古尼虫草生物学特性及其生理活性物质的研究
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摘要
本论文利用菌种分离技术、紫外吸收光谱技术、高效液相色谱技术、氨基酸组成分析技术、定性分析与定量分析技术、电镜技术、原生质体技术和脉冲电泳核型分析技术对古尼虫草(Cordyceps gunnii)的生物学特性及生理活性物质进行了研究，主要包括以下内容：古尼虫草菌种分离及生长曲线的测定、古尼虫草的扫描电镜观察、古尼虫草原生质体制备、脉冲电泳核型分析和古尼虫草的虫草氨基酸、虫草多糖、核苷类物质含量研究，研究结果如下：
1、优化筛选出了古尼虫草菌种分离的最佳部位及方法。
2、首次测定了古尼拟青霉菌丝体的生长曲线，并根据其生长规律，将其分为四个典型的生长时期：生长延迟期、对数生长期、稳定生长期及衰老期。
3、研究发现：古尼虫草菌丝体中含有丰富的虫草多糖、氨基酸及核苷类物质，其含量明显高于冬虫夏草，其中虫草多糖含量为28.2mg／g干菌丝，氨基酸含量为28.62mg／100mg干菌丝，胞苷、尿苷、腺苷、脱氧腺苷含量分别为：620.3μg／g、3784.32μg／g、2588.17μg／g、420.10μg／g，脱氧鸟苷、胸苷、虫草素微量，所测定的7种核苷类物质其总量为7402.4μg／g，是冬虫夏草的含量(1150.1μg／g)的6倍多。在氨基酸组成分析中，首次测得了古尼虫草中含有组氨酸和脯氨酸等17种氨基酸。
4、本研究探索出了古尼虫草菌丝体培养和原生质体制备的最佳条件，即在改良沙氏培养液中25℃，120rpm培养5天的菌丝体，最适于制备古尼虫草原生质体，2％的溶壁酶，30℃，120rpm酶解2小时为制备原生质体的最佳条件。
5、首次利用脉冲电泳技术研究了虫草的电泳核型，这也是首次利用该技术对虫草属真菌的核型研究。原生质体包埋块最适宜浓度为4.3×10~8个／mL，古尼虫草染色体DNA在电泳过程中迁移形成6条带，最大的染色体DNA分子量约为2100Kb，最小的约为
600Kb。由此可以确认古尼虫草有6条染色体。
The biological characteristics and some active component of cordyceps gunnii was studied for the first time ,from growth survey and drawing of the spawn, the observation cordyceps gunnii and paecilomyces gunnii through scanning electron microscope , electrophoretic karyotype of cordyceps gunnii, to the contentation of active components ,such as cordyceps polysaccharide , amino acid , nucleoside in the spawn,tranma and worm of cordyceps gunnii .the result showed as below :
Four typical growth periods in the spawn were studied : the period of growth hesitation, the rapid growth period ,the growth steady period,and the old period.
There were plenty of cordyceps polysaccharide , amino acid , nucleoside in the spawn of cordyceps gunnii , their contentation in it was below : cordyceps polysaccharide,28.2mg/g ; amino acid ,28.62mg/100mg ; cytidine ,620.3 g/g; uridine , 3784.32 g/g; adenosine , 2588.17 g/g ; deoxyadenosine , 420.1 g/g . The total contentation of 7 kinds of nucleoside was 7402.4 u g/g .His and Pro were measured in amino acide of cordyceps gunnii for the first time.
Electrophoretic karyotype of Cordyceps gunnii was studied for the first time .The spawn of C.gunnii was cultured with sabouraud culture medium,which was kept at 25 and vibrated at a speed of 120rpm for five days were best suitable for preparation of protoplasts .It was the optimum condition to prepare protoplasts that spawn was digested in 2% lywallzyme at 30 for 2 h with vibration at a speed of 120 rpm .The concentation of 4.3 108 /mL of protoplasts was the best suitable for electrophoresis . Cordyceps gunnii was separated into 6 bands ,which the biggest estimated to be 2100kb ,the smallest estimated to be 600kb.
1、优化筛选出了古尼虫草菌种分离的最佳部位及方法。
2、首次测定了古尼拟青霉菌丝体的生长曲线，并根据其生长规律，将其分为四个典型的生长时期：生长延迟期、对数生长期、稳定生长期及衰老期。
3、研究发现：古尼虫草菌丝体中含有丰富的虫草多糖、氨基酸及核苷类物质，其含量明显高于冬虫夏草，其中虫草多糖含量为28.2mg／g干菌丝，氨基酸含量为28.62mg／100mg干菌丝，胞苷、尿苷、腺苷、脱氧腺苷含量分别为：620.3μg／g、3784.32μg／g、2588.17μg／g、420.10μg／g，脱氧鸟苷、胸苷、虫草素微量，所测定的7种核苷类物质其总量为7402.4μg／g，是冬虫夏草的含量(1150.1μg／g)的6倍多。在氨基酸组成分析中，首次测得了古尼虫草中含有组氨酸和脯氨酸等17种氨基酸。
4、本研究探索出了古尼虫草菌丝体培养和原生质体制备的最佳条件，即在改良沙氏培养液中25℃，120rpm培养5天的菌丝体，最适于制备古尼虫草原生质体，2％的溶壁酶，30℃，120rpm酶解2小时为制备原生质体的最佳条件。
5、首次利用脉冲电泳技术研究了虫草的电泳核型，这也是首次利用该技术对虫草属真菌的核型研究。原生质体包埋块最适宜浓度为4.3×10~8个／mL，古尼虫草染色体DNA在电泳过程中迁移形成6条带，最大的染色体DNA分子量约为2100Kb，最小的约为
600Kb。由此可以确认古尼虫草有6条染色体。
The biological characteristics and some active component of cordyceps gunnii was studied for the first time ,from growth survey and drawing of the spawn, the observation cordyceps gunnii and paecilomyces gunnii through scanning electron microscope , electrophoretic karyotype of cordyceps gunnii, to the contentation of active components ,such as cordyceps polysaccharide , amino acid , nucleoside in the spawn,tranma and worm of cordyceps gunnii .the result showed as below :
Four typical growth periods in the spawn were studied : the period of growth hesitation, the rapid growth period ,the growth steady period,and the old period.
There were plenty of cordyceps polysaccharide , amino acid , nucleoside in the spawn of cordyceps gunnii , their contentation in it was below : cordyceps polysaccharide,28.2mg/g ; amino acid ,28.62mg/100mg ; cytidine ,620.3 g/g; uridine , 3784.32 g/g; adenosine , 2588.17 g/g ; deoxyadenosine , 420.1 g/g . The total contentation of 7 kinds of nucleoside was 7402.4 u g/g .His and Pro were measured in amino acide of cordyceps gunnii for the first time.
Electrophoretic karyotype of Cordyceps gunnii was studied for the first time .The spawn of C.gunnii was cultured with sabouraud culture medium,which was kept at 25 and vibrated at a speed of 120rpm for five days were best suitable for preparation of protoplasts .It was the optimum condition to prepare protoplasts that spawn was digested in 2% lywallzyme at 30 for 2 h with vibration at a speed of 120 rpm .The concentation of 4.3 108 /mL of protoplasts was the best suitable for electrophoresis . Cordyceps gunnii was separated into 6 bands ,which the biggest estimated to be 2100kb ,the smallest estimated to be 600kb.
引文
步岚、梁宗琦、刘爱英(1999)真菌激发子诱导虫草菌素高产的条件。贵州农业科学 27(1)：30-33
边银丙、罗信昌(1996)脉冲电泳技术及其在食用菌研究中的应用。食用菌学报3(2)：45-50
陈明杰、赵绍惠、张树庭(1995)草菇染色体核型的鉴定。食用菌学报2(1)：1-6
仇志根(1994)冬虫夏草对白血病人NK和LAK细胞活性影响。上海免疫学杂志14(1)30-31
陈顺志(1995)冬虫夏草和北虫草研究进展。中国生化药物杂志16(5)：242-245
陈新谦(1951)新编药理学。北京：人民卫生出版社 712-715
陈召南(1992)细脚拟青霉化学成分测定。中成药14(2)：36-39
陈国桢(1995)冬虫夏草对免疫及造血功能影响的实验研究。湖南医学12(4)：202-204
陈桂宝(1997)蛹虫草的药理作用研究。中草药20(7)：415-417
C.J.亚历克鲍罗斯(1961)真菌概论。北京：科学出版社267-271
邓见迁、吴林(1995)可搏利(冬虫夏草脂质体)治疗乙型肝炎97例疗效分析。现代诊断与治疗6(3：178-180)
杜现华、孙绯(1993)川芎嗪与冬虫夏草治疗慢性肾功能不全临床观察13(11)：680-682
郑丰、张冬梅(1993)冬虫夏草对氨基甙肾毒性损坏保护作用，中华内科杂志32(10)：689-690
郭锡勇(1990)霍克斯虫草化学成分研究。中草药 21(3)：109-112
盖新杰(1992)蛹虫草胞外多糖研究。真菌学报 11(4)：300-304
贡成良、吴友良、朱军贞(1993)家蚕蛹虫草的人工培育及其成分分析。中国食用菌 12(4)：21-24
胡皓彬(1991)虫草属常见虫草的性状鉴别。中药材14(9)：24-27
冯有亮(1991)蛹虫草的组织学研究。真菌学报 9(1)：1-5
黄起鹏(1991)采用GC-MS联用及计算机检索法对冬虫夏草弱极化学成分分析。中药材 14(11)：33-35
洪秀华、黄熙昌(1990)古尼拟青霉对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。贵阳医学院学报15(1)：22-24
虞世佳、黎中明、林文群(1987)染色体研究技术的发展。生物学通报(3)：13-16
江永成、薛芳森(1997)虫草寄主湖南棒蝠蛾生物学特性研究。江西农业大学学报19(2)：13-17
敬一兵(1 986)虫草。昆明：云南科技出版社 31-35
季晖、涂红湖(1993)人工虫草碱提取物的降血糖作用研究。9(5)：386-389
蒋保季(1995)发酵培养物冬虫夏草毒性研究。首都医学院学报16(4)：198-203
蒋宪瑶(1989)古尼虫草拟青霉致突变研究。卫生研究 18(6)：9-12
解军、郭欣(1994)冬虫夏草人工菌丝体中虫草素的定性定量分析。山西中西 10(4)：36-38
孔祥环、蒋保季(1995)发酵培养冬虫夏草毒性研究。首都医学院学报16(4)：256-258
吕作舟(1982)香菇优质高产菌株的选择及其子实体形态发生的细胞学观察。华中农业大学学报(2)：28-40
梁宋平(1994)生物化学与分子生物学实验教程。长沙：湖南师范大学 53-58
梁宗琦(1998)蛹虫草无性型的多型现象。菌物系统 17(1)：57-62
梁宗琦(1983)中国虫草属一新记录种-古尼虫草。真菌学报3(4)：258-260
廖洪军、陈香美(1993)冬虫夏草对体外线粒体钙离子负荷和缺血性肾功能衰竭的作用。中华肾脏病杂志 9(5)：257-260
李玉春、周爱群、李四春等(1989)蛹虫草人工培育技术的研究。中南林学院学报 19(2)：212-217
李钢、万逸敏(1999)具有免疫作用的中草药。药物与临床26(3)：34-35
李楠、宋健国(1995)蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较。吉林农业大学学报 17(增刊)80-83
李秀玉、颜耀祖、申荣段(1991)草菇减数分裂和担子形成的细胞核行为。真菌学报10(1)72-28
李晓明(1990)虫草菌蝠蛾被孢霉发酵液有效成分的测定。中国中药杂志 15(1)：40-42
李晓明(1989)冬虫夏草发酵液中多糖研究。中国中药杂志 14(2)：95-97
李淑芳(1990)古尼拟青霉药理研究、贵州医学院学报 15(1)：25-32
刘雪梅(1998)药用真菌虫草属真菌的研究进展。天然产物研究与开发 11：87-91
刘菊华、李天玲(1991)冬虫夏草及虫草菌丝体对小鼠免疫功能的影响。山东中医杂志 10(5)：41-42
刘凤安、郑效(1995)蚕蛹虫草与冬虫夏草抗喉癌作用对比研究。白求思医科大学学报 21(1)：39-40
刘爱英(1991)古尼虫草人工培养物营养成分分析。贵州农业科学 2：5-8
刘洁(1997)蚕蛹虫草的抗肿瘤及激素样作用。中国中药杂志 22(2)：111-113
刘平(1996)虫草菌丝及药物血清对肝脏枯否氏细胞生成IL-1、IFN、TNF影响。中国中药杂志 21(6)：367-369
刘静明、刘岱(1994)蛹 虫草菌丝及冬虫夏草中核苷类成分的含量测定。中国中药杂志 19(10)：615-617
刘杰麟(1989)激素等活性物质对古尼虫草无性型菌丝生长及子实体形成的影响。贵州农学院学报 8(2)：12-14
黎中明、林文群(1988)细胞遗传学。四川：四川大学出版社 1-12
孟明、谢蜀生(1993)冬虫夏草提取物的免疫抑制作用。上海免疫学杂志 13(5)：261-263
孟祥贤、张志光(2000)收集分生孢子的方法。食用菌23(1)：18
马济民(1997)虫草对慢性肾衰大鼠肝脏和肌肉蛋白质合成速度的影响。中华肾脏病杂志 13(4)：199-201
马继霞、王世英(1995)冬虫夏草人工菌丝体诱变及抗诱变效应的研究。癌变、畸变、突变 7(2)：84-87
彭国平(1996)人工蛹虫草化学成分测定。南京中医药大学学报 12(5)：26-28
邱翠娥(1992)新疆虫覃化学成分测定。中药材 14(2)：36-39
邱德凯、靖大道(1995)冬虫夏草多糖脂质体对肝炎和肝硬化者T细胞免疫调节的作用。中华消化杂志 15(5)：265-268
邱德凯、李海 曾民德等(1997)虫草多糖脂质体对大鼠肝纤维化胶原酶mRNA变化的影响。新消化病学杂志 5(7)：417-418
舒树芳(1991)金针虫草的化学成分测定。贵州医学院学报 (2)：47-50
沈晓云(1998)冬虫夏草与虫草菌丝有效成分的比较。山西大学学报21(1)：80-85
师治贤、王俊德(1999)生物大分子的液相色谱分离和制备。北京：科学出版社 191-230
王国栋(1995)冬虫夏草类生态、培植、应用。科学林业出版社 30-51
王国栋(1995)冬虫夏草防治肾脏病研究进展。辽宁中医杂志 22(2)：93-95
王敬先(1992)冬虫夏草胶囊治疗心律失常。新药与临床 11(6)：369-371
王玉、廖洪军(1992)冬虫夏草对免疫功能的调节。军医进修学院学报 13(3)：256-258
王要军(1996)冬虫夏草对大鼠实验性肝脏纤维化的防治作用及机理的研究。中国中药杂志 21(3)：179-181
王化远(1996)冬虫夏草化学分组成测定。华西药学杂志 11(1)：58-60
吴德龙、王卫芳(1997)亚香棒虫草的研究。江西农业大学学报 19(2)：31-33
汪宝琪(1995)西藏冬虫夏草化学成分测定。中草药 26(4)：189-191
汪洪(1999)虫草研究开发中的几个问题的探讨。农牧产品开发 6：21-23
刑振荣(1989)冬虫夏草核苷类化合物的测定。现代应用药学
徐锦堂(1997)中国药用真菌学。北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社 355-387
Webster J真菌导论。北京：中国林业出版社 106-112
俞大拔(1987)真菌遗传学节要。北京：北京农业大学出版社
125-156
朱振元、梁宗琦(1999)小分子多肽的镇痛作用及其生物来源。山地农业生物学报 18(3)：195-199
朱汉威(1992)冬虫夏草制剂至灵对尿毒症患者蛋白代谢的影响。中华肾脏病杂志 8(1)：14-17
张志光(1985)古尼虫草生活史的研究。湖南师范大学自然科学学报 8(4)：1-5
张显科、刘文霞(1997)蛹虫草化学成分测定。菌物系统 16(1)：78-81
张力(1988)冬虫夏草化学成分和药理作用的研究。药学通报 23(9)：521-523
张甲生(1994)桑、柞蛹虫草化学成分研究。白求恩医学大学学报 20(1)：24-26
张士善(1991)冬虫夏草氨基酸成分的毒性研究。药学学报 26(5)：326-330
赵余庆(1999)冬虫夏草属真菌化学研究概况。中草药 30(12)：20-24
赵学敏(1957)本草纲目拾遗。北京：人民卫生出版社 130
赵锦、王宁、陈月琴(1999)冬虫夏草无性型的分子鉴定。中山大学报(自然科学版) 38(1)：121-124
詹松(1990)蔗蛾虫草化学化学成分的测定。中国中药杂志 15(10)：35-38
詹松(1993)蔗蛾虫草人工培养物化学成分研究。中药材 16(4)：30-34
庄永泽(1996)冬虫夏草防治氨基糖急性肾衰的分子生物学机理。中华肾病杂志 12(5)：300-304
朱家璇、王宝玉(1994)冬虫夏草对实验必免疫损伤肝纤维化的预防和治疗。中华消化杂志 14(6)：333-335
Arima T.and Morinaga T.(1995)Inheritance of chromosome lensth polymorphisms in Coprinus cinereus.Mycoscience,36:9-15
Brody, H and Carbon,J(1989) Proc.Natl.Acad.Aci .USA,86:6260-6263
Chang S.T and Chu S.S (1969)Nuclear behavior in the basidium of Volvariella volvalea. Cytologia,34 :293-299
Carle,G.F.and Olson,M.V. (1985) An electrophoresis Karyotype for
feast .Proc .Natl.Acad .Sci.USA 82:3756-3760
Lai,E.Birren,B. W.W.,Clark,S.M,et.al (1989)Pulsed field gel electrophoresis ,Biotechniques,7(1):34-42
Orbach,M.J.and Vollrath,D(1988) An electrophoretic karyotype of Neurospora crassa Molecular and cellular, Biology.4:1469-1472
Royer ,J.c.,W.E.Hintz,and P.A.horgen (1992) Electrophoretic Raryotype analysis of button mushroom ,Agaricus bisporus . Genome,35:694-698
Sagawa I.and Nagata Y.J.(1992) Analysis of chranolomal DNA of Mushrooms in genus pleurotus by pulsed field gel electophoresis. Microbiol ,38:47-52
Smith ,C.L.,Matsumoto,T.,Niwa,O.et al .(1987) An eletrophoretic karyotype for Schizosaccharomyces pombe by pulsed field gel electrophoresis .Nucleic Acid Research 15(11):4481-4489
边银丙、罗信昌(1996)脉冲电泳技术及其在食用菌研究中的应用。食用菌学报3(2)：45-50
陈明杰、赵绍惠、张树庭(1995)草菇染色体核型的鉴定。食用菌学报2(1)：1-6
仇志根(1994)冬虫夏草对白血病人NK和LAK细胞活性影响。上海免疫学杂志14(1)30-31
陈顺志(1995)冬虫夏草和北虫草研究进展。中国生化药物杂志16(5)：242-245
陈新谦(1951)新编药理学。北京：人民卫生出版社 712-715
陈召南(1992)细脚拟青霉化学成分测定。中成药14(2)：36-39
陈国桢(1995)冬虫夏草对免疫及造血功能影响的实验研究。湖南医学12(4)：202-204
陈桂宝(1997)蛹虫草的药理作用研究。中草药20(7)：415-417
C.J.亚历克鲍罗斯(1961)真菌概论。北京：科学出版社267-271
邓见迁、吴林(1995)可搏利(冬虫夏草脂质体)治疗乙型肝炎97例疗效分析。现代诊断与治疗6(3：178-180)
杜现华、孙绯(1993)川芎嗪与冬虫夏草治疗慢性肾功能不全临床观察13(11)：680-682
郑丰、张冬梅(1993)冬虫夏草对氨基甙肾毒性损坏保护作用，中华内科杂志32(10)：689-690
郭锡勇(1990)霍克斯虫草化学成分研究。中草药 21(3)：109-112
盖新杰(1992)蛹虫草胞外多糖研究。真菌学报 11(4)：300-304
贡成良、吴友良、朱军贞(1993)家蚕蛹虫草的人工培育及其成分分析。中国食用菌 12(4)：21-24
胡皓彬(1991)虫草属常见虫草的性状鉴别。中药材14(9)：24-27
冯有亮(1991)蛹虫草的组织学研究。真菌学报 9(1)：1-5
黄起鹏(1991)采用GC-MS联用及计算机检索法对冬虫夏草弱极化学成分分析。中药材 14(11)：33-35
洪秀华、黄熙昌(1990)古尼拟青霉对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。贵阳医学院学报15(1)：22-24
虞世佳、黎中明、林文群(1987)染色体研究技术的发展。生物学通报(3)：13-16
江永成、薛芳森(1997)虫草寄主湖南棒蝠蛾生物学特性研究。江西农业大学学报19(2)：13-17
敬一兵(1 986)虫草。昆明：云南科技出版社 31-35
季晖、涂红湖(1993)人工虫草碱提取物的降血糖作用研究。9(5)：386-389
蒋保季(1995)发酵培养物冬虫夏草毒性研究。首都医学院学报16(4)：198-203
蒋宪瑶(1989)古尼虫草拟青霉致突变研究。卫生研究 18(6)：9-12
解军、郭欣(1994)冬虫夏草人工菌丝体中虫草素的定性定量分析。山西中西 10(4)：36-38
孔祥环、蒋保季(1995)发酵培养冬虫夏草毒性研究。首都医学院学报16(4)：256-258
吕作舟(1982)香菇优质高产菌株的选择及其子实体形态发生的细胞学观察。华中农业大学学报(2)：28-40
梁宋平(1994)生物化学与分子生物学实验教程。长沙：湖南师范大学 53-58
梁宗琦(1998)蛹虫草无性型的多型现象。菌物系统 17(1)：57-62
梁宗琦(1983)中国虫草属一新记录种-古尼虫草。真菌学报3(4)：258-260
廖洪军、陈香美(1993)冬虫夏草对体外线粒体钙离子负荷和缺血性肾功能衰竭的作用。中华肾脏病杂志 9(5)：257-260
李玉春、周爱群、李四春等(1989)蛹虫草人工培育技术的研究。中南林学院学报 19(2)：212-217
李钢、万逸敏(1999)具有免疫作用的中草药。药物与临床26(3)：34-35
李楠、宋健国(1995)蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较。吉林农业大学学报 17(增刊)80-83
李秀玉、颜耀祖、申荣段(1991)草菇减数分裂和担子形成的细胞核行为。真菌学报10(1)72-28
李晓明(1990)虫草菌蝠蛾被孢霉发酵液有效成分的测定。中国中药杂志 15(1)：40-42
李晓明(1989)冬虫夏草发酵液中多糖研究。中国中药杂志 14(2)：95-97
李淑芳(1990)古尼拟青霉药理研究、贵州医学院学报 15(1)：25-32
刘雪梅(1998)药用真菌虫草属真菌的研究进展。天然产物研究与开发 11：87-91
刘菊华、李天玲(1991)冬虫夏草及虫草菌丝体对小鼠免疫功能的影响。山东中医杂志 10(5)：41-42
刘凤安、郑效(1995)蚕蛹虫草与冬虫夏草抗喉癌作用对比研究。白求思医科大学学报 21(1)：39-40
刘爱英(1991)古尼虫草人工培养物营养成分分析。贵州农业科学 2：5-8
刘洁(1997)蚕蛹虫草的抗肿瘤及激素样作用。中国中药杂志 22(2)：111-113
刘平(1996)虫草菌丝及药物血清对肝脏枯否氏细胞生成IL-1、IFN、TNF影响。中国中药杂志 21(6)：367-369
刘静明、刘岱(1994)蛹 虫草菌丝及冬虫夏草中核苷类成分的含量测定。中国中药杂志 19(10)：615-617
刘杰麟(1989)激素等活性物质对古尼虫草无性型菌丝生长及子实体形成的影响。贵州农学院学报 8(2)：12-14
黎中明、林文群(1988)细胞遗传学。四川：四川大学出版社 1-12
孟明、谢蜀生(1993)冬虫夏草提取物的免疫抑制作用。上海免疫学杂志 13(5)：261-263
孟祥贤、张志光(2000)收集分生孢子的方法。食用菌23(1)：18
马济民(1997)虫草对慢性肾衰大鼠肝脏和肌肉蛋白质合成速度的影响。中华肾脏病杂志 13(4)：199-201
马继霞、王世英(1995)冬虫夏草人工菌丝体诱变及抗诱变效应的研究。癌变、畸变、突变 7(2)：84-87
彭国平(1996)人工蛹虫草化学成分测定。南京中医药大学学报 12(5)：26-28
邱翠娥(1992)新疆虫覃化学成分测定。中药材 14(2)：36-39
邱德凯、靖大道(1995)冬虫夏草多糖脂质体对肝炎和肝硬化者T细胞免疫调节的作用。中华消化杂志 15(5)：265-268
邱德凯、李海 曾民德等(1997)虫草多糖脂质体对大鼠肝纤维化胶原酶mRNA变化的影响。新消化病学杂志 5(7)：417-418
舒树芳(1991)金针虫草的化学成分测定。贵州医学院学报 (2)：47-50
沈晓云(1998)冬虫夏草与虫草菌丝有效成分的比较。山西大学学报21(1)：80-85
师治贤、王俊德(1999)生物大分子的液相色谱分离和制备。北京：科学出版社 191-230
王国栋(1995)冬虫夏草类生态、培植、应用。科学林业出版社 30-51
王国栋(1995)冬虫夏草防治肾脏病研究进展。辽宁中医杂志 22(2)：93-95
王敬先(1992)冬虫夏草胶囊治疗心律失常。新药与临床 11(6)：369-371
王玉、廖洪军(1992)冬虫夏草对免疫功能的调节。军医进修学院学报 13(3)：256-258
王要军(1996)冬虫夏草对大鼠实验性肝脏纤维化的防治作用及机理的研究。中国中药杂志 21(3)：179-181
王化远(1996)冬虫夏草化学分组成测定。华西药学杂志 11(1)：58-60
吴德龙、王卫芳(1997)亚香棒虫草的研究。江西农业大学学报 19(2)：31-33
汪宝琪(1995)西藏冬虫夏草化学成分测定。中草药 26(4)：189-191
汪洪(1999)虫草研究开发中的几个问题的探讨。农牧产品开发 6：21-23
刑振荣(1989)冬虫夏草核苷类化合物的测定。现代应用药学
徐锦堂(1997)中国药用真菌学。北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社 355-387
Webster J真菌导论。北京：中国林业出版社 106-112
俞大拔(1987)真菌遗传学节要。北京：北京农业大学出版社
125-156
朱振元、梁宗琦(1999)小分子多肽的镇痛作用及其生物来源。山地农业生物学报 18(3)：195-199
朱汉威(1992)冬虫夏草制剂至灵对尿毒症患者蛋白代谢的影响。中华肾脏病杂志 8(1)：14-17
张志光(1985)古尼虫草生活史的研究。湖南师范大学自然科学学报 8(4)：1-5
张显科、刘文霞(1997)蛹虫草化学成分测定。菌物系统 16(1)：78-81
张力(1988)冬虫夏草化学成分和药理作用的研究。药学通报 23(9)：521-523
张甲生(1994)桑、柞蛹虫草化学成分研究。白求恩医学大学学报 20(1)：24-26
张士善(1991)冬虫夏草氨基酸成分的毒性研究。药学学报 26(5)：326-330
赵余庆(1999)冬虫夏草属真菌化学研究概况。中草药 30(12)：20-24
赵学敏(1957)本草纲目拾遗。北京：人民卫生出版社 130
赵锦、王宁、陈月琴(1999)冬虫夏草无性型的分子鉴定。中山大学报(自然科学版) 38(1)：121-124
詹松(1990)蔗蛾虫草化学化学成分的测定。中国中药杂志 15(10)：35-38
詹松(1993)蔗蛾虫草人工培养物化学成分研究。中药材 16(4)：30-34
庄永泽(1996)冬虫夏草防治氨基糖急性肾衰的分子生物学机理。中华肾病杂志 12(5)：300-304
朱家璇、王宝玉(1994)冬虫夏草对实验必免疫损伤肝纤维化的预防和治疗。中华消化杂志 14(6)：333-335
Arima T.and Morinaga T.(1995)Inheritance of chromosome lensth polymorphisms in Coprinus cinereus.Mycoscience,36:9-15
Brody, H and Carbon,J(1989) Proc.Natl.Acad.Aci .USA,86:6260-6263
Chang S.T and Chu S.S (1969)Nuclear behavior in the basidium of Volvariella volvalea. Cytologia,34 :293-299
Carle,G.F.and Olson,M.V. (1985) An electrophoresis Karyotype for
feast .Proc .Natl.Acad .Sci.USA 82:3756-3760
Lai,E.Birren,B. W.W.,Clark,S.M,et.al (1989)Pulsed field gel electrophoresis ,Biotechniques,7(1):34-42
Orbach,M.J.and Vollrath,D(1988) An electrophoretic karyotype of Neurospora crassa Molecular and cellular, Biology.4:1469-1472
Royer ,J.c.,W.E.Hintz,and P.A.horgen (1992) Electrophoretic Raryotype analysis of button mushroom ,Agaricus bisporus . Genome,35:694-698
Sagawa I.and Nagata Y.J.(1992) Analysis of chranolomal DNA of Mushrooms in genus pleurotus by pulsed field gel electophoresis. Microbiol ,38:47-52
Smith ,C.L.,Matsumoto,T.,Niwa,O.et al .(1987) An eletrophoretic karyotype for Schizosaccharomyces pombe by pulsed field gel electrophoresis .Nucleic Acid Research 15(11):4481-4489