两种虫草无性型原生质体融合及蜂头虫草发酵条件的研究
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摘要
本文对古尼虫草小孢变种的无性型古尼拟青霉小孢变种蛋氨酸
缺陷型（G106M）和蜂头虫草的无性型蜂头层束梗孢（HS01）的原
生质体形成、再生条件和融合以及蜂头层束梗孢的发酵条件进行了
研究。主要内容包括：G106营养缺陷型的筛选；G106M和HS01
原生质体形成和再生最佳条件的确定；原生质体的融合；HS01发
酵条件的确定。
G106孢子悬浮液经紫外线处理90s后，培养12hr，滤除发芽
的菌丝体，再培养、过滤后，滤液用紫外线处理20s，可使突变率
增加4倍。对其中两株生长较好的突变株进行鉴定，结果为蛋氨酸
缺陷型（G106M）和亮氨酸缺陷型（G106L）。稳定性检验结果表明这两
株缺陷型均可作为原生质体融合时具有遗传标记的融合亲本。
酶解试验结果显示：G106M采用1％溶壁酶与1％蜗牛酶混合
液作为脱壁酶，0.6M的氯化钠为渗透压稳定剂，从摇床培养的16hr
菌龄的菌丝体，酶解1.5～2hrs后，产量可达3.74×1O~7/ml。HS01
采用3％溶壁酶作为脱壁酶，培养48hr菌龄的菌丝体，酶解3.5hrs
后，原生质体产量可达2.5×10~7/ml。
再生试验结果表明：G106M以培养12hr菌龄的原生质体在0.6M
氯化钠的SDAY培养基上再生率最高，为17.92％；HS01以48hr菌
龄的原生质体在添加 0.6M硫酸镁的黄豆粉培养基上再生率最高，
为0.4％；两个菌株原生质体液体再生率都高于固体再生率，分别
达31.245％和19％。
用助融剂PEG进行原生质体融合的结果表明这两个不同种的菌
株之间没有发生两套基因组间的接触和交换，从而没有发生基因的
遗传重组，实现基因杂交；它们之间可能存在着核质之间的不相容
性或者营养不亲和性。
通过对原生质体形成过程的观察发现，GI 06M原生质体形成有
三种形式，一种是菌丝顶端先膨大，然后释放出原生质体，二是从
菌丝的亚顶端或中部的侧壁形成；三是菌丝原位释放出原生质体。
而HS01 的原生质体形成只观察到两种方式，即顶端释放和原位释
放。原生质体的再生方式有两种，一种是原生质体直接萌发长出芽
管，然后形成菌丝体，另一种是原生质体形成酵母状物，然后形成
菌丝。在原生质体再生形态观察时发现，凡是没有再生的原生质体
往往是单个分散的，凡是密集在一起的原生质体，其再生都比较整
齐。
在供试的7种碳源和7种氮源中，HS01对白砂糖和黄豆粉的
利用最好。进一步的正交试验确定了最佳培养基组成为：白砂糖
3％，黄豆粉 3％，复合维生素 B 31．4mg几。非营养性因子中研究了
起始pH、装液量和接种时菌体形态。结果表明最佳条件为：起始pH
为 6．8，适宜装液量为 60ml／250ml三角瓶，接种菌体形态为被高度
分散的菌球。
HS01 放大培养结果显示：该菌不太适宜在机械搅拌罐中进行
深层发酵。在7升气升式发酵罐进行深层发酵，能使发酵周期大为
缩短，可在144b出罐，干菌丝收获量为28．兆会‘Lc本文还对发酵
过程中的pH、还原糖及总氮量的变化进行了研究。
成分分析试验结果表明：HS01菌丝体中氨基酸种类和冬虫夏草
生药一致，但氨基酸总量和人体所必需氨基酸总量明显高于冬虫夏
草生药。
In the present thesis, isolation of auxotrophic mutants. protoplast
formation. regeneration and fusion of G106. a strain of Paecilomyces
gunnhi var minor,the anamorph of Cordyceps gunnii var. minor, and
HSO1. a strain of Hymenostilbe sphecophala, the anamorph of
Cordvceps sphecophala and fermentation conditions of HSO1 were
studied.
Conidium suspension of G106 was treated with UV for 90 seconds.
transferred into liquid basic medium.and cultured at 25~C for l2hr, and
then the culture was filtrated. This procedure was repeated twice, and
the filtrate was treated with UV for 20 seconds again. Thus mutation
rate increased 4 times. Two mutant strains that grew better than others
were selected. Auxotrophic types were identified as meqGlO6M) and
leu(G1O6L) respectively. Stability experiments showed the 2 strains
were stable and were used as parents of genetic marker for proplast
fusion.
The protoplast isolation experiments showed that the protoplast
yield was different under different conditions. Mycelial ages. enzyme
sstem. enzyme consistency and treatment time affected protoplast
formation. The optimal condition of G1O6M was l2hr old mycelium
treated with 1% lywallzyme plus 1% snailase for 2hrs, that of the strain
HSO1 was 48hr old mycelium treaded with 3% lywallzyme for 3.5hrs.
Some factors affected protoplast regeneration, including cultural
111
V
conditions, mycelium age, osmotic stabilizer, culture medium and so on.
The highest protoplast regeneration rate was 17.92%, which achieved
from l2hr old mycelium of G1O6M on SDAY medium containing 0.6M
NaC1 as osmotic stabilizer. For strain HSO 1, the highest regeneration
rate was 0.46%. The optimal condition was the protoplasts from old
48hr mycelium regenerated with 0.6M MgSO4 as osmotic stabilizer on
soybean powder medium. The experiments of culture conditions
showed that liquid regeneration rate was higher than solid significantly.
Three forms of protoplast formation were observed from G1O6M.
Protop1ast~. were released from (1) swelling of hyphal tips, (2) lateral
wall of mycelia at subapical or middle regions, (3) directly from
fragments of mycelia. However the HSOI had protoplast of only form (1)
and form (3). There were 2 basic patterns of regeneration observed.
One was hyphae regenerating directly from protoplast, the other was
the yeast-like cells formed by protoplast. An interesting phenomenon
was that almost all the gathering protoplasts regenerated but the
isolated protoplasts rarely regenerated.
Protoplasts of GIO6M and HSO1 were treated with PEG solutions.
The results of fusion test showed that the two strains are incompatible
with each other.
The fermentation tests of HSO1 showed that the optimal carbon
was commercial sugar and the optimal nitrogen source was soybean
powder. The optimal medium was determined through an orthogonal
A
test to be sugar 3%, soybean powder 3%, vitamin B complex 3 1.4mg
per liter. Non-nutritional factors including initial pH. liquid content,
and
缺陷型（G106M）和蜂头虫草的无性型蜂头层束梗孢（HS01）的原
生质体形成、再生条件和融合以及蜂头层束梗孢的发酵条件进行了
研究。主要内容包括：G106营养缺陷型的筛选；G106M和HS01
原生质体形成和再生最佳条件的确定；原生质体的融合；HS01发
酵条件的确定。
G106孢子悬浮液经紫外线处理90s后，培养12hr，滤除发芽
的菌丝体，再培养、过滤后，滤液用紫外线处理20s，可使突变率
增加4倍。对其中两株生长较好的突变株进行鉴定，结果为蛋氨酸
缺陷型（G106M）和亮氨酸缺陷型（G106L）。稳定性检验结果表明这两
株缺陷型均可作为原生质体融合时具有遗传标记的融合亲本。
酶解试验结果显示：G106M采用1％溶壁酶与1％蜗牛酶混合
液作为脱壁酶，0.6M的氯化钠为渗透压稳定剂，从摇床培养的16hr
菌龄的菌丝体，酶解1.5～2hrs后，产量可达3.74×1O~7/ml。HS01
采用3％溶壁酶作为脱壁酶，培养48hr菌龄的菌丝体，酶解3.5hrs
后，原生质体产量可达2.5×10~7/ml。
再生试验结果表明：G106M以培养12hr菌龄的原生质体在0.6M
氯化钠的SDAY培养基上再生率最高，为17.92％；HS01以48hr菌
龄的原生质体在添加 0.6M硫酸镁的黄豆粉培养基上再生率最高，
为0.4％；两个菌株原生质体液体再生率都高于固体再生率，分别
达31.245％和19％。
用助融剂PEG进行原生质体融合的结果表明这两个不同种的菌
株之间没有发生两套基因组间的接触和交换，从而没有发生基因的
遗传重组，实现基因杂交；它们之间可能存在着核质之间的不相容
性或者营养不亲和性。
通过对原生质体形成过程的观察发现，GI 06M原生质体形成有
三种形式，一种是菌丝顶端先膨大，然后释放出原生质体，二是从
菌丝的亚顶端或中部的侧壁形成；三是菌丝原位释放出原生质体。
而HS01 的原生质体形成只观察到两种方式，即顶端释放和原位释
放。原生质体的再生方式有两种，一种是原生质体直接萌发长出芽
管，然后形成菌丝体，另一种是原生质体形成酵母状物，然后形成
菌丝。在原生质体再生形态观察时发现，凡是没有再生的原生质体
往往是单个分散的，凡是密集在一起的原生质体，其再生都比较整
齐。
在供试的7种碳源和7种氮源中，HS01对白砂糖和黄豆粉的
利用最好。进一步的正交试验确定了最佳培养基组成为：白砂糖
3％，黄豆粉 3％，复合维生素 B 31．4mg几。非营养性因子中研究了
起始pH、装液量和接种时菌体形态。结果表明最佳条件为：起始pH
为 6．8，适宜装液量为 60ml／250ml三角瓶，接种菌体形态为被高度
分散的菌球。
HS01 放大培养结果显示：该菌不太适宜在机械搅拌罐中进行
深层发酵。在7升气升式发酵罐进行深层发酵，能使发酵周期大为
缩短，可在144b出罐，干菌丝收获量为28．兆会‘Lc本文还对发酵
过程中的pH、还原糖及总氮量的变化进行了研究。
成分分析试验结果表明：HS01菌丝体中氨基酸种类和冬虫夏草
生药一致，但氨基酸总量和人体所必需氨基酸总量明显高于冬虫夏
草生药。
In the present thesis, isolation of auxotrophic mutants. protoplast
formation. regeneration and fusion of G106. a strain of Paecilomyces
gunnhi var minor,the anamorph of Cordyceps gunnii var. minor, and
HSO1. a strain of Hymenostilbe sphecophala, the anamorph of
Cordvceps sphecophala and fermentation conditions of HSO1 were
studied.
Conidium suspension of G106 was treated with UV for 90 seconds.
transferred into liquid basic medium.and cultured at 25~C for l2hr, and
then the culture was filtrated. This procedure was repeated twice, and
the filtrate was treated with UV for 20 seconds again. Thus mutation
rate increased 4 times. Two mutant strains that grew better than others
were selected. Auxotrophic types were identified as meqGlO6M) and
leu(G1O6L) respectively. Stability experiments showed the 2 strains
were stable and were used as parents of genetic marker for proplast
fusion.
The protoplast isolation experiments showed that the protoplast
yield was different under different conditions. Mycelial ages. enzyme
sstem. enzyme consistency and treatment time affected protoplast
formation. The optimal condition of G1O6M was l2hr old mycelium
treated with 1% lywallzyme plus 1% snailase for 2hrs, that of the strain
HSO1 was 48hr old mycelium treaded with 3% lywallzyme for 3.5hrs.
Some factors affected protoplast regeneration, including cultural
111
V
conditions, mycelium age, osmotic stabilizer, culture medium and so on.
The highest protoplast regeneration rate was 17.92%, which achieved
from l2hr old mycelium of G1O6M on SDAY medium containing 0.6M
NaC1 as osmotic stabilizer. For strain HSO 1, the highest regeneration
rate was 0.46%. The optimal condition was the protoplasts from old
48hr mycelium regenerated with 0.6M MgSO4 as osmotic stabilizer on
soybean powder medium. The experiments of culture conditions
showed that liquid regeneration rate was higher than solid significantly.
Three forms of protoplast formation were observed from G1O6M.
Protop1ast~. were released from (1) swelling of hyphal tips, (2) lateral
wall of mycelia at subapical or middle regions, (3) directly from
fragments of mycelia. However the HSOI had protoplast of only form (1)
and form (3). There were 2 basic patterns of regeneration observed.
One was hyphae regenerating directly from protoplast, the other was
the yeast-like cells formed by protoplast. An interesting phenomenon
was that almost all the gathering protoplasts regenerated but the
isolated protoplasts rarely regenerated.
Protoplasts of GIO6M and HSO1 were treated with PEG solutions.
The results of fusion test showed that the two strains are incompatible
with each other.
The fermentation tests of HSO1 showed that the optimal carbon
was commercial sugar and the optimal nitrogen source was soybean
powder. The optimal medium was determined through an orthogonal
A
test to be sugar 3%, soybean powder 3%, vitamin B complex 3 1.4mg
per liter. Non-nutritional factors including initial pH. liquid content,
and
引文
[1] Barski G, C R Hebd. Seances Acad sce, 1960, 251: 1825～1827
[2] 张爱文、吴正铠、刘维真。真菌原生质体融合技术的新进展。微生物学通报，1990，17(5)：298～300
[3] Ferenczy L. et al.: Nature Lond, 1974, 248: 793
[4] 辛明秀、马玉娥。微生物的原生质体融合及应用。微生物学通报，1995，22(6)：365～370
[5] Kao K N, Michayluk M R. Method for high-frequency intergeneric fusion of plant protoplasts. 1974, Planta, 115: 355～367
[6] 谌斌、梁宗琦、刘爱英。丝状真菌原生质体融合中亲本标记及融合子检出。贵州农业科学，1994，(4)：61～64
[7] 蒲蛰龙、李增智主编。昆虫真菌学，1996，安徽科学技术出版社出版。
[8] 肖在勤、谭伟、彭卫红等。金针菇与凤尾菇科间原生质体融合研究。食用菌学报，1998，5 (1)：6～12
[9] 刘振岳、董毓琨、泰立芳等。平菇与香菇属间原生质体融合的研究。遗传学报，1991，18 (4)：352～357
[10] 谌斌、刘爱英、梁宗琦。布氏白僵菌和藤仓赤霉菌的原生质体融合研究。贵州农学院丛刊，1996，(4)：101～110
[11] Kiyohara, K. et al. Intergeneric hybridization between Monascus anka and Aspergillus oryzae by protoplast fusion. Apllied Microbiology and Biotechnology. 1990, 33: 671～676
[12] Pham, L. J. et al. Intergeneric protoplast fusion of Trichoderma reesei and Penicillium funiculosum for improved Cellulase Production. Enzyme Engineering 10. 1990, 575～581
[13] Kirimura. K. et al. Intergeneric protoplast fusion between Aspergillus niger and Trichoderma viride. Agric. Biol. Chem. 1988. 52(5): 1327～1329
[14] Nutsubidze, N. N.; Klesov, A. A. Isolation and fusion of fungal protoplasts. Soviet-biotechnology (USA). 1990, (3): 75-84
[15] 刘士旺、梁宗琦、刘爱英。羊肚菌原生质体制备及其再生。西南农业学报，1997，10(4)：75～80
[16] 胡伟、孔繁翔、桑伟莲。菌根真菌——赭丝膜伞原生质体分离与再生研究。菌物系统，1998，17 (3)：262～268
[17] 农向群、吴正铠。丝状真菌原生质体的分离、再生和融合。中国虫生真菌研究与应用，第1卷，1988：44～53
[18] 王赓、杜连祥。新月弯孢霉原生质体制备及再生条件的研究。微生物学通报，1999，26(1)：21～23
[19] 张集慧、郭顺星、曹文芩等。金钱莲——促生真菌原生质体制备和再生研究。微生物学通报，1999，26(5)：321～323
[20] 董昌金、王卫东、李涛。灵芝原生质体形成与再生的研究。中国食用菌，1999，18(1)：8～9
[21] 王景林、殷勤燕、陈宗泽等。康氏木酶B-7和黑曲霉X-15原生质体的形成和再生。微生物学杂志，1999，19(1)：19～23
[22] Peberdy J. F. In Microbiol and Plant Protoplasts. Academic Press, London, 1975, 39～50
[23] 韩黎、陈世平、索继红。微小根毛霉致病株的原生质体形成条件。微生物学通报，1998，25(1)：27～29
[24] 陈漱涢、曹军卫。几种丝状真菌原生质体的形成与再生。真菌学报，1986，5(2)：117～123
[25] Hong soon-woo, et al. Formation and regeneration of protoplasts in Lentinus edodes. Mushroom, 1985, 5(4): 4～10
[26] 闫培生。食用真菌原生质体融合育种的研究进展，莱阳农学院学报，1991，8(3)：202～205
[27] 向世华。果香地霉原生质体的释放与再生。微生物学杂志，1989，9(1)：24～30
[28] 邓春生、吴正铠、叶正楚。蜡蚧轮枝孢原生质体再生条件的研究。中国虫生真菌研究与应用，第2卷，1991：180～183
[29] 阮一俊。黑木耳菌丝原生质体再生研究简报。1986，食用菌，(2)：8
[30] Yoshihiko L. et al. A method for the hish yield preparation of and high frequency regeneration of Bcaidio mycetes protoplasts. Agric Biol Chem, 1986, 50(7): 1855～1861
[31] 农向群、吴正铠、包建中。金龟子绿僵菌原生质体形成和再生的研究。微生物学通报，1990，17 (1)：76～80
[32] 邢来君、张军、孙光等。米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验，真菌学报，1987，6(4)：242～247
[33] 杨慧英、吴志丹、叶舟等，黑曲霉原生质体的形成、分离与再生的研究。遗传，1992，14 (1)：31～34
[34] 单志萍、姜文候、孟妤。丝状真菌三孢布拉霉原生质体制备及再生条件的研究。江苏食品与发酵，1999，(4)：1～4
[35] 邓春生、吴正铠、叶正楚。蜡蚧轮枝孢原生质体形成和再生的研究。中国虫生真菌研究与应用，第2卷，1991：176～179
[36] 高东主编。微生物遗传学。1996，山东大学出版社。
[37] Kiguchi T., Yanagi S. O. Interspecific heterokaryon and fruit body formation in Coprinus macrorhizus by protoplast fusion of auxotrophic mutants. Appl Microbiol Biotechnol 1985, 22: 121～127.
[38] 大政正武等。侧耳种间原生质体融合菌株的子实体形成。国外食用菌，1991，(1)：42～43
[39] 车明秀、蒋亚平。米曲霉原生质体融合及杂合二倍体的形成。微生物通报，1994，21(3)：143～148
[40] 陈劲春、尉渤、周代福。原生质体技术在工业微生物育种中的应用。工业微生物，1997，27(4)：34～36，43
[41] 吴小平。原生质体技术在食用菌遗传育种中的应用。食用菌学报，1999，6(3)：49～53
[42] 张志光、张天晓、邹寿长等。丝状真菌原生质体技术的研究和应用(Ⅲ)营养缺陷型和抗药性标记的研究，中国菌物学会成立大会学术讨论会论文及论文摘要，1993：298～300
[43] 马玉银，顾庆龙。侧耳属种间原生质体融合杂种选育研究。食用菌学报，1994，1(1)：17～21
[44] 曹文芩、郭顺星、徐锦堂等。灵芝原生质体制备、再生及融合的研究。菌物系统，1998，17(1)：51y～56
[45] 朱平、何惠霞、朱慧欣等。麦角菌与雀稗麦角菌种间灭活原生质体融合。中国医药工业杂志，1999，30(8)：342～344，362
[46] Peng W. X., Lu D. J. Studies on the breeding of mushrooms by means of inactivated protoplast fusion I. Acta Mycologica Sinica, 1987, 184～192
[47] Peberdy J F. Fungal cell walls-a review. In: Biochemistry of Cell Walls and Membrans in Fungi (ed. P. J. Kuhn & A. P. J. Trince), Heidelberg: Springer Verlag. 1989, 201～208
[48] 张长铠、梁岩、秦红敏。香菇原生质体融合及融合子的鉴定。微生物学通报，1995，22(2)：67～71
[49] 梁枝荣、赵良启。凤尾菇和盖囊侧耳原生质体非对称融合的研究。菌物系统，1999，18(4)：440～444
[50] 张天晓、张志光、罗定军等。丝状真菌原生质体技术的研究和应用(Ⅳ)黑曲霉原生质体灭活的研究。中国菌物学会成立大会学术讨论会论文及论文摘要，1993，300～301。
[51] 燕克勤、成亚利、朱宝成等。荧光标记紫孢侧耳和糙皮侧耳原生质体融合研究。食用菌学报，1997，4(4)：25～29
[52] 成亚利、朱宝成、李亮亮等。荧光标记金针菇原生质体融合。微生物学通报，1997，24(6)：331～333
[53] 彭卫宪、陆大京。用灭活原生质体融合进行高温香菇育种 Ⅰ．融合产物的选出及其鉴定。真菌学报，1987，6(3)：184～192
[54] 邢来君、温廷益、罗会文等。米曲霉原生质体的营养互补融合及二倍体的诱发分离。真菌学报，1989，8(3)：227～232
[55] 贺建超、贺榆霞。平菇灭活原生质体融合育种研究。食用菌，1986，(2)：10～11
[56] 李玉详、谢涟琪、李惠君。香菇种间原生质体融合。南京农业大学学报。1997，20(2)：58～62
[57] 焦瑞身。细胞工程。1994，化学工业出版社。
[58] 三浦清。张耀红译。应用生物技术培育新的食用菌菌种。国外食用菌，1992，(1)：39～44
[59] 邱景芸、吴月嫦、廖汉泉等。凤尾菇和桃红平菇种间原生质体电融合获杂种菌株。1995，11(2)：162～166
[60] 周正红、方善康。黑曲霉原生质体电融合研究。生物工程学报，1993，9(3)：241～246
[61] 程东升、李国兰。电诱导细胞融合仪的研制及在真菌原生质体融合中的应用。微生物学通报，1995，22(1)：14～17
[62] Ushijima S. et al. Improvement of industrial Aspesgillus fungi. Biotech Handbook 7. Aspergillus. Edt. by J. E. Smith. Plenum Press NY, 1991, 41.
[63] 王建华、赵学慧。螯合剂对原生质体融合的影响。生物工程学报，1998，14(1)：112～115
[64] Karube I, Tamiya E, Matsuoka H. New cell fusion method using polymer membrane. FEBS Lett 1984, 175(1): 13-15
[65] 周东坡，平文祥。微生物原生质体融合。1990，黑龙江科学技术出版社
[66] 杨新美主编。食用菌研究法。1998，中国农业出版社
[67] 王建华、赵学慧。曲霉原生质体融合子生物学性状研究。菌物系统，1999，18(3)：301～306
[68] 曾荣、刘祖同、张树庭。食用菌灭活原生质体电融合及属间融合产物的鉴定分析。微生物学报，1995，35(2)：149～154
[69] Kawamoto H, Aizawa K. Appl. Ent. Zool., 1986, Vol. 21: 531～538
[70] Shimizu S. Protoplast fusion of insect pathogenic fungi. 1981, 401～413
[71] Pfeifer T. A, Khachatourians G. G. The formation of protoplasts from Beauveria bassiana. Appl Microbiol Biotechnol, 1987(26): 248～253.
[72] 吴正铠、邓春生、张爱文。白僵菌原生质体形成条件的研究。中国虫生真菌研究与应用，第1卷，1988：119—125
[73] Couteaudier Y., Viaud M, Riba G. Genetic nature, stability, and improved virulence of hybrids from protoplast fusion in Beauveria. Microb Ecol 1996, 32(1): 1～10
[74] Viaud, M., Couteaudier, Y., Riba, G. Molecular analysis of hypervirulent somatic hybrids of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Beauveria sulfurescens. Applied-and-environmental-microbiology(USA). 1998, 64(1): 88～93.
[75] 曾大兴、梁宗琦、刘爱英。哈栖木霉和球孢白僵菌原生质体的形成和再生。贵州农学院丛刊，1996，(4)：94～100
[76] 时连根。家蚕白僵菌原生质体分离条件的研究。蚕业科学，1997，23(2)：100～103
[77] 时连根。家蚕病原白僵菌原生质体的再生回复研究。蚕业科学，1999，25(1)：35～38
[78] 时连根。家蚕病原球孢白僵菌的原生质体再生回复及核型分析。菌物系统，2000，19(2)：223～229
[79] Riba G. Combinasion apres heteroceryose chez le champignon entomopathogene Paecilomyces fumosorosea(Deuteromycete). Entomophaga, 1978, 23: 417～421
[80] Shimizu S, et al. Protoplast fusion of an entomopathogenic fungus, Paecilomyces fumosoroseus, Japanese-Journal-of-Applied-Entomology-and-Zoology(Japan). 1989, 33(2): 92～94
[81] 清水进等。昆虫致病真菌玫烟色拟青霉菌原生质体的分离和复位。农业新技术新方法译丛，1990，(4)：36～38
[82] 戴美学，奚新伟。灰绿拟青霉U—2原生质体形成和再生条件的研究。生物技术，1997，7(4)：34～37
[83] 张永军、刘爱英、梁宗琦。蝉拟青霉原生质体形成与再生。贵州农业科学，1998，26(5)：1～4
[84] Silveira W. D., Azevedo J. L. Protoplast fusion and genetic recombination in Meterhizium anisopliae. Enzyme Microbiol Technol, 1987, (9): 149～152
[85] 何社辉、苏晓庆。灭蚊真菌——大链壶菌原生质体形成和再生的研究。真菌学报，1995，14(3)：196～201
[86] 梁宗琦、刘爱英。古尼虫草的人工培养。贵州农学院丛刊，1996，(4)：67～73
[87] 吴德龙、王卫芳、薛芳森等。亚香棒虫草的研究。江西农业大学学报，1997，19(2)31～36
[88] 熊淑玲、刘波平、童迎东。亚香棒虫草和冬虫夏草化学成分的测定与比较。1997，19(2)：27～30
[89] 张显科、王玉柱、刘文霞。蛹虫草的研究Ⅳ 蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较。辽宁大学学报(自然科学版)，1996，23(4)：80～83
[90] 焦彦朝、梁宗琦、刘爱英。戴氏虫草无性型的研究—Ⅰ抗生素。贵州农学院丛刊，1994，增刊：54～56
[91] 焦彦朝，梁宗琦，刘爱英。戴氏虫草无性型的研究—Ⅱ多糖。贵州农学院丛刊，1994，增刊：57～62
[92] 焦彦朝，梁宗琦，刘爱英。虫草生物活性物质研究概况。贵州农业科学，1990，(3)：53～58
[93] 杨世海，张红兵，赵英。冬虫夏草研究的新进展。中草药，1994，25(9)：488～492
[94] 肖宏亮，高孔荣，谭盈科。冬虫夏草及其菌丝体研究进展。中国食用菌，1997，16(2)：3～5
[95] 梁佩琼。中国冬虫夏草。微生物学杂志，1986，(6)：68～72
[96] 藏其中，何光星，郑振源。虫草多糖的药理作用。中草药，1985，16(7)：18～23
[97] 李连德。虫草深层发酵与虫草多糖研究。1997，安徽农业大学硕士论文
[98] 尚德静，王孝敏。冬虫夏草深层发酵的研究。中国食用菌，1996，15(6)：48～49
[99] 罗信昌。冬虫夏草研究进展。中国食用菌，1994，13(4)：3～5
[100] 张长铠，赵友春，吴志红。冬虫夏草菌丝生长的营养要求。微生物学通报，1992，19(3)：129～133
[101] 姜文侠、孙武岳、马琳等。蝙蝠蛾拟青霉菌丝体发酵的研究。微生物学通报，1999，26(3)：192～194
[102] 张显耻，何道珍。中国冬虫夏草液体发酵工艺初探．食用菌，1995，6(5)：5～6
[103] 陈传盈，冯观泉，许尧兴。冬虫夏草工业深层发酵研究．中草药，1992，23(8)：409～411
[104] 王青牡、孙姝媛。我国液体培养药用虫草菌丝体的研究进展。食用菌，1997，19(3)：2～4
[105] 钟士清、胡文锋、罗国威等。冬虫夏草头孢菌菌丝体液体发酵条件的研究。华南农业大学学报，1995，16(3)：108～111
[106] 尚德静，王孝敏。冬虫夏草深层发酵的研究．中国食用菌，1996，15(6)：48～49
[107] 郭成金、李爱民、孟庆恒等。冬虫夏草菌丝体深层培养及产品开发。食品科学，1996，17(2)：21～23
[108] 刘杰麟，梁宗琦，刘爱英。古尼虫草无性型菌丝生长条件的研究。贵州农学院学报，1989；(2)：20～25
[109] 江晓路、葛蓓蕾。北虫草菌Y3液体深层发酵的研究。食品与发酵工业，1997，23(6)：31～35
[110] 李信、许雷、裴鑫德。蛹虫草菌丝体液体培养基的优化和发酵条件的研究。核农学报，1998，12(1)：35～40
[111] 李维光、娄虹、林建群等。北冬虫夏草液体深层发酵最适营养的研究。辽宁大学学报(自然科学版)，1997，24(3)：34～38
[112] 李宗军、温琼英。蛹虫草无性型的研究Ⅱ．液体发酵培养苗丝体及胞外多糖的提制。湖南农业大学学报，1998，24(5)：375～379
[113] 俞俊棠、唐孝宣主编。生物工艺学(上册)。1991，华东化工学院出版社
[114] 梁宗琦。虫草及其人工培养。贵州农学院丛刊，1994，增刊：1～21
[115] 颜方贵。发酵微生物学。1993，北京农业大学出版社
[116] 周德庆。微生物学教程。1998，高等教育出版社
[117] Smith J. E, et al. Industrial fungal genetics and strain seliction. The Filamentous Fungi, 1983, 4: 358～361
[118] 徐飞。我国深层培养虫草菌丝体的药用研究进展。药学通报，1992，23(9)：521～525
[119] 刘正南，郑淑芳。中国药用真菌的现状和种质资源。中国食用菌，1996，15(5)：20～22
[120] 李增智、宣言、刘玉珍。几种表面活性剂及营养物对虫生真菌孢子萌发的影响。安徽农业大学学报，1996，23(3)：355～359
[121] 盛祖嘉编著。微生物遗传学(第二版)。1989，科学出版社
[122] 冯清平，葛瑞昌主编。应用微生物技术。1984，甘肃人民出版社
[123] 马玉银，佛罗里达侧耳营养缺陷型的诱变筛选。食用菌，11～12
[124] 郝勃。利用制酶菌素浓缩处理高频率地检出黑曲霉营养缺陷型突变株。生物学杂志，1997，(2)：14～15，5
[125] 李明春，邢来君。γ—亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生。菌物系统，1997，16(1)：24～29
[126] 李武军、郑幼霞、王洪洲等。赤霉素产生菌藤仓赤霉原生质体的形成和再生。真菌学报，1992，11(3)：221～228
[127] 李农昌、樊美珍、李春如等。白僵菌有关培养条件及其与毒力关系的研究。安徽农业大学学报，1996，23(3)：254～259
[128] 林维宣主编。试验设计方法。1995，大连海事大学出版社
[129] 陈连庆，裴致达。培养液pH值对竹荪菌丝体增殖的影响。中国食用菌，1995，14(6)：21～23
[130] 李平作。灵芝深层发酵生产生物活性物质的研究。无锡轻工大学博士学位论文。1997，33～36
[131] 吴茜茜。地生枝顶孢胞外多糖发酵条件与多糖提取工艺的研究。安徽农业大学硕士论文，2000，33～36
[132] 张龙翔、张庭芳、李令嫒编。生物化学实验方法和技术。1981，人民教育出版社
[133] 李如亮主编。生物化学实验。1998，武汉大学出版社出版
[134] 王敏、路福平、蒋岳等。新月弯孢霉原生质体的形成与11 β—羟基化反应。微生物学杂志，2000，20(9)：35～36，62
[135] 张汉波、丁骅孙、程立忠等，出芽短梗霉的原生质体形成及再生研究。云南大学学报(自然科学版)。1999，21(3)：202～204
[136] Ferenc K., Peberdy J. F. Further studies on protoplast fusion and interspecific hybridization within the Aspergillus nidulans group. 1984, Journal of General Microbiology, 130: 2229～2236
[137] 郝勃，阎凉泰、陈华癸。2 株黑曲霉原生质体的形成和再生过程观察。华中农业大学学报，1997，16(1)：48～51
[138] 王镨，何志勇。香菇原生质体的分离和再生行为。浙江农业大学学报，1996，22(3)：321～324
[139] 王克荣、成桂英、刘怡君等。栗疫病菌的营养体亲和性基因和dsRNAs对病毒传播的影响。菌物系统，1997，16(1)：30～35
[140] 闫培生、李桂舫、蒋家慧等。大球盖菇原生质体再生及单核化特性的研究。菌物系统，2001，20(1)：107～110
[141] 叶满红。关于白砂糖灰分问题的探讨。甘蔗糖业，1998，(5)：49～62
[143] 中国医学科学院卫生研究所编著。食物成分表。1983，人民卫生出版社
[144] 陈天寿主编。微生物培养基的制造与应用。1995，中国农业出版社
[145] 刘杰麟，梁宗琦，刘爱英。古尼虫草子实体的人工培养。西南农业学报，1990，3(4)：6～10
[2] 张爱文、吴正铠、刘维真。真菌原生质体融合技术的新进展。微生物学通报，1990，17(5)：298～300
[3] Ferenczy L. et al.: Nature Lond, 1974, 248: 793
[4] 辛明秀、马玉娥。微生物的原生质体融合及应用。微生物学通报，1995，22(6)：365～370
[5] Kao K N, Michayluk M R. Method for high-frequency intergeneric fusion of plant protoplasts. 1974, Planta, 115: 355～367
[6] 谌斌、梁宗琦、刘爱英。丝状真菌原生质体融合中亲本标记及融合子检出。贵州农业科学，1994，(4)：61～64
[7] 蒲蛰龙、李增智主编。昆虫真菌学，1996，安徽科学技术出版社出版。
[8] 肖在勤、谭伟、彭卫红等。金针菇与凤尾菇科间原生质体融合研究。食用菌学报，1998，5 (1)：6～12
[9] 刘振岳、董毓琨、泰立芳等。平菇与香菇属间原生质体融合的研究。遗传学报，1991，18 (4)：352～357
[10] 谌斌、刘爱英、梁宗琦。布氏白僵菌和藤仓赤霉菌的原生质体融合研究。贵州农学院丛刊，1996，(4)：101～110
[11] Kiyohara, K. et al. Intergeneric hybridization between Monascus anka and Aspergillus oryzae by protoplast fusion. Apllied Microbiology and Biotechnology. 1990, 33: 671～676
[12] Pham, L. J. et al. Intergeneric protoplast fusion of Trichoderma reesei and Penicillium funiculosum for improved Cellulase Production. Enzyme Engineering 10. 1990, 575～581
[13] Kirimura. K. et al. Intergeneric protoplast fusion between Aspergillus niger and Trichoderma viride. Agric. Biol. Chem. 1988. 52(5): 1327～1329
[14] Nutsubidze, N. N.; Klesov, A. A. Isolation and fusion of fungal protoplasts. Soviet-biotechnology (USA). 1990, (3): 75-84
[15] 刘士旺、梁宗琦、刘爱英。羊肚菌原生质体制备及其再生。西南农业学报，1997，10(4)：75～80
[16] 胡伟、孔繁翔、桑伟莲。菌根真菌——赭丝膜伞原生质体分离与再生研究。菌物系统，1998，17 (3)：262～268
[17] 农向群、吴正铠。丝状真菌原生质体的分离、再生和融合。中国虫生真菌研究与应用，第1卷，1988：44～53
[18] 王赓、杜连祥。新月弯孢霉原生质体制备及再生条件的研究。微生物学通报，1999，26(1)：21～23
[19] 张集慧、郭顺星、曹文芩等。金钱莲——促生真菌原生质体制备和再生研究。微生物学通报，1999，26(5)：321～323
[20] 董昌金、王卫东、李涛。灵芝原生质体形成与再生的研究。中国食用菌，1999，18(1)：8～9
[21] 王景林、殷勤燕、陈宗泽等。康氏木酶B-7和黑曲霉X-15原生质体的形成和再生。微生物学杂志，1999，19(1)：19～23
[22] Peberdy J. F. In Microbiol and Plant Protoplasts. Academic Press, London, 1975, 39～50
[23] 韩黎、陈世平、索继红。微小根毛霉致病株的原生质体形成条件。微生物学通报，1998，25(1)：27～29
[24] 陈漱涢、曹军卫。几种丝状真菌原生质体的形成与再生。真菌学报，1986，5(2)：117～123
[25] Hong soon-woo, et al. Formation and regeneration of protoplasts in Lentinus edodes. Mushroom, 1985, 5(4): 4～10
[26] 闫培生。食用真菌原生质体融合育种的研究进展，莱阳农学院学报，1991，8(3)：202～205
[27] 向世华。果香地霉原生质体的释放与再生。微生物学杂志，1989，9(1)：24～30
[28] 邓春生、吴正铠、叶正楚。蜡蚧轮枝孢原生质体再生条件的研究。中国虫生真菌研究与应用，第2卷，1991：180～183
[29] 阮一俊。黑木耳菌丝原生质体再生研究简报。1986，食用菌，(2)：8
[30] Yoshihiko L. et al. A method for the hish yield preparation of and high frequency regeneration of Bcaidio mycetes protoplasts. Agric Biol Chem, 1986, 50(7): 1855～1861
[31] 农向群、吴正铠、包建中。金龟子绿僵菌原生质体形成和再生的研究。微生物学通报，1990，17 (1)：76～80
[32] 邢来君、张军、孙光等。米曲霉两株营养缺陷型原生质体的形成和再生的条件实验，真菌学报，1987，6(4)：242～247
[33] 杨慧英、吴志丹、叶舟等，黑曲霉原生质体的形成、分离与再生的研究。遗传，1992，14 (1)：31～34
[34] 单志萍、姜文候、孟妤。丝状真菌三孢布拉霉原生质体制备及再生条件的研究。江苏食品与发酵，1999，(4)：1～4
[35] 邓春生、吴正铠、叶正楚。蜡蚧轮枝孢原生质体形成和再生的研究。中国虫生真菌研究与应用，第2卷，1991：176～179
[36] 高东主编。微生物遗传学。1996，山东大学出版社。
[37] Kiguchi T., Yanagi S. O. Interspecific heterokaryon and fruit body formation in Coprinus macrorhizus by protoplast fusion of auxotrophic mutants. Appl Microbiol Biotechnol 1985, 22: 121～127.
[38] 大政正武等。侧耳种间原生质体融合菌株的子实体形成。国外食用菌，1991，(1)：42～43
[39] 车明秀、蒋亚平。米曲霉原生质体融合及杂合二倍体的形成。微生物通报，1994，21(3)：143～148
[40] 陈劲春、尉渤、周代福。原生质体技术在工业微生物育种中的应用。工业微生物，1997，27(4)：34～36，43
[41] 吴小平。原生质体技术在食用菌遗传育种中的应用。食用菌学报，1999，6(3)：49～53
[42] 张志光、张天晓、邹寿长等。丝状真菌原生质体技术的研究和应用(Ⅲ)营养缺陷型和抗药性标记的研究，中国菌物学会成立大会学术讨论会论文及论文摘要，1993：298～300
[43] 马玉银，顾庆龙。侧耳属种间原生质体融合杂种选育研究。食用菌学报，1994，1(1)：17～21
[44] 曹文芩、郭顺星、徐锦堂等。灵芝原生质体制备、再生及融合的研究。菌物系统，1998，17(1)：51y～56
[45] 朱平、何惠霞、朱慧欣等。麦角菌与雀稗麦角菌种间灭活原生质体融合。中国医药工业杂志，1999，30(8)：342～344，362
[46] Peng W. X., Lu D. J. Studies on the breeding of mushrooms by means of inactivated protoplast fusion I. Acta Mycologica Sinica, 1987, 184～192
[47] Peberdy J F. Fungal cell walls-a review. In: Biochemistry of Cell Walls and Membrans in Fungi (ed. P. J. Kuhn & A. P. J. Trince), Heidelberg: Springer Verlag. 1989, 201～208
[48] 张长铠、梁岩、秦红敏。香菇原生质体融合及融合子的鉴定。微生物学通报，1995，22(2)：67～71
[49] 梁枝荣、赵良启。凤尾菇和盖囊侧耳原生质体非对称融合的研究。菌物系统，1999，18(4)：440～444
[50] 张天晓、张志光、罗定军等。丝状真菌原生质体技术的研究和应用(Ⅳ)黑曲霉原生质体灭活的研究。中国菌物学会成立大会学术讨论会论文及论文摘要，1993，300～301。
[51] 燕克勤、成亚利、朱宝成等。荧光标记紫孢侧耳和糙皮侧耳原生质体融合研究。食用菌学报，1997，4(4)：25～29
[52] 成亚利、朱宝成、李亮亮等。荧光标记金针菇原生质体融合。微生物学通报，1997，24(6)：331～333
[53] 彭卫宪、陆大京。用灭活原生质体融合进行高温香菇育种 Ⅰ．融合产物的选出及其鉴定。真菌学报，1987，6(3)：184～192
[54] 邢来君、温廷益、罗会文等。米曲霉原生质体的营养互补融合及二倍体的诱发分离。真菌学报，1989，8(3)：227～232
[55] 贺建超、贺榆霞。平菇灭活原生质体融合育种研究。食用菌，1986，(2)：10～11
[56] 李玉详、谢涟琪、李惠君。香菇种间原生质体融合。南京农业大学学报。1997，20(2)：58～62
[57] 焦瑞身。细胞工程。1994，化学工业出版社。
[58] 三浦清。张耀红译。应用生物技术培育新的食用菌菌种。国外食用菌，1992，(1)：39～44
[59] 邱景芸、吴月嫦、廖汉泉等。凤尾菇和桃红平菇种间原生质体电融合获杂种菌株。1995，11(2)：162～166
[60] 周正红、方善康。黑曲霉原生质体电融合研究。生物工程学报，1993，9(3)：241～246
[61] 程东升、李国兰。电诱导细胞融合仪的研制及在真菌原生质体融合中的应用。微生物学通报，1995，22(1)：14～17
[62] Ushijima S. et al. Improvement of industrial Aspesgillus fungi. Biotech Handbook 7. Aspergillus. Edt. by J. E. Smith. Plenum Press NY, 1991, 41.
[63] 王建华、赵学慧。螯合剂对原生质体融合的影响。生物工程学报，1998，14(1)：112～115
[64] Karube I, Tamiya E, Matsuoka H. New cell fusion method using polymer membrane. FEBS Lett 1984, 175(1): 13-15
[65] 周东坡，平文祥。微生物原生质体融合。1990，黑龙江科学技术出版社
[66] 杨新美主编。食用菌研究法。1998，中国农业出版社
[67] 王建华、赵学慧。曲霉原生质体融合子生物学性状研究。菌物系统，1999，18(3)：301～306
[68] 曾荣、刘祖同、张树庭。食用菌灭活原生质体电融合及属间融合产物的鉴定分析。微生物学报，1995，35(2)：149～154
[69] Kawamoto H, Aizawa K. Appl. Ent. Zool., 1986, Vol. 21: 531～538
[70] Shimizu S. Protoplast fusion of insect pathogenic fungi. 1981, 401～413
[71] Pfeifer T. A, Khachatourians G. G. The formation of protoplasts from Beauveria bassiana. Appl Microbiol Biotechnol, 1987(26): 248～253.
[72] 吴正铠、邓春生、张爱文。白僵菌原生质体形成条件的研究。中国虫生真菌研究与应用，第1卷，1988：119—125
[73] Couteaudier Y., Viaud M, Riba G. Genetic nature, stability, and improved virulence of hybrids from protoplast fusion in Beauveria. Microb Ecol 1996, 32(1): 1～10
[74] Viaud, M., Couteaudier, Y., Riba, G. Molecular analysis of hypervirulent somatic hybrids of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Beauveria sulfurescens. Applied-and-environmental-microbiology(USA). 1998, 64(1): 88～93.
[75] 曾大兴、梁宗琦、刘爱英。哈栖木霉和球孢白僵菌原生质体的形成和再生。贵州农学院丛刊，1996，(4)：94～100
[76] 时连根。家蚕白僵菌原生质体分离条件的研究。蚕业科学，1997，23(2)：100～103
[77] 时连根。家蚕病原白僵菌原生质体的再生回复研究。蚕业科学，1999，25(1)：35～38
[78] 时连根。家蚕病原球孢白僵菌的原生质体再生回复及核型分析。菌物系统，2000，19(2)：223～229
[79] Riba G. Combinasion apres heteroceryose chez le champignon entomopathogene Paecilomyces fumosorosea(Deuteromycete). Entomophaga, 1978, 23: 417～421
[80] Shimizu S, et al. Protoplast fusion of an entomopathogenic fungus, Paecilomyces fumosoroseus, Japanese-Journal-of-Applied-Entomology-and-Zoology(Japan). 1989, 33(2): 92～94
[81] 清水进等。昆虫致病真菌玫烟色拟青霉菌原生质体的分离和复位。农业新技术新方法译丛，1990，(4)：36～38
[82] 戴美学，奚新伟。灰绿拟青霉U—2原生质体形成和再生条件的研究。生物技术，1997，7(4)：34～37
[83] 张永军、刘爱英、梁宗琦。蝉拟青霉原生质体形成与再生。贵州农业科学，1998，26(5)：1～4
[84] Silveira W. D., Azevedo J. L. Protoplast fusion and genetic recombination in Meterhizium anisopliae. Enzyme Microbiol Technol, 1987, (9): 149～152
[85] 何社辉、苏晓庆。灭蚊真菌——大链壶菌原生质体形成和再生的研究。真菌学报，1995，14(3)：196～201
[86] 梁宗琦、刘爱英。古尼虫草的人工培养。贵州农学院丛刊，1996，(4)：67～73
[87] 吴德龙、王卫芳、薛芳森等。亚香棒虫草的研究。江西农业大学学报，1997，19(2)31～36
[88] 熊淑玲、刘波平、童迎东。亚香棒虫草和冬虫夏草化学成分的测定与比较。1997，19(2)：27～30
[89] 张显科、王玉柱、刘文霞。蛹虫草的研究Ⅳ 蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较。辽宁大学学报(自然科学版)，1996，23(4)：80～83
[90] 焦彦朝、梁宗琦、刘爱英。戴氏虫草无性型的研究—Ⅰ抗生素。贵州农学院丛刊，1994，增刊：54～56
[91] 焦彦朝，梁宗琦，刘爱英。戴氏虫草无性型的研究—Ⅱ多糖。贵州农学院丛刊，1994，增刊：57～62
[92] 焦彦朝，梁宗琦，刘爱英。虫草生物活性物质研究概况。贵州农业科学，1990，(3)：53～58
[93] 杨世海，张红兵，赵英。冬虫夏草研究的新进展。中草药，1994，25(9)：488～492
[94] 肖宏亮，高孔荣，谭盈科。冬虫夏草及其菌丝体研究进展。中国食用菌，1997，16(2)：3～5
[95] 梁佩琼。中国冬虫夏草。微生物学杂志，1986，(6)：68～72
[96] 藏其中，何光星，郑振源。虫草多糖的药理作用。中草药，1985，16(7)：18～23
[97] 李连德。虫草深层发酵与虫草多糖研究。1997，安徽农业大学硕士论文
[98] 尚德静，王孝敏。冬虫夏草深层发酵的研究。中国食用菌，1996，15(6)：48～49
[99] 罗信昌。冬虫夏草研究进展。中国食用菌，1994，13(4)：3～5
[100] 张长铠，赵友春，吴志红。冬虫夏草菌丝生长的营养要求。微生物学通报，1992，19(3)：129～133
[101] 姜文侠、孙武岳、马琳等。蝙蝠蛾拟青霉菌丝体发酵的研究。微生物学通报，1999，26(3)：192～194
[102] 张显耻，何道珍。中国冬虫夏草液体发酵工艺初探．食用菌，1995，6(5)：5～6
[103] 陈传盈，冯观泉，许尧兴。冬虫夏草工业深层发酵研究．中草药，1992，23(8)：409～411
[104] 王青牡、孙姝媛。我国液体培养药用虫草菌丝体的研究进展。食用菌，1997，19(3)：2～4
[105] 钟士清、胡文锋、罗国威等。冬虫夏草头孢菌菌丝体液体发酵条件的研究。华南农业大学学报，1995，16(3)：108～111
[106] 尚德静，王孝敏。冬虫夏草深层发酵的研究．中国食用菌，1996，15(6)：48～49
[107] 郭成金、李爱民、孟庆恒等。冬虫夏草菌丝体深层培养及产品开发。食品科学，1996，17(2)：21～23
[108] 刘杰麟，梁宗琦，刘爱英。古尼虫草无性型菌丝生长条件的研究。贵州农学院学报，1989；(2)：20～25
[109] 江晓路、葛蓓蕾。北虫草菌Y3液体深层发酵的研究。食品与发酵工业，1997，23(6)：31～35
[110] 李信、许雷、裴鑫德。蛹虫草菌丝体液体培养基的优化和发酵条件的研究。核农学报，1998，12(1)：35～40
[111] 李维光、娄虹、林建群等。北冬虫夏草液体深层发酵最适营养的研究。辽宁大学学报(自然科学版)，1997，24(3)：34～38
[112] 李宗军、温琼英。蛹虫草无性型的研究Ⅱ．液体发酵培养苗丝体及胞外多糖的提制。湖南农业大学学报，1998，24(5)：375～379
[113] 俞俊棠、唐孝宣主编。生物工艺学(上册)。1991，华东化工学院出版社
[114] 梁宗琦。虫草及其人工培养。贵州农学院丛刊，1994，增刊：1～21
[115] 颜方贵。发酵微生物学。1993，北京农业大学出版社
[116] 周德庆。微生物学教程。1998，高等教育出版社
[117] Smith J. E, et al. Industrial fungal genetics and strain seliction. The Filamentous Fungi, 1983, 4: 358～361
[118] 徐飞。我国深层培养虫草菌丝体的药用研究进展。药学通报，1992，23(9)：521～525
[119] 刘正南，郑淑芳。中国药用真菌的现状和种质资源。中国食用菌，1996，15(5)：20～22
[120] 李增智、宣言、刘玉珍。几种表面活性剂及营养物对虫生真菌孢子萌发的影响。安徽农业大学学报，1996，23(3)：355～359
[121] 盛祖嘉编著。微生物遗传学(第二版)。1989，科学出版社
[122] 冯清平，葛瑞昌主编。应用微生物技术。1984，甘肃人民出版社
[123] 马玉银，佛罗里达侧耳营养缺陷型的诱变筛选。食用菌，11～12
[124] 郝勃。利用制酶菌素浓缩处理高频率地检出黑曲霉营养缺陷型突变株。生物学杂志，1997，(2)：14～15，5
[125] 李明春，邢来君。γ—亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生。菌物系统，1997，16(1)：24～29
[126] 李武军、郑幼霞、王洪洲等。赤霉素产生菌藤仓赤霉原生质体的形成和再生。真菌学报，1992，11(3)：221～228
[127] 李农昌、樊美珍、李春如等。白僵菌有关培养条件及其与毒力关系的研究。安徽农业大学学报，1996，23(3)：254～259
[128] 林维宣主编。试验设计方法。1995，大连海事大学出版社
[129] 陈连庆，裴致达。培养液pH值对竹荪菌丝体增殖的影响。中国食用菌，1995，14(6)：21～23
[130] 李平作。灵芝深层发酵生产生物活性物质的研究。无锡轻工大学博士学位论文。1997，33～36
[131] 吴茜茜。地生枝顶孢胞外多糖发酵条件与多糖提取工艺的研究。安徽农业大学硕士论文，2000，33～36
[132] 张龙翔、张庭芳、李令嫒编。生物化学实验方法和技术。1981，人民教育出版社
[133] 李如亮主编。生物化学实验。1998，武汉大学出版社出版
[134] 王敏、路福平、蒋岳等。新月弯孢霉原生质体的形成与11 β—羟基化反应。微生物学杂志，2000，20(9)：35～36，62
[135] 张汉波、丁骅孙、程立忠等，出芽短梗霉的原生质体形成及再生研究。云南大学学报(自然科学版)。1999，21(3)：202～204
[136] Ferenc K., Peberdy J. F. Further studies on protoplast fusion and interspecific hybridization within the Aspergillus nidulans group. 1984, Journal of General Microbiology, 130: 2229～2236
[137] 郝勃，阎凉泰、陈华癸。2 株黑曲霉原生质体的形成和再生过程观察。华中农业大学学报，1997，16(1)：48～51
[138] 王镨，何志勇。香菇原生质体的分离和再生行为。浙江农业大学学报，1996，22(3)：321～324
[139] 王克荣、成桂英、刘怡君等。栗疫病菌的营养体亲和性基因和dsRNAs对病毒传播的影响。菌物系统，1997，16(1)：30～35
[140] 闫培生、李桂舫、蒋家慧等。大球盖菇原生质体再生及单核化特性的研究。菌物系统，2001，20(1)：107～110
[141] 叶满红。关于白砂糖灰分问题的探讨。甘蔗糖业，1998，(5)：49～62
[143] 中国医学科学院卫生研究所编著。食物成分表。1983，人民卫生出版社
[144] 陈天寿主编。微生物培养基的制造与应用。1995，中国农业出版社
[145] 刘杰麟，梁宗琦，刘爱英。古尼虫草子实体的人工培养。西南农业学报，1990，3(4)：6～10