蛹虫草液体深层发酵的研究
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摘要
蛹虫草是多种有效成分接近于冬虫夏草的食、药用真菌，是具有较高食药用价值的虫菌复合体。目前对蛹虫草的研究多集中在固体栽培中子实体产量提高的研究，而关于液体发酵还处于实验室研究中，对于实际应用效果及产生的发酵废液研究较少。
论文首先通过蛹虫草液体发酵的营养需求，对碳源、氮源进行优化组合筛选，确定生长所需培养基的种类及用量比例。比较了不同因素对蛹虫草液体发酵效果的影响，通过单因素及正交试验确定蛹虫草最佳发酵条件为：分析纯蔗糖20g/L；蛋白胨30g/L；KH_2PO_42g/L和MgSO_41g/L，培养温度为23℃，pH5.5，接种量12%,装液量120ml,摇床转速120r/min,玻璃珠15颗。在此工艺下，发酵效果最佳。
确立摇瓶培养所需营养物质及培养条件的基础上，扩大培养方式，使用10L发酵罐做深层培养，当罐压0.05～0.07MPa，通风量为1:0.05(V/V.min)，搅拌速率200rpm时，其菌丝体产出率较高。以本试验中产生的废弃发酵液为原料，对乙酸乙酯和正丁醇萃取物进行了抑菌试验，说明蛹虫草发酵废液中具有抗菌活性物质。采用穿刺、喷洒和添食法对蛹虫草四龄幼虫进行接种试验，试验结果表明，穿刺处理是接种柞蚕四龄幼虫的最佳方式。
Cordyceps militaris is close to a variety of active ingredients to the food of the caterpillar fungus,medicinal fungi, with higher edible and medicinal value of insects bacteria complex. In the current,studies focus on research to improve the fruit ing body production in solid culture of Cordycepsmilitaris, for the practical application of the effect produced by fermentation waste less liquidfermentation in laboratory studies.
Firstly, the nutritional needs of Cordyceps militaris fermentation, carbon and nitrogen sources tooptimize the combination of screening, to determine the type and amount of the proportion of thegrowth medium required. Compared the influence of different factors on the effect of Cordycepsmilitaris fermentation, Cordyceps militaris best fermentation conditions for the single factor andorthogonal experiments to determine:20g/Lanalytically pure sucrose;30g/L peptone;2g/L KH_2PO_4;1g/L MgSO_4; cultivation temperature of23°C; pH5.5;12%of the inoculum size; liquid volume120ml;shaking speed120r/min;15glass beads. In this process, the fermentation effect is the best.
On the basis of establishing the required nutrients in the shake flask cultures and cultureconditions to expand the training methods,10L fermentor for submerged culture, when the tank pressure0.05~0.07MPa, the ventilation rate of1:0.05(V/V.min), stirring speed200rpm, the output rate ofmycelium is higher. In this study, waste fermentation broth as raw materials, antibacterial test of ethylacetate and n-butanol extract, waste Cordyceps militaris fermentation with the antimicrobial substances.By puncture, spray and add food method of Cordyceps militaris larvae inoculated with the test resultsshow that puncture processing vaccination tussah fourth instar larvae.
论文首先通过蛹虫草液体发酵的营养需求，对碳源、氮源进行优化组合筛选，确定生长所需培养基的种类及用量比例。比较了不同因素对蛹虫草液体发酵效果的影响，通过单因素及正交试验确定蛹虫草最佳发酵条件为：分析纯蔗糖20g/L；蛋白胨30g/L；KH_2PO_42g/L和MgSO_41g/L，培养温度为23℃，pH5.5，接种量12%,装液量120ml,摇床转速120r/min,玻璃珠15颗。在此工艺下，发酵效果最佳。
确立摇瓶培养所需营养物质及培养条件的基础上，扩大培养方式，使用10L发酵罐做深层培养，当罐压0.05～0.07MPa，通风量为1:0.05(V/V.min)，搅拌速率200rpm时，其菌丝体产出率较高。以本试验中产生的废弃发酵液为原料，对乙酸乙酯和正丁醇萃取物进行了抑菌试验，说明蛹虫草发酵废液中具有抗菌活性物质。采用穿刺、喷洒和添食法对蛹虫草四龄幼虫进行接种试验，试验结果表明，穿刺处理是接种柞蚕四龄幼虫的最佳方式。
Cordyceps militaris is close to a variety of active ingredients to the food of the caterpillar fungus,medicinal fungi, with higher edible and medicinal value of insects bacteria complex. In the current,studies focus on research to improve the fruit ing body production in solid culture of Cordycepsmilitaris, for the practical application of the effect produced by fermentation waste less liquidfermentation in laboratory studies.
Firstly, the nutritional needs of Cordyceps militaris fermentation, carbon and nitrogen sources tooptimize the combination of screening, to determine the type and amount of the proportion of thegrowth medium required. Compared the influence of different factors on the effect of Cordycepsmilitaris fermentation, Cordyceps militaris best fermentation conditions for the single factor andorthogonal experiments to determine:20g/Lanalytically pure sucrose;30g/L peptone;2g/L KH_2PO_4;1g/L MgSO_4; cultivation temperature of23°C; pH5.5;12%of the inoculum size; liquid volume120ml;shaking speed120r/min;15glass beads. In this process, the fermentation effect is the best.
On the basis of establishing the required nutrients in the shake flask cultures and cultureconditions to expand the training methods,10L fermentor for submerged culture, when the tank pressure0.05~0.07MPa, the ventilation rate of1:0.05(V/V.min), stirring speed200rpm, the output rate ofmycelium is higher. In this study, waste fermentation broth as raw materials, antibacterial test of ethylacetate and n-butanol extract, waste Cordyceps militaris fermentation with the antimicrobial substances.By puncture, spray and add food method of Cordyceps militaris larvae inoculated with the test resultsshow that puncture processing vaccination tussah fourth instar larvae.
引文
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