河南省益母草种质资源的遗传多样性研究
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摘要
益母草（Leonurus heterophyllus Houtt.）系唇形科（Lamiaceae）益母草属植物。一年生或两年生草本，全草可入药。主要分布在苏联、朝鲜、日本、热带亚洲、非洲以及美洲各地。我国大部分地区均有分布，生长于多种生境，尤以阳处为多。目前关于益母草遗传多样性的研究主要是借助RAPD、AFLP、ISSR等分子标记展开的。但是关于益母草SSR引物的开发的报道尚未见到。而用SCoT标记分析某一地区益母草种质资源遗传多样性的研究也未见报道。
本文利用磁珠富集法，SCoT-银染技术，UPGMA聚类分析方法，从基因组DNA扩增多态性的角度，进行了如下探索：①益母草SSR引物的初步开发；②益母草植物66份材料遗传多样性、亲缘关系及其地理位置关系研究。本文旨在从基因组水平上为益母草植物分类提供科学依据，丰富益母草植物系统学研究的内容，为保护我国益母草种质资源的多样性提供理论依据。主要的研究结果如下：
1.对SSR引物进行开发并加以检测。由于开发成功的引物较少，只做了初步分析，此方面的工作需要继续延续，且有必要性。
2.借助ScoT这种新型分子标记对来自河南省内的66份益母草材料进行聚类分析。从36个引物中筛选出10对，共扩增得到240条清晰可统计的条带，其中多态性条带为240条，占总带数的100%。所得结果如下：①益母草具有非常丰富的多态性；②聚类结果显示地理距离与亲缘关系的远近有关，但地理距离远近不是主要因素，遗传背景因素起主要作用；③益母草的遗传分化主要存在居群内；④地理距离和遗传距离总体上呈不明显的正相关关系。
Motherwort (Leonurus heterophyllus Houtt.) is an annual or biennial herbaceous plant with medicinalproperties and a worldwide distribution in the Lamiaceae family.Growing in many habitats, especiallyunshaded places, L.Heterophyllus Houtt. can be found in most regions of China. Genetic diversity ofL.Heterophyllus Houtt. has been investigated using RAPD、AFLP and ISSR molecular markers.SSRprimers and the ScoT technique have not been previously employed in the study of L. Heterophyllus Houtt..
Using the magnetic beads enriched, SCoT-silver staining techniques and the UPGMA cluster analysismethod, I explored:①the feasibility of SSR primers;②the genetic diversity and phylogenetic relationshipof the66L.Heterophyllus Houtt.samples. The main results are as follows:
⑴I have developed several SSR primers. Only preliminary analyses concerning these primers havebeen carried out due to the small number of successfully constructed primers. Futher research in this area isnecessary.
⑵I selected ten pairs of SCoT primers from an initial library of36for the analysis, obtaining240clear amplified bands, all of which were polymorphic (100%).①L. Heterophyllus Houtt. appear to behighly polymorphic.②The clustering results show that the geographical distance and phylogeneticrelationship is associated, however, the geographical distance is not the main factors, genetic backgroundfactors play a major role.
.③Genetic diversity of the samples is dominated by inter-population variations.④Overall, geneticdistance was unobvious positively correlated with geographic distance.
本文利用磁珠富集法，SCoT-银染技术，UPGMA聚类分析方法，从基因组DNA扩增多态性的角度，进行了如下探索：①益母草SSR引物的初步开发；②益母草植物66份材料遗传多样性、亲缘关系及其地理位置关系研究。本文旨在从基因组水平上为益母草植物分类提供科学依据，丰富益母草植物系统学研究的内容，为保护我国益母草种质资源的多样性提供理论依据。主要的研究结果如下：
1.对SSR引物进行开发并加以检测。由于开发成功的引物较少，只做了初步分析，此方面的工作需要继续延续，且有必要性。
2.借助ScoT这种新型分子标记对来自河南省内的66份益母草材料进行聚类分析。从36个引物中筛选出10对，共扩增得到240条清晰可统计的条带，其中多态性条带为240条，占总带数的100%。所得结果如下：①益母草具有非常丰富的多态性；②聚类结果显示地理距离与亲缘关系的远近有关，但地理距离远近不是主要因素，遗传背景因素起主要作用；③益母草的遗传分化主要存在居群内；④地理距离和遗传距离总体上呈不明显的正相关关系。
Motherwort (Leonurus heterophyllus Houtt.) is an annual or biennial herbaceous plant with medicinalproperties and a worldwide distribution in the Lamiaceae family.Growing in many habitats, especiallyunshaded places, L.Heterophyllus Houtt. can be found in most regions of China. Genetic diversity ofL.Heterophyllus Houtt. has been investigated using RAPD、AFLP and ISSR molecular markers.SSRprimers and the ScoT technique have not been previously employed in the study of L. Heterophyllus Houtt..
Using the magnetic beads enriched, SCoT-silver staining techniques and the UPGMA cluster analysismethod, I explored:①the feasibility of SSR primers;②the genetic diversity and phylogenetic relationshipof the66L.Heterophyllus Houtt.samples. The main results are as follows:
⑴I have developed several SSR primers. Only preliminary analyses concerning these primers havebeen carried out due to the small number of successfully constructed primers. Futher research in this area isnecessary.
⑵I selected ten pairs of SCoT primers from an initial library of36for the analysis, obtaining240clear amplified bands, all of which were polymorphic (100%).①L. Heterophyllus Houtt. appear to behighly polymorphic.②The clustering results show that the geographical distance and phylogeneticrelationship is associated, however, the geographical distance is not the main factors, genetic backgroundfactors play a major role.
.③Genetic diversity of the samples is dominated by inter-population variations.④Overall, geneticdistance was unobvious positively correlated with geographic distance.
引文
[1]晁志，周秀佳．益母草类中药的研究概况和进展[J]．中草药，1998，28（6）：414-417．
[2]肖培根．新编中药志[M]．第三卷．北京：化学工业出版社，2002．
[3]晁志，王厄舟，周秀佳．益母草药材中生物碱含量与产地生态环境的关系[J]．第一军大学学报，2000，20（6）：504．
[4]吴征镒，李锡文．中国植物志[M]．科学出版社，2004，65（2）：508-511．
[5]邹华，吴云波，王金萍．HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量[J]．辽宁中医药大学学报，2006，8（6）：147．
[6]唐哲，刘莉，张玮．RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量[J]．中国中医药信息杂志，2008，15（8）：51-52．
[7]许小华，杜绍亮，杨云．益母草中总生物碱的提取及含量测定[J]．河南科学，2008，26（12）：1481-1482．
[8]陈喆，宋康，李晓娟等．UPLC测定益母草颗粒和益母草膏中益母草碱含量[J]．中国中药杂志，2009，34（12）：1509-1511．
[9]高岐，刘宏文．微波法提取益母草中总生物碱含量的研究[J]．安徽农业科学，2009，37（2）：646，691．
[10]王英姿，韩春超，赵瑞东．HPLC测定复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量[J]．山东中医药大学学报，2009，33（2）：157-158．
[11]赵鹂，郭圣荣．双水相体系萃取分离-分光光度法测定益母草中水苏碱[J]．药物分析杂志，2010，30（10）：1953-1956．
[12]姜华年．不同种源地益母草干重和水苏碱含量的测定[J]．中国农学通报，2011，27（9）：191-194．
[13]代龙．阳离子交换树脂氯化钠溶液洗脱纯化益母草总碱的研究[J]．江西中医学院学报，2008，20（6）：74-76．
[14]郑师明，严鹏科，李世煌等．精制益母草生物碱提取纯化工艺研究[J]．中国药房，2010，21（15）：1370-1372．
[15]蔡文燕，吴水金，蔡欣．益母草多糖提取工艺的研究[J]．热带农业科学，2008，28（6）：39-42．
[16]丛悦，王艳，谢欣梅等．HPLC-UV法测定益母草和酒炙益母草中丁香酸和芦丁的含量[J]．河南大学学报（自然科学版），2010，40（5）：507-510．
[17]王蕙，魏伟．原子荧光法测定益母草中硒的含量[J]．中国药事，2010，24（4）：378-379，382．
[18]严优芍．益母草不同提取方法的比较研究[J]．中医药导报，2010，16（5）：109-110．
[19]熊南燕，刘艳丽，孔增科．益母草不同采摘期、不同用药部位中含盐酸水苏碱的比较研究[J]．时珍国医国药，2008，19（8）：2004-2005．
[20]马登斌，张文彦，王晓敏等．冀南地区益母草不同采摘期及不同部位中盐酸水苏碱含量的比较[M]．中国民族民间医药，2010，药物研究，49，53．
[21]张文彦，刘艳丽．太行山野生益母草不同采摘期及不同部位的质量分析[J]．中国医院药学杂志，2011，31（12）：1038-1039．
[22]姜智蛟，李林．野生和栽培益母草中总生物碱和黄酮质量分数的比较[J]．东北林业大学学报，2009，37（4）：32-33．
[23]高言明，贾宪生，杨玉琴等．益母草野生品和栽培品中水苏碱的含量比较研究[J]．时珍国医国药，2010，21（1）：101-102．
[24]蒋品，高言明，杨玉琴等．黔产益母草野生品和人工种植品中几种微量元素含量变化研究[J]．微量元素与健康研究，2011,28（1）：15-16．
[25]张燕，王文全，魏菊等．我国北方不同地区益母草不同部位水苏碱含量的比较[J]．时珍国医国药，2007，18（7）：1574-1575．
[26]林家寿．不同地区益母草的水苏碱含量比较[J]．中国医药指南，2011，9（8）：32-33．
[27]晁志，王厄舟，周秀佳等．益母草药材中生物碱含量与产地生态环境的关系[J]．第一军医大学学报，2000，20（6）：504-506．
[28]沈晓霞，盛束军，徐建中．环境因子对益母草总生物碱含量的影响[J]．浙江农业学报，2002，14（4）：221-225．
[29]张娴，彭国平．益母草属化学成分研究进展[J]．天然产物研究与开发，2003，15（2）：162-166．
[30]蔡晓菡，车镇涛，吴斌等．益母草的化学成分[J]．沈阳药科大学学报，2006，23（1）：13-14，21．
[31]张琳，蔡晓菡，高慧媛等．益母草化学成分的分离与鉴定[J]．沈阳药科大学学报，2009，26（1）：15-18，26．
[32]杨世林，张本刚，陈君．药材栽培在中药资源可持续利用中的作用及发展战略[J]．中草药，1999，30（11）：870-873．
[33]李品汉．益母草栽培技术[J]．农村实用技术，2003（05）：13-14．
[34]刘群.药用植物益母草规范高产栽培技术[J]．现代农业，2009（12）：6．
[35]郑兰英，樊孝萍，胡兴宜．抑螺植物益母草的栽培、利用及效益研究[J]．湖北生态工程职业技术学院学报，2008，6（1）：5-7．
[36]徐建中，王志安，俞旭平等．不同来源地的益母草种源种植比较试验[J]．时珍国医国药2006，17（11）：2130-2131．
[37]徐建中，王志安，俞旭平等．益母草GAP栽培技术研究[J]．现代中药研究与实践，2006，20（4）：8-11．
[38]罗光宏，陈叶，毛晓春等．细叶益母草引种及栽培试验[J]．中草药，2005，36（7）：1082-1083．
[39]王年强，唐世涛．兴安益母草人工栽培丰产技术[J]．中国林副特产，2011（4）：61-62．
[40]梁称福．4种野菜种子的发芽特性及无菌播种培养研究[J]．广东农业科学2008（3）：15-17．
[41]李莺，杜瑞春，唐建云等．不同植物生长调节剂对益母草愈伤组织诱导的影响[J]．西安文理学院学报（自然科学版），2009，12（1）：43-47．
[42]厚毅清，王乃亮，欧巧琴等．益母草属植物种子发芽、细胞培养及其化学成分研究进展[J]．中国农学通报，2010，26（18）：75-78．
[43]李学栋，龚真才，马勇等．不同培养条件对益母草悬浮培养细胞生长的影响[J].西华师范大学学报(自然科学版)，2008，29（2）：136-140．
[44]姜华年，赵鹂．不同种源地益母草生物学特性观测评价[J]．江苏农业科学，2011，39(2)：356-359．
[45]晁志，刘传明，张宏伟等．益母草类药材性状鉴定[J]．中药材，2000，23（10）：601-603．
[46]霍忠超，熊南燕，苏县辉等．益母草、夏至草及錾菜的鉴别与合理应用[J]．河北中医，2010，32（3）：420-421．
[47]张国梅，徐腾，王晖．扫描电镜花粉粒形态区分益母草和细叶益母草[C]．中华中医药学会．药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会论文集（上）．北京：2009：117-118．
[48]杨志业，晁志，霍克克等．益母草类中药原植物的核核糖体内转录间隔区序列分析[J]．南方医科大学学报，2006，26（11）：1593-1595．
[49]马玉涛，惠荣奎，崔颖等．益母草基于45S rDNA染色体定位的核型分析及减数分裂观察[J]．园艺学报，2011，38（1）：125-132．
[50]薛愧玲，韩远记，朱倩等．中草药益母草营养器官的解剖结构及显微鉴定[J]．时珍国医国药，2010，21（10）：2599-2560．
[51]阮金兰，杜俊蓉，曾庆忠等．益母草的化学、药理和临床研究进展[J]．中草药，2003，34（11）：附15-19．
[52]郭鹏，高颖，张静泽等．益母草的药理学研究进展[J]．武警医学院学报，2008，17（1）：83-84．
[53]顾月丽，顾江红．益母草药理作用的研究进展[J]．中国中医药科技，2008，15（4）：320-321．
[54]田双彦，冉卫兵，井文贵．益母草临床应用研究综述[J]．临床误诊误治，2008，21（7）：73-75．
[55]赵彩霞，蔡长春，张增巧等．益母草的药理作用及临床应用研究进展[J]．临床误诊误治，2011，24（2）：82-84．
[56]郑学项，冯素萍，李维国．DNA分子标记研究进展[J]．安徽农业科学，2009，37(26)：12420-12422．
[57]廖朝林，王华，廖璐婧等．分子标记在当归属植物遗传多样性研究中的应用[J]．湖北农业科学，2009，48（10）：2598-2602．
[58]王海岗，吕建珍，彭锁堂．作物种质资源遗传多样性的评价方法[J]．山西农业科学，2007，35（11）：26-27．
[59]陈建华，程磊，郭水良．浙江省及其临近地区益母草的RAPD分析[J]．浙江师范大学学报（自然科学版）2003，26（4）：384-388．
[60]余琪，沈晓霞，沈宇峰等．益母草种质资源遗传多样性的AFLP分析[J]．中草药，2009，40（8）：1296-1299．
[61]陈丽雅，赵鹂，白岩等．不同种源益母草遗传关系的ISSR分析[J]．中国中药杂志，2009，34（11）：1343-1345．
[62]刘树兵，王洪刚．植物的微卫星标记及其应用[J]．山东农业大学学报(自然科学版)，2002，33（1）：112-116．
[63]熊发前，蒋菁，钟瑞春等．分子标记技术的两种新分类思路及目标分子标记技术的提出[J]．中国农学通报，2010，26（10）：60-64．
[64]熊发前，蒋菁，钟瑞春等．两种新型目标分子标记技术—CDDP与PAAP[J]．植物生理学通讯，2010，46（9）：871-875．
[65]陈虎，何新华，罗聪等．龙眼SCoT-PCR反应体系的优化[J]．基因组学与应用生物学，2009，28（5）：970-974．
[66]陈虎，何新华，罗聪等．龙眼24个品种的SCoT遗传多样性分析[J]．园艺学报，2010，37（10）：1651-1654．
[67]熊发前，蒋菁，钟瑞春等．目标起始密码子多态性(SCoT)分子标记技术在花生属中的应用[J]．作物学报，2010，36（12）：2055-2061．
[68] Bertrand C.Y.Collard&David J.Mackil, Start Codon Targeted (SCoT) Polymorphism: A Simple NovelDNA Marker Technique for Generating Gene-Targeted Markers in Plants[J]. Plant Mol Biol Rep,2009,27:86-93.
[69]韩国辉，向素琼，汪卫星等．柑橘SCoT分子标记技术体系的建立及其在遗传分析中的应用[J]．园艺学报，2011，38（7）：1243-1250．
[70]杨翠．基于SCoT标记分析甘蔗种质资源遗传多样性[D]．福州：福建农林大学，2010．
[71]张君玉，郭大龙，龚莹等．葡萄目标起始密码子多态性反应体系的优化[J]．果树学报，2011，28（2）：209-214．
[72]周延清．DNA分子标记技术在植物研究中的应用[M]．北京：化学工业出版社，2005．
[73]苗明军，李成琼，司军．SSR标记及其在园艺植物育种中的应用[J]．长江蔬菜（学术版）2010，10：1-5．
[74]杨雪，赵桂仿，周天华等．近缘物种的遗传多样性及其亲缘关系的取样策略研究[J]．西北植物学报，2007，27（6）：1121-1126．
[75]赵茹，程舟，陆伟峰等．基于分子标记的野生大豆居群遗传多样性估算与取样策略[J]．科学通报，2006，51（9）：1042-1048．
[76] Ude G, Pillay M, Nwakanma D, et al. Analysis of genetic diversity and sectional relationships in Musausing AFLP markers[J]. Theor Appl Genet,2002,104:1239-1245.
[77]郭宝林，李家实，阎玉凝．中药材DNA分子标记研究的技术问题[J]．中草药，2000，12：951-954．
[78]韩远记，董美芳，袁王俊等．部分桂花栽培品种的AFLP分析．园艺学报，2008，35（l）：137-142．
[79]阎学燕，肖保林，韩远记等．湖北25个桂花栽培品种的AFLP分析[J]．南京林业大学学报（自然科学版），2008，32（增刊）：16-20．
[80]熊发前，唐荣华，陈忠良等．目标起始密码子多态性(SCoT)：一种基于翻译起始位点的目的基因标记[J]．分子植物育种，2009，7（3）：635-638．
[81] Vos P, ogers R, leeker M, et al. AFLP:a new technique for DNA fingerprinting[J]. Nucleic AcidsResearch,1995,23(21):4407-4414.
[82] Bassam B,Caetano-Anollés G,Gresshoff P.Fast and sensitive silver staining DNA in polyacrylamidegels[J]. Analytical biochemistry,1991,196:80-83.
[83]邹喻苹，葛颂，王晓东．系统与进化植物学中的分子标记[M]．北京：科学出版社，2001．
[84]李淑顺，赵九洲，袁娥．几种石蒜属花卉观赏性状的灰色评价[J]．徐州师范大学学报(自然科学版)，2004，22（1）：69-72．
[85]陈香玲，李杨瑞，杨丽涛等．cDNA-SCOT基因差异表达两种电泳方法的比较研究[J]．生物技
术通报，2010，（10）：93-95．
[2]肖培根．新编中药志[M]．第三卷．北京：化学工业出版社，2002．
[3]晁志，王厄舟，周秀佳．益母草药材中生物碱含量与产地生态环境的关系[J]．第一军大学学报，2000，20（6）：504．
[4]吴征镒，李锡文．中国植物志[M]．科学出版社，2004，65（2）：508-511．
[5]邹华，吴云波，王金萍．HPLC法测定益母草颗粒中盐酸水苏碱含量[J]．辽宁中医药大学学报，2006，8（6）：147．
[6]唐哲，刘莉，张玮．RP-HPLC法测定益母草不同药用部位中盐酸水苏碱的含量[J]．中国中医药信息杂志，2008，15（8）：51-52．
[7]许小华，杜绍亮，杨云．益母草中总生物碱的提取及含量测定[J]．河南科学，2008，26（12）：1481-1482．
[8]陈喆，宋康，李晓娟等．UPLC测定益母草颗粒和益母草膏中益母草碱含量[J]．中国中药杂志，2009，34（12）：1509-1511．
[9]高岐，刘宏文．微波法提取益母草中总生物碱含量的研究[J]．安徽农业科学，2009，37（2）：646，691．
[10]王英姿，韩春超，赵瑞东．HPLC测定复方益母草流浸膏中盐酸水苏碱含量[J]．山东中医药大学学报，2009，33（2）：157-158．
[11]赵鹂，郭圣荣．双水相体系萃取分离-分光光度法测定益母草中水苏碱[J]．药物分析杂志，2010，30（10）：1953-1956．
[12]姜华年．不同种源地益母草干重和水苏碱含量的测定[J]．中国农学通报，2011，27（9）：191-194．
[13]代龙．阳离子交换树脂氯化钠溶液洗脱纯化益母草总碱的研究[J]．江西中医学院学报，2008，20（6）：74-76．
[14]郑师明，严鹏科，李世煌等．精制益母草生物碱提取纯化工艺研究[J]．中国药房，2010，21（15）：1370-1372．
[15]蔡文燕，吴水金，蔡欣．益母草多糖提取工艺的研究[J]．热带农业科学，2008，28（6）：39-42．
[16]丛悦，王艳，谢欣梅等．HPLC-UV法测定益母草和酒炙益母草中丁香酸和芦丁的含量[J]．河南大学学报（自然科学版），2010，40（5）：507-510．
[17]王蕙，魏伟．原子荧光法测定益母草中硒的含量[J]．中国药事，2010，24（4）：378-379，382．
[18]严优芍．益母草不同提取方法的比较研究[J]．中医药导报，2010，16（5）：109-110．
[19]熊南燕，刘艳丽，孔增科．益母草不同采摘期、不同用药部位中含盐酸水苏碱的比较研究[J]．时珍国医国药，2008，19（8）：2004-2005．
[20]马登斌，张文彦，王晓敏等．冀南地区益母草不同采摘期及不同部位中盐酸水苏碱含量的比较[M]．中国民族民间医药，2010，药物研究，49，53．
[21]张文彦，刘艳丽．太行山野生益母草不同采摘期及不同部位的质量分析[J]．中国医院药学杂志，2011，31（12）：1038-1039．
[22]姜智蛟，李林．野生和栽培益母草中总生物碱和黄酮质量分数的比较[J]．东北林业大学学报，2009，37（4）：32-33．
[23]高言明，贾宪生，杨玉琴等．益母草野生品和栽培品中水苏碱的含量比较研究[J]．时珍国医国药，2010，21（1）：101-102．
[24]蒋品，高言明，杨玉琴等．黔产益母草野生品和人工种植品中几种微量元素含量变化研究[J]．微量元素与健康研究，2011,28（1）：15-16．
[25]张燕，王文全，魏菊等．我国北方不同地区益母草不同部位水苏碱含量的比较[J]．时珍国医国药，2007，18（7）：1574-1575．
[26]林家寿．不同地区益母草的水苏碱含量比较[J]．中国医药指南，2011，9（8）：32-33．
[27]晁志，王厄舟，周秀佳等．益母草药材中生物碱含量与产地生态环境的关系[J]．第一军医大学学报，2000，20（6）：504-506．
[28]沈晓霞，盛束军，徐建中．环境因子对益母草总生物碱含量的影响[J]．浙江农业学报，2002，14（4）：221-225．
[29]张娴，彭国平．益母草属化学成分研究进展[J]．天然产物研究与开发，2003，15（2）：162-166．
[30]蔡晓菡，车镇涛，吴斌等．益母草的化学成分[J]．沈阳药科大学学报，2006，23（1）：13-14，21．
[31]张琳，蔡晓菡，高慧媛等．益母草化学成分的分离与鉴定[J]．沈阳药科大学学报，2009，26（1）：15-18，26．
[32]杨世林，张本刚，陈君．药材栽培在中药资源可持续利用中的作用及发展战略[J]．中草药，1999，30（11）：870-873．
[33]李品汉．益母草栽培技术[J]．农村实用技术，2003（05）：13-14．
[34]刘群.药用植物益母草规范高产栽培技术[J]．现代农业，2009（12）：6．
[35]郑兰英，樊孝萍，胡兴宜．抑螺植物益母草的栽培、利用及效益研究[J]．湖北生态工程职业技术学院学报，2008，6（1）：5-7．
[36]徐建中，王志安，俞旭平等．不同来源地的益母草种源种植比较试验[J]．时珍国医国药2006，17（11）：2130-2131．
[37]徐建中，王志安，俞旭平等．益母草GAP栽培技术研究[J]．现代中药研究与实践，2006，20（4）：8-11．
[38]罗光宏，陈叶，毛晓春等．细叶益母草引种及栽培试验[J]．中草药，2005，36（7）：1082-1083．
[39]王年强，唐世涛．兴安益母草人工栽培丰产技术[J]．中国林副特产，2011（4）：61-62．
[40]梁称福．4种野菜种子的发芽特性及无菌播种培养研究[J]．广东农业科学2008（3）：15-17．
[41]李莺，杜瑞春，唐建云等．不同植物生长调节剂对益母草愈伤组织诱导的影响[J]．西安文理学院学报（自然科学版），2009，12（1）：43-47．
[42]厚毅清，王乃亮，欧巧琴等．益母草属植物种子发芽、细胞培养及其化学成分研究进展[J]．中国农学通报，2010，26（18）：75-78．
[43]李学栋，龚真才，马勇等．不同培养条件对益母草悬浮培养细胞生长的影响[J].西华师范大学学报(自然科学版)，2008，29（2）：136-140．
[44]姜华年，赵鹂．不同种源地益母草生物学特性观测评价[J]．江苏农业科学，2011，39(2)：356-359．
[45]晁志，刘传明，张宏伟等．益母草类药材性状鉴定[J]．中药材，2000，23（10）：601-603．
[46]霍忠超，熊南燕，苏县辉等．益母草、夏至草及錾菜的鉴别与合理应用[J]．河北中医，2010，32（3）：420-421．
[47]张国梅，徐腾，王晖．扫描电镜花粉粒形态区分益母草和细叶益母草[C]．中华中医药学会．药用植物化学与中药资源可持续发展学术研讨会论文集（上）．北京：2009：117-118．
[48]杨志业，晁志，霍克克等．益母草类中药原植物的核核糖体内转录间隔区序列分析[J]．南方医科大学学报，2006，26（11）：1593-1595．
[49]马玉涛，惠荣奎，崔颖等．益母草基于45S rDNA染色体定位的核型分析及减数分裂观察[J]．园艺学报，2011，38（1）：125-132．
[50]薛愧玲，韩远记，朱倩等．中草药益母草营养器官的解剖结构及显微鉴定[J]．时珍国医国药，2010，21（10）：2599-2560．
[51]阮金兰，杜俊蓉，曾庆忠等．益母草的化学、药理和临床研究进展[J]．中草药，2003，34（11）：附15-19．
[52]郭鹏，高颖，张静泽等．益母草的药理学研究进展[J]．武警医学院学报，2008，17（1）：83-84．
[53]顾月丽，顾江红．益母草药理作用的研究进展[J]．中国中医药科技，2008，15（4）：320-321．
[54]田双彦，冉卫兵，井文贵．益母草临床应用研究综述[J]．临床误诊误治，2008，21（7）：73-75．
[55]赵彩霞，蔡长春，张增巧等．益母草的药理作用及临床应用研究进展[J]．临床误诊误治，2011，24（2）：82-84．
[56]郑学项，冯素萍，李维国．DNA分子标记研究进展[J]．安徽农业科学，2009，37(26)：12420-12422．
[57]廖朝林，王华，廖璐婧等．分子标记在当归属植物遗传多样性研究中的应用[J]．湖北农业科学，2009，48（10）：2598-2602．
[58]王海岗，吕建珍，彭锁堂．作物种质资源遗传多样性的评价方法[J]．山西农业科学，2007，35（11）：26-27．
[59]陈建华，程磊，郭水良．浙江省及其临近地区益母草的RAPD分析[J]．浙江师范大学学报（自然科学版）2003，26（4）：384-388．
[60]余琪，沈晓霞，沈宇峰等．益母草种质资源遗传多样性的AFLP分析[J]．中草药，2009，40（8）：1296-1299．
[61]陈丽雅，赵鹂，白岩等．不同种源益母草遗传关系的ISSR分析[J]．中国中药杂志，2009，34（11）：1343-1345．
[62]刘树兵，王洪刚．植物的微卫星标记及其应用[J]．山东农业大学学报(自然科学版)，2002，33（1）：112-116．
[63]熊发前，蒋菁，钟瑞春等．分子标记技术的两种新分类思路及目标分子标记技术的提出[J]．中国农学通报，2010，26（10）：60-64．
[64]熊发前，蒋菁，钟瑞春等．两种新型目标分子标记技术—CDDP与PAAP[J]．植物生理学通讯，2010，46（9）：871-875．
[65]陈虎，何新华，罗聪等．龙眼SCoT-PCR反应体系的优化[J]．基因组学与应用生物学，2009，28（5）：970-974．
[66]陈虎，何新华，罗聪等．龙眼24个品种的SCoT遗传多样性分析[J]．园艺学报，2010，37（10）：1651-1654．
[67]熊发前，蒋菁，钟瑞春等．目标起始密码子多态性(SCoT)分子标记技术在花生属中的应用[J]．作物学报，2010，36（12）：2055-2061．
[68] Bertrand C.Y.Collard&David J.Mackil, Start Codon Targeted (SCoT) Polymorphism: A Simple NovelDNA Marker Technique for Generating Gene-Targeted Markers in Plants[J]. Plant Mol Biol Rep,2009,27:86-93.
[69]韩国辉，向素琼，汪卫星等．柑橘SCoT分子标记技术体系的建立及其在遗传分析中的应用[J]．园艺学报，2011，38（7）：1243-1250．
[70]杨翠．基于SCoT标记分析甘蔗种质资源遗传多样性[D]．福州：福建农林大学，2010．
[71]张君玉，郭大龙，龚莹等．葡萄目标起始密码子多态性反应体系的优化[J]．果树学报，2011，28（2）：209-214．
[72]周延清．DNA分子标记技术在植物研究中的应用[M]．北京：化学工业出版社，2005．
[73]苗明军，李成琼，司军．SSR标记及其在园艺植物育种中的应用[J]．长江蔬菜（学术版）2010，10：1-5．
[74]杨雪，赵桂仿，周天华等．近缘物种的遗传多样性及其亲缘关系的取样策略研究[J]．西北植物学报，2007，27（6）：1121-1126．
[75]赵茹，程舟，陆伟峰等．基于分子标记的野生大豆居群遗传多样性估算与取样策略[J]．科学通报，2006，51（9）：1042-1048．
[76] Ude G, Pillay M, Nwakanma D, et al. Analysis of genetic diversity and sectional relationships in Musausing AFLP markers[J]. Theor Appl Genet,2002,104:1239-1245.
[77]郭宝林，李家实，阎玉凝．中药材DNA分子标记研究的技术问题[J]．中草药，2000，12：951-954．
[78]韩远记，董美芳，袁王俊等．部分桂花栽培品种的AFLP分析．园艺学报，2008，35（l）：137-142．
[79]阎学燕，肖保林，韩远记等．湖北25个桂花栽培品种的AFLP分析[J]．南京林业大学学报（自然科学版），2008，32（增刊）：16-20．
[80]熊发前，唐荣华，陈忠良等．目标起始密码子多态性(SCoT)：一种基于翻译起始位点的目的基因标记[J]．分子植物育种，2009，7（3）：635-638．
[81] Vos P, ogers R, leeker M, et al. AFLP:a new technique for DNA fingerprinting[J]. Nucleic AcidsResearch,1995,23(21):4407-4414.
[82] Bassam B,Caetano-Anollés G,Gresshoff P.Fast and sensitive silver staining DNA in polyacrylamidegels[J]. Analytical biochemistry,1991,196:80-83.
[83]邹喻苹，葛颂，王晓东．系统与进化植物学中的分子标记[M]．北京：科学出版社，2001．
[84]李淑顺，赵九洲，袁娥．几种石蒜属花卉观赏性状的灰色评价[J]．徐州师范大学学报(自然科学版)，2004，22（1）：69-72．
[85]陈香玲，李杨瑞，杨丽涛等．cDNA-SCOT基因差异表达两种电泳方法的比较研究[J]．生物技
术通报，2010，（10）：93-95．