复方蛤青注射液指纹图谱和质量标准研究
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摘要
复方蛤青注射液是由蟾蜍、黄芪、苦杏仁、紫菀、前胡、白果、五味子、附子和黑胡椒等九味药材，经过一定的工艺处理制成的复方制剂，既有植物药也有动物药，化学成分复杂，因此测定其中任何一种单一成分均不能全面的反映复方蛤青注射液的内在质量。根据药典委员会提出的相关要求和相关的研究资料，本文较系统的研究了复方蛤青注射液指纹图谱样品前处理、色谱条件的优化、方法学验证以及采用不同相似度软件和算法进行相似度分析等研究，同时分析比较了采用标准提取物用于本品指纹图谱分析的可行性。最终采用RP-HPLC和固相萃取(SPE)等技术建立了复方蛤青注射液成品、中间体和相关药材的对照指纹图谱和复方蛤青注射液共有模式，以规范和优化本品的生产工艺，提高和稳定成品的质量，达到用药安全、稳定的目的。
因复方蛤青注射液原标准中只有定性分析鉴别项，无含量测定项，为了定量分析该药的内在质量，我们进行了该制剂的含量测定标准的研究。苦杏仁是该方中主药之一，其所含苦杏仁苷是苦杏仁中的主要有效成分，苦杏仁苷的含量将直接影响到该制剂的疗效，因此我们采用HPLC法测定了复方蛤青注射液中苦杏仁苷的含量，制定了该制剂质量标准的含量测定项。本方法样品用量少，供试品的制备简便易行，分析时间短，并具有较好的重现性。
结果表明，本研究建立的指纹图谱分析方法具有较好的重现性和专属性，认为将标准提取物用于指纹图谱分析是一种行之有效的方法；质量标准中含量测定项的建立，可以更为客观地监测复方蛤青注射液中的有效成分。总之，指纹图谱分析与含量测定相结合，为系统、有效的控制复方蛤青注射液的内在质量提供了定性与定量分析的依据。
Compound haqing injection is made from nine Chinese herbal medicine, such as bufonid, radix astragali, semen armeniacae amarum, radix asteris, fructus piperis and so on. by some specifically techniques, including botanical and animal medicinal materials, so its constituents are very complicated and diversified, only single constituent can not allover evaluate its inner quality. In this paper fingerprint chromatography of compound haqing injection were set up by RP-HPLC of gradation technology. In order to standardize and optimize the manufacture procedure, reference fingerprint atlas of medical material, intermediate and injection were established after comprehensive analyzing based on correlative rule of Chinese Pharmacopoeia Committee to ensure clinical medicine safe and steady.
We established the method of determination of amygdalin, which is the effective resistance of Aemen armeniacae amarum in the injection prescription by HPLC. The method was convenient, rapid, accurate and also useful for the chemical evaluation of the amygdalin for the quality control.
The results showed that the setting up analysis method of fingerprint chromatography can be repeated and accurate and can be used as a quality control method for this injection. It also showed using standard extraction was an effective method in fingerprint analysis. The fingerprint analysis and the determination of amygdalin can effectively control the inner quality of medicinal material, intermediate and injection.
因复方蛤青注射液原标准中只有定性分析鉴别项，无含量测定项，为了定量分析该药的内在质量，我们进行了该制剂的含量测定标准的研究。苦杏仁是该方中主药之一，其所含苦杏仁苷是苦杏仁中的主要有效成分，苦杏仁苷的含量将直接影响到该制剂的疗效，因此我们采用HPLC法测定了复方蛤青注射液中苦杏仁苷的含量，制定了该制剂质量标准的含量测定项。本方法样品用量少，供试品的制备简便易行，分析时间短，并具有较好的重现性。
结果表明，本研究建立的指纹图谱分析方法具有较好的重现性和专属性，认为将标准提取物用于指纹图谱分析是一种行之有效的方法；质量标准中含量测定项的建立，可以更为客观地监测复方蛤青注射液中的有效成分。总之，指纹图谱分析与含量测定相结合，为系统、有效的控制复方蛤青注射液的内在质量提供了定性与定量分析的依据。
Compound haqing injection is made from nine Chinese herbal medicine, such as bufonid, radix astragali, semen armeniacae amarum, radix asteris, fructus piperis and so on. by some specifically techniques, including botanical and animal medicinal materials, so its constituents are very complicated and diversified, only single constituent can not allover evaluate its inner quality. In this paper fingerprint chromatography of compound haqing injection were set up by RP-HPLC of gradation technology. In order to standardize and optimize the manufacture procedure, reference fingerprint atlas of medical material, intermediate and injection were established after comprehensive analyzing based on correlative rule of Chinese Pharmacopoeia Committee to ensure clinical medicine safe and steady.
We established the method of determination of amygdalin, which is the effective resistance of Aemen armeniacae amarum in the injection prescription by HPLC. The method was convenient, rapid, accurate and also useful for the chemical evaluation of the amygdalin for the quality control.
The results showed that the setting up analysis method of fingerprint chromatography can be repeated and accurate and can be used as a quality control method for this injection. It also showed using standard extraction was an effective method in fingerprint analysis. The fingerprint analysis and the determination of amygdalin can effectively control the inner quality of medicinal material, intermediate and injection.
引文
[1] 谢培山．中药制剂色谱指纹图谱(图像)鉴别．中成药，2000，22(6)：391
[2] 谢培山．中医药文化与现代质量控制．中国中西医结合杂志，1998，18(11)：645—647．
[3] 谢培山．浅谈中药指纹图谱在新药研发中的作用．中国中西医结合杂志，2002，22(9)：644．
[3] 中国药典委员会．中药指纹图谱指导原则(草案)．2003．
[4] Branka Barl. Quality Analysis and Standardized Extracts of Medicinal Herbs. PMAP Conference, 1997.
[5] Rudolf Beuer. Quality Criteria and Phytopharmaceuticals: Can Acceptable Drug Standards Be Achieved? Drug Information Journal. 1998, 32: 101-ii0.
[6] 栗晓黎，林瑞超，王兆基，等．中药鬼臼毒性成分HPLC／UV指纹图谱分析方法研及与威灵仙、龙胆HPLC图谱比较．中成药，2000，22(12)：819．
[7] 张立新，周晓英，张良，等．肾康注射液中大黄药材指纹图谱研究．药品检验 2001，10(10)：36．
[8] 刘艳华，赵陆华，黄剑，等．丹参HPLC指纹图谱的研究．中国药科大学学报，2002，33(2)：127
[9] 张文生，叶正良，岳洪水，等．丹参药材指纹图谱研究．中药材，2001，24(7)：478．
[10] 曾志，杨东晖，宋力飞，等．高效液相色谱应用于板蓝根的鉴定．分析化学，2002，30(7)：849．
[11] 杨广德，贺浪冲，李永茂．丹参有效部位指纹图谱定性和有效成分定量分析方法研究．药物分析杂志，2003，23(6)：409．
[12] 裴学军，芦金清，刘毅，等．厚朴药材高效液相指纹图谱试验研究．中药材，2002，25(9)：631．
[13] 崔秀明，董婷霞，陈中坚，等．三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定．中草药，2002，33(10)：941．
[14] 徐艳春，魏璐雪，周玉新，等．红车轴草中异黄酮的指纹图谱研究．中国中药志，2002，27(3)：196．
[15] 杜程芳，屠鹏飞．白鲜皮药材指纹图谱研究．中国天然药物，2003，1(2)：94
[17] 栗晓黎，林瑞超．中药侧柏叶黄酮成分指纹图谱分析方法的研究．药物分析杂志，2003，23(6)：83
[16] 石先哲，杨军，赵春霞，等．色谱指纹图谱法在参麦注射液质控中的应用．色谱，2002，20(4)：299．
[18]游松，王亮，蒋雅红，等．银杏叶注射剂指纹图谱的研究．中草药，2002，33(3)．
[19]曾令杰，陈矛，邓乔华，等．复方丹参片指纹图谱的质量评价研究．广东药学院学报，2002，18(3)：182．
[20]贾晓斌，施亚芳，陈彦，等．复方人参注射液的HPLC指纹图谱研究．中成药，2002，24(4)：243．
[21]高增平，陆蕴如，孙伟．血栓通注射液指纹图谱研究．中国实验方剂学杂志，2002，8(6)：1
[22]戴德舜，曹进，王义明，等．桂枝汤A部分指纹图谱的确定及比较(一)．中国实验方剂学，2001，7(2)：1．
[23]曹进，戴德舜，王义明，等．桂枝汤A部分有效成分指纹图谱归属(二)．中国实验方剂学，2001，7(3)：1．
[24]张尊建，李茜，王伟，等．丹参及丹参注射液指纹图谱的HPLC-MS研究．中草药，2002，33(12)：1074．
[25]徐青，王加宁，肖红斌，等．黄芪药材的指纹图谱研究方法的建立．分析测试学报，2002，21(2)：89．
[26]谢培山，宋力飞，曾志，等．抗病毒口服液指纹图谱研究成果鉴定资料汇编．2003年8月．
[27]李秀珍，高海，刘海静．鱼腥草注射液指纹图谱分析方法的研究．西北药学杂志，2002，17(4)：154．
[28]魏刚．3种中药复方制剂气相色谱／质谱联用鉴别研究．中国中药杂志，2001，26(6)：399
[29]苏薇薇，冯毅凡，徐桂宇，等．乌鸡白凤丸气相气相色谱指纹特征研究．中药材，1998，21(1)：37．
[30]吴忠．仲景胃灵片GC指纹图谱研究．中药材，2001，24(3)：196．
[31]袁敏，张铭光，袁鹏，等．郁金的裂解色谱指纹图谱及聚类分析．色谱，2003，21(5)：469．
[32]谢培山，祝晨蔯．穿心莲指纹图谱研究技术报告．2003年5月．
[33]何作民，吴子超，钟向红，等．六味地黄丸薄层色谱指纹图谱研究．中国药业，2002，11(9)：36
[34]罗敏，霍永吕，魏献春．五种蛇胆的薄层色谱扫描指纹图谱研究．中药材，2002，25(1)：16．
[35]颜玉贞，林巧玲，谢培山．黄连薄层指纹图谱研究．中国中药杂志，1993，18(6)：329
[36]王天松．毛细管电泳与中草药指纹图谱中成药，2000，22(6)：397．
[37]孙沂，隋因，郭涛，等．不同产地红花药材的高效毛细管电泳指纹图谱研究．中国药学杂志，2003，38(3)：176．
[38]胡平，罗国安，王如骥，等．中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别，药学学报，1997，32(70)：549．
[39]张朝晖，范国容，徐国钧，等．12种海马、海龙类药材高效毛细管电泳法鉴别，中国中药杂志，1998，23(5)：259．
[40]徐重远，陈振德，刘建武，等．狗脊及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别．中药材，199922(7)：337．
[41]陈振德，徐重远，庄志铨，等．穿山甲及其炮制品蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴定．广东药学院学报，2000，16(4)：302．
[42]张亮，马国祥，张正行，等．中药石斛质量的化学模式识别．药学学报，1994，29(4)：290．
[43]王秀坤，李家实，魏璐雪，等．苦参质量的化学模式识别．中国中药杂志，1996，29(4)：198．
[44]孙素琴，袁子民，白雁．红外指纹图谱与计算机辅助解析技术鉴别山药的道地性．计算机与应用化学，2001，19(1)：77．
[45]倪力军，李鹏，郑荣，等．丹参提取物红外指纹图谱间相似度的定量分析．中成药，2002，24(2)：79．
[46]田进国，娄红祥，任键，等．三十种药材对照品红外光谱研究．中国药科大学学报，1996，27(1)：24．
[47]周俊国，吕杨，郑启泰，等．中药蛇床子的粉末X衍射分析．中草药，1999，30(1)：59．
[48]王树春，吕杨，吴楠，等．中药材熊胆的X衍射Fourier谱分析．中草药，2000，31(3)：214．
[49]秦海林，尚玉俊，赵伟，等．核磁共振氢谱法鉴别黄连的研究．中草药，2000，31(1)：48
[50]秦海林，赵天增．核磁共振氢谱鉴别植物中药的研究．药学学报，1999，34(1)：58．
[51]秦海林，赵大曾，袁卫梅，等．虎杖、何首乌和掌叶大黄的1HNMR指纹图解析．药学学报，1999，34(11)：828．
[52]曹明，严继舟，张汉明，等．RAPD技术在葛属药用植物分类和鉴定中的应用．中草药，2000，31(8)：620．
[53]Shaw P.C, But P.H. Planta Med. 1995, 61, 466.
[54]王立世，杨晓云，席绍峰，等．毛细管电泳信号的小波平滑与去噪．高等化学学报．1999，20(3)．383．
[55]冯德益，楼世博．模糊数学方法与应用．北京：地震出版社，1983。
[56]王龙星，肖红斌，梁鑫淼，等．一种评价中药色谱指纹图谱相似度的新方法：向量夹角法)．药学学报，2002，37(9)，713．
[57]王康，杜凯，张方，等．中草药指纹图谱相似度计算方法的研究．药物分析杂志，2003年增刊，29．
[58]张海霞，朱彭龄．固相萃取．分析化学，2000，28(9)：1172．
[59]江苏新医学院．中药大辞典(上册)．上海：上海人民出版社，1977：509．
[60]陈德昌主编．中药化学对照品工作手册，北京：中国医药科技出版社，1999：111．
[61]Reitnauer P G. Arzneim-Forsch, 1972, 22(8): 1347.
[62]李熙民，等．新药与临床，1986，5(3)：141．
[63]Sollmann T.A manual of Pharmacology 8th ed W.B Saunders & Co. 1975.986.
[64]Goodman LS, et al. The Pharmacology Basis of Therapeutics 7th ed. Macmillan&Co. 1985,1642.
[2] 谢培山．中医药文化与现代质量控制．中国中西医结合杂志，1998，18(11)：645—647．
[3] 谢培山．浅谈中药指纹图谱在新药研发中的作用．中国中西医结合杂志，2002，22(9)：644．
[3] 中国药典委员会．中药指纹图谱指导原则(草案)．2003．
[4] Branka Barl. Quality Analysis and Standardized Extracts of Medicinal Herbs. PMAP Conference, 1997.
[5] Rudolf Beuer. Quality Criteria and Phytopharmaceuticals: Can Acceptable Drug Standards Be Achieved? Drug Information Journal. 1998, 32: 101-ii0.
[6] 栗晓黎，林瑞超，王兆基，等．中药鬼臼毒性成分HPLC／UV指纹图谱分析方法研及与威灵仙、龙胆HPLC图谱比较．中成药，2000，22(12)：819．
[7] 张立新，周晓英，张良，等．肾康注射液中大黄药材指纹图谱研究．药品检验 2001，10(10)：36．
[8] 刘艳华，赵陆华，黄剑，等．丹参HPLC指纹图谱的研究．中国药科大学学报，2002，33(2)：127
[9] 张文生，叶正良，岳洪水，等．丹参药材指纹图谱研究．中药材，2001，24(7)：478．
[10] 曾志，杨东晖，宋力飞，等．高效液相色谱应用于板蓝根的鉴定．分析化学，2002，30(7)：849．
[11] 杨广德，贺浪冲，李永茂．丹参有效部位指纹图谱定性和有效成分定量分析方法研究．药物分析杂志，2003，23(6)：409．
[12] 裴学军，芦金清，刘毅，等．厚朴药材高效液相指纹图谱试验研究．中药材，2002，25(9)：631．
[13] 崔秀明，董婷霞，陈中坚，等．三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定．中草药，2002，33(10)：941．
[14] 徐艳春，魏璐雪，周玉新，等．红车轴草中异黄酮的指纹图谱研究．中国中药志，2002，27(3)：196．
[15] 杜程芳，屠鹏飞．白鲜皮药材指纹图谱研究．中国天然药物，2003，1(2)：94
[17] 栗晓黎，林瑞超．中药侧柏叶黄酮成分指纹图谱分析方法的研究．药物分析杂志，2003，23(6)：83
[16] 石先哲，杨军，赵春霞，等．色谱指纹图谱法在参麦注射液质控中的应用．色谱，2002，20(4)：299．
[18]游松，王亮，蒋雅红，等．银杏叶注射剂指纹图谱的研究．中草药，2002，33(3)．
[19]曾令杰，陈矛，邓乔华，等．复方丹参片指纹图谱的质量评价研究．广东药学院学报，2002，18(3)：182．
[20]贾晓斌，施亚芳，陈彦，等．复方人参注射液的HPLC指纹图谱研究．中成药，2002，24(4)：243．
[21]高增平，陆蕴如，孙伟．血栓通注射液指纹图谱研究．中国实验方剂学杂志，2002，8(6)：1
[22]戴德舜，曹进，王义明，等．桂枝汤A部分指纹图谱的确定及比较(一)．中国实验方剂学，2001，7(2)：1．
[23]曹进，戴德舜，王义明，等．桂枝汤A部分有效成分指纹图谱归属(二)．中国实验方剂学，2001，7(3)：1．
[24]张尊建，李茜，王伟，等．丹参及丹参注射液指纹图谱的HPLC-MS研究．中草药，2002，33(12)：1074．
[25]徐青，王加宁，肖红斌，等．黄芪药材的指纹图谱研究方法的建立．分析测试学报，2002，21(2)：89．
[26]谢培山，宋力飞，曾志，等．抗病毒口服液指纹图谱研究成果鉴定资料汇编．2003年8月．
[27]李秀珍，高海，刘海静．鱼腥草注射液指纹图谱分析方法的研究．西北药学杂志，2002，17(4)：154．
[28]魏刚．3种中药复方制剂气相色谱／质谱联用鉴别研究．中国中药杂志，2001，26(6)：399
[29]苏薇薇，冯毅凡，徐桂宇，等．乌鸡白凤丸气相气相色谱指纹特征研究．中药材，1998，21(1)：37．
[30]吴忠．仲景胃灵片GC指纹图谱研究．中药材，2001，24(3)：196．
[31]袁敏，张铭光，袁鹏，等．郁金的裂解色谱指纹图谱及聚类分析．色谱，2003，21(5)：469．
[32]谢培山，祝晨蔯．穿心莲指纹图谱研究技术报告．2003年5月．
[33]何作民，吴子超，钟向红，等．六味地黄丸薄层色谱指纹图谱研究．中国药业，2002，11(9)：36
[34]罗敏，霍永吕，魏献春．五种蛇胆的薄层色谱扫描指纹图谱研究．中药材，2002，25(1)：16．
[35]颜玉贞，林巧玲，谢培山．黄连薄层指纹图谱研究．中国中药杂志，1993，18(6)：329
[36]王天松．毛细管电泳与中草药指纹图谱中成药，2000，22(6)：397．
[37]孙沂，隋因，郭涛，等．不同产地红花药材的高效毛细管电泳指纹图谱研究．中国药学杂志，2003，38(3)：176．
[38]胡平，罗国安，王如骥，等．中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别，药学学报，1997，32(70)：549．
[39]张朝晖，范国容，徐国钧，等．12种海马、海龙类药材高效毛细管电泳法鉴别，中国中药杂志，1998，23(5)：259．
[40]徐重远，陈振德，刘建武，等．狗脊及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别．中药材，199922(7)：337．
[41]陈振德，徐重远，庄志铨，等．穿山甲及其炮制品蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴定．广东药学院学报，2000，16(4)：302．
[42]张亮，马国祥，张正行，等．中药石斛质量的化学模式识别．药学学报，1994，29(4)：290．
[43]王秀坤，李家实，魏璐雪，等．苦参质量的化学模式识别．中国中药杂志，1996，29(4)：198．
[44]孙素琴，袁子民，白雁．红外指纹图谱与计算机辅助解析技术鉴别山药的道地性．计算机与应用化学，2001，19(1)：77．
[45]倪力军，李鹏，郑荣，等．丹参提取物红外指纹图谱间相似度的定量分析．中成药，2002，24(2)：79．
[46]田进国，娄红祥，任键，等．三十种药材对照品红外光谱研究．中国药科大学学报，1996，27(1)：24．
[47]周俊国，吕杨，郑启泰，等．中药蛇床子的粉末X衍射分析．中草药，1999，30(1)：59．
[48]王树春，吕杨，吴楠，等．中药材熊胆的X衍射Fourier谱分析．中草药，2000，31(3)：214．
[49]秦海林，尚玉俊，赵伟，等．核磁共振氢谱法鉴别黄连的研究．中草药，2000，31(1)：48
[50]秦海林，赵天增．核磁共振氢谱鉴别植物中药的研究．药学学报，1999，34(1)：58．
[51]秦海林，赵大曾，袁卫梅，等．虎杖、何首乌和掌叶大黄的1HNMR指纹图解析．药学学报，1999，34(11)：828．
[52]曹明，严继舟，张汉明，等．RAPD技术在葛属药用植物分类和鉴定中的应用．中草药，2000，31(8)：620．
[53]Shaw P.C, But P.H. Planta Med. 1995, 61, 466.
[54]王立世，杨晓云，席绍峰，等．毛细管电泳信号的小波平滑与去噪．高等化学学报．1999，20(3)．383．
[55]冯德益，楼世博．模糊数学方法与应用．北京：地震出版社，1983。
[56]王龙星，肖红斌，梁鑫淼，等．一种评价中药色谱指纹图谱相似度的新方法：向量夹角法)．药学学报，2002，37(9)，713．
[57]王康，杜凯，张方，等．中草药指纹图谱相似度计算方法的研究．药物分析杂志，2003年增刊，29．
[58]张海霞，朱彭龄．固相萃取．分析化学，2000，28(9)：1172．
[59]江苏新医学院．中药大辞典(上册)．上海：上海人民出版社，1977：509．
[60]陈德昌主编．中药化学对照品工作手册，北京：中国医药科技出版社，1999：111．
[61]Reitnauer P G. Arzneim-Forsch, 1972, 22(8): 1347.
[62]李熙民，等．新药与临床，1986，5(3)：141．
[63]Sollmann T.A manual of Pharmacology 8th ed W.B Saunders & Co. 1975.986.
[64]Goodman LS, et al. The Pharmacology Basis of Therapeutics 7th ed. Macmillan&Co. 1985,1642.