地龙注射液的临床前研究
|
摘要
本研究以广地龙为原料,采用水提醇沉的方法提取其有效成分后,加入适当比例的辅料,成功研制出地龙注射液。对该制剂的安全性、药理作用及质量标准进行了研究,同时考察了它的稳定性。地龙注射液在光加速条件下放置10天;相对湿度75±5%,40±2℃条件下放置6个月;室温条件下放置12个月,样品定期考察,结果表明各项考察指标的变化均在允许范围内,次黄嘌呤含量的变化范围符合该制剂质量标准的要求;安全性评价结果表明,此药无毒副作用,刺激性少;药效实验结果表明此药具有较好的增强机体免疫力和减轻喘息症状作用以及一定的解热作用。本文研制的地龙注射液,稳定性好,安全性高,药效明显,该制剂的研制为我国兽医临床更好地利用地龙提供了一种新的制剂。
Earthworm had been used for thousands of years as an animal medicinal substance. This injection used aqua pro injectione to extract the Earthworm active components and alcohol to remove useless elements, adding appreciable proportion adjuvant by its pharmacological properties. The way we used is simple, convenience in clinically. We also studied its stability, safety and effectiveness.
Stable life prediction for earthworm injections was carried out by permanent stability test and the content of hypoxanthine was detected by HPLC-UV. The HPLC equipped with a constant-flow pump was used, together with a variable-wave-length UV detector operated at 254 nm. The separation was performed on C18(5μm, 4.6mm×250mm I.D, Agilent)with water-methanol-tetrahydrofuran(100:0.12:0.04,v/v/v)as the mobile phase at a flow-rate of 0.5mL·min-1 at room temperature, and a 10μL sample was injected into the HPLC system .
According to“the technological specification of stability test for veterinary drug (trial performance)”, the thermal stress tests (6 months, according to Jees-Davis method), light accelerater tests and long-term stability tests of earthworm injections were carried out. After the samples had been kept under ambient condition, illumination (4500±500Lx) and temperature (25±2℃) for 10 days, relative humidity (75±5%) and temperature (40±2℃) for 6 months, relative humidity (60±5%) for 12 months, appearance character, hypoxanthine content and pH were investigated. At the end of the test, except for color, all programs such as pellucidity, pH and decomposed product had no significant change; the hypoxanthine content of the preparation is consistented with the quality standard. The experimental results indicated that the preparation had good stability. We suggest that the period of validity about the injection could be temporarily determined at 2 years at room temperature.
Drench by mouth and inject by abdominal cavity to mice and local stimulus to rabbits tests are used to evaluate earthworm injection’s safety. The dosage and concentration we used are the maximum for each administration way. The experimental results indicated that the earthworm injection hardly have toxic action and side effect.
We viewed its therapeutic action with three tests, I.e.relieve asthma and fever test and immunity enhancement test. The asthma model are caused by histamine phosphate- acetylcholine chloride (1:1); the high fever model are finished by injection Staphylococcus aureus 29213(1×109/mL) into rats. Earthworm injection was gived to guinea pigs which had asthma and rats which had a high fever. E-rosette test andα-HAc naphtalin carboxylesterase test are used to detect the earthworm injection whether raise nonspecific immunity. The experimental results indicated that earthworm injection has a good relief of asthma and fever and highly enhances nonspecific immunity.
Plate chromatography and HPLC are used to control earthworm injection’s quality. The quality controls are finished by plate chromatography to Ala and Val and by HPLC to hypoxanthine. The experimental results indicated that it is totally feasible.
In conclusion, the earthworm injections have good stability, high bioavaibility. The therapeutic effect of relieve asthma and fever and enhancement of immunity are evident. Its successful development can provide a new formulation for veterinary clinical use of Earthworm.
Earthworm had been used for thousands of years as an animal medicinal substance. This injection used aqua pro injectione to extract the Earthworm active components and alcohol to remove useless elements, adding appreciable proportion adjuvant by its pharmacological properties. The way we used is simple, convenience in clinically. We also studied its stability, safety and effectiveness.
Stable life prediction for earthworm injections was carried out by permanent stability test and the content of hypoxanthine was detected by HPLC-UV. The HPLC equipped with a constant-flow pump was used, together with a variable-wave-length UV detector operated at 254 nm. The separation was performed on C18(5μm, 4.6mm×250mm I.D, Agilent)with water-methanol-tetrahydrofuran(100:0.12:0.04,v/v/v)as the mobile phase at a flow-rate of 0.5mL·min-1 at room temperature, and a 10μL sample was injected into the HPLC system .
According to“the technological specification of stability test for veterinary drug (trial performance)”, the thermal stress tests (6 months, according to Jees-Davis method), light accelerater tests and long-term stability tests of earthworm injections were carried out. After the samples had been kept under ambient condition, illumination (4500±500Lx) and temperature (25±2℃) for 10 days, relative humidity (75±5%) and temperature (40±2℃) for 6 months, relative humidity (60±5%) for 12 months, appearance character, hypoxanthine content and pH were investigated. At the end of the test, except for color, all programs such as pellucidity, pH and decomposed product had no significant change; the hypoxanthine content of the preparation is consistented with the quality standard. The experimental results indicated that the preparation had good stability. We suggest that the period of validity about the injection could be temporarily determined at 2 years at room temperature.
Drench by mouth and inject by abdominal cavity to mice and local stimulus to rabbits tests are used to evaluate earthworm injection’s safety. The dosage and concentration we used are the maximum for each administration way. The experimental results indicated that the earthworm injection hardly have toxic action and side effect.
We viewed its therapeutic action with three tests, I.e.relieve asthma and fever test and immunity enhancement test. The asthma model are caused by histamine phosphate- acetylcholine chloride (1:1); the high fever model are finished by injection Staphylococcus aureus 29213(1×109/mL) into rats. Earthworm injection was gived to guinea pigs which had asthma and rats which had a high fever. E-rosette test andα-HAc naphtalin carboxylesterase test are used to detect the earthworm injection whether raise nonspecific immunity. The experimental results indicated that earthworm injection has a good relief of asthma and fever and highly enhances nonspecific immunity.
Plate chromatography and HPLC are used to control earthworm injection’s quality. The quality controls are finished by plate chromatography to Ala and Val and by HPLC to hypoxanthine. The experimental results indicated that it is totally feasible.
In conclusion, the earthworm injections have good stability, high bioavaibility. The therapeutic effect of relieve asthma and fever and enhancement of immunity are evident. Its successful development can provide a new formulation for veterinary clinical use of Earthworm.
引文
[1] 吴普.神农本草经.卷三.北京:人民卫生出版社,1963:123
[2] 李时珍.本草纲目.下册.北京:人民卫生出版社,1982:2353
[3] 尚志钧辑校.名医别录.北京:人民卫生出版社,1986:324
[4] 唐慎微.重修改政和经史证类备用本草.北京:人民卫生出版社,1957:445
[5] 刘文泰.本草品汇精要.卷三十一.北京:人民卫生出版社,1982:742
[6] 苏颁.图经本草.福州:福建科学出版社:1988:463
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.化学工业出版社,2005:80
[8] 龙艳华.地龙的化学成分及药理研究概况.数理医药学杂志,2005,8(4):379～380
[9] 张绍章,兆素臣.蚯蚓提取物的物理症状和化学成分的检测.第四军医大学学报,1994,15(2):134～135
[10] 葛勤,张恩华,刘同华,等.地龙的化学成分及制剂质量研究概况.中国药业,2004,13(3):69～71
[11] 赵春桂.“太平 2 号”蚯蚓化学成分初探.中药通报,1986,11(5):40
[12] 杨得坡,王发松,彭劲甫,等.参环毛蚓脂类挥发性成分分析.中药材,2000,23(1):31
[13] 陈敬炳.通俗环毛蚓的化学成分研究.中成药,1997,19(5):35
[14] 彭劲甫,杨得坡,黄也亮,等.地龙的药理作用与保健功能.中药材,2000,23(2):114～117
[15] 李振荣.广地龙的生药鉴别.河北医学院学报,1985,6(3):136
[16] 宋春梅,李永进.蚯蚓营养成分分析.空军医高专学报,1999,21(1):21～22
[17] 王宗伟,梁秀文,范兴亚.蚯蚓生物工程技术研究.中草药,2000,31(5):386～387
[18] 林建海,刘宝路.减轻喘息症状中药对致敏性哮喘豚鼠气道的作用.上海医学,1996,19(11):638
[19] 张理平,李如辉.地龙药理研究与临床应用的概况.福建中医药,1990, 21(6):52
[20] 陈可夫,王前新,朱德艳.蚯蚓素 9201 减轻喘息症状的实验研究和临床试验.荆门职业技术学院学报,2002,14(1):10～12
[21] 李勇文.地龙的研究进展.广西药学,2004,26(5):699～701
[22] 李淑兰,谢桂芹,弭晓菊,等.地龙降压作用的研究.中医药信息,1995,(3):221
[23] 程能能,马越鸣.地龙中类血小板活化因子物质.中国中医药杂志,1993,18(12):747
[24] 黄德胜,陈之灿.微循环障碍型缺血性心脏病.中国微循环杂志,1997,1(1):80
[25] 段涛,毕奴玛,黄敏利,等.地龙提取物治疗胎崽宫内发育迟缓的实验研究.现代妇产科进展,1996,13(3):115
[26] 任淼,李聪爽.地龙退热口服液的制备及药理研究.医学理论与实践,1996,9(7):334
[27] 黄志力,桂常青,刘锡玖,等.生石膏及地龙对小青龙汤解热的增强作用.中药药理与临床,1997,13(5):12～15
[28] 陈斌艳,张雷,王竟,等.地龙粉针对大鼠小鼠与兔的解热镇痛作用.上海医科大学学报,1996,13(3):115
[29] 张国平,钱睿哲,杨诗春,等.蚓激酶抑制血小板聚集的实验观察.中华医学杂志,1998,78(5):394
[30] 杨明,马治中,和岚,等.益气活血治法实验研究.中药药理与临床,1995,11(1):14～16
[31] 陈学东,田道法,刘红萍,等.地龙煎液对人出血、凝血时间的影响.湖南中学院学报,2003,23(2):10～11
[32] 马培志,邵凤民.蚯蚓提取物对原发性肾病综合症患者凝血系统的影响.中国中西医结合肾病杂志,2002,3(9):528～529
[33] 丁文明,李春兰,丁伟,等.蚓激酶对老年冠性病血液流变异常及甲微循环障碍的近期疗效.中国微循环,1999,3(3):159
[34] 刘协,李小宁,沈逵,等.蚯蚓提取物对血栓形成和血小板聚集作用的实验研究.江苏预防医学,1997,8(2):6
[35] 李永吉.地龙对家兔血栓形成的影响.中医药学报,1998,(2):46
[36] 杨树东.蚯蚓纤溶活性成分的抗凝及溶血栓作用.心肺血管病杂志,1997,16(3):228～230
[37]马恩龙,李艳春,曹颖林,等.溶栓 1 号抗血小板聚集及抗血栓形成作用.沈阳药科大学学报,2001,18(5):370～372
[38] 段平,胡淑丽,曾耀辉.蚯蚓溶栓酶对大鼠凝血及纤溶指标的影响.时珍国药研究,,1997,8 (1):14
[39]杨嘉树,李令媛,茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究.中国生物化学与分子生物学报,1998,14(2):164～169
[40] 金莉蓉,徐桂芝,张国平,等.蚓激酶(普恩复) 治疗脑梗塞时抗凝和纤溶变化的临床研究.中国微循环,1998,2(3):157
[41] 胡文军,傅庭治.一种新型蚯蚓纤溶酶的研究.中药材,1997,20(2):78～81
[42] 马翰章,曾国玲.蚓激酶治疗急性脑梗塞的疗效与机理.现代临床医学生物工程学杂志,1998,4(2):94
[43] 王雪英,伍蛲斌,徐凤彩.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶血性质的研究.药学物生物技术,2003,10(2):88～91
[44] 朱长连,王小阳,张国桢,等.蚯蚓提取物的纤溶和抗凝作用.河南医科大学学报,1993,28(1):15
[45] 姜东胜,刘复强,赵相印,等.赤子爱胜蚯蚓纤溶酶对大鼠血小板聚集性的药理作用观察.首都医学院学报,1994,15(4):291～294
[46] 韩彩芝,余素清,李秀芳,等.蚯蚓提取液纤溶及抗凝作用的实验研究.中国生化药物杂志,1997,18(5):252～254
[47] 金莉蓉.脑梗死的凝血纤溶状态和蚓激酶的应用.中国新药与临床杂志,1999,18(1):40～58
[48] 何执中,郭怀芳,唐宁,等.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究.中国生化杂志,2001,22(6):284～286
[49] 赵晓瑜,静天玉.蚯蚓纤溶酶的成分分析.中国生物化学与分子生物学报 1998,14(4):407～412
[50] 沈谦受.地龙对实验性心律失常作用的研究.湖南医药杂志,1982,(6):68～70
[51] 苏云明,赵雪瑛,宋春燕,等.通脑舒心液药理作用研究.中成药,1997,19(5):29～30
[52] 韩苇.地龙胶囊(912) 透析组分对 MGc803 胃癌细胞 DNA 合成的抑制作用.中国肿瘤临床,1991,(3):152～153
[53] 徐德门.用动态观察方法判断地龙胶囊(912)与放疗综合治疗食管癌的近期效果.中国肿瘤临床,1991,(3):149
[54] 林少琴,余萍,兰端芳,等.蚯蚓抗肿瘤成分的研究.海峡药学,2000,12(3):59～61
[55] 韩苇.蚯蚓提取物透析组分对 MG803 胃癌细胞 DNA 合成的抑制作用.第四军医大学学报,1991,12:302
[56] 张绍章.中药地龙胶囊对食管癌和肺癌的辐射增效作用.第四军医大学学报,1992,13(3):165～168
[57] 张发科.912 对 Hep22 癌细胞的抑制作用.第四军医大学学报,1987,8(6):224
[58] 王克为,张绍章,李玉蓉.912 蚯蚓提取物对小鼠移植瘤的抑制作用.第四军医大学学报,1986,7(2):85～88
[59] 陈洪.“地龙2 号”抗肿瘤作用的初步观察.临床肿瘤学杂志,2001,6(4):349～350
[60] 胡云龙,徐梅,张双全,等.蚯蚓提取物对小鼠肿瘤动物模型的研究.生物技术,2002,12(6):9～10
[61] 张健.“912”对荷瘤小鼠免疫功能的调节及抑制作用.中华微生物和免疫杂志,1991,11:281
[62] 张绍章.蚯蚓提取物对小鼠脾脏抗形成细胞的影响.第四军医大学学报,1993,14(5):350～352
[63] 智刚,朱敏生.912 抗肿瘤作用机理的初探.第四军医大学学报,1988,9(3):171～172
[64] 林少琴,皱开煌.蚯蚓 QY-I 对荷瘤小鼠免疫功能及抗氧化酶的影响.海峡药学,2002,14(1):10～12
[65] 陈飞,刘艳玲,吴红艳,等.蚯蚓有效成分研究进展.微生物学杂志,2000,20(1):48～50
[66] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.蚯蚓体内杀精物质的实验研究.陕西中医,1996,17(5):234
[67] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.地龙粉治疗男性不育症 30 例.陕西中医,1996,17(10):438
[68] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.蚯蚓提取物的杀精子作用及其毒理研究.陕西中医,1997,18(3):138
[69] 郭宝珠,张复夏,王惠云,等.蚯蚓提取物体外杀精及抗阴道毛滴虫作用的实验研究.中医药研究,1997,13(4):39
[70] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.蚯蚓提取物及其制剂对精子穿透无透明带仓鼠卵的影响.陕西中医,1998,19(8):379
[71] 张凤春,陈云峰,苏彦珍,等.地龙促进大白兔背部创伤伤口收缩的实验研究.中国中药杂志,1998,23(9):560
[72] 王沛,李东冰,赵雅茹,等.地龙组分溶液促进痔术后创面愈合的临床研究.中国肛肠病杂志,1999,19(11):3
[73] 张凤春,陈云峰,苏颜珍,等.地龙对新西兰大白鼠背部创伤愈合作用的机制研究.中国药学杂志,1999,34(1):93
[74] 张凤春,陈云峰,苏彦珍,等.地龙对巨噬细胞免疫活性的增强作用.中国药学杂志,1998,33(9):532
[75] 鲍世铨,曾耀辉.蚯蚓在医药保健方面的综合利用研究.中国生化药物杂志,1994,15:23
[76] 唐小云,梁再斌,扬丽群,等.地龙肽对小鼠免疫功能的影响.中国医科大学学报,2003,32(1):21～23
[77] 吴朝晖,张国平,张明,等.蚯蚓制剂(普恩复) 对小鼠游泳时间和丙二醛影响的初步研究.中国微循环,1998,2(2):82～84
[78] 黎莉,甘明,黎祥胜,等.地龙类药材药理作用比较.中药材,1997,20( 7):361～363
[79] 孙前林.地龙能通乳.浙江中医杂志,1995,30(12):562
[80] 陈可夫,石银珍,万前程,等.蚯蚓素安全性毒理学评价试验.荆门职业技术学院学报,2000,15(6):57～64
[81] 刘艳玲,孟宪志,李莉.两种采收加工蚯蚓提取液中活性成分的比较.辽宁中医杂志,2002,27(8):370
[82] 耿秀芳,李桂枝,刘佃金.地龙低温水浸液对 ACE 活性影响.中医药信息,1997,14(6):38
[83] 邵凤民,朱长连,程银桢,等.蚯蚓提取物治疗慢性肾小球肾炎的研究. 河南医学研究,1996,5(2):140～141
[84] 林少琴,余萍,兰瑞芳.蚯蚓抗肿瘤成分的研究.海峡药学,2000,12(3):59～61
[85] 李东冰,王沛,曾耀辉.地龙组分促进痔术后创面愈合的临床和实验研究.中国中西医结合杂志,2000,20(12):899～901
[86] 杨开满,蒋改苏.地龙治疗精神分裂症 220 例.辽宁中医杂志,1996,23(12):567
[87] 黄安如.地龙四味丸治狂证 14 例,1998,29(1):51
[88] 杜登圣,宋月荣,徐倩,等.蚯激酶对糖尿病周围神经病变的治疗作用.中国临床药理学与治疗学杂志,1998,3(2):147
[89] 王正春.蚯激酶的临床作用.中国微循环杂志,1998,2(2):126
[90] 郭丰涛,陈国根,赵可明,等.地龙液的临床应用及药理初步观察.中西医结合杂志,1998,8(8):400
[91] 刘荣,金萍.蚯激酶胶囊治疗缺血性脑血管病 94 例临床观察.当代医师杂志,1998,3(8):51
[92] 陈遗发,刘来顺.蚯激酶治疗老年性脑血栓形成 55 例临床分析.新医学,1998,29(4):196
[93] 贺丰杰.肤康宁治疗滴虫性阴道炎 115 例.中西医结合杂志,1990,(10):633
[94] 李志华,吕桂兰,刘淑芳.鲜地龙外敷治疗感染性褥疮.山东中医杂志,1997,16(6):261
[95] 周振祥.内服外敷治疗流行性腮腺炎验方.中医外治杂志,1997,(1):48
[96] 李凤海.地龙侧柏叶外敷治疗痄腮.中国民间疗法,1998,(2):28
[97] 何少增.地龙水治疗慢性化脓性中耳炎.河南中医,1996,16(4):250
[98] 农业部文件.关于发布兽药稳定性试验技术规范(试行)的通知.农牧发[2005] 13 号
[99] 许真之,李昭喧.新药稳定性试验方法简介.中国药学杂志,1996,3(31):172～173
[100] 胡馨,王倩.HPLC 法测定沪地龙中次黄嘌呤.中草药,2005,36(6):928～929
[101] 赵康虎,刘元瑞.利用电子表格 Excel2000 预测药物有效期.中国现代应用药学杂志,2001,18(6):478～479
[102] 王世弱,王兴龙,韩文愈.现代动物免疫学.吉林科学技术出版社,2001,519
[103] 彭拓华,曾凡,钟红兰,等.双波长薄层扫描法测定地龙注射液中缬氨酸的含量.中成药,2003,25(6):510～511
[2] 李时珍.本草纲目.下册.北京:人民卫生出版社,1982:2353
[3] 尚志钧辑校.名医别录.北京:人民卫生出版社,1986:324
[4] 唐慎微.重修改政和经史证类备用本草.北京:人民卫生出版社,1957:445
[5] 刘文泰.本草品汇精要.卷三十一.北京:人民卫生出版社,1982:742
[6] 苏颁.图经本草.福州:福建科学出版社:1988:463
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.化学工业出版社,2005:80
[8] 龙艳华.地龙的化学成分及药理研究概况.数理医药学杂志,2005,8(4):379～380
[9] 张绍章,兆素臣.蚯蚓提取物的物理症状和化学成分的检测.第四军医大学学报,1994,15(2):134～135
[10] 葛勤,张恩华,刘同华,等.地龙的化学成分及制剂质量研究概况.中国药业,2004,13(3):69～71
[11] 赵春桂.“太平 2 号”蚯蚓化学成分初探.中药通报,1986,11(5):40
[12] 杨得坡,王发松,彭劲甫,等.参环毛蚓脂类挥发性成分分析.中药材,2000,23(1):31
[13] 陈敬炳.通俗环毛蚓的化学成分研究.中成药,1997,19(5):35
[14] 彭劲甫,杨得坡,黄也亮,等.地龙的药理作用与保健功能.中药材,2000,23(2):114～117
[15] 李振荣.广地龙的生药鉴别.河北医学院学报,1985,6(3):136
[16] 宋春梅,李永进.蚯蚓营养成分分析.空军医高专学报,1999,21(1):21～22
[17] 王宗伟,梁秀文,范兴亚.蚯蚓生物工程技术研究.中草药,2000,31(5):386～387
[18] 林建海,刘宝路.减轻喘息症状中药对致敏性哮喘豚鼠气道的作用.上海医学,1996,19(11):638
[19] 张理平,李如辉.地龙药理研究与临床应用的概况.福建中医药,1990, 21(6):52
[20] 陈可夫,王前新,朱德艳.蚯蚓素 9201 减轻喘息症状的实验研究和临床试验.荆门职业技术学院学报,2002,14(1):10～12
[21] 李勇文.地龙的研究进展.广西药学,2004,26(5):699～701
[22] 李淑兰,谢桂芹,弭晓菊,等.地龙降压作用的研究.中医药信息,1995,(3):221
[23] 程能能,马越鸣.地龙中类血小板活化因子物质.中国中医药杂志,1993,18(12):747
[24] 黄德胜,陈之灿.微循环障碍型缺血性心脏病.中国微循环杂志,1997,1(1):80
[25] 段涛,毕奴玛,黄敏利,等.地龙提取物治疗胎崽宫内发育迟缓的实验研究.现代妇产科进展,1996,13(3):115
[26] 任淼,李聪爽.地龙退热口服液的制备及药理研究.医学理论与实践,1996,9(7):334
[27] 黄志力,桂常青,刘锡玖,等.生石膏及地龙对小青龙汤解热的增强作用.中药药理与临床,1997,13(5):12～15
[28] 陈斌艳,张雷,王竟,等.地龙粉针对大鼠小鼠与兔的解热镇痛作用.上海医科大学学报,1996,13(3):115
[29] 张国平,钱睿哲,杨诗春,等.蚓激酶抑制血小板聚集的实验观察.中华医学杂志,1998,78(5):394
[30] 杨明,马治中,和岚,等.益气活血治法实验研究.中药药理与临床,1995,11(1):14～16
[31] 陈学东,田道法,刘红萍,等.地龙煎液对人出血、凝血时间的影响.湖南中学院学报,2003,23(2):10～11
[32] 马培志,邵凤民.蚯蚓提取物对原发性肾病综合症患者凝血系统的影响.中国中西医结合肾病杂志,2002,3(9):528～529
[33] 丁文明,李春兰,丁伟,等.蚓激酶对老年冠性病血液流变异常及甲微循环障碍的近期疗效.中国微循环,1999,3(3):159
[34] 刘协,李小宁,沈逵,等.蚯蚓提取物对血栓形成和血小板聚集作用的实验研究.江苏预防医学,1997,8(2):6
[35] 李永吉.地龙对家兔血栓形成的影响.中医药学报,1998,(2):46
[36] 杨树东.蚯蚓纤溶活性成分的抗凝及溶血栓作用.心肺血管病杂志,1997,16(3):228～230
[37]马恩龙,李艳春,曹颖林,等.溶栓 1 号抗血小板聚集及抗血栓形成作用.沈阳药科大学学报,2001,18(5):370～372
[38] 段平,胡淑丽,曾耀辉.蚯蚓溶栓酶对大鼠凝血及纤溶指标的影响.时珍国药研究,,1997,8 (1):14
[39]杨嘉树,李令媛,茹炳根.蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究.中国生物化学与分子生物学报,1998,14(2):164～169
[40] 金莉蓉,徐桂芝,张国平,等.蚓激酶(普恩复) 治疗脑梗塞时抗凝和纤溶变化的临床研究.中国微循环,1998,2(3):157
[41] 胡文军,傅庭治.一种新型蚯蚓纤溶酶的研究.中药材,1997,20(2):78～81
[42] 马翰章,曾国玲.蚓激酶治疗急性脑梗塞的疗效与机理.现代临床医学生物工程学杂志,1998,4(2):94
[43] 王雪英,伍蛲斌,徐凤彩.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及其部分酶血性质的研究.药学物生物技术,2003,10(2):88～91
[44] 朱长连,王小阳,张国桢,等.蚯蚓提取物的纤溶和抗凝作用.河南医科大学学报,1993,28(1):15
[45] 姜东胜,刘复强,赵相印,等.赤子爱胜蚯蚓纤溶酶对大鼠血小板聚集性的药理作用观察.首都医学院学报,1994,15(4):291～294
[46] 韩彩芝,余素清,李秀芳,等.蚯蚓提取液纤溶及抗凝作用的实验研究.中国生化药物杂志,1997,18(5):252～254
[47] 金莉蓉.脑梗死的凝血纤溶状态和蚓激酶的应用.中国新药与临床杂志,1999,18(1):40～58
[48] 何执中,郭怀芳,唐宁,等.蚯蚓纤溶酶的分离纯化及抗栓活性研究.中国生化杂志,2001,22(6):284～286
[49] 赵晓瑜,静天玉.蚯蚓纤溶酶的成分分析.中国生物化学与分子生物学报 1998,14(4):407～412
[50] 沈谦受.地龙对实验性心律失常作用的研究.湖南医药杂志,1982,(6):68～70
[51] 苏云明,赵雪瑛,宋春燕,等.通脑舒心液药理作用研究.中成药,1997,19(5):29～30
[52] 韩苇.地龙胶囊(912) 透析组分对 MGc803 胃癌细胞 DNA 合成的抑制作用.中国肿瘤临床,1991,(3):152～153
[53] 徐德门.用动态观察方法判断地龙胶囊(912)与放疗综合治疗食管癌的近期效果.中国肿瘤临床,1991,(3):149
[54] 林少琴,余萍,兰端芳,等.蚯蚓抗肿瘤成分的研究.海峡药学,2000,12(3):59～61
[55] 韩苇.蚯蚓提取物透析组分对 MG803 胃癌细胞 DNA 合成的抑制作用.第四军医大学学报,1991,12:302
[56] 张绍章.中药地龙胶囊对食管癌和肺癌的辐射增效作用.第四军医大学学报,1992,13(3):165～168
[57] 张发科.912 对 Hep22 癌细胞的抑制作用.第四军医大学学报,1987,8(6):224
[58] 王克为,张绍章,李玉蓉.912 蚯蚓提取物对小鼠移植瘤的抑制作用.第四军医大学学报,1986,7(2):85～88
[59] 陈洪.“地龙2 号”抗肿瘤作用的初步观察.临床肿瘤学杂志,2001,6(4):349～350
[60] 胡云龙,徐梅,张双全,等.蚯蚓提取物对小鼠肿瘤动物模型的研究.生物技术,2002,12(6):9～10
[61] 张健.“912”对荷瘤小鼠免疫功能的调节及抑制作用.中华微生物和免疫杂志,1991,11:281
[62] 张绍章.蚯蚓提取物对小鼠脾脏抗形成细胞的影响.第四军医大学学报,1993,14(5):350～352
[63] 智刚,朱敏生.912 抗肿瘤作用机理的初探.第四军医大学学报,1988,9(3):171～172
[64] 林少琴,皱开煌.蚯蚓 QY-I 对荷瘤小鼠免疫功能及抗氧化酶的影响.海峡药学,2002,14(1):10～12
[65] 陈飞,刘艳玲,吴红艳,等.蚯蚓有效成分研究进展.微生物学杂志,2000,20(1):48～50
[66] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.蚯蚓体内杀精物质的实验研究.陕西中医,1996,17(5):234
[67] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.地龙粉治疗男性不育症 30 例.陕西中医,1996,17(10):438
[68] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.蚯蚓提取物的杀精子作用及其毒理研究.陕西中医,1997,18(3):138
[69] 郭宝珠,张复夏,王惠云,等.蚯蚓提取物体外杀精及抗阴道毛滴虫作用的实验研究.中医药研究,1997,13(4):39
[70] 张复夏,郭宝珠,王惠云,等.蚯蚓提取物及其制剂对精子穿透无透明带仓鼠卵的影响.陕西中医,1998,19(8):379
[71] 张凤春,陈云峰,苏彦珍,等.地龙促进大白兔背部创伤伤口收缩的实验研究.中国中药杂志,1998,23(9):560
[72] 王沛,李东冰,赵雅茹,等.地龙组分溶液促进痔术后创面愈合的临床研究.中国肛肠病杂志,1999,19(11):3
[73] 张凤春,陈云峰,苏颜珍,等.地龙对新西兰大白鼠背部创伤愈合作用的机制研究.中国药学杂志,1999,34(1):93
[74] 张凤春,陈云峰,苏彦珍,等.地龙对巨噬细胞免疫活性的增强作用.中国药学杂志,1998,33(9):532
[75] 鲍世铨,曾耀辉.蚯蚓在医药保健方面的综合利用研究.中国生化药物杂志,1994,15:23
[76] 唐小云,梁再斌,扬丽群,等.地龙肽对小鼠免疫功能的影响.中国医科大学学报,2003,32(1):21～23
[77] 吴朝晖,张国平,张明,等.蚯蚓制剂(普恩复) 对小鼠游泳时间和丙二醛影响的初步研究.中国微循环,1998,2(2):82～84
[78] 黎莉,甘明,黎祥胜,等.地龙类药材药理作用比较.中药材,1997,20( 7):361～363
[79] 孙前林.地龙能通乳.浙江中医杂志,1995,30(12):562
[80] 陈可夫,石银珍,万前程,等.蚯蚓素安全性毒理学评价试验.荆门职业技术学院学报,2000,15(6):57～64
[81] 刘艳玲,孟宪志,李莉.两种采收加工蚯蚓提取液中活性成分的比较.辽宁中医杂志,2002,27(8):370
[82] 耿秀芳,李桂枝,刘佃金.地龙低温水浸液对 ACE 活性影响.中医药信息,1997,14(6):38
[83] 邵凤民,朱长连,程银桢,等.蚯蚓提取物治疗慢性肾小球肾炎的研究. 河南医学研究,1996,5(2):140～141
[84] 林少琴,余萍,兰瑞芳.蚯蚓抗肿瘤成分的研究.海峡药学,2000,12(3):59～61
[85] 李东冰,王沛,曾耀辉.地龙组分促进痔术后创面愈合的临床和实验研究.中国中西医结合杂志,2000,20(12):899～901
[86] 杨开满,蒋改苏.地龙治疗精神分裂症 220 例.辽宁中医杂志,1996,23(12):567
[87] 黄安如.地龙四味丸治狂证 14 例,1998,29(1):51
[88] 杜登圣,宋月荣,徐倩,等.蚯激酶对糖尿病周围神经病变的治疗作用.中国临床药理学与治疗学杂志,1998,3(2):147
[89] 王正春.蚯激酶的临床作用.中国微循环杂志,1998,2(2):126
[90] 郭丰涛,陈国根,赵可明,等.地龙液的临床应用及药理初步观察.中西医结合杂志,1998,8(8):400
[91] 刘荣,金萍.蚯激酶胶囊治疗缺血性脑血管病 94 例临床观察.当代医师杂志,1998,3(8):51
[92] 陈遗发,刘来顺.蚯激酶治疗老年性脑血栓形成 55 例临床分析.新医学,1998,29(4):196
[93] 贺丰杰.肤康宁治疗滴虫性阴道炎 115 例.中西医结合杂志,1990,(10):633
[94] 李志华,吕桂兰,刘淑芳.鲜地龙外敷治疗感染性褥疮.山东中医杂志,1997,16(6):261
[95] 周振祥.内服外敷治疗流行性腮腺炎验方.中医外治杂志,1997,(1):48
[96] 李凤海.地龙侧柏叶外敷治疗痄腮.中国民间疗法,1998,(2):28
[97] 何少增.地龙水治疗慢性化脓性中耳炎.河南中医,1996,16(4):250
[98] 农业部文件.关于发布兽药稳定性试验技术规范(试行)的通知.农牧发[2005] 13 号
[99] 许真之,李昭喧.新药稳定性试验方法简介.中国药学杂志,1996,3(31):172～173
[100] 胡馨,王倩.HPLC 法测定沪地龙中次黄嘌呤.中草药,2005,36(6):928～929
[101] 赵康虎,刘元瑞.利用电子表格 Excel2000 预测药物有效期.中国现代应用药学杂志,2001,18(6):478～479
[102] 王世弱,王兴龙,韩文愈.现代动物免疫学.吉林科学技术出版社,2001,519
[103] 彭拓华,曾凡,钟红兰,等.双波长薄层扫描法测定地龙注射液中缬氨酸的含量.中成药,2003,25(6):510～511