蚕沙总黄酮的提取工艺研究
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摘要
蚕沙是家蚕(Bombyx mori L.)幼虫排出的干燥粪便,是我国传统中药,主治头风、肢体麻木、关节炎等。近年来研究证实其具有抗肿瘤、降糖降脂、抗炎抑菌等药理活性。目前对蚕沙的研究仅局限于叶绿素及其衍生物、果胶、生物碱等成分,而对其重要的化学成分黄酮的报道极少,本文对蚕沙黄酮的提取纯化工艺进行了研究,主要研究内容和结果如下:
采用试管预示法对蚕沙化学成分进行了系统预示,初步可以确定蚕沙中含有黄酮类、生物碱、糖及其苷、皂苷、萜类和甾体、内酯、香豆素、氨基酸和多肽、蛋白质等;可能含有酚类成分、不含强心苷、蒽醌、挥发油。
采用超声辅助溶剂提取法和总黄酮含量的分光光度测定,研究了乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数等单因素对蚕沙总黄酮提取率的影响,在此基础上,采用L9 (33)正交试验,优化了蚕沙总黄酮提取工艺。通过对AB-8, S-8, D101三种型号大孔吸附树脂纯化蚕沙黄酮的效果比较,筛选出了最适合大孔树脂。最后采用振荡和树脂柱两种方式,研究了AB-8型大孔吸附树脂对蚕沙总黄酮的纯化工艺,得出工艺参数:
超声辅助提取蚕沙中总黄酮的工艺参数为:8倍量的60%乙醇超声提取2次,每次25 min。使用此工艺50 g蚕沙可以得到0.42 g蚕沙黄酮粗品,粗品中总黄酮含量为4.66%;
AB-8型树脂振荡纯化蚕沙总黄酮的工艺参数为: 0.06 mg/ml,pH为6的蚕沙总黄酮溶液,常温下振荡机上吸附2 h达到饱和,用90 %的乙醇解吸,解吸率92 %;
AB-8型大孔吸附树脂柱动态解吸工艺:0.06 mg/ml,pH为6的蚕沙总黄酮溶液上柱,流速1 ml/min,用3 BV蒸馏水去杂,3-5 BV 90%的乙醇解吸附,流速为1 ml/min,总黄酮回收率89.9 %,采用该工艺得到的精制品中总黄酮含量37.5%,是粗提品中的8倍。
提取工艺重现性好,为后续研究提供了理论依据;纯化工艺吸附解吸性能良好,回收率高,精制品黄酮含量高,工艺可行。
Silkworm feces, the dried excrement excreted by the larva of Bombyx mori Linnacus, have been used as traditional Chinese medicine, to treat cancer, hypertension, hyperlipidemia and so on. Currently, only pectin, alkaloids, chlorophyll and its derivatives were studied. We researched the extraction technology of flavonoids from Silkworm feces, the mainly contents and results were following:
The pretest-tube method is used to indicate the chemical composition in Silkworm feces, and the results show that there exist: flavonoids, alkaloids, carbohydrates , saponins , steroids , terpenoids , coumarines , amino acids , proteins and no cardiac glycosides, Anthraquinone and volatile oils in Silkworm feces.
The total flavonoid was determined by spectrophotometry and ultrasound-assisted. The influencing factors on the extraction rate of flavoniod in the Silkworm feces were investigated in the single-factor experiments. The factors are ethanol density, ethanol dosage, extracting time and extracting times. On this basis, optimized this extraction process by L9(33) orthogonal test.
The result showed that AB-8 macroporous resin is good to the total flavonoids of the Silkworm feces comparing with the findings in the three macroporous resin (AB-8, S-8, D101) adsorption and desorption experiments. Finally, we studied the purification process of total flavonoid by resin.
The best extraction conditions of total flavonoid are: 8 times amount of 60% ethanol, ultrasonic extracting 3 times and every time with 25 minutes, and the gross production of the total flavonoids is 4.66%.
The technological parameters of extracting the total flavonoinds of the Silkworm feces in AB-8 macroporous resin oscillation experiments are: the concentration of the Silkworm feces extraction solution is 0.06 mg/ml, pH value is 6, and it yields saturated solution after two-hour adsorption. The technologies of the macroporous resin dynamic adsorption and desorption are: extraction solution is 0.06 mg/ml, pH value is 6, the flow velocity is 1.0 ml/min, remove the impurities with 3VB distilled water, desorption with 3-5 VB 90% ethanol, the flow velocity is 1.0 ml/min, the recovery rate of the total flovoniods is 89.9%. The total flavonoids was 37.5% which is 8 times of the crude production .
The extraction process is more stable and well repetitiveness, providing theoretical basis for further studies. The purification process is feasible.
采用试管预示法对蚕沙化学成分进行了系统预示,初步可以确定蚕沙中含有黄酮类、生物碱、糖及其苷、皂苷、萜类和甾体、内酯、香豆素、氨基酸和多肽、蛋白质等;可能含有酚类成分、不含强心苷、蒽醌、挥发油。
采用超声辅助溶剂提取法和总黄酮含量的分光光度测定,研究了乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数等单因素对蚕沙总黄酮提取率的影响,在此基础上,采用L9 (33)正交试验,优化了蚕沙总黄酮提取工艺。通过对AB-8, S-8, D101三种型号大孔吸附树脂纯化蚕沙黄酮的效果比较,筛选出了最适合大孔树脂。最后采用振荡和树脂柱两种方式,研究了AB-8型大孔吸附树脂对蚕沙总黄酮的纯化工艺,得出工艺参数:
超声辅助提取蚕沙中总黄酮的工艺参数为:8倍量的60%乙醇超声提取2次,每次25 min。使用此工艺50 g蚕沙可以得到0.42 g蚕沙黄酮粗品,粗品中总黄酮含量为4.66%;
AB-8型树脂振荡纯化蚕沙总黄酮的工艺参数为: 0.06 mg/ml,pH为6的蚕沙总黄酮溶液,常温下振荡机上吸附2 h达到饱和,用90 %的乙醇解吸,解吸率92 %;
AB-8型大孔吸附树脂柱动态解吸工艺:0.06 mg/ml,pH为6的蚕沙总黄酮溶液上柱,流速1 ml/min,用3 BV蒸馏水去杂,3-5 BV 90%的乙醇解吸附,流速为1 ml/min,总黄酮回收率89.9 %,采用该工艺得到的精制品中总黄酮含量37.5%,是粗提品中的8倍。
提取工艺重现性好,为后续研究提供了理论依据;纯化工艺吸附解吸性能良好,回收率高,精制品黄酮含量高,工艺可行。
Silkworm feces, the dried excrement excreted by the larva of Bombyx mori Linnacus, have been used as traditional Chinese medicine, to treat cancer, hypertension, hyperlipidemia and so on. Currently, only pectin, alkaloids, chlorophyll and its derivatives were studied. We researched the extraction technology of flavonoids from Silkworm feces, the mainly contents and results were following:
The pretest-tube method is used to indicate the chemical composition in Silkworm feces, and the results show that there exist: flavonoids, alkaloids, carbohydrates , saponins , steroids , terpenoids , coumarines , amino acids , proteins and no cardiac glycosides, Anthraquinone and volatile oils in Silkworm feces.
The total flavonoid was determined by spectrophotometry and ultrasound-assisted. The influencing factors on the extraction rate of flavoniod in the Silkworm feces were investigated in the single-factor experiments. The factors are ethanol density, ethanol dosage, extracting time and extracting times. On this basis, optimized this extraction process by L9(33) orthogonal test.
The result showed that AB-8 macroporous resin is good to the total flavonoids of the Silkworm feces comparing with the findings in the three macroporous resin (AB-8, S-8, D101) adsorption and desorption experiments. Finally, we studied the purification process of total flavonoid by resin.
The best extraction conditions of total flavonoid are: 8 times amount of 60% ethanol, ultrasonic extracting 3 times and every time with 25 minutes, and the gross production of the total flavonoids is 4.66%.
The technological parameters of extracting the total flavonoinds of the Silkworm feces in AB-8 macroporous resin oscillation experiments are: the concentration of the Silkworm feces extraction solution is 0.06 mg/ml, pH value is 6, and it yields saturated solution after two-hour adsorption. The technologies of the macroporous resin dynamic adsorption and desorption are: extraction solution is 0.06 mg/ml, pH value is 6, the flow velocity is 1.0 ml/min, remove the impurities with 3VB distilled water, desorption with 3-5 VB 90% ethanol, the flow velocity is 1.0 ml/min, the recovery rate of the total flovoniods is 89.9%. The total flavonoids was 37.5% which is 8 times of the crude production .
The extraction process is more stable and well repetitiveness, providing theoretical basis for further studies. The purification process is feasible.
引文
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