火麻种子水溶性多糖的提取、分离、纯化和化学结构的研究
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摘要
火麻种子粉碎后经乙醇脱脂后用冷水抽提。经胃蛋白酶酶解后并联合Sevag法脱蛋白后，透析和冷冻干燥得粗多糖H。利用离子交换柱DEAE-sephadex A-50(Cl~-)，琼脂糖凝胶Sepharose CL—2B和葡聚糖凝胶Sephadex G—100对粗多糖H进行分离纯化，得到两种精制多糖HS_1和HS_2，并对其进行了纯度鉴定，研究结果表明它们均为均一多糖组分。并用凝胶过滤法测定了两种多糖的分子量，分别为42795和15396。火麻多糖的热稳定性较差，高温或过酸和偏碱均会使其中的多糖部分将解，它在沸水中溶解性能较好，但不溶于高浓度的有机溶剂，多糖HS_1经过气相色谱分析，结果表明其单糖组成主要为D-阿拉伯糖，D-木糖，D-甘露糖，D-半乳糖和D-葡萄糖组成，其摩尔比为：1.5：1.2：1.6：2.0：3.0。用红外光谱初步分析了多糖HS~1和HS_2的结构，结果表明HS_1和HS_2都是β型糖苷键构型。
In this paper, Hemp seed was defat alcohol,water-extracting,pepsin-enzymolysis, dialysing,freezing and drying.At last,the water soluble polysaccharides H was obtained.Il was fractionated by gel filtration chrom atograph on DEAE-sephadex A-50(Cl-) and Sepharose CL-2B and Sephadex G-100,the results finded two kinds of polysaccharides HS1 and HS2. The results showed that they were all homogeneous porysaccharides.Furthmore,molecular weight was determined by gel filtration chrom atograph method,the result was 42795 and 15396. The polysaccharides of HS1 and HS2 would degrade under the condition of high temperature,acidity (ph<7=and alkalinity (ph>) .The HS1 and HS2 were soluble in hot water but insoluble in the high concentration solutions of such organic solvents as alcohol,ether,acetone,acetic ether etc. By the gas chromatography analysis of polysaccharides HS1 was testified that the main ingredients of monosaccharide compsing the HS1 are D-Arabinose, D-Xylose, D-Mannose, D-Galactose and D-Glucose and the mole rate of them are 1.5: 1.2: 1.6: 2.0: 3.0.I.R.SPECTRA suggested that both HS1 and HS2 have p-glycoside linkage.
In this paper, Hemp seed was defat alcohol,water-extracting,pepsin-enzymolysis, dialysing,freezing and drying.At last,the water soluble polysaccharides H was obtained.Il was fractionated by gel filtration chrom atograph on DEAE-sephadex A-50(Cl-) and Sepharose CL-2B and Sephadex G-100,the results finded two kinds of polysaccharides HS1 and HS2. The results showed that they were all homogeneous porysaccharides.Furthmore,molecular weight was determined by gel filtration chrom atograph method,the result was 42795 and 15396. The polysaccharides of HS1 and HS2 would degrade under the condition of high temperature,acidity (ph<7=and alkalinity (ph>) .The HS1 and HS2 were soluble in hot water but insoluble in the high concentration solutions of such organic solvents as alcohol,ether,acetone,acetic ether etc. By the gas chromatography analysis of polysaccharides HS1 was testified that the main ingredients of monosaccharide compsing the HS1 are D-Arabinose, D-Xylose, D-Mannose, D-Galactose and D-Glucose and the mole rate of them are 1.5: 1.2: 1.6: 2.0: 3.0.I.R.SPECTRA suggested that both HS1 and HS2 have p-glycoside linkage.
引文
[1] 陈家童等．红藻多糖抗 AIDS 病毒作用的体外实验研究．南开大学学报(自然科学)．1998．31(4)21～24
[2] Staub,A.M.et al.Methods in Carbohydr Chem. 1965.5:5
[3] 方积年．多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定．药学通报．1984．19(10)：46～49
[4] 张翼伸．多糖的结构测定．生物化学精悍生物物理进展．1983(5)：18～23
[5] Sugiura M. et al. Japan J Pharmacol. 1980.30:503～513
[6] Rabel F. M. et al. J Chromatog. 1976.126:731
[7] 张翼伸．有关糖复合物的分级纯化结构确定、生物活性的几个问题．生命的化学．1994．14(6)：42～44
[8] 方积年．多糖研究的现状．药学通报．1986．21(12)：944～950
[9] Kosenko L. Mikro9biol zh (kiev). 1983.45:82
[10] 梁忠岩等．斜顶菌水溶性多糖的研究(1)．高等学校化学学报．1983．4(3)：365
[11] 李润秋等．针裂蹄多糖的研究．药学学报．1983．18(6)：430
[12] Kobata A. et al. J. Biol. Chem. 1981.256:5355
[13] 许安邦，林维宣．食品分析[M]，中国轻工业出版社．1994．98～150．
[14] 王长云，管华诗．多糖抗病毒作用研究进展Ⅰ．多糖抗病毒作用[J]．生物工程进展，2000，20(1)：17．
[15] 丁新，李玲凤．关于盐藻多糖的研究[J]．海湖盐与化工，2000，24(6)：4
[16] Fabregas J,Carcia D,Femandez-Alonso M.In vitro inhibition of the replication of hae morrhagic septicae mia virus(VHSV) and African swine fever virus(ASFV) by extracts from marine marine microalgae[J]. Antiviral Res, 1999,44(1):67
[17] 刘广发，楼士林，游兰英，等．10种(株)杜氏藻β胡萝卜素的提取及含量比较[J]．厦门大学学报(自然科学版)，1995，34(1)：94．
[18] 徐秀兰．生物化学实验与指导[M]．北京：中国医药科技出版社，1994．
[19] Dodgson KS,Price RG.Determination of Ester Sulphate[J].Biochem, 1962,84:106.
[20] 张惟杰．糖复合物生化研究所技术[M]．杭州：浙江大学出版社，1994．
[21] southgate D A T.Definition and terminology of dietary fiber. Vahony Dietary in health and disease G V, Kritchevsky D,Eds.New York;Plenum Press, 1982.1～7
[22] Royal college of physicians.Medical Aspects of dietary fiber.London:Pitmans,Medical, 1980
[23] Bingham S,Williarns D R R,Cole,T J,James W P T. Dietary fiber and regional large bowel cancer mortality in Britain.Br J Cancer,1979,40:456～463
[24] Englyst H N,Bingharn S A,Wiggins H S, Southgate D A T, Seppanen R, Helms, p, Anderson V, Day k c, Choolun R, Collinson E, Cummings J H. Non-starchpolysaccharede consumption in flour Scandinavian popula-tions. Nutr Cancer,4:50～60
[25] Cummings J H, Southgate D A T, Branch W, Houston H, Jenkins DS A, Jame W P T. Colonic response to dietary fiber from carrot, cabbage, apple, bran, and guar gum. Lancet,1978,1:5～7
[26] Candlish J K, Gourley L, Lee HP. Dietary fiber and starch in some Southeast Asian food. Asian Journal, 1987,3 (2):81～83
[27] Mullin W J, Peacock S, Loewen D C, Turner N J, Macronu-trients content of Yellow Glacier lily balsamroot;root vegetables used by indigenous peoples of northwestern north America.Food Research International, 1997,30 (10):769
[28] A O A C. Official Method of Analysis. Association of Analyti-cal Chemists Washington, DC. 1975
[29] Dubois M, Gilles K A, Hamilton J, Krebers P A, Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Anal Chem, 1956,28:350～356
[30] J Brandrup, E H Immergut. The polymer handbook. New York: Wiley-interscience, 1996
[31] Hans N Englyst, Michael E Quigley, Geoffrey J Hudson.Analyst July, 1994,119: 1494～1509
[32] 夏尔宁，陈琼华。黑木耳多糖的分离、纯化和鉴定。生物化学与生物物理学
报，1988，20(6)：614
[33] 陈西广，张翼伸，李润秋。安络小皮伞中水溶性多糖的研究 1．甘露聚糖EP_1的纯化与结构研究．真菌学报，1990，9(2)：155
[34] 白日霞，张伸翼。碱提水溶性安络小皮伞多糖的研究—B_1与B_2的分离纯化及结构研究。真菌学报，1990，9(2)：161
[35] 王文杰，朱秀媛。雷丸多糖的抗炎及免疫刺激作用。药学学报，1989，24(2)：151
[36] 李润秋，张伸翼。针裂蹄多糖的研究。药学学报，1983，18(6)：430
[37] 方积年，叶淳渠，刘玉荣，等。竹黄多糖的研究。生物化学与生物物理学报，1980，12(4)：365
[38] 夏尔宁，陈琼化五，银耳子实体多糖的分离、分析及生物活性。真菌学报。1988，7(3)：166
[39] 吴梧桐，余品话五，夏而宁，等。银耳孢子多糖TF-A、TF-B、TF-C的分离、纯化及组成单糖的鉴定。生物化学与生物物理学报，1994，16(4)：393
[40] 刘训红等。太子参多糖的研究，中草药，1993，24(1)：8
[41] 张岗，任丽娟，顾玉诚，等。山豆根中性多糖SSA的分离纯化和性质。中草药，199
[42] Bundle D R, Jennings H j, Kenny C P.J.Biol.chem., 1974, 249:4 797～4801
[43] Hanfland P, Egge H, Dobrowski U, Kuhn S, Roeleke D.Biochem., 1981,20:5301～5319
[44] Bao B N N, Bush C A. Carbohydr. Res., 1988, 180:111～128
[45] Whittaker D V, Parolis L A S, Parolis H. Carbohydr.Res., 1994, 253:247～256
[46] Holmbeck S M A, Petillo P A, Lerner L E.Biochem., 1994, 33:14246～14255
[47] Perlin A S, Ng Ying King Kin N M K, Bhattachajee S S, Johnson L F.Can.J. Chem., 1972,50:2437～2441
[48] Bardbury J H, Jenkins G A. Carbohydr.Res.,1984,126:125～136
[49] Banerji A, Bandyopadhyay D, Sarkar M, Siddhanta A K, Pal s c, Ghosh S, Abraham K, Shoolery J N.Photochem., 1985, 24:279～284
[50] Bock K, Pedersen C.Acta.Chem.Scand.,Ser.B,1975,29:682～686
[51] Uniyal G C, Agrawal P K, Thakur R S, Sati O P. Phytochem.., 1990, 29:937～940
[52] Jain D C, Ahrawal P K, Thakur R S. Planta Med., 1991, 57:94～97
[53] Lipkind G M, Shashkov A S, Knirel Y A, Vinogradov E V, Kochetkov N K. Carbohydr. Res., 1988, 175:59～75
[54] Jansson P E, Kenne L,Widmalm G. Carbohydr. Res., 1989, 188:169～191
[55] 张岗，任丽娟，顾玉诚，等。山豆根中性多糖SSA的分离纯化和性质。中草药，1993．24(1)：8
[56] 丁东宁，靳菊情等，长松箩多糖的研究。天然产物研究与开发，1992，4(4)：3
[57] 丁东宁，刘志玺，靳区情，等。两种地衣多糖组分的测定。西北药学杂志，1992，4(3)：12
[58] 林少琴，朱苏闽，仙草多糖的分离纯化及鉴定。天然产物研究与开发，1992，4(3)：42
[59] 陈菊娣，樊绘曾，邢蕊凝，等。花刺参酸性粘多糖的分离研究。中国海洋药物，1994，(1)：24
[60] 张思巨，张淑运，王岚，等。大黄多糖的研究。中国药学杂志，1993，18(11)：679
[61] 郭跃伟，余品华，庄毅，等。槐耳菌丝体多糖的分离和分析。中国生物药物杂志，1993，(1)：56
[62] 盖新杰，张翼伸，蛹虫草胞外多糖的研究Ⅰ。半乳甘露聚糖(CM-I)的纯化和结构的研究。真菌学报，1992，11(4)：300
[63] 许益民，郭立伟，陈建伟，等。半枝莲多糖的分离、纯化及药理化性质。天然产物研究与开发，1992，4(1)：4
[2] Staub,A.M.et al.Methods in Carbohydr Chem. 1965.5:5
[3] 方积年．多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定．药学通报．1984．19(10)：46～49
[4] 张翼伸．多糖的结构测定．生物化学精悍生物物理进展．1983(5)：18～23
[5] Sugiura M. et al. Japan J Pharmacol. 1980.30:503～513
[6] Rabel F. M. et al. J Chromatog. 1976.126:731
[7] 张翼伸．有关糖复合物的分级纯化结构确定、生物活性的几个问题．生命的化学．1994．14(6)：42～44
[8] 方积年．多糖研究的现状．药学通报．1986．21(12)：944～950
[9] Kosenko L. Mikro9biol zh (kiev). 1983.45:82
[10] 梁忠岩等．斜顶菌水溶性多糖的研究(1)．高等学校化学学报．1983．4(3)：365
[11] 李润秋等．针裂蹄多糖的研究．药学学报．1983．18(6)：430
[12] Kobata A. et al. J. Biol. Chem. 1981.256:5355
[13] 许安邦，林维宣．食品分析[M]，中国轻工业出版社．1994．98～150．
[14] 王长云，管华诗．多糖抗病毒作用研究进展Ⅰ．多糖抗病毒作用[J]．生物工程进展，2000，20(1)：17．
[15] 丁新，李玲凤．关于盐藻多糖的研究[J]．海湖盐与化工，2000，24(6)：4
[16] Fabregas J,Carcia D,Femandez-Alonso M.In vitro inhibition of the replication of hae morrhagic septicae mia virus(VHSV) and African swine fever virus(ASFV) by extracts from marine marine microalgae[J]. Antiviral Res, 1999,44(1):67
[17] 刘广发，楼士林，游兰英，等．10种(株)杜氏藻β胡萝卜素的提取及含量比较[J]．厦门大学学报(自然科学版)，1995，34(1)：94．
[18] 徐秀兰．生物化学实验与指导[M]．北京：中国医药科技出版社，1994．
[19] Dodgson KS,Price RG.Determination of Ester Sulphate[J].Biochem, 1962,84:106.
[20] 张惟杰．糖复合物生化研究所技术[M]．杭州：浙江大学出版社，1994．
[21] southgate D A T.Definition and terminology of dietary fiber. Vahony Dietary in health and disease G V, Kritchevsky D,Eds.New York;Plenum Press, 1982.1～7
[22] Royal college of physicians.Medical Aspects of dietary fiber.London:Pitmans,Medical, 1980
[23] Bingham S,Williarns D R R,Cole,T J,James W P T. Dietary fiber and regional large bowel cancer mortality in Britain.Br J Cancer,1979,40:456～463
[24] Englyst H N,Bingharn S A,Wiggins H S, Southgate D A T, Seppanen R, Helms, p, Anderson V, Day k c, Choolun R, Collinson E, Cummings J H. Non-starchpolysaccharede consumption in flour Scandinavian popula-tions. Nutr Cancer,4:50～60
[25] Cummings J H, Southgate D A T, Branch W, Houston H, Jenkins DS A, Jame W P T. Colonic response to dietary fiber from carrot, cabbage, apple, bran, and guar gum. Lancet,1978,1:5～7
[26] Candlish J K, Gourley L, Lee HP. Dietary fiber and starch in some Southeast Asian food. Asian Journal, 1987,3 (2):81～83
[27] Mullin W J, Peacock S, Loewen D C, Turner N J, Macronu-trients content of Yellow Glacier lily balsamroot;root vegetables used by indigenous peoples of northwestern north America.Food Research International, 1997,30 (10):769
[28] A O A C. Official Method of Analysis. Association of Analyti-cal Chemists Washington, DC. 1975
[29] Dubois M, Gilles K A, Hamilton J, Krebers P A, Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. Anal Chem, 1956,28:350～356
[30] J Brandrup, E H Immergut. The polymer handbook. New York: Wiley-interscience, 1996
[31] Hans N Englyst, Michael E Quigley, Geoffrey J Hudson.Analyst July, 1994,119: 1494～1509
[32] 夏尔宁，陈琼华。黑木耳多糖的分离、纯化和鉴定。生物化学与生物物理学
报，1988，20(6)：614
[33] 陈西广，张翼伸，李润秋。安络小皮伞中水溶性多糖的研究 1．甘露聚糖EP_1的纯化与结构研究．真菌学报，1990，9(2)：155
[34] 白日霞，张伸翼。碱提水溶性安络小皮伞多糖的研究—B_1与B_2的分离纯化及结构研究。真菌学报，1990，9(2)：161
[35] 王文杰，朱秀媛。雷丸多糖的抗炎及免疫刺激作用。药学学报，1989，24(2)：151
[36] 李润秋，张伸翼。针裂蹄多糖的研究。药学学报，1983，18(6)：430
[37] 方积年，叶淳渠，刘玉荣，等。竹黄多糖的研究。生物化学与生物物理学报，1980，12(4)：365
[38] 夏尔宁，陈琼化五，银耳子实体多糖的分离、分析及生物活性。真菌学报。1988，7(3)：166
[39] 吴梧桐，余品话五，夏而宁，等。银耳孢子多糖TF-A、TF-B、TF-C的分离、纯化及组成单糖的鉴定。生物化学与生物物理学报，1994，16(4)：393
[40] 刘训红等。太子参多糖的研究，中草药，1993，24(1)：8
[41] 张岗，任丽娟，顾玉诚，等。山豆根中性多糖SSA的分离纯化和性质。中草药，199
[42] Bundle D R, Jennings H j, Kenny C P.J.Biol.chem., 1974, 249:4 797～4801
[43] Hanfland P, Egge H, Dobrowski U, Kuhn S, Roeleke D.Biochem., 1981,20:5301～5319
[44] Bao B N N, Bush C A. Carbohydr. Res., 1988, 180:111～128
[45] Whittaker D V, Parolis L A S, Parolis H. Carbohydr.Res., 1994, 253:247～256
[46] Holmbeck S M A, Petillo P A, Lerner L E.Biochem., 1994, 33:14246～14255
[47] Perlin A S, Ng Ying King Kin N M K, Bhattachajee S S, Johnson L F.Can.J. Chem., 1972,50:2437～2441
[48] Bardbury J H, Jenkins G A. Carbohydr.Res.,1984,126:125～136
[49] Banerji A, Bandyopadhyay D, Sarkar M, Siddhanta A K, Pal s c, Ghosh S, Abraham K, Shoolery J N.Photochem., 1985, 24:279～284
[50] Bock K, Pedersen C.Acta.Chem.Scand.,Ser.B,1975,29:682～686
[51] Uniyal G C, Agrawal P K, Thakur R S, Sati O P. Phytochem.., 1990, 29:937～940
[52] Jain D C, Ahrawal P K, Thakur R S. Planta Med., 1991, 57:94～97
[53] Lipkind G M, Shashkov A S, Knirel Y A, Vinogradov E V, Kochetkov N K. Carbohydr. Res., 1988, 175:59～75
[54] Jansson P E, Kenne L,Widmalm G. Carbohydr. Res., 1989, 188:169～191
[55] 张岗，任丽娟，顾玉诚，等。山豆根中性多糖SSA的分离纯化和性质。中草药，1993．24(1)：8
[56] 丁东宁，靳菊情等，长松箩多糖的研究。天然产物研究与开发，1992，4(4)：3
[57] 丁东宁，刘志玺，靳区情，等。两种地衣多糖组分的测定。西北药学杂志，1992，4(3)：12
[58] 林少琴，朱苏闽，仙草多糖的分离纯化及鉴定。天然产物研究与开发，1992，4(3)：42
[59] 陈菊娣，樊绘曾，邢蕊凝，等。花刺参酸性粘多糖的分离研究。中国海洋药物，1994，(1)：24
[60] 张思巨，张淑运，王岚，等。大黄多糖的研究。中国药学杂志，1993，18(11)：679
[61] 郭跃伟，余品华，庄毅，等。槐耳菌丝体多糖的分离和分析。中国生物药物杂志，1993，(1)：56
[62] 盖新杰，张翼伸，蛹虫草胞外多糖的研究Ⅰ。半乳甘露聚糖(CM-I)的纯化和结构的研究。真菌学报，1992，11(4)：300
[63] 许益民，郭立伟，陈建伟，等。半枝莲多糖的分离、纯化及药理化性质。天然产物研究与开发，1992，4(1)：4