白英抗肿瘤有效部位筛选及作用机制初探
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摘要
本文通过对白英乙醇提取物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位体外对人肝癌BEL-7402、人胃腺癌SGC-7901及人宫颈癌HeLa细胞等肿瘤细胞的增殖抑制作用及体内对小鼠移植性肝癌H_(22)和肉瘤S_(180)肿瘤生长抑制作用的研究确定白英抗肿瘤作用主要有效部位，并对其体外诱导人宫颈癌HeLa细胞死亡机制进行初步研究。
选取体外培养的人肝癌BEL-7402、人胃腺癌SGC-7901和人宫颈癌HeLa细胞为模型，以半数抑制浓度(IC_(50))为指标，采用MTT法初步筛选白英抗肿瘤作用主要有效部位；体内以小鼠移植性肿瘤肝癌H_(22)和肉瘤S_(180)为模型，以抑瘤率为指标，进一步确定白英抗肿瘤作用的主要有效部位；以体外培养的人宫颈癌HeLa细胞为模型，采用形态学荧光染色、LDH活力测定、流式细胞术分析等方法对白英乙酸乙酯部位的抗肿瘤作用机制进行初步研究。
体外实验结果表明白英不同提取部位对体外培养的BEL-7402、SGC-7901和HeLa细胞均具有显著的细胞增殖抑制活性，且对细胞生长的抑制作用呈现显著的浓度、时间依赖关系，作用48h后对BEL-7402、SGC-7901和HeLa细胞的IC_(50)值分别为：乙醇提取物：287.4±5.8μg·mL~(-1)、176.1±5.2μg·mL~(-1)和297.5±7.0μg·mL~(-1)；乙酸乙酯部位：106.2±5.8μg·mL~(-1)、65.4±6.0μg·mL~(-1)和33.7±4.9μg·mL~(-1)；正丁醇部位：180.2±6.3μg·mL~(-1)、114.9±4.9μg·mL~(-1)和59.3±4.8μg·mL~(-1)。体内实验表明白英不同提取部位对小鼠移植性肉瘤S_(180)均具有显著的抗肿瘤活性，其中乙醇提取物高剂量组和乙酸乙酯部位高剂量组对肉瘤S_(180)及肝癌H_(22)的生长抑制率均达到40％以上；正丁醇部位对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑制作用显著而对肝癌H_(22)的抑制作用不显著。
50μg·mL~(-1)白英乙酸乙酯部位处理的HeLa细胞经Hoechst 33258形态学荧光染色出现明显的凋亡小体；LDH活力分析实验表明，白英乙酸乙酯部位处理HeLa细胞诱导细胞死亡的过程中有一定的凋亡细胞的分布，合适剂量的白英乙酸乙酯部位诱导细胞凋亡；对其采用流式细胞术分析，适当剂量或作用时间后出现凋亡特征峰；随药物浓度增大或作用时间延长，乙酸乙酯部位处理的HeLa细胞各时相的细胞百分含量发生显著的变化，G_0／G_1期细胞百分含量呈显著上升趋势。
由实验结果可见，白英乙酸乙酯部位是白英抗肿瘤作用主要有效部位；白英乙酸乙酯部位体外可诱导HeLa细胞凋亡，且对HeLa细胞呈现显著的细胞周期抑制作用，可将细胞周期阻滞在G_0／G_1期。
The in vitro and vivo antitumor activity of some fractions of Solarium lyratum was studied in this dissertation.The inhibitory effect of some fractions on proliferation of human hepatocarcinoma cell lines BEL-7402, human gastric carcinoma cell lines SGC-7901 and human cervix epithelial cell lines HeLa were measured by MTT colorimetric assay in vitro. The mouse tumor model was used to investigate the effect of some fractions on tumor growth. The mechanism of antitumor effects was studied preliminarily by morphology analysis, lactate dehydrogenase(LDH) activity-based assay and flow cytometry(FCM) in HeLa cells.The studies demonstrate that some fractions inhibited proliferation of several tumor cell lines, including BEL-7402 cells(IC_(50).ethanol extracts: 287.40±5.84μg·mL~(-1), IC_(50). Etoac fractions: 106.23±5.79μg·mL~(-1) and IC_(50). n-BuOH fractions: 180.22±6.32μg·mL~(-1)), SGC-7901 Cells(IC_(50). ethanol extracts: 176.14±5.18μg·mL~(-1), IC_(50). EtoAC fractions: 65.44±6.01μg·mL~(-1) and IC_(50).n-BuOH fractions: 114.89±4.89μg·mL~(-1)) and HeLa cells(IC_(50), ethanoi extracts: 297.45±6.95μg·mL~(-1), IC_(50). Etoac fractions: 33.66±4.87μg·mL~(-1) and IC_(50). n-BuOH fractions: 59.31±4.78μg·mL~(-1)). When the concentration of some fractions varied from low to high, they were able to inhibit the proliferation of tumor cells in a concentration-dependent manner in vitro. At high doses of ethanol extracts and EtoAC fractions, the tumor inhibition rates on mice bearing sarcoma 180(S_(180)) and hepatocarcinoma 22(H_(22)) were both over 40%. N-BuOH fractions could significantly inhibit the tumor growth of S_(180). But there was no influence of n-BuOH fractions on the growth of H_(22).In EtoAC fractions-treated HeLa cells for 12 h, apoptotic bodies were formed, nuclear damage was observed by Hoechst 33258 staining. Treatment with various concentrations of EtoAC fractions for 12 h, HeLa cells underwent apoptosis as measured by LDH activity-based assay. At the same time, apoptosis was confirmed by the appearance of apoptotic peak on FCM in HeLa cells. FCM results showed that HeLa cells treated with EtoAC fractions were remarkably arrested at G_0／G_1 phase in a time and concentration-dependent manner.
Main active fractions were confirmed as EtoAC fractions. The possible mechanism of antitumor effects of EtoAC fractions maybe associate with inducing apoptosis and inducing G_0/G_1 phase arrest.
选取体外培养的人肝癌BEL-7402、人胃腺癌SGC-7901和人宫颈癌HeLa细胞为模型，以半数抑制浓度(IC_(50))为指标，采用MTT法初步筛选白英抗肿瘤作用主要有效部位；体内以小鼠移植性肿瘤肝癌H_(22)和肉瘤S_(180)为模型，以抑瘤率为指标，进一步确定白英抗肿瘤作用的主要有效部位；以体外培养的人宫颈癌HeLa细胞为模型，采用形态学荧光染色、LDH活力测定、流式细胞术分析等方法对白英乙酸乙酯部位的抗肿瘤作用机制进行初步研究。
体外实验结果表明白英不同提取部位对体外培养的BEL-7402、SGC-7901和HeLa细胞均具有显著的细胞增殖抑制活性，且对细胞生长的抑制作用呈现显著的浓度、时间依赖关系，作用48h后对BEL-7402、SGC-7901和HeLa细胞的IC_(50)值分别为：乙醇提取物：287.4±5.8μg·mL~(-1)、176.1±5.2μg·mL~(-1)和297.5±7.0μg·mL~(-1)；乙酸乙酯部位：106.2±5.8μg·mL~(-1)、65.4±6.0μg·mL~(-1)和33.7±4.9μg·mL~(-1)；正丁醇部位：180.2±6.3μg·mL~(-1)、114.9±4.9μg·mL~(-1)和59.3±4.8μg·mL~(-1)。体内实验表明白英不同提取部位对小鼠移植性肉瘤S_(180)均具有显著的抗肿瘤活性，其中乙醇提取物高剂量组和乙酸乙酯部位高剂量组对肉瘤S_(180)及肝癌H_(22)的生长抑制率均达到40％以上；正丁醇部位对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑制作用显著而对肝癌H_(22)的抑制作用不显著。
50μg·mL~(-1)白英乙酸乙酯部位处理的HeLa细胞经Hoechst 33258形态学荧光染色出现明显的凋亡小体；LDH活力分析实验表明，白英乙酸乙酯部位处理HeLa细胞诱导细胞死亡的过程中有一定的凋亡细胞的分布，合适剂量的白英乙酸乙酯部位诱导细胞凋亡；对其采用流式细胞术分析，适当剂量或作用时间后出现凋亡特征峰；随药物浓度增大或作用时间延长，乙酸乙酯部位处理的HeLa细胞各时相的细胞百分含量发生显著的变化，G_0／G_1期细胞百分含量呈显著上升趋势。
由实验结果可见，白英乙酸乙酯部位是白英抗肿瘤作用主要有效部位；白英乙酸乙酯部位体外可诱导HeLa细胞凋亡，且对HeLa细胞呈现显著的细胞周期抑制作用，可将细胞周期阻滞在G_0／G_1期。
The in vitro and vivo antitumor activity of some fractions of Solarium lyratum was studied in this dissertation.The inhibitory effect of some fractions on proliferation of human hepatocarcinoma cell lines BEL-7402, human gastric carcinoma cell lines SGC-7901 and human cervix epithelial cell lines HeLa were measured by MTT colorimetric assay in vitro. The mouse tumor model was used to investigate the effect of some fractions on tumor growth. The mechanism of antitumor effects was studied preliminarily by morphology analysis, lactate dehydrogenase(LDH) activity-based assay and flow cytometry(FCM) in HeLa cells.The studies demonstrate that some fractions inhibited proliferation of several tumor cell lines, including BEL-7402 cells(IC_(50).ethanol extracts: 287.40±5.84μg·mL~(-1), IC_(50). Etoac fractions: 106.23±5.79μg·mL~(-1) and IC_(50). n-BuOH fractions: 180.22±6.32μg·mL~(-1)), SGC-7901 Cells(IC_(50). ethanol extracts: 176.14±5.18μg·mL~(-1), IC_(50). EtoAC fractions: 65.44±6.01μg·mL~(-1) and IC_(50).n-BuOH fractions: 114.89±4.89μg·mL~(-1)) and HeLa cells(IC_(50), ethanoi extracts: 297.45±6.95μg·mL~(-1), IC_(50). Etoac fractions: 33.66±4.87μg·mL~(-1) and IC_(50). n-BuOH fractions: 59.31±4.78μg·mL~(-1)). When the concentration of some fractions varied from low to high, they were able to inhibit the proliferation of tumor cells in a concentration-dependent manner in vitro. At high doses of ethanol extracts and EtoAC fractions, the tumor inhibition rates on mice bearing sarcoma 180(S_(180)) and hepatocarcinoma 22(H_(22)) were both over 40%. N-BuOH fractions could significantly inhibit the tumor growth of S_(180). But there was no influence of n-BuOH fractions on the growth of H_(22).In EtoAC fractions-treated HeLa cells for 12 h, apoptotic bodies were formed, nuclear damage was observed by Hoechst 33258 staining. Treatment with various concentrations of EtoAC fractions for 12 h, HeLa cells underwent apoptosis as measured by LDH activity-based assay. At the same time, apoptosis was confirmed by the appearance of apoptotic peak on FCM in HeLa cells. FCM results showed that HeLa cells treated with EtoAC fractions were remarkably arrested at G_0／G_1 phase in a time and concentration-dependent manner.
Main active fractions were confirmed as EtoAC fractions. The possible mechanism of antitumor effects of EtoAC fractions maybe associate with inducing apoptosis and inducing G_0/G_1 phase arrest.
引文
[1] Harris CC. Chemical and physical carcinogenesis: Advances and perspectives for the 1990s. Cancer Res, 1991, 51: 5023s
[2] 李桂源主编．肿瘤学基础(第二版)．长沙：湖南医科大学，1996．70
[3] 景永奎，韩锐，抗肿瘤药物筛选方法的进展[J]，国外医学．药学分册，1991，8(1)：1-4
[4] 曾益新，吕有勇，朱明华，等．肿瘤学(第二版)[M]．北京：人民卫生出版社，2003，1：381-385
[5] 杨晓春，吴镭，等．天然药物化学研究在我国新药创制中的作用[J]．中国新药杂志，2000，9(16)，361-363
[6] 周炳刚，苏刚，等．槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究[J]．肿瘤，2003，23(3)：197-199
[7] 俞超芹，凌昌全，潘瑞萍，等．大蒜素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的实验研究[J]．中医杂志，1999，40(5)：307-308
[8] 冯长伟，潘祥林，邹俊晖．冬凌草甲素对人白血病HL-60细胞抑制作用的研究[J]．浙江中医学院学报，2000，24(3)：47-48
[9] 凌昌全，俞超芹，潘瑞萍，等．人参皂甙对人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡基因的影响[J]．中医杂志，2000，41(3)：176-177
[10] 张晨，黄世林，向阳，等．低剂量雄黄诱导NB4细胞凋亡的研究[J]．中国中医基础医学杂志，2000，6(2)：11-13
[11] 袁静，顾振纶，周文轩，等．榄香烯诱导人白血病K562细胞凋亡[J]．中国药理学报，1998，14(5)：410-412
[12] 黄韧敏，袁淑兰，宋逸，等．丹参酮Ⅱ-A诱导细胞凋亡[J]．癌症，1998，17(3)：164-166
[13] 吴裕丹，陈燕，陈文娟，等．姜黄素对急性髓性白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响[J]．同济医科大学学报，1999，28(4)：299-301
[14] 丁志山，高承贤，陈铌铍，等．姜黄素具有抑制肿瘤血管生成与诱导肿瘤细胞凋亡双重作用[J]．中国药理学通报，2003，19(2)：171-173
[15] 唐伟，陈国强，沈志祥，等．氧化砷诱导早幼粒白血病细胞凋亡的体外研究[J]．中华血液学杂志，1997，18(12)：623-626
[16] 麦文渊，林茂芳．高三尖杉酯碱诱导K562细胞的实验研究[J]．中华血液学杂志，1998，19(7)：375-376
[17] 王春玲，包永明，段延龙，等．胡桃楸的抗肿瘤活性研究[J]．中成药，2003，25(8)：643-646
[18] 古建立，杜志谦，李东升，等．化岩胶囊对骨肉瘤细胞系诱导凋亡作用的实验研究[J]．中国正骨，2002， 14(12)：13-14
[19] 菊花倍半萜烯内酯诱导人鼻咽癌细胞毒性和凋亡的研究[J]．中草药，2002，33(10)：909-912
[20] 徐向毅，唐丽华，梁中琴，等．珍珠菜提取物抗肿瘤作用的初步研究[J]．中国野生植物资源，2003，22(2)：31-34
[21] 李尘远，潘兴瑜，刘辉，等．玉竹提取物B抗肿瘤机制的初步研究[J]．中国免疫学杂志，2003，19(4)：253-254
[22] 单长民，胡娟娟，杜冠华，等．白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用[J]．中国临床药理学与治疗学，2001，6(3)：200-203
[23] 韩锐．抗癌中草药研究进展[J]．中国新药杂志，1993，2(5)：1
[24] Kerr JFR, Wyllie AH, Currie AR, Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics[J]. Br J Cancer, 1972, 26: 239
[25] 田建广，杜泽涵，等．核磁共振在细胞凋亡研究中的应用[J]．军事医学科学院院刊，1998，22(4)：309-312
[26] 潘耀谦，高丰，成军，等．细胞凋亡与细胞坏死比较的研究进展[J]．动物医学进展，2000，21：5-8
[27] Ferrari D, Los M, VauerMK, et al. P2Z purinoreceptor ligation induces activations of caspases with distinct roles in apoptotic and necrotic alterations of cell death[J]. FEBS Lett 1999, 447: 71-75
[28] Holland TA, Eider J, McCloud JM et al. Subcellular localization of cyclin D1 protein in colorectal tumors is associated with P21 (WAF1/CIP1) expression and correlates with patient survival. Int J Cancer. 2001, 95: 302-306
[29] 刘国卿，王敏伟，钱之玉，等．药理学[M]，北京：中国医药科技出版社(第一版)，2000：437-453
[30] 张洪峰，宋维华，王锡山，等．麦康复对结肠癌Ls-174-T细胞生长影响的研究[J]．哈尔滨医科大学学报，2002，36(5)：366-368
[31] 全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编[M]．北京：人民卫生出版社，1988．291
[32] 江苏新医学院．中药大辞典[M]．上海：上海科学技术出版社．1986，5：700
[33] 刘春安，彭明．抗癌中草药大辞典[M]．武汉：湖北科学技术出版社．1994．331
[34] Bookyung KANG, Eunhee LEE, Insup HONG et al. Abolition of anaphylactic shock by Solanum lyratum THUNB.[J]. Int. J. Immunopharmac. 1997, 19 (11): 729-734
[35] H. M. Kim, M. J. Kim, E. Li et al. The nitric oxide-producing properties ofSolanum lyratum[J]. J of Ethnopharmacol. 1999, 67: 163-169
[36] 杨宇．白毛藤在民族民间医药中的应用初探[J]．中国民族民间医药杂志，1999，40：275
[37] 李广勋．中药药理毒理与临床[M]．天津：天津科技翻译出版公司，1992．4
[38] 施文荣，刘艳．白英对人急性早幼粒白血病HL-60细胞生长的影响[J]．福建中医学院学报 2002，12(1)：36-39
[39] 曹济远，谭湘陵．抗癌中药白毛藤对CHO细胞G2-PC染色体畸变的观察[J]．现代应用药学，1988，6：1
[40] 张永健，王耐勤，许树旭，等．复方中药注射液对人癌细胞体外杀伤效应及其对细胞周期的影响[J]．中西医结合杂志，1989，7：416
[41] Moamann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survial: Application to proliferation and cytotoxicity assays[J]. J Immunol Methods, 1983, 65: 55-58
[42] 徐叔云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社(第三版)，2002，65：1785-1786
[43] 陈奇主编，中药药理研究方法学[M]．北京：人民卫生出版社(第一版)，1993，8：119
[44] 徐叔云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社(第三版)，2002，65：1757-1761
[45] 司徒镇强，吴军正．细胞培养[M]．上海：世界图书出版公司，1992．293-298
[46] Charrier L, Jorry A, Toquet C et al. Growth phase-dependent expression of ICAD-L/DFF45 modulates in human colonic cancer cells[J]. Cancer Res; 2002, 62(7): 2169-74
[47] 朱立军，陈学清主编．免疫学常用实验方法[M]．北京：人民军医出版社，2000：199-200
[48] 张春玲，吴立军，田代真一，等．冬凌草甲素通过激活caspase诱导HeLa细胞凋亡[J]．中国药理学通报，2003，19(5)：521-525
[49] 司徒镇强，吴军正．细胞培养[M]．上海：世界图书出版公司，1992．298-305
[50] 郑海萍，李艳辉，流式细胞仪的原理及应用[J]．邯郸医学院学报，2003，16(3)：286
[51] 孙立新，任靖，王敏伟，等．中药白英抗肿瘤活性部位的筛选及初步研究[J]．沈阳药科大学学报，2005，22(3)：210-212
[52] 孙浩清，李启璎，刘巍，等．靶细胞LDH释放法用于比较晚期肿瘤病人和正常人NK活性[J]，肿瘤，1989，9(4)：168-169
[53] 黄梅芳，付苓，周燕，等．LDH释放法与形态学方法测定细胞毒的对比研究[J]．上海免疫学杂志，1989，9(1)：16-18
[54] 曾益新，吕有勇，朱明华，等．肿瘤学，北京：人民卫生出版社(第二版)，2003，7：158-174
[2] 李桂源主编．肿瘤学基础(第二版)．长沙：湖南医科大学，1996．70
[3] 景永奎，韩锐，抗肿瘤药物筛选方法的进展[J]，国外医学．药学分册，1991，8(1)：1-4
[4] 曾益新，吕有勇，朱明华，等．肿瘤学(第二版)[M]．北京：人民卫生出版社，2003，1：381-385
[5] 杨晓春，吴镭，等．天然药物化学研究在我国新药创制中的作用[J]．中国新药杂志，2000，9(16)，361-363
[6] 周炳刚，苏刚，等．槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究[J]．肿瘤，2003，23(3)：197-199
[7] 俞超芹，凌昌全，潘瑞萍，等．大蒜素诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的实验研究[J]．中医杂志，1999，40(5)：307-308
[8] 冯长伟，潘祥林，邹俊晖．冬凌草甲素对人白血病HL-60细胞抑制作用的研究[J]．浙江中医学院学报，2000，24(3)：47-48
[9] 凌昌全，俞超芹，潘瑞萍，等．人参皂甙对人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡基因的影响[J]．中医杂志，2000，41(3)：176-177
[10] 张晨，黄世林，向阳，等．低剂量雄黄诱导NB4细胞凋亡的研究[J]．中国中医基础医学杂志，2000，6(2)：11-13
[11] 袁静，顾振纶，周文轩，等．榄香烯诱导人白血病K562细胞凋亡[J]．中国药理学报，1998，14(5)：410-412
[12] 黄韧敏，袁淑兰，宋逸，等．丹参酮Ⅱ-A诱导细胞凋亡[J]．癌症，1998，17(3)：164-166
[13] 吴裕丹，陈燕，陈文娟，等．姜黄素对急性髓性白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响[J]．同济医科大学学报，1999，28(4)：299-301
[14] 丁志山，高承贤，陈铌铍，等．姜黄素具有抑制肿瘤血管生成与诱导肿瘤细胞凋亡双重作用[J]．中国药理学通报，2003，19(2)：171-173
[15] 唐伟，陈国强，沈志祥，等．氧化砷诱导早幼粒白血病细胞凋亡的体外研究[J]．中华血液学杂志，1997，18(12)：623-626
[16] 麦文渊，林茂芳．高三尖杉酯碱诱导K562细胞的实验研究[J]．中华血液学杂志，1998，19(7)：375-376
[17] 王春玲，包永明，段延龙，等．胡桃楸的抗肿瘤活性研究[J]．中成药，2003，25(8)：643-646
[18] 古建立，杜志谦，李东升，等．化岩胶囊对骨肉瘤细胞系诱导凋亡作用的实验研究[J]．中国正骨，2002， 14(12)：13-14
[19] 菊花倍半萜烯内酯诱导人鼻咽癌细胞毒性和凋亡的研究[J]．中草药，2002，33(10)：909-912
[20] 徐向毅，唐丽华，梁中琴，等．珍珠菜提取物抗肿瘤作用的初步研究[J]．中国野生植物资源，2003，22(2)：31-34
[21] 李尘远，潘兴瑜，刘辉，等．玉竹提取物B抗肿瘤机制的初步研究[J]．中国免疫学杂志，2003，19(4)：253-254
[22] 单长民，胡娟娟，杜冠华，等．白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用[J]．中国临床药理学与治疗学，2001，6(3)：200-203
[23] 韩锐．抗癌中草药研究进展[J]．中国新药杂志，1993，2(5)：1
[24] Kerr JFR, Wyllie AH, Currie AR, Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics[J]. Br J Cancer, 1972, 26: 239
[25] 田建广，杜泽涵，等．核磁共振在细胞凋亡研究中的应用[J]．军事医学科学院院刊，1998，22(4)：309-312
[26] 潘耀谦，高丰，成军，等．细胞凋亡与细胞坏死比较的研究进展[J]．动物医学进展，2000，21：5-8
[27] Ferrari D, Los M, VauerMK, et al. P2Z purinoreceptor ligation induces activations of caspases with distinct roles in apoptotic and necrotic alterations of cell death[J]. FEBS Lett 1999, 447: 71-75
[28] Holland TA, Eider J, McCloud JM et al. Subcellular localization of cyclin D1 protein in colorectal tumors is associated with P21 (WAF1/CIP1) expression and correlates with patient survival. Int J Cancer. 2001, 95: 302-306
[29] 刘国卿，王敏伟，钱之玉，等．药理学[M]，北京：中国医药科技出版社(第一版)，2000：437-453
[30] 张洪峰，宋维华，王锡山，等．麦康复对结肠癌Ls-174-T细胞生长影响的研究[J]．哈尔滨医科大学学报，2002，36(5)：366-368
[31] 全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编[M]．北京：人民卫生出版社，1988．291
[32] 江苏新医学院．中药大辞典[M]．上海：上海科学技术出版社．1986，5：700
[33] 刘春安，彭明．抗癌中草药大辞典[M]．武汉：湖北科学技术出版社．1994．331
[34] Bookyung KANG, Eunhee LEE, Insup HONG et al. Abolition of anaphylactic shock by Solanum lyratum THUNB.[J]. Int. J. Immunopharmac. 1997, 19 (11): 729-734
[35] H. M. Kim, M. J. Kim, E. Li et al. The nitric oxide-producing properties ofSolanum lyratum[J]. J of Ethnopharmacol. 1999, 67: 163-169
[36] 杨宇．白毛藤在民族民间医药中的应用初探[J]．中国民族民间医药杂志，1999，40：275
[37] 李广勋．中药药理毒理与临床[M]．天津：天津科技翻译出版公司，1992．4
[38] 施文荣，刘艳．白英对人急性早幼粒白血病HL-60细胞生长的影响[J]．福建中医学院学报 2002，12(1)：36-39
[39] 曹济远，谭湘陵．抗癌中药白毛藤对CHO细胞G2-PC染色体畸变的观察[J]．现代应用药学，1988，6：1
[40] 张永健，王耐勤，许树旭，等．复方中药注射液对人癌细胞体外杀伤效应及其对细胞周期的影响[J]．中西医结合杂志，1989，7：416
[41] Moamann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survial: Application to proliferation and cytotoxicity assays[J]. J Immunol Methods, 1983, 65: 55-58
[42] 徐叔云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社(第三版)，2002，65：1785-1786
[43] 陈奇主编，中药药理研究方法学[M]．北京：人民卫生出版社(第一版)，1993，8：119
[44] 徐叔云，卞如濂，陈修，等．药理实验方法学[M]．北京：人民卫生出版社(第三版)，2002，65：1757-1761
[45] 司徒镇强，吴军正．细胞培养[M]．上海：世界图书出版公司，1992．293-298
[46] Charrier L, Jorry A, Toquet C et al. Growth phase-dependent expression of ICAD-L/DFF45 modulates in human colonic cancer cells[J]. Cancer Res; 2002, 62(7): 2169-74
[47] 朱立军，陈学清主编．免疫学常用实验方法[M]．北京：人民军医出版社，2000：199-200
[48] 张春玲，吴立军，田代真一，等．冬凌草甲素通过激活caspase诱导HeLa细胞凋亡[J]．中国药理学通报，2003，19(5)：521-525
[49] 司徒镇强，吴军正．细胞培养[M]．上海：世界图书出版公司，1992．298-305
[50] 郑海萍，李艳辉，流式细胞仪的原理及应用[J]．邯郸医学院学报，2003，16(3)：286
[51] 孙立新，任靖，王敏伟，等．中药白英抗肿瘤活性部位的筛选及初步研究[J]．沈阳药科大学学报，2005，22(3)：210-212
[52] 孙浩清，李启璎，刘巍，等．靶细胞LDH释放法用于比较晚期肿瘤病人和正常人NK活性[J]，肿瘤，1989，9(4)：168-169
[53] 黄梅芳，付苓，周燕，等．LDH释放法与形态学方法测定细胞毒的对比研究[J]．上海免疫学杂志，1989，9(1)：16-18
[54] 曾益新，吕有勇，朱明华，等．肿瘤学，北京：人民卫生出版社(第二版)，2003，7：158-174