犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠免疫干扰作用机制研究
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摘要
目的：考察犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠免疫指标的影响,并分析其可能的作用机制。
方法
(1)采用迟发型超敏反应导致的慢性皮炎湿疹小鼠动物模型实验,测定其耳肿胀度,分析犀角地黄汤合消风散对耳肿胀度的影响。
(2)采用流式细胞仪检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠脾细胞CD4、CD8水平,分析犀角地黄汤合消风散对小鼠T细胞亚群CD4+、CD8+及其比值的影响。
(3)采用双抗夹心ELISA法检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠血清IFN-γ、IL-4含量,分析犀角地黄汤合消风散对免疫指标IFN-γ、IL-4以及其比值的影响。
(4)采用双抗夹心ELISA检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠血清LTB4、LTC4,分析犀角地黄汤合消风散对变态反应性、慢反应性物质半胱氨酸白三烯的影响。
(5)采用Real-time PCR检测法检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠耳部皮肤组织CysLTRl、CysLTR2的表达,分析犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠白三烯受体的表达影响。
(6)采用Western-blot法检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠耳部皮肤组织CysLTR1蛋白的表达,分析犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠CysLTR1的表达影响。
结果
(1)犀角地黄汤合消风散高、低剂量对小鼠迟发型皮肤超敏反应小鼠耳肿胀度具有非常显著的抑制作用(P均<0.001)。
(2)慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均能降低小鼠慢性皮炎湿疹模型升高的血清CD4、CD8阳性表达水平以及其比值,且中药干预1、2组之间无明显差异。
(3)慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均能调节慢性皮炎湿疹模型小鼠血清IFN-r、IL-4以及其IFN-r/IL-4比值,表现为对升高的血清IFN-r水平有降低的作用,对降低的血清IL-4水平有升高的作用,并且能降低其升高的IFN-r/IL-4比值,使其向比值的平衡状态偏移；
(4)犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平有一定的抑制作用。
(5)慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均显著的降低相对CysLTR1 mRNA表达水平的作用,慢性皮炎湿疹中药干预1、2组之间没有明显的差异。慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均显著的降低相对CysLTR2 mRNA表达水平的作用,慢性皮炎湿疹中药干预2组降低的水平高于慢性皮炎湿疹中药干预1组,有显著差异;
(6)慢性皮炎湿疹中药干预1-2组均能非常显著降低小鼠皮肤组织CysLTR1蛋白的表达(p<0.001)。
结论：犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠,耳肿胀度具有显著的抑制作用,对其免疫功能失衡状态下的CD4+T细胞、CD8+T细胞以及其比值,TH1、TH2(IFN-γ、IL-4)以及其比值、LTB4、LTC4及其受体均有显著的调节作用。
Objective:Research on the immune parameters in mice about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan meddle the animal model of chronic dermatitis and eczema, and to analyze its possible mechanism.
Methods:(1) Using the experiment of delayed-type hypersensitivity induced mouce model of chronic dermatitis and eczema to determine ear swelling and analysing the ear swelling about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(2) Using FCM (Flow Cytometry) to test the CD4, CD8 levels of spleen cells of mice of the animal models of chronic dermatitis and eczema, and analysing the effects of T cell subsets CD4+, CD8+ and their ratios about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(3) Using the method of double-antibody sandwich ELISA to test mice serum IFN-γ, IL-4 levels of animal models of chronic dermatitis and eczema, and analyzing the effects of immune indicators IFN-y, IL-4 and its ratio about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(4) Using double-antibody sandwich ELISA to determine the mice serum LTB4, LTC4 of chronic dermatitis and eczema animal model, and analysing the effects of of slow reactive substance cysteine leukotriene about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(5) Useing Real-time PCR to detect ear skin CysLTR1, CysLTR2 expression of mouce models of chronic dermatitis and eczema, and analysing Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on the leukotriene receptor in mice expression.
(6) Useing Western-blot to detect ear skin CysLTRl expression of mouce models of chronic dermatitis and eczema, and analysing Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on the mice's CysLTRl expression.
Results:(1) Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan high-and low-dose has a very significant inhibition on mice ear swelling in delayed-type skin hypersensitivity (P all<0.001).
(2) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema are able to decrease elevated serum CD4, CD8 expression levels and their ratio of the mouce model of chronic dermatitis and eczema, and there is no significant difference between groups 1,2.
(3) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema are able to regulate mouse serum IFN-r, IL-4 as well as its IFN-r/IL-4 ratio, manifested as decrease the elevated serum IFN-r levels and increase the reduced serum IL-4 levels, furtheremore, it has an decrease effect on the elevated IFN-r/IL-4 ratio, so that the ratio shift to equilibrium.
(4) Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan has a certain extent on Serum LTB4, LTC4 levels in mouse model of chronic dermatitis and eczema.
(5) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema have significantly role of lower relative CysLTRl mRNA expression levels, and there is no significant difference between 1,2 groups. Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema have significantly role of lower relative CysLTR2 mRNA expression levels. comparing with medicine intervention 1-group,2-group has an significantly differences in lower relative CysLTR2 mRNA expression levels.
(6) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema have significantly role of lower relative CysLTR1 expression levels in the ear skin of mice(p<0.001).
Conclusions:Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan high-and low-dose has a very significant inhibition on mice ear swelling in delayed-type skin hypersensitivity. It had showed a significant regulatory role including the CD4 + T cells, CD8 + T cells, as well as their ratio, the TH1, TH2 (IFN-γ, IL-4) as well as their ratio, the LTB4, LTC4 and its receptor under the condition of mice's imbalance immune.
方法
(1)采用迟发型超敏反应导致的慢性皮炎湿疹小鼠动物模型实验,测定其耳肿胀度,分析犀角地黄汤合消风散对耳肿胀度的影响。
(2)采用流式细胞仪检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠脾细胞CD4、CD8水平,分析犀角地黄汤合消风散对小鼠T细胞亚群CD4+、CD8+及其比值的影响。
(3)采用双抗夹心ELISA法检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠血清IFN-γ、IL-4含量,分析犀角地黄汤合消风散对免疫指标IFN-γ、IL-4以及其比值的影响。
(4)采用双抗夹心ELISA检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠血清LTB4、LTC4,分析犀角地黄汤合消风散对变态反应性、慢反应性物质半胱氨酸白三烯的影响。
(5)采用Real-time PCR检测法检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠耳部皮肤组织CysLTRl、CysLTR2的表达,分析犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠白三烯受体的表达影响。
(6)采用Western-blot法检测慢性皮炎湿疹动物模型小鼠耳部皮肤组织CysLTR1蛋白的表达,分析犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠CysLTR1的表达影响。
结果
(1)犀角地黄汤合消风散高、低剂量对小鼠迟发型皮肤超敏反应小鼠耳肿胀度具有非常显著的抑制作用(P均<0.001)。
(2)慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均能降低小鼠慢性皮炎湿疹模型升高的血清CD4、CD8阳性表达水平以及其比值,且中药干预1、2组之间无明显差异。
(3)慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均能调节慢性皮炎湿疹模型小鼠血清IFN-r、IL-4以及其IFN-r/IL-4比值,表现为对升高的血清IFN-r水平有降低的作用,对降低的血清IL-4水平有升高的作用,并且能降低其升高的IFN-r/IL-4比值,使其向比值的平衡状态偏移；
(4)犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹模型小鼠血清LTB4、LTC4水平有一定的抑制作用。
(5)慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均显著的降低相对CysLTR1 mRNA表达水平的作用,慢性皮炎湿疹中药干预1、2组之间没有明显的差异。慢性皮炎湿疹中药干预1、2组均显著的降低相对CysLTR2 mRNA表达水平的作用,慢性皮炎湿疹中药干预2组降低的水平高于慢性皮炎湿疹中药干预1组,有显著差异;
(6)慢性皮炎湿疹中药干预1-2组均能非常显著降低小鼠皮肤组织CysLTR1蛋白的表达(p<0.001)。
结论：犀角地黄汤合消风散对慢性皮炎湿疹动物模型小鼠,耳肿胀度具有显著的抑制作用,对其免疫功能失衡状态下的CD4+T细胞、CD8+T细胞以及其比值,TH1、TH2(IFN-γ、IL-4)以及其比值、LTB4、LTC4及其受体均有显著的调节作用。
Objective:Research on the immune parameters in mice about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan meddle the animal model of chronic dermatitis and eczema, and to analyze its possible mechanism.
Methods:(1) Using the experiment of delayed-type hypersensitivity induced mouce model of chronic dermatitis and eczema to determine ear swelling and analysing the ear swelling about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(2) Using FCM (Flow Cytometry) to test the CD4, CD8 levels of spleen cells of mice of the animal models of chronic dermatitis and eczema, and analysing the effects of T cell subsets CD4+, CD8+ and their ratios about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(3) Using the method of double-antibody sandwich ELISA to test mice serum IFN-γ, IL-4 levels of animal models of chronic dermatitis and eczema, and analyzing the effects of immune indicators IFN-y, IL-4 and its ratio about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(4) Using double-antibody sandwich ELISA to determine the mice serum LTB4, LTC4 of chronic dermatitis and eczema animal model, and analysing the effects of of slow reactive substance cysteine leukotriene about Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on mice.
(5) Useing Real-time PCR to detect ear skin CysLTR1, CysLTR2 expression of mouce models of chronic dermatitis and eczema, and analysing Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on the leukotriene receptor in mice expression.
(6) Useing Western-blot to detect ear skin CysLTRl expression of mouce models of chronic dermatitis and eczema, and analysing Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan effect on the mice's CysLTRl expression.
Results:(1) Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan high-and low-dose has a very significant inhibition on mice ear swelling in delayed-type skin hypersensitivity (P all<0.001).
(2) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema are able to decrease elevated serum CD4, CD8 expression levels and their ratio of the mouce model of chronic dermatitis and eczema, and there is no significant difference between groups 1,2.
(3) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema are able to regulate mouse serum IFN-r, IL-4 as well as its IFN-r/IL-4 ratio, manifested as decrease the elevated serum IFN-r levels and increase the reduced serum IL-4 levels, furtheremore, it has an decrease effect on the elevated IFN-r/IL-4 ratio, so that the ratio shift to equilibrium.
(4) Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan has a certain extent on Serum LTB4, LTC4 levels in mouse model of chronic dermatitis and eczema.
(5) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema have significantly role of lower relative CysLTRl mRNA expression levels, and there is no significant difference between 1,2 groups. Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema have significantly role of lower relative CysLTR2 mRNA expression levels. comparing with medicine intervention 1-group,2-group has an significantly differences in lower relative CysLTR2 mRNA expression levels.
(6) Both the medicine intervention 1,2-group of chronic dermatitis and eczema have significantly role of lower relative CysLTR1 expression levels in the ear skin of mice(p<0.001).
Conclusions:Xi-jiao Di-huang Tang and Xiao-fengsan high-and low-dose has a very significant inhibition on mice ear swelling in delayed-type skin hypersensitivity. It had showed a significant regulatory role including the CD4 + T cells, CD8 + T cells, as well as their ratio, the TH1, TH2 (IFN-γ, IL-4) as well as their ratio, the LTB4, LTC4 and its receptor under the condition of mice's imbalance immune.
引文
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