蔬菜发酵专用乳酸菌的选育及其菌体高密度培养
|
摘要
泡菜、酸菜、酱油、豆豉等都是一种具有悠久历史的大众发酵蔬菜制品，其制作工艺可以追溯到2000多年前。发酵蔬菜以其酸鲜纯正、脆嫩芳香、清爽可口、回味悠久、解腻开胃的品位及功效越来越为各国人民喜欢。发酵蔬菜作为一种传统的健康食品，其营养和保健功效越来越引起人们的关注。
乳酸菌是发酵蔬菜生产中的主要生产菌株，筛选适合于蔬菜发酵的专用乳酸菌种是缩短蔬菜发酵生产周期、稳定产品质量和提高食品安全性的关键。提高蔬菜发酵速率、缩短直投式泡菜发酵时间、减少甚至防止亚硝酸盐产生的关键是提高蔬菜发酵专用复合菌粉中的活菌数，而制备蔬菜发酵专用复合菌粉的关键环节是菌体高密度培养。
本文主要进行以下方面的研究：
(1)从蔬菜发酵老液出发，有目的地筛选到3株菌，经形态特征和生理生化特征鉴定均为乳酸菌。
(2)对筛选到的乳酸菌进行蔬菜发酵性能研究：其中菌株编号NCU0101在发酵24h后，发酵液pH值达到3.39、酸度达到0.63g乳酸／100mL、菌落数达到1.25×10~9cfu／mL的高密度富集状态。
(3)采用缓冲盐法、化学中和法和补料培养法进行乳酸菌NCU0101的菌体高密度培养，分析研究培养基配方、培养条件、补料培养方式对菌体活菌数的影响。结果表明：菌体适宜培养基配方为葡萄糖5％、蛋白胨1％、磷酸氢二钾0.5％、醋酸钠0.3％，适宜培养条件为培养液pH值6.3～5.8、培养温度30℃、振荡频率40r／min、培养时间20h，适宜补料培养方式为培养0h、4h和8h时各补加2.5％的碳氮源(碳氮比为5：1)；培养结束后，培养液中乳酸菌菌体活菌数可达7.83×10~9cfu／mL。
All of pickles, sour pickled cabbage,sauce, bean are a kind of public which have a long history to ferment vegetable ware, which creation craft can trace back to more than 2000 years ago. Vegetable fermented is enjoyed by more and more people in all countries with sour and fresh delicate fragrance, clearness of the pure and unadulterated, frailty is tasty and enjoy in retrospect long, get fed up with solving and open personal status and effect of the stomach. Ferment is as a kind of traditional health food which nourishment and health care effect of vegetable conduct cause people more and more of concern.
The lactobacillus is to fermentvegetable production in of main production germ stub, sievingthe appropriation lactobacillus suited for the vegetable ferment is the key to shorten a vegetable to ferment production period, stabilize the product quality and raise the food safety. The key which raises a vegetable to ferment velocity, shortens to keep a hurl type pickles to ferment time and reduces to even keep second nitrate from producing is to raise the live bacteria number of compounds germ powders which is appropriatd to ferment vegetable. But dense cultivation is the key to prepare concentrated bacterial powder for vegetable fermentation.
Main contents discussed in this thesis are as follows:
(1) Three lactobacillus strains have been screened from the original culture fluid after certain time of vegetable fermentation. Characterization of morphology and physiochemical properties has confirmed that all of them are lactobacillus.
(2) The study has been conducted to identify the fermenting capacity of these strains. After fermentation for 24 hours the fermenting solution of the strain (No.NCU0101) contains the biomass of 1.25×10~9cfu/mL, with the acidity of 0.63 g lactic acid /100mL and pH 3.39.
(3) The study of high cell density culture of lactobacillus No. NCU 0101 has shown that it is feasible to achieve the goal using buffer solution, chemical neutralization and feed batch culture. It is found that medium formula, culture conditions, and feed batch methods have great impacts on biomass growth. Suitable medium formulation is: 5% glucose, 1% peptone, 0.5%K_2HPO_4, 0.3%sodium acetate. Optimal culture conditions are pH 6.3～5.8, temperature 30℃, oscillation frequency 40 r/min , and culture time 20h. Appropriate feeding culture method is that 2.5% carbon and nitrogen sources (C/N ratio is 5:1) is added respectively after Oh, 4h and 8h. With the optimal culture conditions, the number of the bacteria cells is up to 7.83×10~9cfu/mL.
乳酸菌是发酵蔬菜生产中的主要生产菌株，筛选适合于蔬菜发酵的专用乳酸菌种是缩短蔬菜发酵生产周期、稳定产品质量和提高食品安全性的关键。提高蔬菜发酵速率、缩短直投式泡菜发酵时间、减少甚至防止亚硝酸盐产生的关键是提高蔬菜发酵专用复合菌粉中的活菌数，而制备蔬菜发酵专用复合菌粉的关键环节是菌体高密度培养。
本文主要进行以下方面的研究：
(1)从蔬菜发酵老液出发，有目的地筛选到3株菌，经形态特征和生理生化特征鉴定均为乳酸菌。
(2)对筛选到的乳酸菌进行蔬菜发酵性能研究：其中菌株编号NCU0101在发酵24h后，发酵液pH值达到3.39、酸度达到0.63g乳酸／100mL、菌落数达到1.25×10~9cfu／mL的高密度富集状态。
(3)采用缓冲盐法、化学中和法和补料培养法进行乳酸菌NCU0101的菌体高密度培养，分析研究培养基配方、培养条件、补料培养方式对菌体活菌数的影响。结果表明：菌体适宜培养基配方为葡萄糖5％、蛋白胨1％、磷酸氢二钾0.5％、醋酸钠0.3％，适宜培养条件为培养液pH值6.3～5.8、培养温度30℃、振荡频率40r／min、培养时间20h，适宜补料培养方式为培养0h、4h和8h时各补加2.5％的碳氮源(碳氮比为5：1)；培养结束后，培养液中乳酸菌菌体活菌数可达7.83×10~9cfu／mL。
All of pickles, sour pickled cabbage,sauce, bean are a kind of public which have a long history to ferment vegetable ware, which creation craft can trace back to more than 2000 years ago. Vegetable fermented is enjoyed by more and more people in all countries with sour and fresh delicate fragrance, clearness of the pure and unadulterated, frailty is tasty and enjoy in retrospect long, get fed up with solving and open personal status and effect of the stomach. Ferment is as a kind of traditional health food which nourishment and health care effect of vegetable conduct cause people more and more of concern.
The lactobacillus is to fermentvegetable production in of main production germ stub, sievingthe appropriation lactobacillus suited for the vegetable ferment is the key to shorten a vegetable to ferment production period, stabilize the product quality and raise the food safety. The key which raises a vegetable to ferment velocity, shortens to keep a hurl type pickles to ferment time and reduces to even keep second nitrate from producing is to raise the live bacteria number of compounds germ powders which is appropriatd to ferment vegetable. But dense cultivation is the key to prepare concentrated bacterial powder for vegetable fermentation.
Main contents discussed in this thesis are as follows:
(1) Three lactobacillus strains have been screened from the original culture fluid after certain time of vegetable fermentation. Characterization of morphology and physiochemical properties has confirmed that all of them are lactobacillus.
(2) The study has been conducted to identify the fermenting capacity of these strains. After fermentation for 24 hours the fermenting solution of the strain (No.NCU0101) contains the biomass of 1.25×10~9cfu/mL, with the acidity of 0.63 g lactic acid /100mL and pH 3.39.
(3) The study of high cell density culture of lactobacillus No. NCU 0101 has shown that it is feasible to achieve the goal using buffer solution, chemical neutralization and feed batch culture. It is found that medium formula, culture conditions, and feed batch methods have great impacts on biomass growth. Suitable medium formulation is: 5% glucose, 1% peptone, 0.5%K_2HPO_4, 0.3%sodium acetate. Optimal culture conditions are pH 6.3～5.8, temperature 30℃, oscillation frequency 40 r/min , and culture time 20h. Appropriate feeding culture method is that 2.5% carbon and nitrogen sources (C/N ratio is 5:1) is added respectively after Oh, 4h and 8h. With the optimal culture conditions, the number of the bacteria cells is up to 7.83×10~9cfu/mL.
引文
[1] 沈国华，卢英．优良乳酸发酵菌种特性的研究及菌种筛选[J] ．中国调味品，2002，(3)：22-25，35
[2] 常峰，易奎星，刘小兰．类细菌素高产菌CF10的筛选诱变及发酵条件的研究[J] ．食品科学 2006，27(1)：143-147
[3] Perlak F J, Dwaton R W, Armstrong TA.Insect resistant cotton plants[J] . Biotechnol, 1990, (8): 939-943
[4] 朱玉昌，周大寨．多菌种混合乳酸菌发酵酸豆奶工艺研制[J] ．食品工艺．2005，26(5)：81-83
[5] 陆步诗，李新社．百合泡菜的工业化发酵生产研究[J] ．食品科技，2007，28(1)：110-112
[6] 刘飞，杨丽杰，侯俊财．青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定[J] ．江西饲料，2007(1)：22-25
[7] 张艳国，田雷．乳酸菌的耐酸性机制[J] ．饲料工业 2007，28(4)：62-64
[8] 卢士玲，吴桂春，李开雄．发酵肉制品中乳酸菌的分离、筛选和鉴定[J] ．食品与生物技术学报，2006，25(3)：116-121
[9] 徐光域．发酵香肠加工中的发酵剂及其应用进展[J] ．食品科学，2002，23(8)：306-310
[10] Lipid Research Clinics Program1 The lipid research clinics coronary prima2ryprevention trial results 111 Reduction in incidence of coronary heart disease[J] .J.Am.Med.Assoc, 1984,251:351-3631
[11] Mann,GB,and A Spoerry 1 Studies of a surfactant and cholesteremia in the Maasai [J] .Am.J.Clin.Nutr,1974,27:464-4691.
[12] 顾瑞霞，谢继志．乳酸菌与人体健康[M] ．北京：科学出版社，1995：1-5
[13] 罗富英，李再峰，杨秀坚．浓缩鲜荔枝果汁乳酸菌饮料的研制[J] ．食品工业科技，2006，(1)：123-125
[14] 广西植物研究所．广西植物志[M] ．南宁广西科技出版社，1965：780-785
[15] 王德纯．浓缩型乳酸菌饮料的研制[J] ．饮料工业，2002，5(1)：33-34
[16] 江汉湖．食品微生物学[M] ．北京：中国农业出版社，2002
[17] 周德庆．微生物学实验手册[M] ．上海：上海科学技术出版社，1986
[18] 凌代文，东秀珠．乳酸细菌分类鉴定及实验方法[M] ．北京：中国轻工业出版社，1999：85-86
[19] 郝林．食品微生物学实验技术[M] ．北京，中国农业出版社．2001．5
[20] 布坎南R．E，吉本斯 R．E，等．伯杰细菌鉴定手册(第八版)[M] ．北京：科学出版社，1984
[21] 王福源．现代食品发酵技术[M] ．北京：中国轻工业出版社，1998
[22] 周光燕，张小平，钟凯．乳酸菌对泡菜发酵过程中亚硝酸盐含量变化及泡菜品质的影响研究西[J] ．南农业学报，2006，19(2)：290-293
[23] Eichholzer M,Gutzuiler F1 Dietary Nitrate and N2nitroso2compounds and Cancer Risk:A Review of the Epidemiological Evidence[J] .Nu2 trition Review, 1998,54 (4):95-105
[24] 刘青梅，杨性民．腌制蔬菜亚硝酸盐含量及降低措施研究[J] ．食品科学，2001，22(9)：451
[25] 赵书欣．接种乳酸菌腌制渍菜过程中亚硝酸盐变化规律的研究[J] ．中国畜产与食 品，1998，5(4)：153-154
[26] 陈有容，杨凤琼．降低腌制蔬菜亚硝酸盐含量方法的研究进展[J] ．上海水产大学学报，2004，13(2)：65-68
[27] 张丹凤，陆东林．干酪的营养价值及发展前景[J] ．新疆畜牧业，2004(5)：55-57
[28] 吴非，刘晓玲．乳酸菌发酵不同乳基质的凝乳特性研究[J] ．食品与发酵工业 2007，33(3)：143-147
[29] Ljungh A,Wadst rom T. Lactic acid bacteria as probiotics[J] .Curr Issues Intest Microbiol,2006,7(2):73-89
[30] 励建荣．我国乳品工业的现状与发展前景[J] ．中国乳品工业，2004，32(9)：49-52
[31] Hickey DK, Kilcawley KN,Beresford TP, et al.Starterst rain related effects on the biochemical and sensory properties of Cheddar cheese[J] .J Dairy Res,2006,21(9): 1-9
[32] Gallardo2Escamilla F J, Kelly A L, Delahunty C M. Influence of starter culture on flavor and headspace volatile profiles of fermented whey and whey produced from fermented milk[J] .J Dairy Sci,2005,88:3745-3753
[33] 邱健人．食品工业微生物学[M] ．台湾：复文书局，1989：157
[34] 柳翰凌，周雨霞，乌尼等．乳制品中具有降胆固醇功能乳酸菌的体外筛选[J] ．乳业科学与技术，2006(1)：9-11
[35] 中国科学院微生物研究所细菌分类组．一般细菌常用鉴定方法[M] ．北京：科学出版社，1978
[36] 陈欣，潘素华，胡黎黎．人源乳酸杆菌耐酸耐胆盐能力的测定和鉴定[J] ．现代预防医学 2006，33(3)：278-279
[37] Rao D R,C B Chawan,and S R Pulusani1Influence of milk and thermophi2 lus milk on plasma cholesterol levels and hepatic cholesterogenesis in rats[J] .J.Food Sci,1981,46:1339-1341
[38] S E Gilliland,C R Nelson,and C Maxwell1Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus[J] .Appl.Environ.Microbiol, 1985,49:377-381
[39] 吕欣，高宇．抗真菌乳酸菌的筛选及菌种鉴定[J] ．食品科学，2006，22(2)：98-101
[40] 徐进，计融．乳酸菌对霉菌生长及产毒的影响[J] ．国外医学卫生学分册，2001，28(4)：237-240
[41] Mitsuoka, T.The Lactic Acid Bacteria.London and New York:Elserier Applied [J] .Science Press Ine, 1992:69-115
[42] Virginia S O, Aida A P. Maria E N-Characterization of a bacteriocin-like substance producedbyavaginallactobacillussalivariusstrain [J] .Appl Environ Microbiol, 1999,65(5):5631-5635
[43] Laukova A, Marekova M,Javorsky P.Lett in Appl [J] .Microbiol, 1993,6:257-259
[44] Whitford M F,Mcpherson M A, Forster M F,et al. [J] .Appl EnvironMicrobiol,2001,67: 569-574
[45] 迟乃玉，刘英吴，张庆芳等．SOD高产菌株乳酸菌的选育及其产酶条件的研究[J] ．微生物学通报，2001，28(6)：22-25
[46] 王素英，王翠英，王敏．耐胆酸盐、降胆固醇乳酸菌的筛选[J] ．中国乳品工业，2004，32(2)14-16．
[47] 吕加平，于景华，骆承庠．乳酸菌发酵剂优良菌种的选育[J] ．中国乳品工业，2002，30(5)：49-53
[48] 孙翠焕，冀宝营，王艳华等．高活性乳酸菌发酵剂培养条件优化及活性测定[J] ．微生物学毒志 2006，26(3)：70-73
[49] NEIJ W C. Determination of growth parameters of lactocoeei in milk and ultrafilterred milk[J] .Journal of Science, 1995,78:17-23
[50] 侯红漫，宋海波，刘扬等．酸菜汁中乳酸菌的分布[J] ．食品科学，1997，18(1)：29-32
[51] MONGKOLWAI H. Technology transfer for small and medium soy sauce fermentation factories in Thailand: a consortium approach [J] .Food Res Int,1997,30(8):555-563
[52] 奚震，刘然，万守朋．直投式乳酸菌发酵剂的制备[J] ．食品研究与开发，2003，24(6)：25
[53] 吴荣荣，张柏林．直投式酸奶发酵剂的发酵工艺及其优化[J] ．食品科学 2006，27(2)：178-181
[54] 申彤，姜雷，杨洁．直投式泡菜乳酸菌发酵剂冷冻保护的研究[J] ．食品科学 2006，27(5)：106-108
[55] 肖静，孙剑秋，王秀静．发酵白菜中乳酸菌的分离及鉴定[J] ．中国酿造 2006，(5)：17-19
[56] 吴兴壮，张华，迟吉捷．发酵白菜乳酸菌的培养基及发酵剂的筛选[J] ．食品科技 2007，(5)：92-94
[57] 钟之绚．酸白菜发酵中乳酸菌群的分析[J] ．微生物学报，1999(1)：74-76
[58] 黄君红，陈青荷．提高泡菜汁中乳酸菌含量的研究[J] ．中国酿造，1997(4)：24-28
[59] Berdague J L, Monteil P. Effects of starter cultures on the formation of flavour compounds in dry sausages[J] .Meat Sci, 1993,35:229-240
[60] 方智远，吴明珠，张宝玺等．韩国蔬菜产业和蔬菜科技考察见闻[J] ．中国蔬菜 2005(1)：36-38
[61] 潘道东，吴玲．高产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的筛选与鉴定[J] ．食品科学 2007，28(3)：171-174
[62] KITAZAWA H, YAMAGUCHI T, ITOH T. B-cell mitogenicactivity of slime products produced from slime-forming encapsulated Lactococcus lactis subsp. cremoris[J] .JournalofDairyScience, 1992,75:2946-2951
[63] LUC D V. Heteropolysaccarides from lactic acid bacteria FEMS[J] .Microbiology Review, 1999,23:153-177
[64] HASSAN A N,FRANK J F,SCHMIDT K A,et al.Rheological propertiesofyogurtmadewithencapsulatednonropylacticcultures[J] .J Dairy Sci, 1996,79: 2091-2097
[65] KITAZAWA H, ITOH T. Antitumoral activity of slime-forming encapsulated Lactococcus lactis subsp, cremoris isolated from Scandinavian ropy sour milk "viili"[J] . Animal Science and Technology, 1991,62:277-283
[66] 宋萍，陈功，王柱．绿色功能菌(群)发酵制泡菜的中试研究[J] ．四川食品与发酵 2004(3)：16-22
[67] 杨郁，张丽靖．耐酸性乳酸菌的筛选及应用的初步研究[J] ．浙江农业科学，2006(4)：463-466
[68] 王艳梅，马俪珍．泡菜汁中乳酸菌的分离与初步鉴定[J] ．天津农学院学报，2007，14(3)：5-8
[69] 陈仲翔，董英．泡菜工业化生产的研究进展[J] ．食品科技，2004(4)：33-35
[70] 冉艳红，于淑娟，杨春哲等．泡菜乳酸菌发酵蔬菜汁研究[J] ．中国酿造，2002(6)：28-30
[71] Speckman,C.A.,sandine,W.E.&Eliker,P.R.: Lyophilized lactic acid starter culture:Preparation and use inoculation of vat milk for cheddar and cottage cheese[J] .Dairy Sci., 1973,57(2): 165
[72] Perderson C S, AI Bury M N. The effect of pureculture inoculation on fermentation of cucumbers[J] .Food Technology, 1961,15:351-354
[73] 李幼筠．泡菜乳酸菌种的选育(一)[J] ．中国调味品，1996(11)：14-18
[74] 沈国华．纯菌接种发酵技术在腌渍蔬菜加工上的应用研究(二)[J] ．中国调味品，2002(6)：24-31
[75] 毕金峰．自然发酵酸菜汁中乳酸菌的分离、鉴定及发酵剂的筛选[J] ．沈阳农业大学学报，2000，31(4)
[76] 罗云波．园艺产品贮藏加工学[M] ．北京：中国农业大学出版社，2001：147
[77] 蒋和体．四川泡菜袋装发酵研究[J] ．食品科学，1994(4)：39-40
[78] Nancy J Gardner, et al. Selection and characterizationof mixed starter cultures for lactic acid fermentation of carrot,cabbage,beet and onion vegetable mixtures[J] .International Journal of Food Microbiology,2001,64:261-275
[79] 陆兆新．食品生物技术导论[M] ．中国农业出版社，2002
[80] 蒋冬花，后加衡，黄大年等．酸菜中高产γ2氨基丁酸乳酸菌的筛选[J] ．微生物学杂志 2007，27(1)：35-39
[81] 刘清，姚惠源，张晖．生产γ2氨基丁酸乳酸菌的选育及发酵条件优化[J] ．氨基酸与生物资源，2004，26(1)：40-43
[82] Blaine,J.W.et al:Preparation and storage of lactic starterconcentrates[J] .Dairy Sci., 1971,54:755
[83] 张兰威，鄂志强，万海峰等．乳酸菌增菌培养基的筛选及干燥保护剂的选择[J] ．中国乳品工业，2000，28(2)：7-9
[84] 梁勇，杜敏，南庆贤等．浓缩型乳酸菌发酵剂的制备[J] ．中国乳品工业，1995，23(2)：132-133
[85] 乔发东，吴秀芳，南庆贤等．浓缩乳酸菌发酵剂的现状[J] ．中国乳品工业，1998，26(1)：22-23
[86] 贾士杰，生庆海．发酵乳及新型发酵剂的研究概述[J] ．中国奶牛，2000，(3)：45-48
[87] 周晓宏，廖永红．超浓缩乳酸菌发酵剂研究进展[J] ．粮油食品科技，1998，(1)：10-11
[88] 许本发．酸奶和乳酸菌饮料加工[M] ．北京：中国轻工业出版社，1994
[89] 刘会平，马丽珍，南庆贤．高效浓缩乳酸菌发酵剂[J] ．中国畜产与食品，1997，4(1)：34-35
[90] 乔发东，南庆贤．浓缩乳酸菌发酵剂制造工艺的研究[J] ．河南职技师院学报 1998，26(3)：50-52，55
[91] 刘云鹤．高效乳酸菌增殖培养基的筛选[J] ．淮海工学院学报，2003，12(4)：59-60
[92] 乔发东．超滤技术制备浓缩乳酸菌发酵剂的研究[J] ．中国畜产与食品，1998，5(3)：112
[93] 方祥，胡文锋，张辉华等．乳酸菌的分离、鉴定及其生长特性[J] ．中国微生态学杂志，2000，12(5)：262-264
[94] Cowman,R.A.,Westhoff, D.C.,Swaisgood,H.E. and Speck, M.L. Proteinase system of lactic streptocci..Relationship Ⅳbetween proteinase activity and growth at 32 [J] .Dairy Sci., ℃ 1969, 53(2):126-131
[95] 吕兵，张国农．乳酸菌发酵剂浓缩培养的研究[J] ．中国乳品工业，2001，29(3)：7-9
[96] USTUNOL Z. Effect of commrial interal pH control media on cheese yield starter culture growth and activity[J] .J Dairy Sci,1986,69:15
[97] John GHolt·Noel R Krieg, Peter H A Sneath. et al. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology(Ninth Edition)[M] .Baltimore: Williams& Wilkins.1994:175—201
[98] RALPH E.The technology of dairy products(2nd)[M] .Elsevier Science Pub lishers Ltd, 1997
[99] 山丽杰，田洪涛，贾英民等．浓缩型乳酸菌发酵剂制备中几个技术关键问题的探讨[J] ．中国乳品工业，2002，30(5)：66-69
[100] 高松伯．高效嗜酸乳杆菌发酵剂制备和嗜酸菌奶粉新工艺的研究[J] ．中国乳品工业，1991(4)
[101] Osbome,R.J.W.:Production of frozen concentrated cheesestarters by diffusion culture[J] .Journal of the Society of Dairy Technology. 1977,30(1):40
[102] 陈婕．乳酸链球菌过滤培养的研究[J] ．中国乳品工业，1991，2(19)：6-8
[103] 刘振民．采用微滤膜浓缩乳酸菌发酵液的工艺条件研究[J] ．食品与发酵工业，2004，30(10)：73-76
[104] Claudine Prigent et al.,Production of concentrated streptococcussalivarius subsp.Thermophilus by couplingcontinous fermentation and ultrafiltration[J] .Journal of Dairy Research, 1988,55:569-557
[105] 黄玲．对番茄酱中乳酸菌培养基的筛选研究[J] ．新疆农业科学，2004，41：90—91
[106] 李艾黎，代敏，霍贵成．浓缩型乳酸菌发酵剂的工业化生产[J] ．中国乳品工业，2005，33(6)：50-53
[107] 吕为群，骆承庠，刘书臣．乳酸菌在冷冻干燥过程中存活率影响因素探讨[J] ．中国乳品工业，1993，21(5)：217-220
[108] 李庆钟．微生物菌种保藏技术[M] ．北京：科学出版社，1989
[109] 杨洁彬，凌代文，郭兴华等．乳酸菌—生物学基础及应用[M] 北京：中国轻工业出版社，1996，75-83
[110] 吕兵，张国农，林金资．酸奶发酵剂速效干燥制备中保护剂的研究[J] ．中国乳品工业，1996，24(2)：3-5
[111] 乔发东．冷冻干燥浓缩乳酸菌发酵剂抗冷冻保护剂的选择[J] ．河南职技师院学报，1998，26(1)：43-46
[112] 乔发东，南庆贤，兰风英．浓缩乳酸菌发酵剂冷冻干燥介质的选择[J] ．中国乳品工业，1998，26(4)：13-15
[113] 陈声明，吕琴．微生物冷冻干燥的抗性机理[J] ．微生物学通报：1996(4)：236-238
[114] 吕兵，张国农等．嗜酸乳杆菌生物学特性及其发酵乳的研究[J] ．中国乳品工业，2002，30(5)：37-39
[115] 贺稚非，向瑞玺等．泡菜活性直投式乳酸菌发酵剂的研究[J] ．食品科学 2006，27(8)：191-197
[116] 史媛英，肖冬光．酸奶发酵剂高浓度培养的研究[J] ．天津轻工业学院学报，1999，1：20-25
[2] 常峰，易奎星，刘小兰．类细菌素高产菌CF10的筛选诱变及发酵条件的研究[J] ．食品科学 2006，27(1)：143-147
[3] Perlak F J, Dwaton R W, Armstrong TA.Insect resistant cotton plants[J] . Biotechnol, 1990, (8): 939-943
[4] 朱玉昌，周大寨．多菌种混合乳酸菌发酵酸豆奶工艺研制[J] ．食品工艺．2005，26(5)：81-83
[5] 陆步诗，李新社．百合泡菜的工业化发酵生产研究[J] ．食品科技，2007，28(1)：110-112
[6] 刘飞，杨丽杰，侯俊财．青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定[J] ．江西饲料，2007(1)：22-25
[7] 张艳国，田雷．乳酸菌的耐酸性机制[J] ．饲料工业 2007，28(4)：62-64
[8] 卢士玲，吴桂春，李开雄．发酵肉制品中乳酸菌的分离、筛选和鉴定[J] ．食品与生物技术学报，2006，25(3)：116-121
[9] 徐光域．发酵香肠加工中的发酵剂及其应用进展[J] ．食品科学，2002，23(8)：306-310
[10] Lipid Research Clinics Program1 The lipid research clinics coronary prima2ryprevention trial results 111 Reduction in incidence of coronary heart disease[J] .J.Am.Med.Assoc, 1984,251:351-3631
[11] Mann,GB,and A Spoerry 1 Studies of a surfactant and cholesteremia in the Maasai [J] .Am.J.Clin.Nutr,1974,27:464-4691.
[12] 顾瑞霞，谢继志．乳酸菌与人体健康[M] ．北京：科学出版社，1995：1-5
[13] 罗富英，李再峰，杨秀坚．浓缩鲜荔枝果汁乳酸菌饮料的研制[J] ．食品工业科技，2006，(1)：123-125
[14] 广西植物研究所．广西植物志[M] ．南宁广西科技出版社，1965：780-785
[15] 王德纯．浓缩型乳酸菌饮料的研制[J] ．饮料工业，2002，5(1)：33-34
[16] 江汉湖．食品微生物学[M] ．北京：中国农业出版社，2002
[17] 周德庆．微生物学实验手册[M] ．上海：上海科学技术出版社，1986
[18] 凌代文，东秀珠．乳酸细菌分类鉴定及实验方法[M] ．北京：中国轻工业出版社，1999：85-86
[19] 郝林．食品微生物学实验技术[M] ．北京，中国农业出版社．2001．5
[20] 布坎南R．E，吉本斯 R．E，等．伯杰细菌鉴定手册(第八版)[M] ．北京：科学出版社，1984
[21] 王福源．现代食品发酵技术[M] ．北京：中国轻工业出版社，1998
[22] 周光燕，张小平，钟凯．乳酸菌对泡菜发酵过程中亚硝酸盐含量变化及泡菜品质的影响研究西[J] ．南农业学报，2006，19(2)：290-293
[23] Eichholzer M,Gutzuiler F1 Dietary Nitrate and N2nitroso2compounds and Cancer Risk:A Review of the Epidemiological Evidence[J] .Nu2 trition Review, 1998,54 (4):95-105
[24] 刘青梅，杨性民．腌制蔬菜亚硝酸盐含量及降低措施研究[J] ．食品科学，2001，22(9)：451
[25] 赵书欣．接种乳酸菌腌制渍菜过程中亚硝酸盐变化规律的研究[J] ．中国畜产与食 品，1998，5(4)：153-154
[26] 陈有容，杨凤琼．降低腌制蔬菜亚硝酸盐含量方法的研究进展[J] ．上海水产大学学报，2004，13(2)：65-68
[27] 张丹凤，陆东林．干酪的营养价值及发展前景[J] ．新疆畜牧业，2004(5)：55-57
[28] 吴非，刘晓玲．乳酸菌发酵不同乳基质的凝乳特性研究[J] ．食品与发酵工业 2007，33(3)：143-147
[29] Ljungh A,Wadst rom T. Lactic acid bacteria as probiotics[J] .Curr Issues Intest Microbiol,2006,7(2):73-89
[30] 励建荣．我国乳品工业的现状与发展前景[J] ．中国乳品工业，2004，32(9)：49-52
[31] Hickey DK, Kilcawley KN,Beresford TP, et al.Starterst rain related effects on the biochemical and sensory properties of Cheddar cheese[J] .J Dairy Res,2006,21(9): 1-9
[32] Gallardo2Escamilla F J, Kelly A L, Delahunty C M. Influence of starter culture on flavor and headspace volatile profiles of fermented whey and whey produced from fermented milk[J] .J Dairy Sci,2005,88:3745-3753
[33] 邱健人．食品工业微生物学[M] ．台湾：复文书局，1989：157
[34] 柳翰凌，周雨霞，乌尼等．乳制品中具有降胆固醇功能乳酸菌的体外筛选[J] ．乳业科学与技术，2006(1)：9-11
[35] 中国科学院微生物研究所细菌分类组．一般细菌常用鉴定方法[M] ．北京：科学出版社，1978
[36] 陈欣，潘素华，胡黎黎．人源乳酸杆菌耐酸耐胆盐能力的测定和鉴定[J] ．现代预防医学 2006，33(3)：278-279
[37] Rao D R,C B Chawan,and S R Pulusani1Influence of milk and thermophi2 lus milk on plasma cholesterol levels and hepatic cholesterogenesis in rats[J] .J.Food Sci,1981,46:1339-1341
[38] S E Gilliland,C R Nelson,and C Maxwell1Assimilation of cholesterol by Lactobacillus acidophilus[J] .Appl.Environ.Microbiol, 1985,49:377-381
[39] 吕欣，高宇．抗真菌乳酸菌的筛选及菌种鉴定[J] ．食品科学，2006，22(2)：98-101
[40] 徐进，计融．乳酸菌对霉菌生长及产毒的影响[J] ．国外医学卫生学分册，2001，28(4)：237-240
[41] Mitsuoka, T.The Lactic Acid Bacteria.London and New York:Elserier Applied [J] .Science Press Ine, 1992:69-115
[42] Virginia S O, Aida A P. Maria E N-Characterization of a bacteriocin-like substance producedbyavaginallactobacillussalivariusstrain [J] .Appl Environ Microbiol, 1999,65(5):5631-5635
[43] Laukova A, Marekova M,Javorsky P.Lett in Appl [J] .Microbiol, 1993,6:257-259
[44] Whitford M F,Mcpherson M A, Forster M F,et al. [J] .Appl EnvironMicrobiol,2001,67: 569-574
[45] 迟乃玉，刘英吴，张庆芳等．SOD高产菌株乳酸菌的选育及其产酶条件的研究[J] ．微生物学通报，2001，28(6)：22-25
[46] 王素英，王翠英，王敏．耐胆酸盐、降胆固醇乳酸菌的筛选[J] ．中国乳品工业，2004，32(2)14-16．
[47] 吕加平，于景华，骆承庠．乳酸菌发酵剂优良菌种的选育[J] ．中国乳品工业，2002，30(5)：49-53
[48] 孙翠焕，冀宝营，王艳华等．高活性乳酸菌发酵剂培养条件优化及活性测定[J] ．微生物学毒志 2006，26(3)：70-73
[49] NEIJ W C. Determination of growth parameters of lactocoeei in milk and ultrafilterred milk[J] .Journal of Science, 1995,78:17-23
[50] 侯红漫，宋海波，刘扬等．酸菜汁中乳酸菌的分布[J] ．食品科学，1997，18(1)：29-32
[51] MONGKOLWAI H. Technology transfer for small and medium soy sauce fermentation factories in Thailand: a consortium approach [J] .Food Res Int,1997,30(8):555-563
[52] 奚震，刘然，万守朋．直投式乳酸菌发酵剂的制备[J] ．食品研究与开发，2003，24(6)：25
[53] 吴荣荣，张柏林．直投式酸奶发酵剂的发酵工艺及其优化[J] ．食品科学 2006，27(2)：178-181
[54] 申彤，姜雷，杨洁．直投式泡菜乳酸菌发酵剂冷冻保护的研究[J] ．食品科学 2006，27(5)：106-108
[55] 肖静，孙剑秋，王秀静．发酵白菜中乳酸菌的分离及鉴定[J] ．中国酿造 2006，(5)：17-19
[56] 吴兴壮，张华，迟吉捷．发酵白菜乳酸菌的培养基及发酵剂的筛选[J] ．食品科技 2007，(5)：92-94
[57] 钟之绚．酸白菜发酵中乳酸菌群的分析[J] ．微生物学报，1999(1)：74-76
[58] 黄君红，陈青荷．提高泡菜汁中乳酸菌含量的研究[J] ．中国酿造，1997(4)：24-28
[59] Berdague J L, Monteil P. Effects of starter cultures on the formation of flavour compounds in dry sausages[J] .Meat Sci, 1993,35:229-240
[60] 方智远，吴明珠，张宝玺等．韩国蔬菜产业和蔬菜科技考察见闻[J] ．中国蔬菜 2005(1)：36-38
[61] 潘道东，吴玲．高产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的筛选与鉴定[J] ．食品科学 2007，28(3)：171-174
[62] KITAZAWA H, YAMAGUCHI T, ITOH T. B-cell mitogenicactivity of slime products produced from slime-forming encapsulated Lactococcus lactis subsp. cremoris[J] .JournalofDairyScience, 1992,75:2946-2951
[63] LUC D V. Heteropolysaccarides from lactic acid bacteria FEMS[J] .Microbiology Review, 1999,23:153-177
[64] HASSAN A N,FRANK J F,SCHMIDT K A,et al.Rheological propertiesofyogurtmadewithencapsulatednonropylacticcultures[J] .J Dairy Sci, 1996,79: 2091-2097
[65] KITAZAWA H, ITOH T. Antitumoral activity of slime-forming encapsulated Lactococcus lactis subsp, cremoris isolated from Scandinavian ropy sour milk "viili"[J] . Animal Science and Technology, 1991,62:277-283
[66] 宋萍，陈功，王柱．绿色功能菌(群)发酵制泡菜的中试研究[J] ．四川食品与发酵 2004(3)：16-22
[67] 杨郁，张丽靖．耐酸性乳酸菌的筛选及应用的初步研究[J] ．浙江农业科学，2006(4)：463-466
[68] 王艳梅，马俪珍．泡菜汁中乳酸菌的分离与初步鉴定[J] ．天津农学院学报，2007，14(3)：5-8
[69] 陈仲翔，董英．泡菜工业化生产的研究进展[J] ．食品科技，2004(4)：33-35
[70] 冉艳红，于淑娟，杨春哲等．泡菜乳酸菌发酵蔬菜汁研究[J] ．中国酿造，2002(6)：28-30
[71] Speckman,C.A.,sandine,W.E.&Eliker,P.R.: Lyophilized lactic acid starter culture:Preparation and use inoculation of vat milk for cheddar and cottage cheese[J] .Dairy Sci., 1973,57(2): 165
[72] Perderson C S, AI Bury M N. The effect of pureculture inoculation on fermentation of cucumbers[J] .Food Technology, 1961,15:351-354
[73] 李幼筠．泡菜乳酸菌种的选育(一)[J] ．中国调味品，1996(11)：14-18
[74] 沈国华．纯菌接种发酵技术在腌渍蔬菜加工上的应用研究(二)[J] ．中国调味品，2002(6)：24-31
[75] 毕金峰．自然发酵酸菜汁中乳酸菌的分离、鉴定及发酵剂的筛选[J] ．沈阳农业大学学报，2000，31(4)
[76] 罗云波．园艺产品贮藏加工学[M] ．北京：中国农业大学出版社，2001：147
[77] 蒋和体．四川泡菜袋装发酵研究[J] ．食品科学，1994(4)：39-40
[78] Nancy J Gardner, et al. Selection and characterizationof mixed starter cultures for lactic acid fermentation of carrot,cabbage,beet and onion vegetable mixtures[J] .International Journal of Food Microbiology,2001,64:261-275
[79] 陆兆新．食品生物技术导论[M] ．中国农业出版社，2002
[80] 蒋冬花，后加衡，黄大年等．酸菜中高产γ2氨基丁酸乳酸菌的筛选[J] ．微生物学杂志 2007，27(1)：35-39
[81] 刘清，姚惠源，张晖．生产γ2氨基丁酸乳酸菌的选育及发酵条件优化[J] ．氨基酸与生物资源，2004，26(1)：40-43
[82] Blaine,J.W.et al:Preparation and storage of lactic starterconcentrates[J] .Dairy Sci., 1971,54:755
[83] 张兰威，鄂志强，万海峰等．乳酸菌增菌培养基的筛选及干燥保护剂的选择[J] ．中国乳品工业，2000，28(2)：7-9
[84] 梁勇，杜敏，南庆贤等．浓缩型乳酸菌发酵剂的制备[J] ．中国乳品工业，1995，23(2)：132-133
[85] 乔发东，吴秀芳，南庆贤等．浓缩乳酸菌发酵剂的现状[J] ．中国乳品工业，1998，26(1)：22-23
[86] 贾士杰，生庆海．发酵乳及新型发酵剂的研究概述[J] ．中国奶牛，2000，(3)：45-48
[87] 周晓宏，廖永红．超浓缩乳酸菌发酵剂研究进展[J] ．粮油食品科技，1998，(1)：10-11
[88] 许本发．酸奶和乳酸菌饮料加工[M] ．北京：中国轻工业出版社，1994
[89] 刘会平，马丽珍，南庆贤．高效浓缩乳酸菌发酵剂[J] ．中国畜产与食品，1997，4(1)：34-35
[90] 乔发东，南庆贤．浓缩乳酸菌发酵剂制造工艺的研究[J] ．河南职技师院学报 1998，26(3)：50-52，55
[91] 刘云鹤．高效乳酸菌增殖培养基的筛选[J] ．淮海工学院学报，2003，12(4)：59-60
[92] 乔发东．超滤技术制备浓缩乳酸菌发酵剂的研究[J] ．中国畜产与食品，1998，5(3)：112
[93] 方祥，胡文锋，张辉华等．乳酸菌的分离、鉴定及其生长特性[J] ．中国微生态学杂志，2000，12(5)：262-264
[94] Cowman,R.A.,Westhoff, D.C.,Swaisgood,H.E. and Speck, M.L. Proteinase system of lactic streptocci..Relationship Ⅳbetween proteinase activity and growth at 32 [J] .Dairy Sci., ℃ 1969, 53(2):126-131
[95] 吕兵，张国农．乳酸菌发酵剂浓缩培养的研究[J] ．中国乳品工业，2001，29(3)：7-9
[96] USTUNOL Z. Effect of commrial interal pH control media on cheese yield starter culture growth and activity[J] .J Dairy Sci,1986,69:15
[97] John GHolt·Noel R Krieg, Peter H A Sneath. et al. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology(Ninth Edition)[M] .Baltimore: Williams& Wilkins.1994:175—201
[98] RALPH E.The technology of dairy products(2nd)[M] .Elsevier Science Pub lishers Ltd, 1997
[99] 山丽杰，田洪涛，贾英民等．浓缩型乳酸菌发酵剂制备中几个技术关键问题的探讨[J] ．中国乳品工业，2002，30(5)：66-69
[100] 高松伯．高效嗜酸乳杆菌发酵剂制备和嗜酸菌奶粉新工艺的研究[J] ．中国乳品工业，1991(4)
[101] Osbome,R.J.W.:Production of frozen concentrated cheesestarters by diffusion culture[J] .Journal of the Society of Dairy Technology. 1977,30(1):40
[102] 陈婕．乳酸链球菌过滤培养的研究[J] ．中国乳品工业，1991，2(19)：6-8
[103] 刘振民．采用微滤膜浓缩乳酸菌发酵液的工艺条件研究[J] ．食品与发酵工业，2004，30(10)：73-76
[104] Claudine Prigent et al.,Production of concentrated streptococcussalivarius subsp.Thermophilus by couplingcontinous fermentation and ultrafiltration[J] .Journal of Dairy Research, 1988,55:569-557
[105] 黄玲．对番茄酱中乳酸菌培养基的筛选研究[J] ．新疆农业科学，2004，41：90—91
[106] 李艾黎，代敏，霍贵成．浓缩型乳酸菌发酵剂的工业化生产[J] ．中国乳品工业，2005，33(6)：50-53
[107] 吕为群，骆承庠，刘书臣．乳酸菌在冷冻干燥过程中存活率影响因素探讨[J] ．中国乳品工业，1993，21(5)：217-220
[108] 李庆钟．微生物菌种保藏技术[M] ．北京：科学出版社，1989
[109] 杨洁彬，凌代文，郭兴华等．乳酸菌—生物学基础及应用[M] 北京：中国轻工业出版社，1996，75-83
[110] 吕兵，张国农，林金资．酸奶发酵剂速效干燥制备中保护剂的研究[J] ．中国乳品工业，1996，24(2)：3-5
[111] 乔发东．冷冻干燥浓缩乳酸菌发酵剂抗冷冻保护剂的选择[J] ．河南职技师院学报，1998，26(1)：43-46
[112] 乔发东，南庆贤，兰风英．浓缩乳酸菌发酵剂冷冻干燥介质的选择[J] ．中国乳品工业，1998，26(4)：13-15
[113] 陈声明，吕琴．微生物冷冻干燥的抗性机理[J] ．微生物学通报：1996(4)：236-238
[114] 吕兵，张国农等．嗜酸乳杆菌生物学特性及其发酵乳的研究[J] ．中国乳品工业，2002，30(5)：37-39
[115] 贺稚非，向瑞玺等．泡菜活性直投式乳酸菌发酵剂的研究[J] ．食品科学 2006，27(8)：191-197
[116] 史媛英，肖冬光．酸奶发酵剂高浓度培养的研究[J] ．天津轻工业学院学报，1999，1：20-25