拟南芥低氮耐性突变体的筛选及其生理特性研究
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摘要
化肥的施用对农业生产的突破性发展功不可没，但长期大量、单一地施用化肥特别是化学氮肥所带来的肥料利用率降低、农产品品质下降和环境污染问题正日益突出，已经对农业的可持续发展产生严重的负面影响。而现代育种策略通常是在养分充足的条件下进行的，这也使得蕴藏在植物资源中能在低养分胁迫环境下高效吸收和利用养分的遗传潜力未能发挥。
激活标签法(ACTIVATION TAGGING)是新近发展起来的一种用于基因分离和鉴定的方法。本论文实验利用激活突变使特定内源基因发生过量表达而产生显性功能获得型突变的方法，创建大规模的拟南芥突变体库，以这些转化植株作为突变体筛选的材料。
通过反复的比较实验，自行设计专为拟南芥水培设计的植物漂浮装置，该装置由两部分组成：浮板和容器。装有石英砂的浮板既可满足种子的直播培养，又可以进行幼苗的移栽培养。采用发芽、幼苗等实验确定筛选拟南芥低氮耐性突变体的适宜浓度，其含氮量为0.18mmol/L。在该浓度下，野生型基本受到抑制而不能表现，而突变体的优势则得到发挥。
利用上述实验确定的漂浮装置和选择压，对建好的突变体库中的种子(T_2)进行大规模、高通量的突变体筛选。培养过程中，以叶绿素SPAD值为主要筛选指标，并且辅之于其它较为明显的生物学性状，第一轮从中筛选出6株生长良好的植株(T_3)：第二轮从中筛选出7株生长较好的植株(T_4)；第三轮则从中筛选出于8株植株(T_5)。
将三轮筛选得到的其中4株可能突变体(T_5)，首先进行抗除草剂特性的鉴定实验，从其后代(T_6)中分离出5株具有抗性的植株；然后分析这5株在低氮胁迫环境下的叶绿素含量、全氮磷钾含量，并与标准营养液培养下的野生型植株进行比较；结果表明两者之间没有明显的差异，说明可能突变体在低氮条件下对氮、磷、钾等主要营养元素仍然具有良好的吸收能力。
综合所有实验结果，本论文实验初步筛选得到5株拟南芥低氮耐性突变体，并且对其氮素营养生理生化特性进行分析和研究，为鉴定和分离其与耐低氮性状连锁的基因奠定了基础。
Application of chemical fertilizer has promoted a great development in agricultural production. However, injudicious use of chemical fertilizer, especially chemical nitrogen fertilizer has induced a crucial negative impact to sustainable agriculture development, such as decrease of fertilizer utilization efficiency, reduction of agricultural product quality, and environmental pollution. But modern breeding is always proceeding under standard condition, so the high absorbing and using ability of plants under low nutrient stress are not exerted.
Activation tagging is a new method for isolation and functional identification. It can generate dominant gain-of-function mutants by over expression of a particular endogenous gene. The mutant-isolation experiment is based on large seed pools (T2) which are mutagenized by activation tagging.
A hydroponic system was designed for Arabidopsis, which is based on two units: a seed-holder and a tank. The quartz sand-containing seed-holder allows not only direct culture of seeds, but transplant of seedlings. Effects of low nitrogen stress on germination and growth of Arabidopsis thaliana were studied and the corresponding N concentrations for screening mutants were determined as 0.18mmol/L. Under this concentration, growth of wild type was restrained but mutants will be alive.
By using floating system and corresponding screen pressure, T2 populations (seed pool) were screened for low nitrogen tolerant mutants with high efficiency and low maintenance. During the culture, with chlorophyll SPAD scores and other biological characters, 6 plants (T3) were selected for putative mutants at first round, 7 plants (T4) were selected at second round, and 8 plants (T5) were selected at third round.
After the isolation, 4 plants (T5) were selected to have herbicide test and 5 plants (T6) resisted herbicide and were still alive. Then chlorophyll content, total N, P, K content of those 5 putative mutants (T6) under low-N stress were measured and they are similar with those of wild type under standard condition. These results show that 5 plants have good absorbing capacity of nutrients under low nitrogen stress.
Due to the whole results, 5 low-nitrogen tolerant putative mutants of Arabidopsis thaliana were isolated and their physiological and biochemical characters of nitrogen nutrient were studied. It could provide the materials to identify and separate its corresponding gene.
激活标签法(ACTIVATION TAGGING)是新近发展起来的一种用于基因分离和鉴定的方法。本论文实验利用激活突变使特定内源基因发生过量表达而产生显性功能获得型突变的方法，创建大规模的拟南芥突变体库，以这些转化植株作为突变体筛选的材料。
通过反复的比较实验，自行设计专为拟南芥水培设计的植物漂浮装置，该装置由两部分组成：浮板和容器。装有石英砂的浮板既可满足种子的直播培养，又可以进行幼苗的移栽培养。采用发芽、幼苗等实验确定筛选拟南芥低氮耐性突变体的适宜浓度，其含氮量为0.18mmol/L。在该浓度下，野生型基本受到抑制而不能表现，而突变体的优势则得到发挥。
利用上述实验确定的漂浮装置和选择压，对建好的突变体库中的种子(T_2)进行大规模、高通量的突变体筛选。培养过程中，以叶绿素SPAD值为主要筛选指标，并且辅之于其它较为明显的生物学性状，第一轮从中筛选出6株生长良好的植株(T_3)：第二轮从中筛选出7株生长较好的植株(T_4)；第三轮则从中筛选出于8株植株(T_5)。
将三轮筛选得到的其中4株可能突变体(T_5)，首先进行抗除草剂特性的鉴定实验，从其后代(T_6)中分离出5株具有抗性的植株；然后分析这5株在低氮胁迫环境下的叶绿素含量、全氮磷钾含量，并与标准营养液培养下的野生型植株进行比较；结果表明两者之间没有明显的差异，说明可能突变体在低氮条件下对氮、磷、钾等主要营养元素仍然具有良好的吸收能力。
综合所有实验结果，本论文实验初步筛选得到5株拟南芥低氮耐性突变体，并且对其氮素营养生理生化特性进行分析和研究，为鉴定和分离其与耐低氮性状连锁的基因奠定了基础。
Application of chemical fertilizer has promoted a great development in agricultural production. However, injudicious use of chemical fertilizer, especially chemical nitrogen fertilizer has induced a crucial negative impact to sustainable agriculture development, such as decrease of fertilizer utilization efficiency, reduction of agricultural product quality, and environmental pollution. But modern breeding is always proceeding under standard condition, so the high absorbing and using ability of plants under low nutrient stress are not exerted.
Activation tagging is a new method for isolation and functional identification. It can generate dominant gain-of-function mutants by over expression of a particular endogenous gene. The mutant-isolation experiment is based on large seed pools (T2) which are mutagenized by activation tagging.
A hydroponic system was designed for Arabidopsis, which is based on two units: a seed-holder and a tank. The quartz sand-containing seed-holder allows not only direct culture of seeds, but transplant of seedlings. Effects of low nitrogen stress on germination and growth of Arabidopsis thaliana were studied and the corresponding N concentrations for screening mutants were determined as 0.18mmol/L. Under this concentration, growth of wild type was restrained but mutants will be alive.
By using floating system and corresponding screen pressure, T2 populations (seed pool) were screened for low nitrogen tolerant mutants with high efficiency and low maintenance. During the culture, with chlorophyll SPAD scores and other biological characters, 6 plants (T3) were selected for putative mutants at first round, 7 plants (T4) were selected at second round, and 8 plants (T5) were selected at third round.
After the isolation, 4 plants (T5) were selected to have herbicide test and 5 plants (T6) resisted herbicide and were still alive. Then chlorophyll content, total N, P, K content of those 5 putative mutants (T6) under low-N stress were measured and they are similar with those of wild type under standard condition. These results show that 5 plants have good absorbing capacity of nutrients under low nitrogen stress.
Due to the whole results, 5 low-nitrogen tolerant putative mutants of Arabidopsis thaliana were isolated and their physiological and biochemical characters of nitrogen nutrient were studied. It could provide the materials to identify and separate its corresponding gene.
引文
1．方萍，陶勤南，吴平。水稻吸氮能力与氮素利用率的QTLs及其基因效应分析。植物营养与肥料学报，2001，7(2)：159-165
2．赵淑清，郭剑波。一种简单快速的拟南芥水培方法的研究。生物学杂志，2000，17(6)：22～23
3．赵淑消，林春，杨小贺等。拟南芥耐低钾突变体的筛选及遗传分析。植物学报，2001，43(1)：105～107
4．崔晓勇，曹一平，张福锁。拟南芥营养突变体的初步筛选。中国农业大学学报，1999，4(5)：31～36
5．武维华主编。2003。植物生理学。科学出版社
6．吴平，印莉萍，张立平等编著。2001。植物营养分子生理学。科学出版社
7．陶勤南，方萍，吴良欢。水稻氮素营养叶色诊断研究。土壤，1990，4：190-193
8．郑继刚，李成梅，肖英华等。激活标签法及其在植物基因工程上的应用。遗传，2003，25(4)：471～474
9．韩燕来，徐芳森，段海燕等。拟南芥养分离子转运蛋白研究进展。植物学通报，2003，20(1)：23～35
10．潘瑞炽，董愚得编著。1979。植物生理学。高等教育出版社
11．张礼忠，毛知耘译。1992。植物的无机营养。农业出版社
12．曹一平，陆景陵译。1991。高等植物的矿质营养。北京农业大学出版社
13．何念祖主编。1998。肥料制造与加工。上海科学技术出版社
14．严小龙，张福锁著。1997。植物营养遗传学。中国农业出版社
15．方萍，何延编著。2003。试验设计与统计。浙江大学出版社
16．方萍编著。2000。实用农业试验设计与统计分析指南。中国农业出版社
17．崔玉亭主编。2000。化肥与生态环境保护。化学工业出版社
18．陈阅增主编。1997。普通生物学。高等教育出版社
19．李衍达，孙之荣等译。2000。生物信息学。清华大学出版社
20．孙乃恩，孙东旭，朱德煦编。1990。分子遗传学。南京大学出版社
21．翟中和，王喜忠，丁明孝主编。2000。细胞生物学。高等教育出版社
22．郝柏林，张淑誉编著。2000。生物信息学手册。上海科学技术出版社
23．黄海，罗友丰等编著。2001。SPSS 10.0 for Windows统计分析。人民邮电出版社
24．洪楠，候军编著。2001。SAS for Windows统计分析系统教程。电子工业出版社
25．鲁如坤主编。1999。土壤农业化学分析方法。中国农业科技出版社
26．李合生，陈翠莲等主编。1998。植物生理生化实验原理和技术。华中农业大学出版社
27．王秀荣，沈宏，严小龙。拟南芥室内繁种技术研究。华南农业大学学报(自然科学版)，2002，23(3)：94～94
28．陈敏，白书农。拟南芥培养经验点滴。植物生理学通讯，1995，3(16)：436～438
29．赵淑清。一种筛选拟南芥突变体的有效方法。遗传，2001，23(3)：260～262
30．肖淼波，李文学，段宗颜等。植物对硝态氮的吸收及其调控。中国农业科技导报。2002，4(2)：56～59
31．孙宝启，李玉京。硝酸还原酶与氮素利用的关系及其在作物遗传育种中的应用。北京农业火学学报，1993，19(3)：29～33
32．曹翠玲，李生秀，苗芳。氮素对植物某些生理生化过程影响的研究进展。西北农业大学学报，1999，27(4)：96～101
33．赵平，孙谷畴，彭少麟。植物氮素营养的生理生态学研究。生态科学，1998，17(2)：37～42
34．安贤惠。拟南芥及其研究进展。西北农业学报，1998，7(1)：92～94
35．陈明吕，张强，杨晋玲。农业生态系统中氮素循环研究综述。山西农业科学，1993，21(4)：53～59
36．张金恒，王珂，王人潮。叶绿素计SPAD-502在水稻氮素营养诊断中的应用。西北农林科技大学学报(自然科学版)，2003，31(2)：177～180
37．徐芳森，年夫照，王运华。不同拟南芥生态型对缺硼反映的初步研究。华中农业大学学报，2003，22(2)：138～141
38．陆晓春，薛庆中。插入诱变在拟南芥基因克隆中的应用。中国生物工程杂志，2002，22(4)：66～69
39．孙彭力，王慧君。氮素化肥的环境污染。环境污染与防治，1995，17(1)：38～41
40．巩振辉，何玉科。拟南芥基因转移新方法—真空渗入法的研究。西北植物学报，1996，16(3)：277～283
41．唐银凤。叶绿素含量测定中的误差分析。南京理工大学学报，1997，21(2)：130～132
42．郑慧琼，陈季楚，赵毓橘。油菜素内酯不敏感型的拟南芥突变型筛选。植物生理学报，1997，23(3)：293～298
43．刘秀丽，宋平，孙成明。植物叶绿素测定方法的再探讨。江苏农业研究，1999，20(3)：46～47
44．韩玉珍，李睿，孟繁静。拟南芥开花的光周期调节。植物生理学通讯，1998，34(5)：401～406
45．杨敏文。快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨。光谱实验室，2002，19(4)：478～481
46．康定明，邓兴旺，陈章良。拟南芥DNA全序列测定与分析完成。植物学通报，2001，18(1)：124～125
47．殷奎德，张兴梅。拟南芥的生物学特性及基因克隆策略。黑龙江八一农垦大学学报，2001，13(3)：1～5
48．瞿绍洪，张文俊，景健康。玉米转座子Ac在单倍体烟草中转座的研究。遗传学报，1998，25(2)：150～154
49．廖鸣娟，董爱华，王正栋。植物转座子及其在功能基因组学中的应用。遗传，2000，22(5)：345～348
50．陈锦强，李明启。不同氮素营养对黄麻叶片的光合作用、光呼吸的影响及光呼吸与硝酸还原的关系。植物生理学报，1983(3)：251～259
51．尹新华，曹翠玉，史瑞和。氮肥对夏高粱养分吸收及产质影响的研究。土壤通报，1992，23(4)：171～173
52．冯福生，陈文龙。李洁。不同供氮水平下冬小麦叶片中RuBPC羧化酶和NRA活性的变化。植物生理学通讯，1986(6)：20～22
53．罗廉源，林植芳。氮素营养对丙酮酸磷酸二激酶的调节。植物生理学通讯，1992，28(1)：40-42
54．薛菘，吴小平，冯彩平。不同氮素水平对早地小麦叶片、叶绿素和糖含量的影响及其产量的关系。干旱地区农业研究，1997，15(1)：79～109
55．石正强。铵态氮和硝态氮营养与大豆幼苗的抗氰呼吸作用。植物生理学报，1997，23(2)：204～208
56．李春喜，张根发，石惠恩。氮肥对小麦硝酸还原酶活性和籽粒蛋白质含量变化动态的影响。西北植物学报，1995，15(4)：276～281
57．陈少裕。膜脂过氧化对植物细胞的伤害。植物生理学通讯，1991，27(2)：84～90
58．李宪利，高东升，顾曼如。铵态和硝态氮对苹果植株SOD和POD活性的影响。植物生理学通讯，1997，33(4)：254～255
59．鲁如坤。我国土壤氮、磷、钾的基本情况。土壤学报，1989，26(3)：280～286
60．何龙飞，刘友良，沈振过。植物离子通道特征、功能、调节与分子生物学。植物学通报，1997，16(5)：517～525
61. Tsay YF. The herbicide sensitibiity gene CHLI of Arabidopsis thaliana encodes a nitrate inducible nitrate transporter. Cell, 1993,72:705～713
62. Ninnemann O, Jauniaux JC, Frommer WB. Identification of a high affinity NH_4~+ transporter from plants. EMBO J. 1994,13:3464-3471
63. Poirier Y, Thoma S, Somerville C, et al. A mutant of Arabidopsis deficient in xylem loading of phosphate. Plant Physiol, 1991, 97: 1087-1093
64. Delhaize E, Randall PJ. Characterization of a phosphate-accumulator mutant of Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1995,107:207～213
65. Arteca RN, Arteca JM. A novel method for growing Arabidopsis thaliana plants hydroponically. Physiol Plant,2000,108:188～193
66. Wang XB, Wu P. Effects of Nitrate on the growth of lateral root and nitrogen absorption in rice. Acta Botanica Sinica,2002,44(6):678～683
67. Pierre T, Laurent C. A novel high efficiency, low maintenance, hydroponic system for synchronous growth and flowering of Arabidopsis thaliana. BMC Plant Biology 2003,3:2
68. Nigel C. Nitrate: Nutrient and signal for plant growth. Plant Cell, 1995,7:859～868
69. Gloria C, Daniel B. Nitrogen and carbon nutrient and metabolite signaling in plants. Plant Physiol, 2001, 125: 61～64
70. Peng S, Cassman KG, Kropff MJ. Relationship between leaf photosynthesis and nitrogen content of field grown rice in tropics. Crop Sci, 1995, 35:1627-1630
71. David W. Meinke. Arabidopsis thaliana: A Model plant for Genome Analysis [J]. Science, 1998, 282(5389):662～682
72. Murphy A, Taiz L. A new vertical mesh transfer technique for metal-tolerance studies in Arabidopsis. Plant Physiol, 1995(108): 29～38
73. Tang YX, Chen AP, Liu SG. Identification and Characterization of a salt tolerance-responsive gene (AtGRP9) of Arabidopsis. Progress in Natural Science, 2003,13(I):50～54
74. Huang S, Cerny RE, Bhat DS. Cloning of an Arabidopsis patatin like gene, sturdy, by activation T-DNA tagging. Plant Physiol,2001,125:573～584
75. Weigel D, Ahn JH, Biazquez MA. Activation tagging in Arabidopsis. Plant Physiol, 2000, 122: 1003～1014
76. Howden R, Cobbett CS. Cadmium-sensitive mutants of mutants of Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1992,99: 100～107
77. Larsen PB. Arabidopsis mutants with increased sensitivity to aluminium. Plant Physiol, 1996, 110: 743～751
78. Angus M, Taiz L. The vertical mesh transfer technique: A new method for the rapid isolation of metal resistant and sensitive mutants in Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1994,105:30～30
79. Koyama H, Toda T, Yokota S. Effects of aluminium and pH on root growth and cell viability in Arabidopsis thaliana strain Landsburg in hydroponic culture. Plant Cell Physiol, 1995,36:201～205
80. Hirai MY, Fujiwara T, Chino M. Effects of sulphate concentrations on the expression of a soybean seed storage protein gene and its reversibility in transgenic Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1995,107:207～213
81. Koomneef M, Alonso-Blanco C, Peeters AJM. Genetic control of flowering time in Arabidopsis. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 1998,49:345～370
82. Levy YY, Dean C. The transition of flowering. Plant Cell, 1998,10:1973～1989
83. Gibeaut DM, Hulett J, Cramer GR. Maximal biomass of Arabidopsis thaliana using a simple, low-maintenance hydroponic method and favourable environmental conditions. Plant Physioi, 1997,115:317～319
84. Corbesier L, Gadisseur I, Silvestre G. Design in Arabidopsis thaliana of a synchronous system of floral induction by one long day. Plant J,1996.9:947～952
85. Wilkinson JQ, Crawford NM. Identification and characterization of a chlorate-resistant mutant ofArabidopsis thaliana with mutations in both nitrate reductase structural genes NIA1 and NIA2. Mol Gen Genet, 1993,239:289～297
86. Bechtold N, Ellis J, Pelletier G. In planta agrobacterium mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants. CR Acad Sci, 1993,316:1194～1199
87. Feldmann KA. T-DNA insertion mutagenesis in Arabidopsis: mutational spectrum. Plant J, 1991,1:71～82
88. Errampali D, Patton D. Embryonic lethals and T-DNA insertional mutagensis in Arabidopsis. Plant Cell, 1991, 11: 149～157
2．赵淑清，郭剑波。一种简单快速的拟南芥水培方法的研究。生物学杂志，2000，17(6)：22～23
3．赵淑消，林春，杨小贺等。拟南芥耐低钾突变体的筛选及遗传分析。植物学报，2001，43(1)：105～107
4．崔晓勇，曹一平，张福锁。拟南芥营养突变体的初步筛选。中国农业大学学报，1999，4(5)：31～36
5．武维华主编。2003。植物生理学。科学出版社
6．吴平，印莉萍，张立平等编著。2001。植物营养分子生理学。科学出版社
7．陶勤南，方萍，吴良欢。水稻氮素营养叶色诊断研究。土壤，1990，4：190-193
8．郑继刚，李成梅，肖英华等。激活标签法及其在植物基因工程上的应用。遗传，2003，25(4)：471～474
9．韩燕来，徐芳森，段海燕等。拟南芥养分离子转运蛋白研究进展。植物学通报，2003，20(1)：23～35
10．潘瑞炽，董愚得编著。1979。植物生理学。高等教育出版社
11．张礼忠，毛知耘译。1992。植物的无机营养。农业出版社
12．曹一平，陆景陵译。1991。高等植物的矿质营养。北京农业大学出版社
13．何念祖主编。1998。肥料制造与加工。上海科学技术出版社
14．严小龙，张福锁著。1997。植物营养遗传学。中国农业出版社
15．方萍，何延编著。2003。试验设计与统计。浙江大学出版社
16．方萍编著。2000。实用农业试验设计与统计分析指南。中国农业出版社
17．崔玉亭主编。2000。化肥与生态环境保护。化学工业出版社
18．陈阅增主编。1997。普通生物学。高等教育出版社
19．李衍达，孙之荣等译。2000。生物信息学。清华大学出版社
20．孙乃恩，孙东旭，朱德煦编。1990。分子遗传学。南京大学出版社
21．翟中和，王喜忠，丁明孝主编。2000。细胞生物学。高等教育出版社
22．郝柏林，张淑誉编著。2000。生物信息学手册。上海科学技术出版社
23．黄海，罗友丰等编著。2001。SPSS 10.0 for Windows统计分析。人民邮电出版社
24．洪楠，候军编著。2001。SAS for Windows统计分析系统教程。电子工业出版社
25．鲁如坤主编。1999。土壤农业化学分析方法。中国农业科技出版社
26．李合生，陈翠莲等主编。1998。植物生理生化实验原理和技术。华中农业大学出版社
27．王秀荣，沈宏，严小龙。拟南芥室内繁种技术研究。华南农业大学学报(自然科学版)，2002，23(3)：94～94
28．陈敏，白书农。拟南芥培养经验点滴。植物生理学通讯，1995，3(16)：436～438
29．赵淑清。一种筛选拟南芥突变体的有效方法。遗传，2001，23(3)：260～262
30．肖淼波，李文学，段宗颜等。植物对硝态氮的吸收及其调控。中国农业科技导报。2002，4(2)：56～59
31．孙宝启，李玉京。硝酸还原酶与氮素利用的关系及其在作物遗传育种中的应用。北京农业火学学报，1993，19(3)：29～33
32．曹翠玲，李生秀，苗芳。氮素对植物某些生理生化过程影响的研究进展。西北农业大学学报，1999，27(4)：96～101
33．赵平，孙谷畴，彭少麟。植物氮素营养的生理生态学研究。生态科学，1998，17(2)：37～42
34．安贤惠。拟南芥及其研究进展。西北农业学报，1998，7(1)：92～94
35．陈明吕，张强，杨晋玲。农业生态系统中氮素循环研究综述。山西农业科学，1993，21(4)：53～59
36．张金恒，王珂，王人潮。叶绿素计SPAD-502在水稻氮素营养诊断中的应用。西北农林科技大学学报(自然科学版)，2003，31(2)：177～180
37．徐芳森，年夫照，王运华。不同拟南芥生态型对缺硼反映的初步研究。华中农业大学学报，2003，22(2)：138～141
38．陆晓春，薛庆中。插入诱变在拟南芥基因克隆中的应用。中国生物工程杂志，2002，22(4)：66～69
39．孙彭力，王慧君。氮素化肥的环境污染。环境污染与防治，1995，17(1)：38～41
40．巩振辉，何玉科。拟南芥基因转移新方法—真空渗入法的研究。西北植物学报，1996，16(3)：277～283
41．唐银凤。叶绿素含量测定中的误差分析。南京理工大学学报，1997，21(2)：130～132
42．郑慧琼，陈季楚，赵毓橘。油菜素内酯不敏感型的拟南芥突变型筛选。植物生理学报，1997，23(3)：293～298
43．刘秀丽，宋平，孙成明。植物叶绿素测定方法的再探讨。江苏农业研究，1999，20(3)：46～47
44．韩玉珍，李睿，孟繁静。拟南芥开花的光周期调节。植物生理学通讯，1998，34(5)：401～406
45．杨敏文。快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨。光谱实验室，2002，19(4)：478～481
46．康定明，邓兴旺，陈章良。拟南芥DNA全序列测定与分析完成。植物学通报，2001，18(1)：124～125
47．殷奎德，张兴梅。拟南芥的生物学特性及基因克隆策略。黑龙江八一农垦大学学报，2001，13(3)：1～5
48．瞿绍洪，张文俊，景健康。玉米转座子Ac在单倍体烟草中转座的研究。遗传学报，1998，25(2)：150～154
49．廖鸣娟，董爱华，王正栋。植物转座子及其在功能基因组学中的应用。遗传，2000，22(5)：345～348
50．陈锦强，李明启。不同氮素营养对黄麻叶片的光合作用、光呼吸的影响及光呼吸与硝酸还原的关系。植物生理学报，1983(3)：251～259
51．尹新华，曹翠玉，史瑞和。氮肥对夏高粱养分吸收及产质影响的研究。土壤通报，1992，23(4)：171～173
52．冯福生，陈文龙。李洁。不同供氮水平下冬小麦叶片中RuBPC羧化酶和NRA活性的变化。植物生理学通讯，1986(6)：20～22
53．罗廉源，林植芳。氮素营养对丙酮酸磷酸二激酶的调节。植物生理学通讯，1992，28(1)：40-42
54．薛菘，吴小平，冯彩平。不同氮素水平对早地小麦叶片、叶绿素和糖含量的影响及其产量的关系。干旱地区农业研究，1997，15(1)：79～109
55．石正强。铵态氮和硝态氮营养与大豆幼苗的抗氰呼吸作用。植物生理学报，1997，23(2)：204～208
56．李春喜，张根发，石惠恩。氮肥对小麦硝酸还原酶活性和籽粒蛋白质含量变化动态的影响。西北植物学报，1995，15(4)：276～281
57．陈少裕。膜脂过氧化对植物细胞的伤害。植物生理学通讯，1991，27(2)：84～90
58．李宪利，高东升，顾曼如。铵态和硝态氮对苹果植株SOD和POD活性的影响。植物生理学通讯，1997，33(4)：254～255
59．鲁如坤。我国土壤氮、磷、钾的基本情况。土壤学报，1989，26(3)：280～286
60．何龙飞，刘友良，沈振过。植物离子通道特征、功能、调节与分子生物学。植物学通报，1997，16(5)：517～525
61. Tsay YF. The herbicide sensitibiity gene CHLI of Arabidopsis thaliana encodes a nitrate inducible nitrate transporter. Cell, 1993,72:705～713
62. Ninnemann O, Jauniaux JC, Frommer WB. Identification of a high affinity NH_4~+ transporter from plants. EMBO J. 1994,13:3464-3471
63. Poirier Y, Thoma S, Somerville C, et al. A mutant of Arabidopsis deficient in xylem loading of phosphate. Plant Physiol, 1991, 97: 1087-1093
64. Delhaize E, Randall PJ. Characterization of a phosphate-accumulator mutant of Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1995,107:207～213
65. Arteca RN, Arteca JM. A novel method for growing Arabidopsis thaliana plants hydroponically. Physiol Plant,2000,108:188～193
66. Wang XB, Wu P. Effects of Nitrate on the growth of lateral root and nitrogen absorption in rice. Acta Botanica Sinica,2002,44(6):678～683
67. Pierre T, Laurent C. A novel high efficiency, low maintenance, hydroponic system for synchronous growth and flowering of Arabidopsis thaliana. BMC Plant Biology 2003,3:2
68. Nigel C. Nitrate: Nutrient and signal for plant growth. Plant Cell, 1995,7:859～868
69. Gloria C, Daniel B. Nitrogen and carbon nutrient and metabolite signaling in plants. Plant Physiol, 2001, 125: 61～64
70. Peng S, Cassman KG, Kropff MJ. Relationship between leaf photosynthesis and nitrogen content of field grown rice in tropics. Crop Sci, 1995, 35:1627-1630
71. David W. Meinke. Arabidopsis thaliana: A Model plant for Genome Analysis [J]. Science, 1998, 282(5389):662～682
72. Murphy A, Taiz L. A new vertical mesh transfer technique for metal-tolerance studies in Arabidopsis. Plant Physiol, 1995(108): 29～38
73. Tang YX, Chen AP, Liu SG. Identification and Characterization of a salt tolerance-responsive gene (AtGRP9) of Arabidopsis. Progress in Natural Science, 2003,13(I):50～54
74. Huang S, Cerny RE, Bhat DS. Cloning of an Arabidopsis patatin like gene, sturdy, by activation T-DNA tagging. Plant Physiol,2001,125:573～584
75. Weigel D, Ahn JH, Biazquez MA. Activation tagging in Arabidopsis. Plant Physiol, 2000, 122: 1003～1014
76. Howden R, Cobbett CS. Cadmium-sensitive mutants of mutants of Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1992,99: 100～107
77. Larsen PB. Arabidopsis mutants with increased sensitivity to aluminium. Plant Physiol, 1996, 110: 743～751
78. Angus M, Taiz L. The vertical mesh transfer technique: A new method for the rapid isolation of metal resistant and sensitive mutants in Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1994,105:30～30
79. Koyama H, Toda T, Yokota S. Effects of aluminium and pH on root growth and cell viability in Arabidopsis thaliana strain Landsburg in hydroponic culture. Plant Cell Physiol, 1995,36:201～205
80. Hirai MY, Fujiwara T, Chino M. Effects of sulphate concentrations on the expression of a soybean seed storage protein gene and its reversibility in transgenic Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 1995,107:207～213
81. Koomneef M, Alonso-Blanco C, Peeters AJM. Genetic control of flowering time in Arabidopsis. Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 1998,49:345～370
82. Levy YY, Dean C. The transition of flowering. Plant Cell, 1998,10:1973～1989
83. Gibeaut DM, Hulett J, Cramer GR. Maximal biomass of Arabidopsis thaliana using a simple, low-maintenance hydroponic method and favourable environmental conditions. Plant Physioi, 1997,115:317～319
84. Corbesier L, Gadisseur I, Silvestre G. Design in Arabidopsis thaliana of a synchronous system of floral induction by one long day. Plant J,1996.9:947～952
85. Wilkinson JQ, Crawford NM. Identification and characterization of a chlorate-resistant mutant ofArabidopsis thaliana with mutations in both nitrate reductase structural genes NIA1 and NIA2. Mol Gen Genet, 1993,239:289～297
86. Bechtold N, Ellis J, Pelletier G. In planta agrobacterium mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants. CR Acad Sci, 1993,316:1194～1199
87. Feldmann KA. T-DNA insertion mutagenesis in Arabidopsis: mutational spectrum. Plant J, 1991,1:71～82
88. Errampali D, Patton D. Embryonic lethals and T-DNA insertional mutagensis in Arabidopsis. Plant Cell, 1991, 11: 149～157