山茱萸炮制机理研究
|
摘要
山茱萸炮制机理研究为科技部资助的“十五”攻关项目，旨在通过比较研究山茱萸炮制前后化学成分与药效学的变化，寻找炮制增效或改变药性的活性成分，围绕中药炮制的物质基础及药效学结果，阐明山茱萸炮制机理，为山茱萸饮片的质量标准与临床应用提供一定的理论依据。
本论文分四个部分从化学研究与药理研究两大方面对山茱萸炮制机理进行了探讨。
第一部分：文献研究，包括：山茱萸炮制的历史沿革、临床应用及现代化学与药理研究，为实验研究奠定坚实的文献基础。
第二部分：山茱萸生品与炮制品化学成分的比较研究，包括：
1．对山茱萸生品及炮制品的水提液和醇提液及各个萃取部位进行了HPLC-DAD和HPLC-ELSD图谱比较，结果表明山茱萸炮制产生5-羟甲基糠醛(5-HMF)且多种化学成分含量发生显著变化，其中没食子酸等物质含量增大，莫诺苷和马钱素等含量降低。HPLC图谱定性的反映了山茱萸各个萃取部位主要化学成分及生品与制品化学成分的差异。
2．建立了HPLC-DAD法同时测定了山茱萸生品与制品中5-羟甲基糠醛、没食子酸、莫诺苷、马钱素含量的方法，结果：没食子酸在30.9～309μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9995；5-HMF在25～250μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9998；莫诺苷在47.4～948μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9999；马钱素在14.6～292μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9992。平均加样回收率为：没食子酸为99.12％，RSD为1.68％；5-HMF为101.9％，RSD为2.11％；莫诺苷为100.2％，RSD为2.42％；马钱素为99.83％，RSD为1.88％。生品与制品中含量：没食子酸分别为0.081％(n=5，RSD为0.78％)和0.28％(n=5，RSD为1.73％)；莫诺苷分别为1.91％(n=5，RSD为2.15％)和1.38％(n=5，RSD为3.31％)；马钱素分别为1.41％(n=5，RSD为0.65％)和1.27％(n=5，RSD为1.54％)；制品中5-羟甲基糠醛含量为0.78％(n=5，RSD为0.69％)。
3．采用分光光度法对山茱萸生品与制品中总多糖、总黄酮、总皂苷和总鞣质的含量进行了测定，结果：以葡萄糖为对照，生品、制品中总多糖的平均含量分别为：7.72％(n=3，RSD为0.58％)和5.59％(n=3，RSD为0.72％)；以芦丁为对照，生品与制品中，总黄酮的平均含量分别为：3.09％(n=5，RSD为2.16％)和1.42％(n=5，RSD为4.49％)；以熊果酸为对照，生品与制品中总皂苷的平均含量分别为：7.72％(n=3，RSD为0.58％)和5.59％(n=3，RSD为0.72％)；以没食子酸为对照，生品与制品中总鞣质的平均含量分别为：4.02％(n=3，RSD为0.96％)和3.01％(n=3，RSD为0.73％)。
4．滴定分析法测定山茱萸生品与制品中总有机酸的含量。结果：生品与制品中总有机酸的平均含量分别为：7.83％(n=3，RSD为1.83％)和8.96％(n=3，RSD为2.52％)。HPLC法测定山茱萸生品与制品中熊果酸和齐墩果酸的含量，结果：生品与制品中熊果酸的平均含量分别为：0.234％(n=3，RSD为1.40％)和0.221％(n=3，RSD为2.70％)，齐墩果酸的平均含量分别为：0.0644％(n=3，RSD为1.44％)，0.0622％(n=3，RSD为1.38％)。
5采用HPLC法监控了山茱萸炮制过程中化学成分的动态变化，结果：山茱萸炮制后产生了5-羟甲基糠醛且与没食子酸的含量在10 h内随着蒸制时间的延长而增加，但蒸制10 h～12 h含量变化不大。山茱萸经酒蒸后环烯醚萜苷成分含量有所下降，制品中含量低于生品中含量，蒸制4～12 h，莫诺苷含量基本不变，蒸制4～10 h马钱素含量变化不大，蒸制12 h后其含量会进一步降低。
6．对补肝益肾活性部位——石油醚萃取部位及二氯甲烷萃取部位，进行了GC-MS定性分析，结果：在醇提液的石油醚萃取部位鉴定出16种除烷烃外的化学成分，其中主要含有β-谷甾醇、邻苯二甲酸二丁酯、香树脂醇、亚油酸、维生素E、亚麻酸甲酯和十六酸等化学成分，炮制后维生素E增加46.6％，亚油酸提高了18.3％，香树脂醇增加了16.5％，亚麻酸甲酯增加了30.9％。山茱萸水煎液二氯甲烷萃取部位鉴定出25种成分，主要含有5-羟甲基糠醛、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二异丁酯，十六酸、十八酸及其酯和β-谷甾醇等，其中5-羟甲基糠醛炮制后含量达80％，炮制品与生品相比增大了近2倍。采用ICP-AES和HPLC测定补肝益肾活性部位——水部位中宏微量元素与氨基酸含量。山茱萸生品与制品水溶出液中各检出了十六种和十五种游离氨基酸及十五种和十四种总氨基酸，炮制品中人体必须氨基酸和药用氨基酸占氨基酸总量的98.64％。山茱萸中富含天冬氨酸，炮制品中其占总氨基酸含量的30.5％，占炮制品干重的0.738％。山茱萸水溶出液中共检出十九种无机元素，结果显示山茱萸富含K、Ca、Mg、P等宏量元素，炮制品中K含量占炮制品干重的1.55％。
7．采用D101大孔树脂柱色谱和有机溶剂萃取法对炮制品产生的新成分进行分离，运用IR、UV、GC-MS等对其进行鉴定，并与标准品对照比较确定该成分为5-羟甲基糠醛，并将该成分用于药理实验研究其生物活性。
8．采用DEAE-52纤维素柱色谱与Sephadex凝胶柱色谱分离纯化多糖，从山茱萸生品与制品中各分离得到一个均质多糖SZYS和SZYP，运用高效液相凝胶色谱测定其分子量并采用HPLC-氨基柱确定它们的化学组成，结果：分子量：SZYS为4.29×10~4，SZYP为1.38×10~4，组成：SZYS为Glu：Ara：Rha=1：1.51：1.17，SZYP为：Ara：Glu：Rha=1：8.05：1.78，并将两均质多糖用于体外药理实验，验证其免疫活性。
9．优化SP825大孔树脂富集环烯醚萜苷的工艺条件，确定最佳工艺为：树脂与药材比为1：2，动态上样两次，50％的乙醇洗脱7 BV。
10．建立了13批山茱萸炮制品的高效液相指纹图谱共有模式，11批山茱萸生品的高效液相指纹图谱共有模式，生品中发现有23个共有色谱峰，制品中有26个共有色谱峰，通过与对照品对照，确认了几个主要峰的归属，从整体上体现了山茱萸生品与炮制品的特征及生品与制品中化学成分的差异。
第三部分：山茱萸补肝益肾活性成分的化学与药效学研究及炮制机理的总结，包括：
1．山茱萸生品与制品药效学比较及活性部位筛选的药效学实验摘要。
2．研究5-羟甲基糠醛对小鼠CCl_4急性肝损伤模型的作用，结果显示，5-羟甲基糠醛能降低小鼠血清中的ALT、AST的含量和肝脏系数且存在一定的量效关系，表明其对急性肝损伤小鼠具有一定的治疗与保护作用；研究5-羟甲基糠醛对血管内皮细胞的作用，细胞形态观察、MTT检测和流失细胞仪检测结果显示5-羟甲基糠醛对H_2O_2或葡萄糖所致血管内皮细胞的损伤具有保护作用，抗氧化作用可能是其保护血管内皮细胞的机理之一。
3．研究多糖在细胞免疫和体液免疫方面的作用，药效学实验结果显示，山茱萸制品多糖能提高小鼠血清溶血素含量显示其具有促进体液免疫的作用，MTT检测结果表明山茱萸多糖能提高巨噬细胞吞噬功能显示其促进细胞免疫的作用，同时显示制品多糖作用优于生品多糖。
4．比较分析山茱萸的化学与药理实验结果及文献研究，围绕山茱萸补肝益肾炮制增效的物质基础和药效学实验结果，总结出酒蒸山茱萸炮制机理。结论：山茱萸炮制后生成5-羟甲基糠醛，它对CCl_4所致的急性肝损伤有抑制作用，具有保护肝细胞、血管内皮细胞的生物活性，是山茱萸炮制增效的主要物质基础之一。山茱萸多糖为滋阴补肾、提高机体免疫炮制增效的物质基础。炮制后山茱萸多糖结构与组成发生改变，从而增强了山茱萸多糖的补益作用。天冬氨酸钾镁、维生素E、不饱和脂肪酸等物质为山茱萸补益肝肾的物质基础，炮制后他们的含量显著提高。山茱萸水部位中亮氨酸、赖氨酸、稀土元素La、Ce和微量元素Fe、V等含量提高明显，可能对炮制增效也起到一定作用。环烯醚萜苷为治疗糖尿病及其并发症的活性成分，但同时其高浓度时与鞣质一样又是免疫抑制活性物质，炮制后环烯醚萜苷和鞣质浓度降低，对补肝益肾作用增强也作出一定贡献。已有的研究表明：山茱萸由一种活性成分通过作用于多个受体靶点或由多种活性成分通过多条通道而调节一个靶点或多个靶点而发挥补肝肾的药效作用。山茱萸通过炮制产生5-羟甲基糠醛、改变多糖的组成与结构，同时改变多种成分的含量，实现炮制增效的目的。
第四部分：对实验结果进行分析讨论。
The item came from Subject of Nation's Tackle Key Problen in the tenth Five-year. Theprocessing mechanism of comus officinalis was mainly discussed in two aspects ofchemistry and pharmacology. We studied some components that can increase the efficacy orchange the character and function of the comus officinalis by comparing component andpharmacological index before and after processing to acquired active composition,summarized processing principle and provide the theoretical basis of quality standard andclinical application of comus officinalis.
This dissertation illustrated the research of chemical active composition andprocessing mechanism of comus officinalis. It can be divided into four parts.
PartⅠReview of Comus officinalis literature
It included processing history, clinical application, modem chemistry andpharmacology of Comus officinalis. The work of this part paved the way for thedevelopment of research program.
PartⅡThe chemical research of Comus officinalis include following contents.
1. Comparative study of chemical constituents of Comus officinalis before and afterprocessing.
The chemical components in the water and alcohol extraction and other extractionparts of organic solution(petroleum ether, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol andwater ) were analyzed by HPLC-DAD and HPLC-ELSD. The results showed that throughprocessing a new substance was produced, which was confirmed to be 5-HMF. Manycomponents changed largely. Gallic acid increased remarkably, while other chemicalcomponents such as loganin and Morroniside decreased. Besides, the chemicalcompositions that were very different from crude samples and processed samples.
2. A method was built up to quantify the amount of 5-hydroxymethylfurfural, Gallicacid, loganin and Morroniside from Comus officinalis by HPLC. The result showed thatwithin the range of 30.9～309 g·mL~(-1), Gallic acid had a good linear relationship, with r=0.9995; within the range of 25～250g·mL~(-1), 5-hydroxymethylfurfural had a good linearrelationship, with r=0.9998; within the range of 14.6～292 g·mL~(-1), Loganin had a goodlinear relationship, with r=0.9992; within the range of 47.4～948 g·mL~(-1), Morroniside had agood linear relationship, with r=0.9999; The average recovery rate of Gallic acid was99.12%, RSD was 1.68%; 5-hydroxymethylfurfural was 99.12%,RSD was 2.11%;Morroniside was 100.2%, RSD was 2.42%; Loganin was 99.83%,RSD was 1.88%.Thecontents of Gallic acid were 0.081%( n=5, RSD=0.78%) and 0.28 % (n=5, RSD=1.73%)respectively in Comus officinalis before and after processing; 5-hydroxymethylfurfural was0.78% ( n=5, RSD=0.69%) in processed sample; Morroniside were 1.91%(n=5,RSD=2.15%) and 1.38%(n=5, RSD=3.31%) respectively; Loganin were 1.41%(n=5,RSD=0.65%) and 1.27% ( n=5, RSD=1.54%) respectively.
3. The contents of total Polysaccharides, flavonoids, saponins and Tannins weredetermined by Vis-UV spectrophotometer. The results showed that if Glucose was served asa reference, the average amount of total Polysaccharides were 7.72% (n=3, RSD 0.58%)and5.59% (n=3, RSD 0.72%) respectively; If Rutin was served as a reference, the averageamount of total Flavones were 3.09%(n=5, RSD 2.16%) and 1.42%(n=5, RSD 4.49%)respectively; If Ursolic acid was served as a reference, the average amount of totalSaponins were 3.88%(n=5, RSD 0.64%)and 2.81% (n=5, RSD 0.41%) respectively; IfGallic acid was served as a reference, the average amount of total Tannins were 4.02% (n=5,RSD 0.96%)and 3.01%(n=5, RSD 0.73%) respectively.
4. Titration analysis was employed to determined the amount of total organic acidfrom Comus officinalis before and after processing. The results showed that the averageamount of total organic acid were 7.83% (n=3, RSD 1.83%) and 8.96% (n=3, RSD 2.52%)respectively. The contents of Ursolic acid and Oleanolic acid were detected by HPLC. Thecontents of Ursolic acid were 0.234% (n=3, RSD 1.40%)and 0.221% (n=3, RSD 2.70%)respectively, The contents of Oleanolic acid were 0.0644%(n=3, RSD 1.44%) and0.0622%(n=3, RSD 1.38%) respectively.
5. The dynamic change of chemical component was observed by HPLC in theprocessing process. The results showed that there produced 5-hydroxymethylfurfural byprocessing and Gallic acid increased within 10 hours, but their contents were almoststeadiness between 10 hours and 12 hours. After processing, morroniside and loganindecreased. Morroniside was steadiness between 4 hours and 12 hours, loganin wassteadiness between 4 hours and 10 hours. After 12 hours, their contents decreased ulteriorly.
6. 16 compounds in the petroleum ether active part were identified by HPLC-MS.Theyare Sitosterol, Vitamin e, Amyrin, 9,12-Octadecadadienoic acid; Dibutyl phthalate, and soon. After processing, Vitamin e increased 46.6 %, 9,12-Octadecadadienoic acid increased18.3 %, Amyrin increased 16.5%, 9,12,15-Octadecatrien-1-ol increased 30.9% inwine-baked sample. 25 compounds in dichloromethane active site were identified byHPLC-MS. They are 5-HMF, dibutyl phthalale, and so on. After processing the content of5-HMF increased by 80%, nearly two-fold. Amino acids and trace elements were detectedby ICP-AES and HPLC. There were 16 and 15 kinds of free aa, 15 and 14 kinds of total aarespectively found in water extraction of comus officinalis.
7. The new compound was separated by using D_(101) macroporous resin columnchromatography and organic solvent extraction. Its structure was identified by IR, UV,GC-MS and compared with standard sample. It is 5-HMF, which was separated for thepharmacological experiment.
8. Two purifier polysaccharides were acquired by using DEAE-52 and Sephadexcolumn chromatography. Their chemical composition and molecular weight weredetermined with HPLC. Molecular weight of SZYS is 4.29x10~4, SZYP is 1.38×10~4. SZYSand SZYP are composed of Glu, Ara and Rha, but they are different in proportion. InSZYS,Glu:Ara:Rha was 1:1.51:1.17,while in SZYP, Glu:Ara:Rha was 1:8.05:1.78. Twopurifier polysaccharides were separated for the pharmacological experiment.
9. Determining the technological parameters of the enrichment purification of iridoidlgycoside with SP825-Macroporous resin. The optimum process was 2 times macroporousresin which was absorbed two dynamicly with columns of SP825-macroporous resin andthe column washed with 7 column volume of 50% ethanol.
10. Fingerprints of comus officinalis before and after processing were establishedfrom 13 raw and 11 samples processed by HPLC. Gradient mobile system was applied withacetonitrile-phosphoric acid and the method of logical experiments showed high precisionand good repeatability. There were 26 common fingerprint peaks dentified in many samplesprocessed. There are 23 common fingerprint peaks were identified in raw samples. Bycomparing with standard samples, some primary peaks were identified. The fingerprintsshowed unitary character of comus officinalis before and after processing in chemicalcomposition kinds and quantities.
PartⅢ: The chemical and pharmacodynamic effect on active ingredient tonifyingliver and kidney was studied and processing mechanism was summed-up as follows:
1. Summing up the abstract of the results of research on pharmacological experimentsof the filter of active parts and comparative study between sample before and afterprocessing.
2. Pharmacodynamic experiments demonstrated that 5-HMF had protective effect onacute liver injury in mice and can protect human vein epidermal cell against H_2O_2 andglucose. The antioxidant effect may be one of the mechanisms to protect liver andendothelium.
3. Pharmacodynamic experiments demonstrated that crude polysaccharides had effecton tonifying humoral immunity and cell immunity. The effect of sample processed excelledone of crude sample.
4. Comparative analysis of results and the literature study of Comus officinalis,explored the material basis increasing ability of tonifying liver and kidney and processingmechanism of Comus officinalis was summed up. The results showed that 5-HMF hasprotective effects on liver and vascular endothelial cell and polysaccharides could enhancethe immune efficiency. Both 5-HMF and polysaccharide were the material basis oftonifying liver and kidney. After processing, the structure and composition change ofpolysaccharide was to enhance effect. Aspartic acid K and Mg has positive effects onmitochondria, cell metabolism, ammonia metabolism in liver and ion transportation ofcytomembrane. Comus fruit contains large quantity of Asp and K and Mg, which mayexplain why it has protective effect on acute liver injury in mice and tonifying liver andkidney. The increasing of the amount of vitamin E and polyunsaturated fatty acidreinforced the tonifying function, which had certaint effect on processing synergism. Thesignificant increase of Leu, Ile, La, Ce, and so on, may contribute to tonifying liver andkidney. Tannins and iridoid glucosides decreased, which may also play a role in increasedfunction.
All the literature and experimental study showed that Comus officinalis played a roleof tonifying liver and kidney through a number of channels of singe active component or achannel or a number of channels of many ones. The function increase was implemented by5-HMF increase, the change of polysaccharides structure and many compositions' contents.
PartⅣ: Discussion.
本论文分四个部分从化学研究与药理研究两大方面对山茱萸炮制机理进行了探讨。
第一部分：文献研究，包括：山茱萸炮制的历史沿革、临床应用及现代化学与药理研究，为实验研究奠定坚实的文献基础。
第二部分：山茱萸生品与炮制品化学成分的比较研究，包括：
1．对山茱萸生品及炮制品的水提液和醇提液及各个萃取部位进行了HPLC-DAD和HPLC-ELSD图谱比较，结果表明山茱萸炮制产生5-羟甲基糠醛(5-HMF)且多种化学成分含量发生显著变化，其中没食子酸等物质含量增大，莫诺苷和马钱素等含量降低。HPLC图谱定性的反映了山茱萸各个萃取部位主要化学成分及生品与制品化学成分的差异。
2．建立了HPLC-DAD法同时测定了山茱萸生品与制品中5-羟甲基糠醛、没食子酸、莫诺苷、马钱素含量的方法，结果：没食子酸在30.9～309μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9995；5-HMF在25～250μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9998；莫诺苷在47.4～948μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9999；马钱素在14.6～292μg·mL~(-1)范围内有良好的线性关系，r=0.9992。平均加样回收率为：没食子酸为99.12％，RSD为1.68％；5-HMF为101.9％，RSD为2.11％；莫诺苷为100.2％，RSD为2.42％；马钱素为99.83％，RSD为1.88％。生品与制品中含量：没食子酸分别为0.081％(n=5，RSD为0.78％)和0.28％(n=5，RSD为1.73％)；莫诺苷分别为1.91％(n=5，RSD为2.15％)和1.38％(n=5，RSD为3.31％)；马钱素分别为1.41％(n=5，RSD为0.65％)和1.27％(n=5，RSD为1.54％)；制品中5-羟甲基糠醛含量为0.78％(n=5，RSD为0.69％)。
3．采用分光光度法对山茱萸生品与制品中总多糖、总黄酮、总皂苷和总鞣质的含量进行了测定，结果：以葡萄糖为对照，生品、制品中总多糖的平均含量分别为：7.72％(n=3，RSD为0.58％)和5.59％(n=3，RSD为0.72％)；以芦丁为对照，生品与制品中，总黄酮的平均含量分别为：3.09％(n=5，RSD为2.16％)和1.42％(n=5，RSD为4.49％)；以熊果酸为对照，生品与制品中总皂苷的平均含量分别为：7.72％(n=3，RSD为0.58％)和5.59％(n=3，RSD为0.72％)；以没食子酸为对照，生品与制品中总鞣质的平均含量分别为：4.02％(n=3，RSD为0.96％)和3.01％(n=3，RSD为0.73％)。
4．滴定分析法测定山茱萸生品与制品中总有机酸的含量。结果：生品与制品中总有机酸的平均含量分别为：7.83％(n=3，RSD为1.83％)和8.96％(n=3，RSD为2.52％)。HPLC法测定山茱萸生品与制品中熊果酸和齐墩果酸的含量，结果：生品与制品中熊果酸的平均含量分别为：0.234％(n=3，RSD为1.40％)和0.221％(n=3，RSD为2.70％)，齐墩果酸的平均含量分别为：0.0644％(n=3，RSD为1.44％)，0.0622％(n=3，RSD为1.38％)。
5采用HPLC法监控了山茱萸炮制过程中化学成分的动态变化，结果：山茱萸炮制后产生了5-羟甲基糠醛且与没食子酸的含量在10 h内随着蒸制时间的延长而增加，但蒸制10 h～12 h含量变化不大。山茱萸经酒蒸后环烯醚萜苷成分含量有所下降，制品中含量低于生品中含量，蒸制4～12 h，莫诺苷含量基本不变，蒸制4～10 h马钱素含量变化不大，蒸制12 h后其含量会进一步降低。
6．对补肝益肾活性部位——石油醚萃取部位及二氯甲烷萃取部位，进行了GC-MS定性分析，结果：在醇提液的石油醚萃取部位鉴定出16种除烷烃外的化学成分，其中主要含有β-谷甾醇、邻苯二甲酸二丁酯、香树脂醇、亚油酸、维生素E、亚麻酸甲酯和十六酸等化学成分，炮制后维生素E增加46.6％，亚油酸提高了18.3％，香树脂醇增加了16.5％，亚麻酸甲酯增加了30.9％。山茱萸水煎液二氯甲烷萃取部位鉴定出25种成分，主要含有5-羟甲基糠醛、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二异丁酯，十六酸、十八酸及其酯和β-谷甾醇等，其中5-羟甲基糠醛炮制后含量达80％，炮制品与生品相比增大了近2倍。采用ICP-AES和HPLC测定补肝益肾活性部位——水部位中宏微量元素与氨基酸含量。山茱萸生品与制品水溶出液中各检出了十六种和十五种游离氨基酸及十五种和十四种总氨基酸，炮制品中人体必须氨基酸和药用氨基酸占氨基酸总量的98.64％。山茱萸中富含天冬氨酸，炮制品中其占总氨基酸含量的30.5％，占炮制品干重的0.738％。山茱萸水溶出液中共检出十九种无机元素，结果显示山茱萸富含K、Ca、Mg、P等宏量元素，炮制品中K含量占炮制品干重的1.55％。
7．采用D101大孔树脂柱色谱和有机溶剂萃取法对炮制品产生的新成分进行分离，运用IR、UV、GC-MS等对其进行鉴定，并与标准品对照比较确定该成分为5-羟甲基糠醛，并将该成分用于药理实验研究其生物活性。
8．采用DEAE-52纤维素柱色谱与Sephadex凝胶柱色谱分离纯化多糖，从山茱萸生品与制品中各分离得到一个均质多糖SZYS和SZYP，运用高效液相凝胶色谱测定其分子量并采用HPLC-氨基柱确定它们的化学组成，结果：分子量：SZYS为4.29×10~4，SZYP为1.38×10~4，组成：SZYS为Glu：Ara：Rha=1：1.51：1.17，SZYP为：Ara：Glu：Rha=1：8.05：1.78，并将两均质多糖用于体外药理实验，验证其免疫活性。
9．优化SP825大孔树脂富集环烯醚萜苷的工艺条件，确定最佳工艺为：树脂与药材比为1：2，动态上样两次，50％的乙醇洗脱7 BV。
10．建立了13批山茱萸炮制品的高效液相指纹图谱共有模式，11批山茱萸生品的高效液相指纹图谱共有模式，生品中发现有23个共有色谱峰，制品中有26个共有色谱峰，通过与对照品对照，确认了几个主要峰的归属，从整体上体现了山茱萸生品与炮制品的特征及生品与制品中化学成分的差异。
第三部分：山茱萸补肝益肾活性成分的化学与药效学研究及炮制机理的总结，包括：
1．山茱萸生品与制品药效学比较及活性部位筛选的药效学实验摘要。
2．研究5-羟甲基糠醛对小鼠CCl_4急性肝损伤模型的作用，结果显示，5-羟甲基糠醛能降低小鼠血清中的ALT、AST的含量和肝脏系数且存在一定的量效关系，表明其对急性肝损伤小鼠具有一定的治疗与保护作用；研究5-羟甲基糠醛对血管内皮细胞的作用，细胞形态观察、MTT检测和流失细胞仪检测结果显示5-羟甲基糠醛对H_2O_2或葡萄糖所致血管内皮细胞的损伤具有保护作用，抗氧化作用可能是其保护血管内皮细胞的机理之一。
3．研究多糖在细胞免疫和体液免疫方面的作用，药效学实验结果显示，山茱萸制品多糖能提高小鼠血清溶血素含量显示其具有促进体液免疫的作用，MTT检测结果表明山茱萸多糖能提高巨噬细胞吞噬功能显示其促进细胞免疫的作用，同时显示制品多糖作用优于生品多糖。
4．比较分析山茱萸的化学与药理实验结果及文献研究，围绕山茱萸补肝益肾炮制增效的物质基础和药效学实验结果，总结出酒蒸山茱萸炮制机理。结论：山茱萸炮制后生成5-羟甲基糠醛，它对CCl_4所致的急性肝损伤有抑制作用，具有保护肝细胞、血管内皮细胞的生物活性，是山茱萸炮制增效的主要物质基础之一。山茱萸多糖为滋阴补肾、提高机体免疫炮制增效的物质基础。炮制后山茱萸多糖结构与组成发生改变，从而增强了山茱萸多糖的补益作用。天冬氨酸钾镁、维生素E、不饱和脂肪酸等物质为山茱萸补益肝肾的物质基础，炮制后他们的含量显著提高。山茱萸水部位中亮氨酸、赖氨酸、稀土元素La、Ce和微量元素Fe、V等含量提高明显，可能对炮制增效也起到一定作用。环烯醚萜苷为治疗糖尿病及其并发症的活性成分，但同时其高浓度时与鞣质一样又是免疫抑制活性物质，炮制后环烯醚萜苷和鞣质浓度降低，对补肝益肾作用增强也作出一定贡献。已有的研究表明：山茱萸由一种活性成分通过作用于多个受体靶点或由多种活性成分通过多条通道而调节一个靶点或多个靶点而发挥补肝肾的药效作用。山茱萸通过炮制产生5-羟甲基糠醛、改变多糖的组成与结构，同时改变多种成分的含量，实现炮制增效的目的。
第四部分：对实验结果进行分析讨论。
The item came from Subject of Nation's Tackle Key Problen in the tenth Five-year. Theprocessing mechanism of comus officinalis was mainly discussed in two aspects ofchemistry and pharmacology. We studied some components that can increase the efficacy orchange the character and function of the comus officinalis by comparing component andpharmacological index before and after processing to acquired active composition,summarized processing principle and provide the theoretical basis of quality standard andclinical application of comus officinalis.
This dissertation illustrated the research of chemical active composition andprocessing mechanism of comus officinalis. It can be divided into four parts.
PartⅠReview of Comus officinalis literature
It included processing history, clinical application, modem chemistry andpharmacology of Comus officinalis. The work of this part paved the way for thedevelopment of research program.
PartⅡThe chemical research of Comus officinalis include following contents.
1. Comparative study of chemical constituents of Comus officinalis before and afterprocessing.
The chemical components in the water and alcohol extraction and other extractionparts of organic solution(petroleum ether, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol andwater ) were analyzed by HPLC-DAD and HPLC-ELSD. The results showed that throughprocessing a new substance was produced, which was confirmed to be 5-HMF. Manycomponents changed largely. Gallic acid increased remarkably, while other chemicalcomponents such as loganin and Morroniside decreased. Besides, the chemicalcompositions that were very different from crude samples and processed samples.
2. A method was built up to quantify the amount of 5-hydroxymethylfurfural, Gallicacid, loganin and Morroniside from Comus officinalis by HPLC. The result showed thatwithin the range of 30.9～309 g·mL~(-1), Gallic acid had a good linear relationship, with r=0.9995; within the range of 25～250g·mL~(-1), 5-hydroxymethylfurfural had a good linearrelationship, with r=0.9998; within the range of 14.6～292 g·mL~(-1), Loganin had a goodlinear relationship, with r=0.9992; within the range of 47.4～948 g·mL~(-1), Morroniside had agood linear relationship, with r=0.9999; The average recovery rate of Gallic acid was99.12%, RSD was 1.68%; 5-hydroxymethylfurfural was 99.12%,RSD was 2.11%;Morroniside was 100.2%, RSD was 2.42%; Loganin was 99.83%,RSD was 1.88%.Thecontents of Gallic acid were 0.081%( n=5, RSD=0.78%) and 0.28 % (n=5, RSD=1.73%)respectively in Comus officinalis before and after processing; 5-hydroxymethylfurfural was0.78% ( n=5, RSD=0.69%) in processed sample; Morroniside were 1.91%(n=5,RSD=2.15%) and 1.38%(n=5, RSD=3.31%) respectively; Loganin were 1.41%(n=5,RSD=0.65%) and 1.27% ( n=5, RSD=1.54%) respectively.
3. The contents of total Polysaccharides, flavonoids, saponins and Tannins weredetermined by Vis-UV spectrophotometer. The results showed that if Glucose was served asa reference, the average amount of total Polysaccharides were 7.72% (n=3, RSD 0.58%)and5.59% (n=3, RSD 0.72%) respectively; If Rutin was served as a reference, the averageamount of total Flavones were 3.09%(n=5, RSD 2.16%) and 1.42%(n=5, RSD 4.49%)respectively; If Ursolic acid was served as a reference, the average amount of totalSaponins were 3.88%(n=5, RSD 0.64%)and 2.81% (n=5, RSD 0.41%) respectively; IfGallic acid was served as a reference, the average amount of total Tannins were 4.02% (n=5,RSD 0.96%)and 3.01%(n=5, RSD 0.73%) respectively.
4. Titration analysis was employed to determined the amount of total organic acidfrom Comus officinalis before and after processing. The results showed that the averageamount of total organic acid were 7.83% (n=3, RSD 1.83%) and 8.96% (n=3, RSD 2.52%)respectively. The contents of Ursolic acid and Oleanolic acid were detected by HPLC. Thecontents of Ursolic acid were 0.234% (n=3, RSD 1.40%)and 0.221% (n=3, RSD 2.70%)respectively, The contents of Oleanolic acid were 0.0644%(n=3, RSD 1.44%) and0.0622%(n=3, RSD 1.38%) respectively.
5. The dynamic change of chemical component was observed by HPLC in theprocessing process. The results showed that there produced 5-hydroxymethylfurfural byprocessing and Gallic acid increased within 10 hours, but their contents were almoststeadiness between 10 hours and 12 hours. After processing, morroniside and loganindecreased. Morroniside was steadiness between 4 hours and 12 hours, loganin wassteadiness between 4 hours and 10 hours. After 12 hours, their contents decreased ulteriorly.
6. 16 compounds in the petroleum ether active part were identified by HPLC-MS.Theyare Sitosterol, Vitamin e, Amyrin, 9,12-Octadecadadienoic acid; Dibutyl phthalate, and soon. After processing, Vitamin e increased 46.6 %, 9,12-Octadecadadienoic acid increased18.3 %, Amyrin increased 16.5%, 9,12,15-Octadecatrien-1-ol increased 30.9% inwine-baked sample. 25 compounds in dichloromethane active site were identified byHPLC-MS. They are 5-HMF, dibutyl phthalale, and so on. After processing the content of5-HMF increased by 80%, nearly two-fold. Amino acids and trace elements were detectedby ICP-AES and HPLC. There were 16 and 15 kinds of free aa, 15 and 14 kinds of total aarespectively found in water extraction of comus officinalis.
7. The new compound was separated by using D_(101) macroporous resin columnchromatography and organic solvent extraction. Its structure was identified by IR, UV,GC-MS and compared with standard sample. It is 5-HMF, which was separated for thepharmacological experiment.
8. Two purifier polysaccharides were acquired by using DEAE-52 and Sephadexcolumn chromatography. Their chemical composition and molecular weight weredetermined with HPLC. Molecular weight of SZYS is 4.29x10~4, SZYP is 1.38×10~4. SZYSand SZYP are composed of Glu, Ara and Rha, but they are different in proportion. InSZYS,Glu:Ara:Rha was 1:1.51:1.17,while in SZYP, Glu:Ara:Rha was 1:8.05:1.78. Twopurifier polysaccharides were separated for the pharmacological experiment.
9. Determining the technological parameters of the enrichment purification of iridoidlgycoside with SP825-Macroporous resin. The optimum process was 2 times macroporousresin which was absorbed two dynamicly with columns of SP825-macroporous resin andthe column washed with 7 column volume of 50% ethanol.
10. Fingerprints of comus officinalis before and after processing were establishedfrom 13 raw and 11 samples processed by HPLC. Gradient mobile system was applied withacetonitrile-phosphoric acid and the method of logical experiments showed high precisionand good repeatability. There were 26 common fingerprint peaks dentified in many samplesprocessed. There are 23 common fingerprint peaks were identified in raw samples. Bycomparing with standard samples, some primary peaks were identified. The fingerprintsshowed unitary character of comus officinalis before and after processing in chemicalcomposition kinds and quantities.
PartⅢ: The chemical and pharmacodynamic effect on active ingredient tonifyingliver and kidney was studied and processing mechanism was summed-up as follows:
1. Summing up the abstract of the results of research on pharmacological experimentsof the filter of active parts and comparative study between sample before and afterprocessing.
2. Pharmacodynamic experiments demonstrated that 5-HMF had protective effect onacute liver injury in mice and can protect human vein epidermal cell against H_2O_2 andglucose. The antioxidant effect may be one of the mechanisms to protect liver andendothelium.
3. Pharmacodynamic experiments demonstrated that crude polysaccharides had effecton tonifying humoral immunity and cell immunity. The effect of sample processed excelledone of crude sample.
4. Comparative analysis of results and the literature study of Comus officinalis,explored the material basis increasing ability of tonifying liver and kidney and processingmechanism of Comus officinalis was summed up. The results showed that 5-HMF hasprotective effects on liver and vascular endothelial cell and polysaccharides could enhancethe immune efficiency. Both 5-HMF and polysaccharide were the material basis oftonifying liver and kidney. After processing, the structure and composition change ofpolysaccharide was to enhance effect. Aspartic acid K and Mg has positive effects onmitochondria, cell metabolism, ammonia metabolism in liver and ion transportation ofcytomembrane. Comus fruit contains large quantity of Asp and K and Mg, which mayexplain why it has protective effect on acute liver injury in mice and tonifying liver andkidney. The increasing of the amount of vitamin E and polyunsaturated fatty acidreinforced the tonifying function, which had certaint effect on processing synergism. Thesignificant increase of Leu, Ile, La, Ce, and so on, may contribute to tonifying liver andkidney. Tannins and iridoid glucosides decreased, which may also play a role in increasedfunction.
All the literature and experimental study showed that Comus officinalis played a roleof tonifying liver and kidney through a number of channels of singe active component or achannel or a number of channels of many ones. The function increase was implemented by5-HMF increase, the change of polysaccharides structure and many compositions' contents.
PartⅣ: Discussion.
引文
[1] 中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：化学工业出版社．2005：20．
[2] 魏·吴普等述，清·孙星衍，孙冯翼辑．神农本草经[M]．上海：商务印书馆，1963：83．
[3] 南北朝·雷斅撰，清·张骥补辑．雷公炮炙论[M]．江苏：江苏科技出版社，1985：28．
[4] 唐·孙思邈著，备急千金药方[M]．北京：人民卫生出版社影印，1955：10(北宋刻本)．
[5] 宋·唐慎微，重修政和经史证类备急本草[M]．北京：人民卫生出版社影印，1957：326(据张氏原刻晦明轩本)．
[6] 宋·赵佶著(太医院编)，圣济总录[M]．北京：人民卫生出版社，1962：1954(据现存善本与残存原刻珍本进行了互按增补，加句排印)．
[7] 宋·太平惠民局，陈师文．太平惠民和剂局方[M]．北京：人民卫生出版社，1959：430(据元建安宇文书堂郑天泽本排印)．
[8] 宋·苏轼，沈括著．苏沈良方[M]．北京：人民卫生出版社，1956：80．
[9] 宋·齐仲甫著．女科百问[M]．上海：上海古籍书店出版，1983：上十六．
[10] 元·沙图穆苏．瑞竹堂经验方[M]．上海：上海科学技术出版社，1959：21．
[11] 元·曾世荣撰．活幼心书[M]．北京：北京市中国书店，1985：51
[12] 明·朱棣撰．普济方[M]．北京：人民卫生出版社铅印，1959：823，834，853(据四库抄本)．
[13] 明·方贤著．奇效良方[M]．上海：商务印书馆，1959：753，650，672，674(依明成化六年原刊本黑口版)．
[14] 明·汪机 编辑．外科理例[M]．上海：商务印书馆，1957：294．
[15] 明·龚廷贤 编，张慧芳，伊广谦 点校，鲁府禁方[M]．北京：中国中医药出版社，1992：49．
[16] 明·王旨堂著．证治准绳[M]．上海：上海科技出版社影印本，1959：471．
[17] 明·张介宾 撰，景岳全书[M]．上海：上海科学技术出版社影印，1959：780(据岳峙搂本)．
[18] 明·缪希雍 撰，炮制大法[M]．北京：人民卫生出版社影印，1956：52．
[19] 明·邓苑 撰，清·胡兰樵 校订，一草亭目科全书·异授眼科[M]．上海：上海科学技术出版社，1959．
[20] 明·龚廷贤 撰，寿世保元[M]．上海：上海科技出版社铅印本，1959：273，274，290．
[21] 清·祁坤 著．外科大成[M]．上海：上海卫生出版社，1957：318．
[22] 清·杨时泰 辑．本草述钩元[M]．科技卫生出版社，1958：528．
[23] 清·刘若金 著，本草述[M]．清嘉庆十五年(1810年)还读山房刻本．
[24] 清·孙伟 撰，齐馨 点校．良朋汇集[M]．北京：中医古籍出版社，1993：85．
[25] 清·吴瑭 著，李宗，郭莉莉 校注．吴鞠通医案[M]．北京：中国中医药出版社，1998：274．
[26] 辽宁省卫生厅编．辽宁省中药炮制规范[M]．辽宁：辽宁科技出版社，1990：83．
[27] 江苏省卫生厅编．江苏省中药饮片炮制规范[M]．江苏：江苏科学技术出版社，1990：92．
[28] 山东省卫生厅编．山东省中药炮制规范[M]．山东：山东科学技术出版社，1990：91．
[29] 河南省卫生厅编．河南省中药材炮制规范(修订本)[M]．河南：河南科学技术出 版社，1983：180-181．
[30] 上海市卫生局编．上海市中药饮片炮制规范[M]．上海：上海科学技术出版社，1980：102．
[31] 江西省卫生厅药政管理局编．江西省中药炮制规范[M]．上海：上海科学技术出版社，1991：216．
[32] 湖南省卫生厅编．湖南省中药材炮制规范．湖南：湖南科学技术出版社，1990：107．
[33] 中华人民共和国药政管理局编．全国中药炮制规范[M]．北京：人民卫生出版社，1988：116．
[34] 宋·王辟之．渑水燕谈录[M]．中华书局，1981．
[35] 民国·张锡纯．医学衷中参西录[M]．石家庄：河北人民出版社，1980．
[36] 梁·陶弘景．本草经集注[M]．上海：群联出版社，1955．
[37] 清·蒋仲芳撰．医宗说约[M]．北京：中国中医药出版社，2004．
[38] 尚遂存，梁生旺，郑培根，等．山茱萸果核药用价值研究简报[J]．中药通报，1987，12(11)：38．
[39] 戴亚明．山茱萸肉与核可以同用[J]．中国中药杂志，1990，15(1)：56-57．
[40] 吴震扬．山茱萸肉与核在临床上不能混用。中药通报，1988，13(4)：51，33．
[41] 杨加华，管康林，陈经梧．山茱萸果核中矿质元素和氨基酸的研究[J]．中草药，1989，20(11)：17-18．
[42] 段天璇，王静竹，冯鹏等．山茱萸炮制前后没食子酸溶出及煎出量比较[J]．中国中药杂志，1999，24(4)：213-214．
[43] 张振凌，赵建颖，李娟等．山茱萸去核的作用和方法研究[J]．中药材，2006，29(1)：62-64．
[44] 杜小伟，范力力，王京辉．不同产地制山茱萸中马钱苷的含量测定[J]．中国中药杂志，2006，17(9)：1466-1467．
[45] 丁霞，蔡宝昌．山茱萸炮制前后有效成分的含量比较[J]．中成药，2006，28(11)：1597-1600．
[46] 徐德然，丁晴，王峥涛．HPLC法测定山茱萸及知柏地黄丸中齐墩果酸、熊果酸的含量[J]．中草药，2002，33(11)：996-997．
[47] 段天璇．山茱萸炮制前后没食子酸溶出及煎出量比较[J]．中国中药杂志，1992，24(4)：213．
[48] Sissi EL, Ishak, Abd El, Wahid. Pclyphenclic Components of Rhus coriaria Leawes.Planta Med[J]. 1972,21 (1):67.
[1] 康锁彬．张仲景医方精要(金匮篇)[M]．石家庄：河北科技出版社，2004：52．
[2] 南北朝·陈延之撰，高文涛辑注．小品方[M]．北京：中国中医药出版社，1995：66．
[3] 唐·孙思邈．千金翼方[M]．北京：人民卫生出版社，1955：60．
[4] 唐·孙思邈．千金要方[M]．上海：上海中原书局，民国19庚午(1930)
[5] 宋·王怀隐，陈昭遇．太平圣惠方．北京：人民卫生出版社，1958．
[6] 宋·赵佶著(太医院编)，圣济总录[M]．北京：人民卫生出版社，1962：1954，1955，3012，3026，3030(据现存善本与残存原刻珍本进行了互按增补，加句排印)
[7] 宋·钱乙撰，阎孝忠编集，郭君双整理．小儿药证直诀[M]．北京：人民卫生出版社，2006：44．
[8] 宋·陈言．三因极一辨证方论[M]．北京：中国古籍出版社，1999．
[9] 金·刘完素．黄帝素问宣明论方[M]．
[10] 元·沙图穆苏．瑞竹堂经验方[M]．上海：上海科学技术出版社，1959．
[11] 明·朱梓．普济方[M]．上海：上海古籍出版社，1994．
[12] 明·周文采集．外科集验方[M]．古籍书店，1980．
[13] 明·陈实功．外科正宗[M]．天津：天津科技出版社，1993．
[14] 明·龚廷贤．寿世保元[M]．上海：上海科技出版社，1959．
[15] 明·张介宾．景岳全书[M]．北京：人民卫生出版社，1991．
[16] 明·吴昆．医方考．江苏：江苏科技出版社，1985：154．
[17] 民国·张锡纯．医学衷中参西录[M]．石家庄：河北人民出版社，1980．
[18] 清·程国彭 撰，田代华整理．医学心悟[M]．2006：131．
[19] 李林，钟德珍，钟德雄．重用山茱萸治疗乙肝相关性肾炎[J]．北京中医杂志，2003，22(1)：5-7．
[20] 孙伟．肾炎灵颗粒剂治疗慢性原发性肾小球疾病临床观察[J]．中国中医药信息杂志，2000，7(4)：45-46．
[21] 贺旭龙，郭仁锡．降糖散治疗2型糖尿病49例[J]．实用中医药杂志，2006，22(6)：345-346．
[22] Hu J P.48 Cases of treatment of urinary protein due to diabetic nephropathy by Danqiyishen Decocotion [J].Shang haiJ T rad it Ch in M ed,2001 (8):241-243.
[23] 陈亚平，姚木铭，黄腾蛟，等．芪六丹汤治疗单纯型糖尿病视网膜病变疗效观察．赣南医学院学报，2005，25(3)：398-399．
[24] 王奕儿．补肾益脑汤治疗儿童多动38例疗效观察[J]．中国乡村医药杂志，2005，12(6)：55-56．
[25] 李建奎．六味地黄丸儿科临床运用举隅[J]．四川中医，2006，24(6)：68-69．
[26] 李乃荣，袁绿化．益气固冲方治疗崩漏196例[J]．中国中医急症，2005，14(2)：146-147．
[27] 崔永华．六味地黄汤治疗妇科病举隅[J]．中医药临床杂志，2006，18(4)：361-362．
[28] 张季娟，宋淑贤，王晓婷．补肾填精法治疗更年期综合征58例[J]．中医药报，2002，30(3)：25-26．
[29] 孙湘．加味左归丸治疗骨质疏松症腰背痛临床疗效观察[J]．中国中医骨伤科杂志，2002，10(5)：37-38．
[30] 孟来保．加味黄芪桂枝五物汤治疗老年性肩关节周围炎40例[J]．河北中医，1999，21(3)：167-168．
[31] 王树炜，金秀梅．益智醒脑汤治疗老年性痴呆50例[J]．2005，23(5)：49-50．
[32] 李永波，温光祥，李永忠．消斑丸治疗黄褐斑36例观察[J]．实用中医药杂志，2005，21(3)：142-143．
[33] 张新风．补肾填精汤治疗老年性痴呆30例临床观察[J]．江西中医34药，2005，36(12)：23-24．
[34] 陈洪延，秦海光．左归丸在泌尿男科疾病应用举隅[J]．陕西中医，1999， 20(5)：234-235．
[35] 胡吉元，胡迁，胡涛．补中益气汤加味方治疗男性不育症60例的临床观察[J]．中国临床医生，2005，33(1)：52-53．
[36] 孙风华．山茱萸善治失眠[J]．吉林中医药，1998，2：49．
[37] 吴春芝，谷福根，刘红在．六味地黄丸(汤)的临床应用进展[J]．中国医院用药评价分析，2005，5(3)：189-192．
[1] 戴建子，张志豪，唐蕾，等．山茱萸化学成分及药理作用进展[J]．中国药业，2006，15(2)：74-75．
[2] 张兰桐，袁志芳，杜英峰，等．山茱萸的研究近况及开发前景[J]．中草药，2004，35(8)：952-955．
[3] 王丽娟，张军，池爱平．山茱萸药用物质基础及相关分子机理研究进展[J]．和田师范专科学校学报，2006，26(3)：4-5．
[4] 周京华，李春生，李电东．山茱萸有效化学成分的研究进展[J]．中国新药杂志，2001，10(11)：808-812．
[5] 励建荣，夏道宗．山茱萸有效成分和药理作用的研究进展及其在食品工业中的应用[J]．2003，24(3)：161-163．
[6] 速藤徹，田口平八郎．成分研究[J]．药学杂志(日)，1973，93(3)：30-33．
[7] 徐丽珍，李慧颖，田磊，等．山茱萸化学成分的研究[J]，中草药，1995，26(2)：62-65．
[8] 潘扬，王天山．植物山茱萸化学成分的研究概况[J]．南京中医药大学学报，1998，14(1)：61-62．
[9] 陈玉武，薛智．制萸肉免疫活性成分的化学研究[J]中日友好医院学报，1992，6(10)：231-232(增刊)．
[10] T. Hatano, T. Tanaka, R.Abe, et al. A galloylated monoterpene glucoside and a dimerichydrolysable tannin from Comus Officinalis[J]. Phytochemistry, 1990,29(9): 2975-2978.
[11] 赵世萍，薛智．山茱萸化学成分的研究[J]．药学学报，1992，27(11)：845-848．
[12] Takuo Okuda, Tsutomu Hatano, Noboru Ogawa, et al. Comusiin A, a Dimeric Ellagitannin Forming Tautomers and Accompanying New Tannins in Cornus officinalis[J]. Chem. Pharm. Bull,1984, 32(11): 4662-4665.
[13] T.Hatano,T, Yasuhara, T, Okuda, Tanins of Cornaceous plants Ⅱ—cornusiins D, E and F, new dimeric and tRimeric hydrolysable tannins from Cornus officinalis[J]. Chem.Pharm.Bull, 1989,37(10): 2665-2668.
[14] T. Hatano, R, Kira. Tanins of Cormaceous plants Ⅰ—comusiinsA, B and C,dimeric monomeric and trimeric hydrolysable tannins from Cornusofficinalis,and orientation of valoneoyl group in related tannins[J].Chem.Pharm. Bull, 1989, 37(8): 2083-2086.
[15] 尚遂存，郑培根，武雪芬，等．山茱萸果实成分的研究[J]．中药材1989，12(4)：29-31．
[16] 张广强，刘伟，尚遂存，等．山茱萸核中脂肪酸的测定[J]．中药材，1991， 1(1)：38-39．
[17] Mitsuo Miyazawa, Hiromu Kameoka. Volatile Flavor Components of CORNI FRUCTUS(cornus officinalis Sieb.et Zucc)[J]. Agric.Biol.Chem. 1989, 53(12):3337-3339.
[18] 李平，王艳辉，马润宇．水提山茱萸多糖的理化性质及抗氧化活性研究[J]．食品科学杂志，2003，38(8)：583-586．
[19] 李平，王艳辉，马润宇．碱提山茱萸多糖的理化性质及抗氧化活性研究[J]．中草药，2003，24(7)：133-137．
[20] 杨云，刘翠平，王浴铭．山茱萸多糖的化学研究[J]．中国中药杂志，1999，24(10)：614-617．
[21] 陈汝贤，徐桂云，张瑞，等．山茱萸多糖SZYP-2的结构分析[J]．分析测试报，2002，21(1)：68-70．
[22] 舒晓燕，胡定慧，侯大斌．山茱萸多糖的分离纯化及部分理化性质研究[J]．中国现代中药，2006，8(7)：15-17．
[23] 张永文，陈玉武，赵世萍，等．山茱萸中的单没食子酰景天庚酮糖苷[J]．药学学报，1999，34(2)：153-155．
[24] 罗源生，梁松庆，吴忠．56种中药材中微量元素硒、钼的含量测定[J]．中药材，1995，9(18)：464-465．
[25] 杨加华，管康林，陈经梧，等．山茱萸中矿质元素和氨基酸的研究[J]．中草药，1989，20(11)：17-19．
[26] 吴红，梁恒，刘永红，等．山茱萸总皂苷的提取分离与含量测定[J]．第四军医大学学报，2003，24(5)：430-433．
[27] 李建军，杨冉，陈晓岚．山茱萸挥发油化学成分的GC-MS研究[J]．中草药，2003，34(6)：503-506．
[28] 赵武述，张玉琴，赵世琴，等．黄芪脂多糖、金钱草多糖和山萸糖促进免疫作用的研究[J]．中日友好医院学报，1989(4)：194-198．
[29] Sergeev. Immune modulating and antitrumor activity of polysaccharides of plant origin [J]. Bull Exp Biol Med,1985,10:74-77.
[30] 苗明山，杨云．山茱萸多糖抗氧化作用研究[J]．河南中医，2002，1(22)：66-68．
[31] 李平，王艳辉，马润宇．山茱萸多糖PFCAⅢ的理化性质及生物活性研究[J]．中国药学杂志，2003，38(8)：583-586．
[32] 李平，王艳辉，马润宇．山茱萸多糖PFCAⅠ抗氧化性能研究[J]．食品工业科技，2003，24(5)：34-36．
[33] 苗明三，方晓燕，杨云．山茱萸多糖对小鼠免疫功能的影响[J]．河南中医，2002，22(3)：12-13．
[34] 张江涛，刘沛乐．山茱萸总有机酸含量的变化及测定[J]．现代中药研究与实践，2003，17(4)：25-27．
[35] Mirvish,Cardesa, Wallcave,etal. Induction of mouse lung adenomas amines by NitRite and by N-nitRoso compouds. Effect of ascorbat, gallic acid thiocyanate and caffeine[J]. J Natl Cancer Inst. 1975,55(3):633-635.
[36] 徐国钧，王强，余伯阳，等．抗肿瘤中草药彩色图谱[M]．福州：福建科学技术出版社，61-63．
[37] 许惠琴，朱荃．山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病肾病变的保护作用[J]．南京中医药大学学报，2003，19(6)：342-345．
[38] 皮文霞，蔡宝昌，许惠琴，等．山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症模型大鼠血清SOD的影响[J]．中药新药与临床药理2003，14(1)：23-24．
[39] 马允慰，陈汝炎，王天山，等．萸肉注射液抑制血小板聚集的研究[J]．南京中医学院学报，1989，(1)：41-42．
[40] 吕晓东，杨胜，齐春会，等．山茱萸免疫活性部位F-1C的免疫抑制作用[J]．中国天然药物，2004，2(1)：50-53．
[41] 王宗伟，黄兆胜．植物鞣质的药理作用及结构特征[J]．国外医药中医中药分册，1997，19(2)：22-25．
[1] 耿放，王喜军．5-羟甲基-2-糠醛(5-HMF)在中药复方中的研究现状及相关药效探讨[J]．世界科学技术—中医药现代化，2005，7(6)：52-57．
[2] Vinay K.Sharma,Jinsuk Choi,Niti Sharma, etal. In vitro anti-tyrosinase activity of 5-(Hydroxymethyl)-2-furfural isolated from Dictyophor indusiata.Phytother.Res,2004, (18):841～844.
[3] 刘洪，许惠琴．山茱萸及其主要成分的药理学研究进展[J]．南京中医药大学学报，2003，19(4)：254-256．
[4] 许惠琴，朱荃．山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病肾病变的保护作用[J]．南京中医药大学学报，2003，19(6)：342-3451．
[5] 李平，王艳辉，马润宇．山茱萸多糖提取过程研究．北京化工大学学报．2003，30(1)：13-16．
[6] 苗明三，方晓燕，杨云．山茱萸多糖免疫兴奋作用的研究[J]．河南中医，2002，22(3)：24-25．
[7] 苗明三，杨云．山茱萸多糖抗氧化作用研究[J]．河南中医，2002，22(1)：66-67．
[8] 藏连碧，郑怡建．山茱萸抗衰老实验研究[J]．浙江中医学院学 报，1993，17(5)：341-342．
[9] 丁晴，徐德然，王峥涛．HPLC法测定六味地黄丸及六味地黄胶囊中齐墩果酸、熊果酸的含量[J]．中国中药杂志，2002，27(8)：587-590．
[10] 皮文霞．中药山茱萸及其治疗糖尿病微血管并发症有效部位的药学研究[D]．2003，6．
[11] 藏晋，薛刚，邱永军．山茱萸中总皂苷提取条件研究[J]．食品工业科技，1997(2)：26-30．
[12] 吴红，梁恒，刘永红，等．山茱萸总皂苷的提取分离与含量测定[J]．第四军医大学学报，203，24(5)：430-432．
[13] 丁利君，邱映雪．山茱萸中黄酮类物质的提取及其抗氧化作用的研究[J]．东方食疗与保健，2004，10：42-46．
[14] 中华人民共和国药典(一部)[S]．2005，附录XB．
[15] 吕晓东，张永祥，茹祥斌，等．山茱萸体液免疫抑制活性成分的药理学导向评价分离[J]．解放军药学学报，2004，18(4)：753-756．
[16] 张江涛，刘沛乐．山茱萸总有机酸含量的变化及测定[J]．现代中药研究与实践，2003，17(4)：25-27．
[17] 皮文霞．中药山茱萸及其治疗糖尿病微血管并发症有效部位的药学研究[D]．2003，6：73-83．
[1] 郭松林，谌南辉．维生素E的营养作用与免疫功能研究进展[J]．动物科学与动物医学，2000，17(4)：23-24．
[2] 高宁，叶建锋．维生素E的免疫调节剂作用[J]．国外医学卫生学分册，2000，27(1)：46-51．
[3] 荆丽珍，王宝维，张旭晖等．共轭亚油酸对动物免疫功能的调节[J]．中国饲料，2006，14(7)：14-16．
[4] 周勤飞，章晓莉，王永才．共轭亚油酸的免疫功能研究进展[J]．饲料工业，2005，26(12)：31-33．
[5] 孔秀芹，戴伟民，葛海涛等．螺旋藻来源的γ-亚麻酸甲酯调血脂作用研究[J]．2003，96(6)：30-33．
[6] Herbert Godel, Petra Seitz, Marin Verhoef. OPA-FMOC联用全自动柱前衍生氨基酸分析-Amino Quant氨基酸分析法[J]．惠普应用通讯(氨基酸应用专集)，1995，(1)：1-7．
[7] 彭克军，王秋林，吴琛珩等．门冬氨酸钾镁对肝细胞代谢的影响[J]．中国新药与临床杂志，2005，24(3)：215-219．
[8] 江骥，王世真，李文敏等．口服支链氨基酸前后慢性肾衰病人血浆三种氨基酸代谢动力学的变化[J]1中华肾脏病杂志，1994，1(6)：3501
[9] 吴华，徐中武，唐志毅．肾病综合征患者氨基酸代谢临床观察[J]．临床荟萃，2003，18(10)：5631-5633．
[10] 陈体强，李开本，何修金等．灵芝浸膏粉微量元素与氨基酸测试分析简报[J]．中国中药杂志，1994，19(4)：34-36．
[1] 张维杰主编．复合多糖生化技术[J]．上海：上海科技出版社，1986：101-107，109．
[2] 季宇彬．中药多糖的化学与药理[M]．2005．6：1-9，71-72．
[3] 中华人民共和国药典(一部)[S]．2005：20．
[4] 吴红，梁恒，吴道澄，等．大孔吸附树脂法分离纯化山茱萸总皂苷[J]．第四军医大学学报，2003，24(8)：689-692．
[1] 皮文霞．中药山茱萸及其治疗糖尿病微血管并发症有效部位的药学研究[D]．2003，5：72-87．
[2] 王花红，郭五保，顾莹，等．山茱萸药材指纹图谱的研究[J]．西北植物学报2004，24(10)：1922—1928．
[1] 陈奇．中药药理研究方法[M]．北京：人民卫生出版社，2000：725，842．
[2] 冯怡，马清钧．人脐静脉血管内皮细胞的分离、培养、鉴定及试验研究[J]．生物技术通讯，2002，13(2)：138-141．
[3] 王璇，陆征丽，常红，等．维生素C、维生素E及其联合对体外血管内皮细胞氧化 损伤保护作用的研究[J]．天津医科大学学报，2005，11(2)：187-189．
[4] 茅彩萍，顾振纶，韩蓉，等．葛根总黄酮对血糖致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制[J]．中国药理学通报，2005，21(10)：1255-1259．
[5] 徐淑云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社，1982：448．
[6] 杨光，罗炳德，李文，等．中药复方热毒平对实验性中暑小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[J]．解放军预防医学杂志，2006，24(1)：4-7．
[2] 魏·吴普等述，清·孙星衍，孙冯翼辑．神农本草经[M]．上海：商务印书馆，1963：83．
[3] 南北朝·雷斅撰，清·张骥补辑．雷公炮炙论[M]．江苏：江苏科技出版社，1985：28．
[4] 唐·孙思邈著，备急千金药方[M]．北京：人民卫生出版社影印，1955：10(北宋刻本)．
[5] 宋·唐慎微，重修政和经史证类备急本草[M]．北京：人民卫生出版社影印，1957：326(据张氏原刻晦明轩本)．
[6] 宋·赵佶著(太医院编)，圣济总录[M]．北京：人民卫生出版社，1962：1954(据现存善本与残存原刻珍本进行了互按增补，加句排印)．
[7] 宋·太平惠民局，陈师文．太平惠民和剂局方[M]．北京：人民卫生出版社，1959：430(据元建安宇文书堂郑天泽本排印)．
[8] 宋·苏轼，沈括著．苏沈良方[M]．北京：人民卫生出版社，1956：80．
[9] 宋·齐仲甫著．女科百问[M]．上海：上海古籍书店出版，1983：上十六．
[10] 元·沙图穆苏．瑞竹堂经验方[M]．上海：上海科学技术出版社，1959：21．
[11] 元·曾世荣撰．活幼心书[M]．北京：北京市中国书店，1985：51
[12] 明·朱棣撰．普济方[M]．北京：人民卫生出版社铅印，1959：823，834，853(据四库抄本)．
[13] 明·方贤著．奇效良方[M]．上海：商务印书馆，1959：753，650，672，674(依明成化六年原刊本黑口版)．
[14] 明·汪机 编辑．外科理例[M]．上海：商务印书馆，1957：294．
[15] 明·龚廷贤 编，张慧芳，伊广谦 点校，鲁府禁方[M]．北京：中国中医药出版社，1992：49．
[16] 明·王旨堂著．证治准绳[M]．上海：上海科技出版社影印本，1959：471．
[17] 明·张介宾 撰，景岳全书[M]．上海：上海科学技术出版社影印，1959：780(据岳峙搂本)．
[18] 明·缪希雍 撰，炮制大法[M]．北京：人民卫生出版社影印，1956：52．
[19] 明·邓苑 撰，清·胡兰樵 校订，一草亭目科全书·异授眼科[M]．上海：上海科学技术出版社，1959．
[20] 明·龚廷贤 撰，寿世保元[M]．上海：上海科技出版社铅印本，1959：273，274，290．
[21] 清·祁坤 著．外科大成[M]．上海：上海卫生出版社，1957：318．
[22] 清·杨时泰 辑．本草述钩元[M]．科技卫生出版社，1958：528．
[23] 清·刘若金 著，本草述[M]．清嘉庆十五年(1810年)还读山房刻本．
[24] 清·孙伟 撰，齐馨 点校．良朋汇集[M]．北京：中医古籍出版社，1993：85．
[25] 清·吴瑭 著，李宗，郭莉莉 校注．吴鞠通医案[M]．北京：中国中医药出版社，1998：274．
[26] 辽宁省卫生厅编．辽宁省中药炮制规范[M]．辽宁：辽宁科技出版社，1990：83．
[27] 江苏省卫生厅编．江苏省中药饮片炮制规范[M]．江苏：江苏科学技术出版社，1990：92．
[28] 山东省卫生厅编．山东省中药炮制规范[M]．山东：山东科学技术出版社，1990：91．
[29] 河南省卫生厅编．河南省中药材炮制规范(修订本)[M]．河南：河南科学技术出 版社，1983：180-181．
[30] 上海市卫生局编．上海市中药饮片炮制规范[M]．上海：上海科学技术出版社，1980：102．
[31] 江西省卫生厅药政管理局编．江西省中药炮制规范[M]．上海：上海科学技术出版社，1991：216．
[32] 湖南省卫生厅编．湖南省中药材炮制规范．湖南：湖南科学技术出版社，1990：107．
[33] 中华人民共和国药政管理局编．全国中药炮制规范[M]．北京：人民卫生出版社，1988：116．
[34] 宋·王辟之．渑水燕谈录[M]．中华书局，1981．
[35] 民国·张锡纯．医学衷中参西录[M]．石家庄：河北人民出版社，1980．
[36] 梁·陶弘景．本草经集注[M]．上海：群联出版社，1955．
[37] 清·蒋仲芳撰．医宗说约[M]．北京：中国中医药出版社，2004．
[38] 尚遂存，梁生旺，郑培根，等．山茱萸果核药用价值研究简报[J]．中药通报，1987，12(11)：38．
[39] 戴亚明．山茱萸肉与核可以同用[J]．中国中药杂志，1990，15(1)：56-57．
[40] 吴震扬．山茱萸肉与核在临床上不能混用。中药通报，1988，13(4)：51，33．
[41] 杨加华，管康林，陈经梧．山茱萸果核中矿质元素和氨基酸的研究[J]．中草药，1989，20(11)：17-18．
[42] 段天璇，王静竹，冯鹏等．山茱萸炮制前后没食子酸溶出及煎出量比较[J]．中国中药杂志，1999，24(4)：213-214．
[43] 张振凌，赵建颖，李娟等．山茱萸去核的作用和方法研究[J]．中药材，2006，29(1)：62-64．
[44] 杜小伟，范力力，王京辉．不同产地制山茱萸中马钱苷的含量测定[J]．中国中药杂志，2006，17(9)：1466-1467．
[45] 丁霞，蔡宝昌．山茱萸炮制前后有效成分的含量比较[J]．中成药，2006，28(11)：1597-1600．
[46] 徐德然，丁晴，王峥涛．HPLC法测定山茱萸及知柏地黄丸中齐墩果酸、熊果酸的含量[J]．中草药，2002，33(11)：996-997．
[47] 段天璇．山茱萸炮制前后没食子酸溶出及煎出量比较[J]．中国中药杂志，1992，24(4)：213．
[48] Sissi EL, Ishak, Abd El, Wahid. Pclyphenclic Components of Rhus coriaria Leawes.Planta Med[J]. 1972,21 (1):67.
[1] 康锁彬．张仲景医方精要(金匮篇)[M]．石家庄：河北科技出版社，2004：52．
[2] 南北朝·陈延之撰，高文涛辑注．小品方[M]．北京：中国中医药出版社，1995：66．
[3] 唐·孙思邈．千金翼方[M]．北京：人民卫生出版社，1955：60．
[4] 唐·孙思邈．千金要方[M]．上海：上海中原书局，民国19庚午(1930)
[5] 宋·王怀隐，陈昭遇．太平圣惠方．北京：人民卫生出版社，1958．
[6] 宋·赵佶著(太医院编)，圣济总录[M]．北京：人民卫生出版社，1962：1954，1955，3012，3026，3030(据现存善本与残存原刻珍本进行了互按增补，加句排印)
[7] 宋·钱乙撰，阎孝忠编集，郭君双整理．小儿药证直诀[M]．北京：人民卫生出版社，2006：44．
[8] 宋·陈言．三因极一辨证方论[M]．北京：中国古籍出版社，1999．
[9] 金·刘完素．黄帝素问宣明论方[M]．
[10] 元·沙图穆苏．瑞竹堂经验方[M]．上海：上海科学技术出版社，1959．
[11] 明·朱梓．普济方[M]．上海：上海古籍出版社，1994．
[12] 明·周文采集．外科集验方[M]．古籍书店，1980．
[13] 明·陈实功．外科正宗[M]．天津：天津科技出版社，1993．
[14] 明·龚廷贤．寿世保元[M]．上海：上海科技出版社，1959．
[15] 明·张介宾．景岳全书[M]．北京：人民卫生出版社，1991．
[16] 明·吴昆．医方考．江苏：江苏科技出版社，1985：154．
[17] 民国·张锡纯．医学衷中参西录[M]．石家庄：河北人民出版社，1980．
[18] 清·程国彭 撰，田代华整理．医学心悟[M]．2006：131．
[19] 李林，钟德珍，钟德雄．重用山茱萸治疗乙肝相关性肾炎[J]．北京中医杂志，2003，22(1)：5-7．
[20] 孙伟．肾炎灵颗粒剂治疗慢性原发性肾小球疾病临床观察[J]．中国中医药信息杂志，2000，7(4)：45-46．
[21] 贺旭龙，郭仁锡．降糖散治疗2型糖尿病49例[J]．实用中医药杂志，2006，22(6)：345-346．
[22] Hu J P.48 Cases of treatment of urinary protein due to diabetic nephropathy by Danqiyishen Decocotion [J].Shang haiJ T rad it Ch in M ed,2001 (8):241-243.
[23] 陈亚平，姚木铭，黄腾蛟，等．芪六丹汤治疗单纯型糖尿病视网膜病变疗效观察．赣南医学院学报，2005，25(3)：398-399．
[24] 王奕儿．补肾益脑汤治疗儿童多动38例疗效观察[J]．中国乡村医药杂志，2005，12(6)：55-56．
[25] 李建奎．六味地黄丸儿科临床运用举隅[J]．四川中医，2006，24(6)：68-69．
[26] 李乃荣，袁绿化．益气固冲方治疗崩漏196例[J]．中国中医急症，2005，14(2)：146-147．
[27] 崔永华．六味地黄汤治疗妇科病举隅[J]．中医药临床杂志，2006，18(4)：361-362．
[28] 张季娟，宋淑贤，王晓婷．补肾填精法治疗更年期综合征58例[J]．中医药报，2002，30(3)：25-26．
[29] 孙湘．加味左归丸治疗骨质疏松症腰背痛临床疗效观察[J]．中国中医骨伤科杂志，2002，10(5)：37-38．
[30] 孟来保．加味黄芪桂枝五物汤治疗老年性肩关节周围炎40例[J]．河北中医，1999，21(3)：167-168．
[31] 王树炜，金秀梅．益智醒脑汤治疗老年性痴呆50例[J]．2005，23(5)：49-50．
[32] 李永波，温光祥，李永忠．消斑丸治疗黄褐斑36例观察[J]．实用中医药杂志，2005，21(3)：142-143．
[33] 张新风．补肾填精汤治疗老年性痴呆30例临床观察[J]．江西中医34药，2005，36(12)：23-24．
[34] 陈洪延，秦海光．左归丸在泌尿男科疾病应用举隅[J]．陕西中医，1999， 20(5)：234-235．
[35] 胡吉元，胡迁，胡涛．补中益气汤加味方治疗男性不育症60例的临床观察[J]．中国临床医生，2005，33(1)：52-53．
[36] 孙风华．山茱萸善治失眠[J]．吉林中医药，1998，2：49．
[37] 吴春芝，谷福根，刘红在．六味地黄丸(汤)的临床应用进展[J]．中国医院用药评价分析，2005，5(3)：189-192．
[1] 戴建子，张志豪，唐蕾，等．山茱萸化学成分及药理作用进展[J]．中国药业，2006，15(2)：74-75．
[2] 张兰桐，袁志芳，杜英峰，等．山茱萸的研究近况及开发前景[J]．中草药，2004，35(8)：952-955．
[3] 王丽娟，张军，池爱平．山茱萸药用物质基础及相关分子机理研究进展[J]．和田师范专科学校学报，2006，26(3)：4-5．
[4] 周京华，李春生，李电东．山茱萸有效化学成分的研究进展[J]．中国新药杂志，2001，10(11)：808-812．
[5] 励建荣，夏道宗．山茱萸有效成分和药理作用的研究进展及其在食品工业中的应用[J]．2003，24(3)：161-163．
[6] 速藤徹，田口平八郎．成分研究[J]．药学杂志(日)，1973，93(3)：30-33．
[7] 徐丽珍，李慧颖，田磊，等．山茱萸化学成分的研究[J]，中草药，1995，26(2)：62-65．
[8] 潘扬，王天山．植物山茱萸化学成分的研究概况[J]．南京中医药大学学报，1998，14(1)：61-62．
[9] 陈玉武，薛智．制萸肉免疫活性成分的化学研究[J]中日友好医院学报，1992，6(10)：231-232(增刊)．
[10] T. Hatano, T. Tanaka, R.Abe, et al. A galloylated monoterpene glucoside and a dimerichydrolysable tannin from Comus Officinalis[J]. Phytochemistry, 1990,29(9): 2975-2978.
[11] 赵世萍，薛智．山茱萸化学成分的研究[J]．药学学报，1992，27(11)：845-848．
[12] Takuo Okuda, Tsutomu Hatano, Noboru Ogawa, et al. Comusiin A, a Dimeric Ellagitannin Forming Tautomers and Accompanying New Tannins in Cornus officinalis[J]. Chem. Pharm. Bull,1984, 32(11): 4662-4665.
[13] T.Hatano,T, Yasuhara, T, Okuda, Tanins of Cornaceous plants Ⅱ—cornusiins D, E and F, new dimeric and tRimeric hydrolysable tannins from Cornus officinalis[J]. Chem.Pharm.Bull, 1989,37(10): 2665-2668.
[14] T. Hatano, R, Kira. Tanins of Cormaceous plants Ⅰ—comusiinsA, B and C,dimeric monomeric and trimeric hydrolysable tannins from Cornusofficinalis,and orientation of valoneoyl group in related tannins[J].Chem.Pharm. Bull, 1989, 37(8): 2083-2086.
[15] 尚遂存，郑培根，武雪芬，等．山茱萸果实成分的研究[J]．中药材1989，12(4)：29-31．
[16] 张广强，刘伟，尚遂存，等．山茱萸核中脂肪酸的测定[J]．中药材，1991， 1(1)：38-39．
[17] Mitsuo Miyazawa, Hiromu Kameoka. Volatile Flavor Components of CORNI FRUCTUS(cornus officinalis Sieb.et Zucc)[J]. Agric.Biol.Chem. 1989, 53(12):3337-3339.
[18] 李平，王艳辉，马润宇．水提山茱萸多糖的理化性质及抗氧化活性研究[J]．食品科学杂志，2003，38(8)：583-586．
[19] 李平，王艳辉，马润宇．碱提山茱萸多糖的理化性质及抗氧化活性研究[J]．中草药，2003，24(7)：133-137．
[20] 杨云，刘翠平，王浴铭．山茱萸多糖的化学研究[J]．中国中药杂志，1999，24(10)：614-617．
[21] 陈汝贤，徐桂云，张瑞，等．山茱萸多糖SZYP-2的结构分析[J]．分析测试报，2002，21(1)：68-70．
[22] 舒晓燕，胡定慧，侯大斌．山茱萸多糖的分离纯化及部分理化性质研究[J]．中国现代中药，2006，8(7)：15-17．
[23] 张永文，陈玉武，赵世萍，等．山茱萸中的单没食子酰景天庚酮糖苷[J]．药学学报，1999，34(2)：153-155．
[24] 罗源生，梁松庆，吴忠．56种中药材中微量元素硒、钼的含量测定[J]．中药材，1995，9(18)：464-465．
[25] 杨加华，管康林，陈经梧，等．山茱萸中矿质元素和氨基酸的研究[J]．中草药，1989，20(11)：17-19．
[26] 吴红，梁恒，刘永红，等．山茱萸总皂苷的提取分离与含量测定[J]．第四军医大学学报，2003，24(5)：430-433．
[27] 李建军，杨冉，陈晓岚．山茱萸挥发油化学成分的GC-MS研究[J]．中草药，2003，34(6)：503-506．
[28] 赵武述，张玉琴，赵世琴，等．黄芪脂多糖、金钱草多糖和山萸糖促进免疫作用的研究[J]．中日友好医院学报，1989(4)：194-198．
[29] Sergeev. Immune modulating and antitrumor activity of polysaccharides of plant origin [J]. Bull Exp Biol Med,1985,10:74-77.
[30] 苗明山，杨云．山茱萸多糖抗氧化作用研究[J]．河南中医，2002，1(22)：66-68．
[31] 李平，王艳辉，马润宇．山茱萸多糖PFCAⅢ的理化性质及生物活性研究[J]．中国药学杂志，2003，38(8)：583-586．
[32] 李平，王艳辉，马润宇．山茱萸多糖PFCAⅠ抗氧化性能研究[J]．食品工业科技，2003，24(5)：34-36．
[33] 苗明三，方晓燕，杨云．山茱萸多糖对小鼠免疫功能的影响[J]．河南中医，2002，22(3)：12-13．
[34] 张江涛，刘沛乐．山茱萸总有机酸含量的变化及测定[J]．现代中药研究与实践，2003，17(4)：25-27．
[35] Mirvish,Cardesa, Wallcave,etal. Induction of mouse lung adenomas amines by NitRite and by N-nitRoso compouds. Effect of ascorbat, gallic acid thiocyanate and caffeine[J]. J Natl Cancer Inst. 1975,55(3):633-635.
[36] 徐国钧，王强，余伯阳，等．抗肿瘤中草药彩色图谱[M]．福州：福建科学技术出版社，61-63．
[37] 许惠琴，朱荃．山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病肾病变的保护作用[J]．南京中医药大学学报，2003，19(6)：342-345．
[38] 皮文霞，蔡宝昌，许惠琴，等．山茱萸环烯醚萜总苷对糖尿病血管并发症模型大鼠血清SOD的影响[J]．中药新药与临床药理2003，14(1)：23-24．
[39] 马允慰，陈汝炎，王天山，等．萸肉注射液抑制血小板聚集的研究[J]．南京中医学院学报，1989，(1)：41-42．
[40] 吕晓东，杨胜，齐春会，等．山茱萸免疫活性部位F-1C的免疫抑制作用[J]．中国天然药物，2004，2(1)：50-53．
[41] 王宗伟，黄兆胜．植物鞣质的药理作用及结构特征[J]．国外医药中医中药分册，1997，19(2)：22-25．
[1] 耿放，王喜军．5-羟甲基-2-糠醛(5-HMF)在中药复方中的研究现状及相关药效探讨[J]．世界科学技术—中医药现代化，2005，7(6)：52-57．
[2] Vinay K.Sharma,Jinsuk Choi,Niti Sharma, etal. In vitro anti-tyrosinase activity of 5-(Hydroxymethyl)-2-furfural isolated from Dictyophor indusiata.Phytother.Res,2004, (18):841～844.
[3] 刘洪，许惠琴．山茱萸及其主要成分的药理学研究进展[J]．南京中医药大学学报，2003，19(4)：254-256．
[4] 许惠琴，朱荃．山茱萸环烯醚萜总苷对实验性糖尿病肾病变的保护作用[J]．南京中医药大学学报，2003，19(6)：342-3451．
[5] 李平，王艳辉，马润宇．山茱萸多糖提取过程研究．北京化工大学学报．2003，30(1)：13-16．
[6] 苗明三，方晓燕，杨云．山茱萸多糖免疫兴奋作用的研究[J]．河南中医，2002，22(3)：24-25．
[7] 苗明三，杨云．山茱萸多糖抗氧化作用研究[J]．河南中医，2002，22(1)：66-67．
[8] 藏连碧，郑怡建．山茱萸抗衰老实验研究[J]．浙江中医学院学 报，1993，17(5)：341-342．
[9] 丁晴，徐德然，王峥涛．HPLC法测定六味地黄丸及六味地黄胶囊中齐墩果酸、熊果酸的含量[J]．中国中药杂志，2002，27(8)：587-590．
[10] 皮文霞．中药山茱萸及其治疗糖尿病微血管并发症有效部位的药学研究[D]．2003，6．
[11] 藏晋，薛刚，邱永军．山茱萸中总皂苷提取条件研究[J]．食品工业科技，1997(2)：26-30．
[12] 吴红，梁恒，刘永红，等．山茱萸总皂苷的提取分离与含量测定[J]．第四军医大学学报，203，24(5)：430-432．
[13] 丁利君，邱映雪．山茱萸中黄酮类物质的提取及其抗氧化作用的研究[J]．东方食疗与保健，2004，10：42-46．
[14] 中华人民共和国药典(一部)[S]．2005，附录XB．
[15] 吕晓东，张永祥，茹祥斌，等．山茱萸体液免疫抑制活性成分的药理学导向评价分离[J]．解放军药学学报，2004，18(4)：753-756．
[16] 张江涛，刘沛乐．山茱萸总有机酸含量的变化及测定[J]．现代中药研究与实践，2003，17(4)：25-27．
[17] 皮文霞．中药山茱萸及其治疗糖尿病微血管并发症有效部位的药学研究[D]．2003，6：73-83．
[1] 郭松林，谌南辉．维生素E的营养作用与免疫功能研究进展[J]．动物科学与动物医学，2000，17(4)：23-24．
[2] 高宁，叶建锋．维生素E的免疫调节剂作用[J]．国外医学卫生学分册，2000，27(1)：46-51．
[3] 荆丽珍，王宝维，张旭晖等．共轭亚油酸对动物免疫功能的调节[J]．中国饲料，2006，14(7)：14-16．
[4] 周勤飞，章晓莉，王永才．共轭亚油酸的免疫功能研究进展[J]．饲料工业，2005，26(12)：31-33．
[5] 孔秀芹，戴伟民，葛海涛等．螺旋藻来源的γ-亚麻酸甲酯调血脂作用研究[J]．2003，96(6)：30-33．
[6] Herbert Godel, Petra Seitz, Marin Verhoef. OPA-FMOC联用全自动柱前衍生氨基酸分析-Amino Quant氨基酸分析法[J]．惠普应用通讯(氨基酸应用专集)，1995，(1)：1-7．
[7] 彭克军，王秋林，吴琛珩等．门冬氨酸钾镁对肝细胞代谢的影响[J]．中国新药与临床杂志，2005，24(3)：215-219．
[8] 江骥，王世真，李文敏等．口服支链氨基酸前后慢性肾衰病人血浆三种氨基酸代谢动力学的变化[J]1中华肾脏病杂志，1994，1(6)：3501
[9] 吴华，徐中武，唐志毅．肾病综合征患者氨基酸代谢临床观察[J]．临床荟萃，2003，18(10)：5631-5633．
[10] 陈体强，李开本，何修金等．灵芝浸膏粉微量元素与氨基酸测试分析简报[J]．中国中药杂志，1994，19(4)：34-36．
[1] 张维杰主编．复合多糖生化技术[J]．上海：上海科技出版社，1986：101-107，109．
[2] 季宇彬．中药多糖的化学与药理[M]．2005．6：1-9，71-72．
[3] 中华人民共和国药典(一部)[S]．2005：20．
[4] 吴红，梁恒，吴道澄，等．大孔吸附树脂法分离纯化山茱萸总皂苷[J]．第四军医大学学报，2003，24(8)：689-692．
[1] 皮文霞．中药山茱萸及其治疗糖尿病微血管并发症有效部位的药学研究[D]．2003，5：72-87．
[2] 王花红，郭五保，顾莹，等．山茱萸药材指纹图谱的研究[J]．西北植物学报2004，24(10)：1922—1928．
[1] 陈奇．中药药理研究方法[M]．北京：人民卫生出版社，2000：725，842．
[2] 冯怡，马清钧．人脐静脉血管内皮细胞的分离、培养、鉴定及试验研究[J]．生物技术通讯，2002，13(2)：138-141．
[3] 王璇，陆征丽，常红，等．维生素C、维生素E及其联合对体外血管内皮细胞氧化 损伤保护作用的研究[J]．天津医科大学学报，2005，11(2)：187-189．
[4] 茅彩萍，顾振纶，韩蓉，等．葛根总黄酮对血糖致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制[J]．中国药理学通报，2005，21(10)：1255-1259．
[5] 徐淑云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社，1982：448．
[6] 杨光，罗炳德，李文，等．中药复方热毒平对实验性中暑小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[J]．解放军预防医学杂志，2006，24(1)：4-7．