“逆灸”对大鼠更年期衰变的影响及机制研究
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摘要
“逆灸”即在机体健康无病、疾病发生之前或疾病发展轻浅之时,预先应用艾灸方法,激发经络之气,增强机体的抗病与应变能力,促进健康、保健延年、防止疾病的发生或减轻随后疾病损害的传统方法,是针灸“治未病”的重要内容。关元穴是肝、脾、肾经与任脉的交会穴,全身强壮要穴之一。艾灸关元穴是历代保健防病、延年益寿的方法。本论文主要从“治未病”角度对逆灸关元穴预防更年期衰变进行了理论和实验研究,并对其机制进行了初步探讨,以期对更年期综合征的防治提供理论和实验依据,探讨针灸“治未病”的规律与机制。现摘要如下:
1 文献与理论研究总结
1.1 更年期病理主要是以生殖内分泌紊乱为先导,并影响神经、免疫功能的变化为基础。中医学认为更年期的病理主要是以肾虚为主,并影响肝、脾、心、肺功能变化。中医“肾”的功能与神经内分泌免疫网络相关,尤其与“下丘脑—垂体—性腺轴”的功能关系密切。
1.2 人的衰老年龄一般从30-35岁开始,因而保健防衰的介入年龄应从30-35岁开始。艾灸关元穴有使阳生阴长之意,具有保健防病、延年益寿作用。
1.3 针灸预处理与“缺血预适应”(Ischemic preconditioning,IPC)等预处理方法有相似的规律与机制,并有其自身特点。针灸预处理更安全、方便、实用。“逆灸”与预处理方法有相似之处。
2 实验研究总结
以雌性自然更年期大鼠为模型,从10月龄开始逆灸关元穴八周,采用放免分析、HE染色、免疫组化、化学比色等方法,观察对随后更年期12、14、16月龄时下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴变化的影响;对卵巢、子宫组织病理学变化的影响;对血清、子宫的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-α(TGF-α)、一氧化氮合酶(NOS)及下丘脑促肾上腺激素释放激素(CRH)、血浆促肾上腺激素(ACTH)含量以及子宫、脾脏、下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)雌激素受体(ER-α)表达的影响,以研究逆灸关元穴对更年期衰变的“治未病”效应及其规律和作用机制。实验研究主要结论如下:
2.1 对照组大鼠更年期随月龄增加卵巢、子宫HE染色显示萎缩退变,如卵巢内卵泡逐渐减少或消失,间质细胞减少,结缔组织增多;子宫内膜的大部分单层柱状上皮逐渐消失,出现鳞状上皮化改变,固有层的基质细胞、腺体和血管减少,组织结构紊乱,纤维结缔组织明显增多。子宫雌二醇(E_2)、孕激素(P)、雌激素受体-α(ER-α)表达水平逐渐降低。逆灸组的卵巢、子宫HE染色明显比对照组好,表现在大鼠卵巢的生发上皮较厚、卵巢内可见卵滤泡、结缔组织较少。逆灸组子宫结构虽也有退化表现,但与对照组比较,子宫结构明显好,表现在大鼠子宫内膜的大部分仍为单层柱状上皮被覆或鳞状上皮化改变较轻,固有层的基质细胞、腺体和血管比对照组多,纤维结缔
逆灸关元穴对大鼠更年期衰变的影响及机制研究
组织也比对照组相对少。肌层比较厚,有明显的淋巴样细胞浸润和适量的血
管,纤维化程度也轻。提示逆灸虽不能完全逆转卵巢、子宫的衰变,但可有
效减轻卵巢、子宫结构的衰变程度,同时增加子宫EZ、P的含量(以逆灸16月
龄组有效果最明显)、提高ER一Q的表达水平(以逆灸12、14月龄组效果显
著)。提示逆灸关元穴对于子宫结构衰变的防护及改善与促进子宫局部EZ、
ER一Q的合成与代谢、提高EZ与ER一Q结合,使雌激素的作用得到有效发挥有
关,其作用又与神经对灸信号的传导有关。逆灸在增加子宫EZ含量的同时,P
的拮抗作用也相应增加,对于预防子宫内膜癌有重要意义。同时,说明逆灸
关元穴和单纯的补充雌激素具有不同的作用,它具有多环节、多靶点调节作
用,因而不易产生副作用。
2.2对照组大鼠在10、12月龄时HPO轴已经开始轻微的波动;到14月龄波
动的幅度开始增大,下丘脑GnRH明显下降(P(0 .05);到16月龄HPO轴出现
明显病理改变,如血清EZ、T、EZ/T、FSH、血浆GnRH均明显升高,下丘脑GnRH
明显下降。大鼠更年期表现为HPO轴之间时序性去同步化。逆灸有降低血清
FSH、LH的趋势,下丘脑GnRH含量在逆灸12、16月龄组比对照组明显增加
(P<0.05),逆灸14月龄组比对照组降低,但无显著性差异(P>0 .05);血浆
GnRH在逆灸12、16月龄组比对照组明显升高(P<0 .05),14月龄基本无变化。
逆灸各组与对照各组血清EZ比较,呈现双向调节的效应,即使12月龄下降的
血清EZ升高,使14、16月龄升高的血清EZ降低,并在16月龄的效应有显著
性差异(P<0.05)。逆灸组血清T下降,EZ/T增高。逆灸关元穴总体上显示了
对更年期HPO轴之间协调性的维护,显示了其良性的调节作用。
2.3更年期大鼠,随月龄增加,血清TNF一Q波动性降低、升高,子宫TNF一。
波动性降低,同时脾脏ER一。表达水平明显降低。逆灸关元穴可调节血清
TNF一Q的含量,提高子宫TNF一。含量,并提高脾脏的重量指数与脾脏ER一a
的表达水平。逆灸对TNF一Q、脾脏ER一Q水平的影响效应均表现出12月龄的
早期效应和16月龄的后效应。脾脏的重量指数与脾脏ER一。表达水平的相关
分析为正相关,提示逆灸关元穴对雌性大鼠更年期免疫功能的调节作用,与
免疫器官的ER一Q介导有关。
2.4对照组大鼠更年期ER一Q在视上核(SON)、室旁核(PVN)中的表达随
增龄表现为不同的分布趋势,在前者呈先升高后降趋势,在后者为增高?
"Preventative moxibustion", called nijiu in Chinese ,is a commonly used preventive technique commonly used in Chinese medicine ..It refers to the stimulation of qi and blood within the meridians when a person is healthy or he has a mild condition, the self-healing force and stress ability within the body will be strengthened so that health protection or alleviation of diseases and disorders could be achieved. Moxibustion on Guanyuan(REN 4) is a traditional way to prevent diseases and prolong the life. Systematic studies on menopausal rats by"Preventative moxibustion" on Guanyuan(REN 4) both the theory and practice of this techniques were researched in this paper. Experimental MethodsThe model: Female 10 month old rats were used at the menopausal stage. The rats were given the Preventative Moxibustion on the Guanyuan (REN 4) for eight weeks. Then using the techniques of the Hematoxylin eosin(HE), immuunohistochemistry, histopathology, radioimmunity and biochemistry, observations of the organism changes were made in the stages of the 12th,14th and 16th month. Such as the changes of the HPO, the tissue pathology of the ovary and uterus, the TNF-α, TGF-α and NOS in the uterus and the serum, the CRH in the hypothalamus, the ACTH in the plasma, and the expression of the ER-a in the uterus ,spleen ,PVN and SON of the hypothalamus. Rresults1. The HPO of the female rats in the model groups began to change in the 10th month and the 12th month, but the results were insignificant. There was decreased significance in GnRH in the hypothalamus in the 14th month and the 16th month, and there was a significant increased of the E_2、T、E_2/T、 FSH in the serum and the GnRH in the plasma. After giving the preventative moxibustion, the GnRH in the hypothalamus and the plasma of the groups using the preventative moxibustion were increased in the 12th month and the 16th month significantly from those in the model groups; the FSH and LH in the serum showed a decreased trend ; the E_2 in the serum was increased in the 12th month and decreased in the 14th month and the 16th month, among these , the effect is statistical significant in the 16th month. It shows a positive dual-regulation to the E_2 in the serum in the preventative moxibustion groups .The T in the serum was decreased significantly in the 16th month; the E_2/T in the serum was increased in the 12th month and the 14th month, but did not showed the statistical significance. In generally, it shows the protective functions for harmonizing of the HPO after giving preventative moxibustion on the Guanyuan (REN 4).2. The structures of the ovaries and the uterus of the female rats in the model groups showed degenerative changes by the HE method, such as the structure of a mass, the connectives tissue was increased and the ovary follicles were reduced or disappeared gradually. Meanwhile, the levels of the E_2, P and the expressions of the ER-α in the uterus had decreased. In the groups using the preventative moxibustion , the framework of the
ovaries and the uterus were better than that in the model groups and the levels of the E_2, P (The effects in the 16th month were statistical significant) and the expressions of the ER-α in the uterus was increased. The effects in the 12th and the 14th month were statistical significant.3. In the models groups, the TNF-α in the serum were increased and had decreased in the uterus of the female rats. The weight of the spleen and the expressions of the ER-α in the spleen were decreased in the model groups. In the groups using the preventative moxibustion, the TNF-α in the serum had decreased more than in the model groups significantly in the 12th and the 16th month; the TNF-α in the uterus, the weight of the spleen and the expressions of the ER-α in the spleen were increased significantly in the 12th month and the 16th month. It showed the positive correlation between the weight of the spleen and the expressions of the ER-α in the spleen by using correlative analysis. It hints that the regulative function of the preventative moxibustion on t
1 文献与理论研究总结
1.1 更年期病理主要是以生殖内分泌紊乱为先导,并影响神经、免疫功能的变化为基础。中医学认为更年期的病理主要是以肾虚为主,并影响肝、脾、心、肺功能变化。中医“肾”的功能与神经内分泌免疫网络相关,尤其与“下丘脑—垂体—性腺轴”的功能关系密切。
1.2 人的衰老年龄一般从30-35岁开始,因而保健防衰的介入年龄应从30-35岁开始。艾灸关元穴有使阳生阴长之意,具有保健防病、延年益寿作用。
1.3 针灸预处理与“缺血预适应”(Ischemic preconditioning,IPC)等预处理方法有相似的规律与机制,并有其自身特点。针灸预处理更安全、方便、实用。“逆灸”与预处理方法有相似之处。
2 实验研究总结
以雌性自然更年期大鼠为模型,从10月龄开始逆灸关元穴八周,采用放免分析、HE染色、免疫组化、化学比色等方法,观察对随后更年期12、14、16月龄时下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴变化的影响;对卵巢、子宫组织病理学变化的影响;对血清、子宫的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-α(TGF-α)、一氧化氮合酶(NOS)及下丘脑促肾上腺激素释放激素(CRH)、血浆促肾上腺激素(ACTH)含量以及子宫、脾脏、下丘脑室旁核(PVN)、视上核(SON)雌激素受体(ER-α)表达的影响,以研究逆灸关元穴对更年期衰变的“治未病”效应及其规律和作用机制。实验研究主要结论如下:
2.1 对照组大鼠更年期随月龄增加卵巢、子宫HE染色显示萎缩退变,如卵巢内卵泡逐渐减少或消失,间质细胞减少,结缔组织增多;子宫内膜的大部分单层柱状上皮逐渐消失,出现鳞状上皮化改变,固有层的基质细胞、腺体和血管减少,组织结构紊乱,纤维结缔组织明显增多。子宫雌二醇(E_2)、孕激素(P)、雌激素受体-α(ER-α)表达水平逐渐降低。逆灸组的卵巢、子宫HE染色明显比对照组好,表现在大鼠卵巢的生发上皮较厚、卵巢内可见卵滤泡、结缔组织较少。逆灸组子宫结构虽也有退化表现,但与对照组比较,子宫结构明显好,表现在大鼠子宫内膜的大部分仍为单层柱状上皮被覆或鳞状上皮化改变较轻,固有层的基质细胞、腺体和血管比对照组多,纤维结缔
逆灸关元穴对大鼠更年期衰变的影响及机制研究
组织也比对照组相对少。肌层比较厚,有明显的淋巴样细胞浸润和适量的血
管,纤维化程度也轻。提示逆灸虽不能完全逆转卵巢、子宫的衰变,但可有
效减轻卵巢、子宫结构的衰变程度,同时增加子宫EZ、P的含量(以逆灸16月
龄组有效果最明显)、提高ER一Q的表达水平(以逆灸12、14月龄组效果显
著)。提示逆灸关元穴对于子宫结构衰变的防护及改善与促进子宫局部EZ、
ER一Q的合成与代谢、提高EZ与ER一Q结合,使雌激素的作用得到有效发挥有
关,其作用又与神经对灸信号的传导有关。逆灸在增加子宫EZ含量的同时,P
的拮抗作用也相应增加,对于预防子宫内膜癌有重要意义。同时,说明逆灸
关元穴和单纯的补充雌激素具有不同的作用,它具有多环节、多靶点调节作
用,因而不易产生副作用。
2.2对照组大鼠在10、12月龄时HPO轴已经开始轻微的波动;到14月龄波
动的幅度开始增大,下丘脑GnRH明显下降(P(0 .05);到16月龄HPO轴出现
明显病理改变,如血清EZ、T、EZ/T、FSH、血浆GnRH均明显升高,下丘脑GnRH
明显下降。大鼠更年期表现为HPO轴之间时序性去同步化。逆灸有降低血清
FSH、LH的趋势,下丘脑GnRH含量在逆灸12、16月龄组比对照组明显增加
(P<0.05),逆灸14月龄组比对照组降低,但无显著性差异(P>0 .05);血浆
GnRH在逆灸12、16月龄组比对照组明显升高(P<0 .05),14月龄基本无变化。
逆灸各组与对照各组血清EZ比较,呈现双向调节的效应,即使12月龄下降的
血清EZ升高,使14、16月龄升高的血清EZ降低,并在16月龄的效应有显著
性差异(P<0.05)。逆灸组血清T下降,EZ/T增高。逆灸关元穴总体上显示了
对更年期HPO轴之间协调性的维护,显示了其良性的调节作用。
2.3更年期大鼠,随月龄增加,血清TNF一Q波动性降低、升高,子宫TNF一。
波动性降低,同时脾脏ER一。表达水平明显降低。逆灸关元穴可调节血清
TNF一Q的含量,提高子宫TNF一。含量,并提高脾脏的重量指数与脾脏ER一a
的表达水平。逆灸对TNF一Q、脾脏ER一Q水平的影响效应均表现出12月龄的
早期效应和16月龄的后效应。脾脏的重量指数与脾脏ER一。表达水平的相关
分析为正相关,提示逆灸关元穴对雌性大鼠更年期免疫功能的调节作用,与
免疫器官的ER一Q介导有关。
2.4对照组大鼠更年期ER一Q在视上核(SON)、室旁核(PVN)中的表达随
增龄表现为不同的分布趋势,在前者呈先升高后降趋势,在后者为增高?
"Preventative moxibustion", called nijiu in Chinese ,is a commonly used preventive technique commonly used in Chinese medicine ..It refers to the stimulation of qi and blood within the meridians when a person is healthy or he has a mild condition, the self-healing force and stress ability within the body will be strengthened so that health protection or alleviation of diseases and disorders could be achieved. Moxibustion on Guanyuan(REN 4) is a traditional way to prevent diseases and prolong the life. Systematic studies on menopausal rats by"Preventative moxibustion" on Guanyuan(REN 4) both the theory and practice of this techniques were researched in this paper. Experimental MethodsThe model: Female 10 month old rats were used at the menopausal stage. The rats were given the Preventative Moxibustion on the Guanyuan (REN 4) for eight weeks. Then using the techniques of the Hematoxylin eosin(HE), immuunohistochemistry, histopathology, radioimmunity and biochemistry, observations of the organism changes were made in the stages of the 12th,14th and 16th month. Such as the changes of the HPO, the tissue pathology of the ovary and uterus, the TNF-α, TGF-α and NOS in the uterus and the serum, the CRH in the hypothalamus, the ACTH in the plasma, and the expression of the ER-a in the uterus ,spleen ,PVN and SON of the hypothalamus. Rresults1. The HPO of the female rats in the model groups began to change in the 10th month and the 12th month, but the results were insignificant. There was decreased significance in GnRH in the hypothalamus in the 14th month and the 16th month, and there was a significant increased of the E_2、T、E_2/T、 FSH in the serum and the GnRH in the plasma. After giving the preventative moxibustion, the GnRH in the hypothalamus and the plasma of the groups using the preventative moxibustion were increased in the 12th month and the 16th month significantly from those in the model groups; the FSH and LH in the serum showed a decreased trend ; the E_2 in the serum was increased in the 12th month and decreased in the 14th month and the 16th month, among these , the effect is statistical significant in the 16th month. It shows a positive dual-regulation to the E_2 in the serum in the preventative moxibustion groups .The T in the serum was decreased significantly in the 16th month; the E_2/T in the serum was increased in the 12th month and the 14th month, but did not showed the statistical significance. In generally, it shows the protective functions for harmonizing of the HPO after giving preventative moxibustion on the Guanyuan (REN 4).2. The structures of the ovaries and the uterus of the female rats in the model groups showed degenerative changes by the HE method, such as the structure of a mass, the connectives tissue was increased and the ovary follicles were reduced or disappeared gradually. Meanwhile, the levels of the E_2, P and the expressions of the ER-α in the uterus had decreased. In the groups using the preventative moxibustion , the framework of the
ovaries and the uterus were better than that in the model groups and the levels of the E_2, P (The effects in the 16th month were statistical significant) and the expressions of the ER-α in the uterus was increased. The effects in the 12th and the 14th month were statistical significant.3. In the models groups, the TNF-α in the serum were increased and had decreased in the uterus of the female rats. The weight of the spleen and the expressions of the ER-α in the spleen were decreased in the model groups. In the groups using the preventative moxibustion, the TNF-α in the serum had decreased more than in the model groups significantly in the 12th and the 16th month; the TNF-α in the uterus, the weight of the spleen and the expressions of the ER-α in the spleen were increased significantly in the 12th month and the 16th month. It showed the positive correlation between the weight of the spleen and the expressions of the ER-α in the spleen by using correlative analysis. It hints that the regulative function of the preventative moxibustion on t
引文
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