医杂志，1997，38(12)：709-710．
[51] 薛伟先，程术芹．牛蒡子临床应用[J]．时珍国医国药，1999，10(10)：784．
[52] 李晓三，朱树宽，牛效清，等．专题笔谈牛蒡子[J]．中医杂志，1997，11：645-647．
[53] 牛效清．牛蒡子通鼻窍有殊功[J]．中医杂志，1997，38(11)：645．
[54] 陈智远．牛蒡子擅通便[J]．中医杂志，1997，38(12)：710-711．
[55] 姜辉，王柱林．牛蒡子治疗扁平疣[J]．四川中医，1999，09：35-36．