瑶药枸骨叶（Ilex latifolia Thunb.）化学成分及生物活性研究
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摘要
枸骨叶，其原生植物鉴定为卫茅目冬青属冬青科大叶冬青(Ilex latifolia Thunb．)，在我国两广地区分布较广，资源丰富，是瑶族地区用途较广的一种中草药。本文对采自连南地区枸骨叶化学成分进行了研究，并对枸骨叶的抑菌、解酒、护肝以及降血压、降低高脂饮食大鼠血甘油三酯和血胆固醇水平等生物活性进行了初步探讨。
从枸骨叶的乙醇提取物中分离得到5个单体化合物，2个混合物。通过IR、UV、NMR以及MS等方法对分离得到的化合物进行了波谱解析，单体化合物分别鉴定为：β—谷甾醇(1)和乌索烷—12—烯—3β，28—二羟基(2)、乌索酸(3)，化合物4和化合物5结构待定。混合物通过GC-MS鉴定为：棕榈酸乙酯(6)、棕榈酸丁酯(7)，乌索—9(11)，12—二烯—3—醇(8)和β—香树脂醇(9)，其中化合物2(乌索烷—12—烯—3β，28—二羟基)是首次从枸骨叶中分离得到。
采用水蒸气蒸馏法提取枸骨叶挥发性成分，并通过气相色谱—质谱联用分析，鉴定出枸骨叶挥发油中酸、酯、醇以及酮、酰胺、含氧萜类等42个化学成分，运用峰面积归一化法测定各化学成分的相对百分含量，已鉴定的化学成分占挥发油总量的83.46％。对枸骨叶挥发性成分的研究本文为首次报道。
采用用微量稀释法测定瑶药枸骨叶5种不同溶剂组分的最小抑菌浓度(MIC)，探讨枸骨叶不同溶剂提取物的体外抑菌活性。结果表明枸骨叶中的3种溶剂组分(乙醇提取物、正丁醇和乙酸乙酯萃取物)均显示一定的抑菌效用(MIC≤2.50mg／mL)，其乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的抑菌效果最为显著MIC为0.625mg／mL，醇提物和正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌也显示较好的抑菌效果MIC均为2.50 mg／mL。
采用小鼠急性酒精中毒实验模型和CCl_4致小鼠急性肝损伤模型对瑶药枸骨叶以及枸骨叶—野葛花复方的解酒、护肝效果进行了初步研究。实验结果证明，枸骨叶以及枸骨叶—野葛花复方对降低小鼠的醉酒率、延长耐受时间、降低醉酒持续时间和血乙醇含量均有不同程度的效果。枸骨叶及复方也能有效降低CCl_4致急性肝
暨南大学硕士毕业论文
损小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性，其中构骨叶低剂量组、中剂量组和复
方高剂量组效果较好。本文还研究了构骨叶对大鼠正常血压，对高脂饮食大鼠的血
胆固醇、血甘油三醋的的影响，实验结果表明，饮用构骨叶茶对正常大鼠血压有降
压作用，作用可维持Zh以上，静脉注射构骨叶水提物降压作用明显并呈现量效关
系;进食高脂饲料的大鼠饮用构骨叶茶可防止血胆固醇及甘油三醋的上升，对甘油
三酷的影响，也呈现量效关系。
Ilex.latifolia Thunb. grows widely in guangxi and guangdong province and has a broad resource. It is s kind of herbal medicine with wide treatment functions of the Yao nationality. We studtied the chemical constitunts of Ilex latifolia Thunb. from Liannan, and explored the antibacterial effective, relieving alcohol toxicity effect and liver protection effect ect.
Five pure constituents and two mixtures were isolated from the Ilex.latifolia Thunb. Three pure constituents were determined as P -sitosterol( 1), urs!2 - ene-3 P , 28-diol(2), ursolic acid (3) by manifold spectroscopy methods such as IR, *HNMR, !3CNMR and MS ect., compound 4 and compound 5 are in determining. Two mixtures were identified as palmitic acid ethyl ester(6), palmitic acid n- butyl ester(7) and Ursa-9(1 l),12-dien-3- ol (8), B -Amyrin (9) by GC-MS.Compound 2 was isolated from Ilex.latifolia Thunb. firstly.
The essential oil of Ilex latifolia Thunb.vsas extracted by steam distillation. The chemical constituents in the essential oil were analyzed by GC-MS. Forty-two components (acid,ester, alcohols, ketones, amides and some meterpenes)were identified. The contents of the constituents identified make up 83.46% of the total essential oil.
To study the antibacterial activity of Ilex latifolia Thunb. in vitro by way of double-dilute method in plates of 96 wells. Three kinds of extractions of Ilex latifolia Thunb. (ethanol extg. ,n- butylol extg. and acetic acid ester extg. )all have antibacterial activities(MIC 2.50 mg/mL). The antibacterial activity of acetic acid ester extg. to Staphylococcus aureus and Escherichia coli was evident (MIC=0.625 mg/mL), the antibacterial activities of ethanol extg. and n- butylol extg. to Staphylococcus aureus were better(MIC=2.50mg/mL).
To study the relieving alcohol toxicity effect and liver protection effect of Ilex
latifolia Thunb. and Ilex latifolia Thunb. -Flos Pueraria omeiensis (L P) with the alcohol toxicity model and the liver injure model made by CCl4 . The results showed I
and L & P can shorten sleeping time induced by alcohol, decrease alcohol concentration, reduce alcohol toxicity and protect the liver of mice injured by CCl4 and dec- rease the ALT activity. The low dose ,the middle dose of Ilex latifolia Thunb. and the high
dose of L & P had better effect. In our experiment, we explored the effect to hypertension, CHL, TG level with rats. The results showed Ilex latifolia Thunb.can drop hypertension by drinking. Injecting Ilex latifolia Thunb. in vein had same effect and the effect has relation to the concentration of Ilex latifolia Thunb. The study showed that Ilex latifolia Thunb. can decrease the CHL and TG level in the serum of rats eating high fat foods , the decrement has relation to the concentr ation of Ilex latifolia Thunb. too.
从枸骨叶的乙醇提取物中分离得到5个单体化合物，2个混合物。通过IR、UV、NMR以及MS等方法对分离得到的化合物进行了波谱解析，单体化合物分别鉴定为：β—谷甾醇(1)和乌索烷—12—烯—3β，28—二羟基(2)、乌索酸(3)，化合物4和化合物5结构待定。混合物通过GC-MS鉴定为：棕榈酸乙酯(6)、棕榈酸丁酯(7)，乌索—9(11)，12—二烯—3—醇(8)和β—香树脂醇(9)，其中化合物2(乌索烷—12—烯—3β，28—二羟基)是首次从枸骨叶中分离得到。
采用水蒸气蒸馏法提取枸骨叶挥发性成分，并通过气相色谱—质谱联用分析，鉴定出枸骨叶挥发油中酸、酯、醇以及酮、酰胺、含氧萜类等42个化学成分，运用峰面积归一化法测定各化学成分的相对百分含量，已鉴定的化学成分占挥发油总量的83.46％。对枸骨叶挥发性成分的研究本文为首次报道。
采用用微量稀释法测定瑶药枸骨叶5种不同溶剂组分的最小抑菌浓度(MIC)，探讨枸骨叶不同溶剂提取物的体外抑菌活性。结果表明枸骨叶中的3种溶剂组分(乙醇提取物、正丁醇和乙酸乙酯萃取物)均显示一定的抑菌效用(MIC≤2.50mg／mL)，其乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的抑菌效果最为显著MIC为0.625mg／mL，醇提物和正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌也显示较好的抑菌效果MIC均为2.50 mg／mL。
采用小鼠急性酒精中毒实验模型和CCl_4致小鼠急性肝损伤模型对瑶药枸骨叶以及枸骨叶—野葛花复方的解酒、护肝效果进行了初步研究。实验结果证明，枸骨叶以及枸骨叶—野葛花复方对降低小鼠的醉酒率、延长耐受时间、降低醉酒持续时间和血乙醇含量均有不同程度的效果。枸骨叶及复方也能有效降低CCl_4致急性肝
暨南大学硕士毕业论文
损小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性，其中构骨叶低剂量组、中剂量组和复
方高剂量组效果较好。本文还研究了构骨叶对大鼠正常血压，对高脂饮食大鼠的血
胆固醇、血甘油三醋的的影响，实验结果表明，饮用构骨叶茶对正常大鼠血压有降
压作用，作用可维持Zh以上，静脉注射构骨叶水提物降压作用明显并呈现量效关
系;进食高脂饲料的大鼠饮用构骨叶茶可防止血胆固醇及甘油三醋的上升，对甘油
三酷的影响，也呈现量效关系。
Ilex.latifolia Thunb. grows widely in guangxi and guangdong province and has a broad resource. It is s kind of herbal medicine with wide treatment functions of the Yao nationality. We studtied the chemical constitunts of Ilex latifolia Thunb. from Liannan, and explored the antibacterial effective, relieving alcohol toxicity effect and liver protection effect ect.
Five pure constituents and two mixtures were isolated from the Ilex.latifolia Thunb. Three pure constituents were determined as P -sitosterol( 1), urs!2 - ene-3 P , 28-diol(2), ursolic acid (3) by manifold spectroscopy methods such as IR, *HNMR, !3CNMR and MS ect., compound 4 and compound 5 are in determining. Two mixtures were identified as palmitic acid ethyl ester(6), palmitic acid n- butyl ester(7) and Ursa-9(1 l),12-dien-3- ol (8), B -Amyrin (9) by GC-MS.Compound 2 was isolated from Ilex.latifolia Thunb. firstly.
The essential oil of Ilex latifolia Thunb.vsas extracted by steam distillation. The chemical constituents in the essential oil were analyzed by GC-MS. Forty-two components (acid,ester, alcohols, ketones, amides and some meterpenes)were identified. The contents of the constituents identified make up 83.46% of the total essential oil.
To study the antibacterial activity of Ilex latifolia Thunb. in vitro by way of double-dilute method in plates of 96 wells. Three kinds of extractions of Ilex latifolia Thunb. (ethanol extg. ,n- butylol extg. and acetic acid ester extg. )all have antibacterial activities(MIC 2.50 mg/mL). The antibacterial activity of acetic acid ester extg. to Staphylococcus aureus and Escherichia coli was evident (MIC=0.625 mg/mL), the antibacterial activities of ethanol extg. and n- butylol extg. to Staphylococcus aureus were better(MIC=2.50mg/mL).
To study the relieving alcohol toxicity effect and liver protection effect of Ilex
latifolia Thunb. and Ilex latifolia Thunb. -Flos Pueraria omeiensis (L P) with the alcohol toxicity model and the liver injure model made by CCl4 . The results showed I
and L & P can shorten sleeping time induced by alcohol, decrease alcohol concentration, reduce alcohol toxicity and protect the liver of mice injured by CCl4 and dec- rease the ALT activity. The low dose ,the middle dose of Ilex latifolia Thunb. and the high
dose of L & P had better effect. In our experiment, we explored the effect to hypertension, CHL, TG level with rats. The results showed Ilex latifolia Thunb.can drop hypertension by drinking. Injecting Ilex latifolia Thunb. in vein had same effect and the effect has relation to the concentration of Ilex latifolia Thunb. The study showed that Ilex latifolia Thunb. can decrease the CHL and TG level in the serum of rats eating high fat foods , the decrement has relation to the concentr ation of Ilex latifolia Thunb. too.
引文
[1] 张兰桐，任雷鸣，温进坤．中药现代化研究与发展战略[J]．河北医科大学学报，2000，21(4)：253—256
[2] 罗金裕．覃显玉．瑶族医药概述[J]．中国民族民间医药杂志，1994，3(10)：1—4
[3] 戴斌，匠翠嫦．瑶药资源及其开发利用研究进展[J]．中国民族民间医药杂志，2003，3(65)：314—318
[4] 何子强，黄崇巧．中国民族医药现状概论[J]．中国民族民间医药杂志，1995，(16)：39—43
[5] 中华人民共和国卫生部药政管理局、中国药品生物制品检定所编，现代实用本草(中册)[M]．人民卫生出版社，2000：730—732
[6] 江苏省植物研究所，中国医学科学院药用植物资源开发研究所等编著．新华本草纲要[M]．第三册，第一版．上海科学技术出版社，1990：12．
[7] 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草[M]．上海科学技术出版社，1998：151
[8] 蒋建敏，许实波．苦丁茶化学成分和药理作用研究进展[J]．时针国医国药，2002，11(1)：92
[9] 罗源生，吴忠，梁松庆．苦丁茶中总黄酮及微量元素研究[J]．广东微量科学．1995，2(5)：65—67
[10] 周永红．王立升，韦藤幼．苦丁茶化学成分研究[J]．广西大学学报(自然科学版)，1999，9(24)．203—204
[11] Huang,jing, Oginhara, Yukio, Watanabe,Fumiko. Triterpenoids from stem bark of llex latifolia.Nat. Med. (Tokyo), 2000,54(2):107
[12] Nishimura, Keiich, Miyase,Oshio, Noguctii. Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase(ACAT)inhibitors from Ilex spp. Nat. Med (Tokyo),2000,54(6):297-305
[13] 王淘淘，鲁润华，汪汉卿，陈忠．大叶冬青三萜糖甙结构的研究[J]．波谱学杂志，2000，17(4)：283—296
[14] Ouyang, M. A., Wang , H. Q., Chen, Z. L. Triterpenoids from leaves of Ilex latifolia.Phytochemistry, 1997, 45(7):1501-1505
[15] Ouyang, M. A., Yu-Qing Liu, Wang. Triterpenoids from leaves of Ilex latifolia. Phytochemistry,1998, 49(8): 2483-2486
[16] Huang,jing, Wang,Xu, Oginhara, Yukio. Latifolosides K and L, two new triterpenoid saponins
from the bark of Ilex latifolia. Chem.Pharm.Bull, 2001,49(6):765-767
[17] 黄煌，黄晓敏，李洁，欧录明，岳赛．苦丁茶抗菌效能的实验研究[J]．衡阳医学院学报，1999，27(2)：123—125．
[18] 蒋建敏，许实波．苦丁茶化学成分和药理作用研究进展[J]．时针国医国药，2002，11(1) ：92
[19] 董艳，乔建成，张晓丽，梁忆红．苦丁茶药效学实验研究[J]．牡丹江医学院学报，2001，22(1)：7—9
[20] 陈薇，王恒山，黄世稳，邓彦兴，钟代信．大叶苦丁茶抗氧化成分及抗氧化性能研究(Ⅰ)[J]．广西植物，2002，22(5)：463—466
[21] 陈薇．王恒山，黄世稳．大叶苦丁茶成分提取及抗氧化性能研究[J]．天然产物研究与开发，2002，14(4)：24—28
[22] 许实波，蒋建敏，许东晖，江润祥，胡秀英．苦丁茶水提物的毒理学研究[J]．中山大学学报(自然科学版)，2001，40(3)：93—111
[23] 屈立志，陆婷，鲁培基，奚九一．苦丁茶对大鼠肾上腺素性高血糖的影响[J]．中药新药与临床药理，1999．10(5)：279—280
[24] 徐元秀，宋耕英，张鲁彤．中药苦丁茶对大鼠的抗生育作用[J]．西安医学院学报，1984，(4)：379
[25] 徐元秀，宋耕英，张鲁彤．中药苦丁茶对动物子宫平滑肌的作用[J]．西安医学院学报，1985，(2)：125—126
[26] 杨杏林，范海鹰．中药苦丁茶的研究开发述评[J]．内蒙古中医药，2003，3(3)：35—37
[27] 张树人．苦丁茶及其伪品的性状鉴别[J]．时珍国医国药．2001，12(7)：613
[28] 叶端炉．苦丁茶及其混淆品种的鉴别[J]．时珍国医国药，2001，12(7)：612．
[2] 罗金裕．覃显玉．瑶族医药概述[J]．中国民族民间医药杂志，1994，3(10)：1—4
[3] 戴斌，匠翠嫦．瑶药资源及其开发利用研究进展[J]．中国民族民间医药杂志，2003，3(65)：314—318
[4] 何子强，黄崇巧．中国民族医药现状概论[J]．中国民族民间医药杂志，1995，(16)：39—43
[5] 中华人民共和国卫生部药政管理局、中国药品生物制品检定所编，现代实用本草(中册)[M]．人民卫生出版社，2000：730—732
[6] 江苏省植物研究所，中国医学科学院药用植物资源开发研究所等编著．新华本草纲要[M]．第三册，第一版．上海科学技术出版社，1990：12．
[7] 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草[M]．上海科学技术出版社，1998：151
[8] 蒋建敏，许实波．苦丁茶化学成分和药理作用研究进展[J]．时针国医国药，2002，11(1)：92
[9] 罗源生，吴忠，梁松庆．苦丁茶中总黄酮及微量元素研究[J]．广东微量科学．1995，2(5)：65—67
[10] 周永红．王立升，韦藤幼．苦丁茶化学成分研究[J]．广西大学学报(自然科学版)，1999，9(24)．203—204
[11] Huang,jing, Oginhara, Yukio, Watanabe,Fumiko. Triterpenoids from stem bark of llex latifolia.Nat. Med. (Tokyo), 2000,54(2):107
[12] Nishimura, Keiich, Miyase,Oshio, Noguctii. Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase(ACAT)inhibitors from Ilex spp. Nat. Med (Tokyo),2000,54(6):297-305
[13] 王淘淘，鲁润华，汪汉卿，陈忠．大叶冬青三萜糖甙结构的研究[J]．波谱学杂志，2000，17(4)：283—296
[14] Ouyang, M. A., Wang , H. Q., Chen, Z. L. Triterpenoids from leaves of Ilex latifolia.Phytochemistry, 1997, 45(7):1501-1505
[15] Ouyang, M. A., Yu-Qing Liu, Wang. Triterpenoids from leaves of Ilex latifolia. Phytochemistry,1998, 49(8): 2483-2486
[16] Huang,jing, Wang,Xu, Oginhara, Yukio. Latifolosides K and L, two new triterpenoid saponins
from the bark of Ilex latifolia. Chem.Pharm.Bull, 2001,49(6):765-767
[17] 黄煌，黄晓敏，李洁，欧录明，岳赛．苦丁茶抗菌效能的实验研究[J]．衡阳医学院学报，1999，27(2)：123—125．
[18] 蒋建敏，许实波．苦丁茶化学成分和药理作用研究进展[J]．时针国医国药，2002，11(1) ：92
[19] 董艳，乔建成，张晓丽，梁忆红．苦丁茶药效学实验研究[J]．牡丹江医学院学报，2001，22(1)：7—9
[20] 陈薇，王恒山，黄世稳，邓彦兴，钟代信．大叶苦丁茶抗氧化成分及抗氧化性能研究(Ⅰ)[J]．广西植物，2002，22(5)：463—466
[21] 陈薇．王恒山，黄世稳．大叶苦丁茶成分提取及抗氧化性能研究[J]．天然产物研究与开发，2002，14(4)：24—28
[22] 许实波，蒋建敏，许东晖，江润祥，胡秀英．苦丁茶水提物的毒理学研究[J]．中山大学学报(自然科学版)，2001，40(3)：93—111
[23] 屈立志，陆婷，鲁培基，奚九一．苦丁茶对大鼠肾上腺素性高血糖的影响[J]．中药新药与临床药理，1999．10(5)：279—280
[24] 徐元秀，宋耕英，张鲁彤．中药苦丁茶对大鼠的抗生育作用[J]．西安医学院学报，1984，(4)：379
[25] 徐元秀，宋耕英，张鲁彤．中药苦丁茶对动物子宫平滑肌的作用[J]．西安医学院学报，1985，(2)：125—126
[26] 杨杏林，范海鹰．中药苦丁茶的研究开发述评[J]．内蒙古中医药，2003，3(3)：35—37
[27] 张树人．苦丁茶及其伪品的性状鉴别[J]．时珍国医国药．2001，12(7)：613
[28] 叶端炉．苦丁茶及其混淆品种的鉴别[J]．时珍国医国药，2001，12(7)：612．