中药材金银花的生药学与高效液相指纹图谱研究
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摘要
2005年版药典规定金银花(Flos Lonicerae)为忍冬科Caprifoliaceae忍冬属Lonicera植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand-Mazz.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.或华南忍冬Lonicera confuse DC.的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收,干燥;或用硫磺熏后干燥。金银花具有清热解毒、凉散风热的功能,主治痈肿疗疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热,广泛用于中药方剂及中成药。
我们共收集了山东、河南、重庆、成都、湖南、贵州、广西等产地的药材。选用道地药材河南金银花(密银花)、山东金银花(济银花)及重庆当地产金银花为主要研究对象,对药材绿原酸等化合物进行了HPLC指纹图谱研究。金银花药材用50%甲醇超声30min,浸出物用日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪检测(美国迪马公司Diamonsil HPLC色谱柱(KromasilC18 5μm,250×4.6mm),PDA二极管阵列检测器,甲醇-0.1%磷酸梯度洗脱),建立的方法稳定、可靠、重现性好。己初步建立了金银花药材甲醇提取物的高效液相色谱指纹图谱,结果显示18批金银花得到了相当稳定、相似度很高的指纹图谱:金银花各成分峰分离效果好,没有脱尾、重叠现象且基线平稳。建立的HPLC-FPS可作为金银花绿原酸等化合物的全面质量控制方法,也可用于鉴别,比仅测定绿原酸含量更科学、更全面。
本文实验部分首先对18批不同产地的金银花药材按照2005年《中华人民共和国药典》(第一部)上的规定和方法进行了定性鉴别,考察了它们的水分、灰分、酸不溶灰分以及有害元素的含量,并采用高效液相色谱法对它们中绿原酸的含量进行了测定。
本文采用高效液相色谱仪结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》对金银花药材进行了指纹图谱研究。研究内容包括:(1)色谱条件的选择分别对样品的提取方式、提取溶剂、进样量、柱温、流速、检测波长和流动相配比及洗脱方式进行了选择并加以确定;(2)方法学考察通过计算色谱图上选定的各共有峰相对保留时间和相对积分面积的RSD值来考察仪器和方法的精密度、重现性以及样品供试液的稳定性并得出结论;(3)指纹图谱的建立利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(研究版)软件的计算结果系统方法学考察后,以18批金银花药材的HPLC图谱数据建立指纹图谱,并导出建好的对照指纹图谱;(4)样品测定将建好的对照指纹图谱和样品图谱依次导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(评价版)软件中进行相似性对比,由软件输出的相似度判定样品是否合格;(5)结果讨论讨论检测波长、时间漂移、实验方法和仪器系统等因素对相似度的影响;(6)建议及展望针对目前指纹图谱技术存在的诸多问题提出了改进建议,并对指纹图谱技术在中草药分析中的应用前景作出了展望。
Flos Ionicerae is a common Chinese traditional medicine, dried budor flower of Lonicera japonica Thunb., Lonicera hypoglauca Miq. , Lonicera confusa DC. or Lonicera macranihoides Hand-Mazz. Picked in early straight dried in sunlight or after fumed by sulfur.
We have collected flos lonicerae of different area such as hennan,shandong ,chongqing. HPLC with PDA diode array detector was used to analyze 50% methanol extract of flos lonicerae. We have established HPLC fingerprint spectra of 50% methanol extract. The result showed 11peaks were common. The HPLC-FPS of 18 batches of Flos lonicerae from the different sources are very similar, It is a reliable and effective method with good reproducibility and has practical value to identify and provides the quality information.
Firstly, the experimentation in this thesis made some quantity discrimination to 18 batches of flos lonicerae. which is coming from different provinces where are planting honeysuckle. Secondly, the experimentation tests their content of water, draff, undissolved draff from acids and toxicity. Thirdly, using the HPLC mensurates the content of chlorogenic acid(CHA).
This dissertation, which uses HPLC and scheme from "Evaluation Standard System to the Similarity of Fingerprints Atlas in the ChineseTraditional Medicine(2004)", prosecutes some researches in Fingerprints Atlas of honeysuckle which include: (1) the selection of chromatogram condition which made some selection and confirmation of various samples by different distill means, distill solvent, the quantity of entered sample, temperature, flowing velocity, checking spectrum wave, the proportion of flowing phases, and method of rushing; (2) methodology which is a research method by calculating the time and RSD of relative area preserved from the peak number of chromatogram, and to assess the apparatus' accuracy and recurring and stability; (3) erecting Fingerprints Atlas which utilizes the calculating results by the program of "Evaluation Standard System to the Similarity of Fingerprints Atlas in the Chinese Traditional Medicine(2004A)" to construct the dactylogram figure by the data of HPLC of 18 batches of Flos lonicerae, and deduce to a complete instituted dactylogram figure; (4) mensurating of samples which is by the technique of collating the dactylogram figures and sample figures from the instituted figures which are deduced from "Evaluation Standard System to the Similarity of Fingerprints Atlas in the ChineseTraditional Medicine(2004A)" and determine the eligibility; (5) the discussing of results which includes discussing the similar impact by checking waves, fleeting time, experiment method and apparatus system; (6) suggestion and prospect which is aim at nowadays some problems in the fingerprint chromatogram and provide some innovational suggestions, furthermore prospect to the developmentof fingerprint chromatogram technology.
我们共收集了山东、河南、重庆、成都、湖南、贵州、广西等产地的药材。选用道地药材河南金银花(密银花)、山东金银花(济银花)及重庆当地产金银花为主要研究对象,对药材绿原酸等化合物进行了HPLC指纹图谱研究。金银花药材用50%甲醇超声30min,浸出物用日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪检测(美国迪马公司Diamonsil HPLC色谱柱(KromasilC18 5μm,250×4.6mm),PDA二极管阵列检测器,甲醇-0.1%磷酸梯度洗脱),建立的方法稳定、可靠、重现性好。己初步建立了金银花药材甲醇提取物的高效液相色谱指纹图谱,结果显示18批金银花得到了相当稳定、相似度很高的指纹图谱:金银花各成分峰分离效果好,没有脱尾、重叠现象且基线平稳。建立的HPLC-FPS可作为金银花绿原酸等化合物的全面质量控制方法,也可用于鉴别,比仅测定绿原酸含量更科学、更全面。
本文实验部分首先对18批不同产地的金银花药材按照2005年《中华人民共和国药典》(第一部)上的规定和方法进行了定性鉴别,考察了它们的水分、灰分、酸不溶灰分以及有害元素的含量,并采用高效液相色谱法对它们中绿原酸的含量进行了测定。
本文采用高效液相色谱仪结合《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》对金银花药材进行了指纹图谱研究。研究内容包括:(1)色谱条件的选择分别对样品的提取方式、提取溶剂、进样量、柱温、流速、检测波长和流动相配比及洗脱方式进行了选择并加以确定;(2)方法学考察通过计算色谱图上选定的各共有峰相对保留时间和相对积分面积的RSD值来考察仪器和方法的精密度、重现性以及样品供试液的稳定性并得出结论;(3)指纹图谱的建立利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(研究版)软件的计算结果系统方法学考察后,以18批金银花药材的HPLC图谱数据建立指纹图谱,并导出建好的对照指纹图谱;(4)样品测定将建好的对照指纹图谱和样品图谱依次导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(评价版)软件中进行相似性对比,由软件输出的相似度判定样品是否合格;(5)结果讨论讨论检测波长、时间漂移、实验方法和仪器系统等因素对相似度的影响;(6)建议及展望针对目前指纹图谱技术存在的诸多问题提出了改进建议,并对指纹图谱技术在中草药分析中的应用前景作出了展望。
Flos Ionicerae is a common Chinese traditional medicine, dried budor flower of Lonicera japonica Thunb., Lonicera hypoglauca Miq. , Lonicera confusa DC. or Lonicera macranihoides Hand-Mazz. Picked in early straight dried in sunlight or after fumed by sulfur.
We have collected flos lonicerae of different area such as hennan,shandong ,chongqing. HPLC with PDA diode array detector was used to analyze 50% methanol extract of flos lonicerae. We have established HPLC fingerprint spectra of 50% methanol extract. The result showed 11peaks were common. The HPLC-FPS of 18 batches of Flos lonicerae from the different sources are very similar, It is a reliable and effective method with good reproducibility and has practical value to identify and provides the quality information.
Firstly, the experimentation in this thesis made some quantity discrimination to 18 batches of flos lonicerae. which is coming from different provinces where are planting honeysuckle. Secondly, the experimentation tests their content of water, draff, undissolved draff from acids and toxicity. Thirdly, using the HPLC mensurates the content of chlorogenic acid(CHA).
This dissertation, which uses HPLC and scheme from "Evaluation Standard System to the Similarity of Fingerprints Atlas in the ChineseTraditional Medicine(2004)", prosecutes some researches in Fingerprints Atlas of honeysuckle which include: (1) the selection of chromatogram condition which made some selection and confirmation of various samples by different distill means, distill solvent, the quantity of entered sample, temperature, flowing velocity, checking spectrum wave, the proportion of flowing phases, and method of rushing; (2) methodology which is a research method by calculating the time and RSD of relative area preserved from the peak number of chromatogram, and to assess the apparatus' accuracy and recurring and stability; (3) erecting Fingerprints Atlas which utilizes the calculating results by the program of "Evaluation Standard System to the Similarity of Fingerprints Atlas in the Chinese Traditional Medicine(2004A)" to construct the dactylogram figure by the data of HPLC of 18 batches of Flos lonicerae, and deduce to a complete instituted dactylogram figure; (4) mensurating of samples which is by the technique of collating the dactylogram figures and sample figures from the instituted figures which are deduced from "Evaluation Standard System to the Similarity of Fingerprints Atlas in the ChineseTraditional Medicine(2004A)" and determine the eligibility; (5) the discussing of results which includes discussing the similar impact by checking waves, fleeting time, experiment method and apparatus system; (6) suggestion and prospect which is aim at nowadays some problems in the fingerprint chromatogram and provide some innovational suggestions, furthermore prospect to the developmentof fingerprint chromatogram technology.
引文
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