优质北柴胡快速繁殖及主要药用成分分析
|
摘要
柴胡是重要的药用植物,也是我国、韩国及日本等国所使用的大宗药材。《中国药典》(2005年版)收录伞形科植物北柴胡Bupleurum chinese DC.(又称硬苗柴胡)和狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.(又称软苗柴胡或红柴胡)为药用柴胡的原植物。柴胡以根入药,根中含有柴胡皂苷和挥发油等成分,具有抗病毒、抗细菌内毒素、抗炎、抗肿瘤、抗惊厥、解热、降血脂及促进分泌、保肝、提高免疫力等功效,药用价值很高。近年来,柴胡的市场需求量逐年增加,而过度采掘又导致其野生资源越来越少。但是人工种植柴胡存在种子发芽率低、栽培技术难度大等问题。各产地的柴胡均存在不同程度的品种混杂现象,造成了柴胡药材的种质不纯、质量参差不齐,致使总体质量下降,已影响到用药的准确性和药品质量的稳定性,也影响到柴胡的出口创汇。对现有的、已被广大药农所接受的人工栽培种进行种质提纯、复壮,培育出品质优良且变异小的高产、优质柴胡植株并批量生产和供应市场是急需解决的问题。
为了建立北柴胡的选优育优技术体系,大量生产北柴胡优质种苗和种子,本研究对种植于山西万荣的中柴1号北柴胡种子进行了种皮损伤和植物激素处理试验,比较了其萌发率;应用植物组织培养技术分别对种植于山西陵川、万荣、左权、芮城、方山、灵丘及甘肃陇西和陕西商洛等8个地区的优质北柴胡进行快速繁殖;应用分光光度法测定了移栽半年后的试管植株根中的柴胡总皂苷含量,应用HPLC-UV法测定了其柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量;用分光光度法测定、比较了试管植株、移栽植株以及移栽田间第2年的试管植株与田间自然栽培植株叶片中叶绿素的含量。
实验结果表明:植物激素处理对北柴胡种子萌发无明显作用,打磨损伤处理种皮可使种子的萌发率提高20%,并且能大幅度缩短种子的萌发时间。附加6-BA 1.0mg/L和KT 0.2 mg/L的B_5培养基适合于各地北柴胡芽的快速增殖与生长;附加NAA 0.1mg/L、IBA 0.5 mg/L和DSC 1.0 mg/L的1/2 MS培养基对北柴胡试管苗的生根有良好的促进作用;北柴胡试管苗的年繁殖系数超过1×10~8,移栽成活率达到94%～97%。试管苗移栽大田半年后,根中柴胡皂苷的含量符合质量检测标准。北柴胡试管植株在芽增殖及移栽阶段生长状态良好;移栽育苗钵后试管植株的光合作用能力增强。
Thorowax is an important medical plant as well as popular crude drugs in China,South Corea and Japan.According to Chinese Medicine Dictionary published in 2005 AC,both Bupleurum chinese DC.and B.scorzonerifolium Wild.are two original plants for medical use.Roots of thorowax are used as medicine because they contain components such as saikoside and essential oil. These components are positive for health because of following effects such as anti-virus,anti-bacterial toxins,anti-inflammatory,anti-tumor, anti-convulsion,antipyretic,hypolipidemic,secretion promotion,liver protection,immunity improvement and etc.
In recent years,the market demand of thorowax increases every year, but in contrast wildlife resources has been fewer and fewer due to over-exploitation.And the seeds of thorowax germination and cultivation techniques have difficult issues.Further more,there are different degrees of hybrid varieties phenomenon at almost every origin of Bupleurum,causing impure germplasm and uneven quality.The declined overall quality has affected the accuracy and stability of medicine quality.The export business of thorowax has also been affected unfavorably.
The most urgent problem is producing thorowax plants with characteristics such as good quality,small variability and high-yield to supply market.The plants mentioned above should be gained by purifying and rejuvenating current popular artificial cultivation of germplasm.
In order to mass-producing high quality seedlings and seeds of B. chinese DC.,1~(st),we dispose seeds named Zhongchai No.1 through damaging the seed capsule or soaking them in different phytohormones;2~(nd),applying the rapid propagation technology on B.chinese which are picked from eight different areas such as Linchuan,Wanrong,Zuoquan,Ruicheng,Linqiu, Fangshan county in Shanxi province,Longxi county in Gansu province and Shanglv county in Shaanxi province;3~(rd),collected the B.chinese roots after being transplanted for six months,tested total saikoside by spectrophotometry, and determined the amount of saikosaponin a and d by HPLC-UV,tested if they meet quality standards;4~(th),tested,compared and analysed the chlorophyll contents of thorowax leaves sampled from test-tube plantlets, transplanted plants grown in nutrition pot,transplanted plants grown in fields in the second year,plants grown in field by spectrophotometry.
The experiment results in following conclusions:The phytohormone has little effect on seed germination of B.chinese,but scraping the testa could increase the germination percentage of seeds by 20%as well as shorten the germinating time greatly.The optimum medium for bud propagation was B_5 supplemented with 1.0mg/L 6-BA and 0.2mg/L KT.The optimum medium for root induction of test-tube plantlets was 1/2 MS added with 0.1mg/L NAA,0.5mg/L IBA and 1.0mg/L DSC.The annual propagation coefficient of B.chinese plants is more than 1×10~8,and the survival rate of transplantation reaches 94%～97%.After transplanted in field for more than six months,the saikosaponin content of thorowax root meets the quality inspection standards. There are sufficient nutriments in bud stage and transplanting stage,growing condition for test-tube plantlets is good.After transplanted in nutrition pots, the photosynthesis ability has enhanced.
为了建立北柴胡的选优育优技术体系,大量生产北柴胡优质种苗和种子,本研究对种植于山西万荣的中柴1号北柴胡种子进行了种皮损伤和植物激素处理试验,比较了其萌发率;应用植物组织培养技术分别对种植于山西陵川、万荣、左权、芮城、方山、灵丘及甘肃陇西和陕西商洛等8个地区的优质北柴胡进行快速繁殖;应用分光光度法测定了移栽半年后的试管植株根中的柴胡总皂苷含量,应用HPLC-UV法测定了其柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量;用分光光度法测定、比较了试管植株、移栽植株以及移栽田间第2年的试管植株与田间自然栽培植株叶片中叶绿素的含量。
实验结果表明:植物激素处理对北柴胡种子萌发无明显作用,打磨损伤处理种皮可使种子的萌发率提高20%,并且能大幅度缩短种子的萌发时间。附加6-BA 1.0mg/L和KT 0.2 mg/L的B_5培养基适合于各地北柴胡芽的快速增殖与生长;附加NAA 0.1mg/L、IBA 0.5 mg/L和DSC 1.0 mg/L的1/2 MS培养基对北柴胡试管苗的生根有良好的促进作用;北柴胡试管苗的年繁殖系数超过1×10~8,移栽成活率达到94%～97%。试管苗移栽大田半年后,根中柴胡皂苷的含量符合质量检测标准。北柴胡试管植株在芽增殖及移栽阶段生长状态良好;移栽育苗钵后试管植株的光合作用能力增强。
Thorowax is an important medical plant as well as popular crude drugs in China,South Corea and Japan.According to Chinese Medicine Dictionary published in 2005 AC,both Bupleurum chinese DC.and B.scorzonerifolium Wild.are two original plants for medical use.Roots of thorowax are used as medicine because they contain components such as saikoside and essential oil. These components are positive for health because of following effects such as anti-virus,anti-bacterial toxins,anti-inflammatory,anti-tumor, anti-convulsion,antipyretic,hypolipidemic,secretion promotion,liver protection,immunity improvement and etc.
In recent years,the market demand of thorowax increases every year, but in contrast wildlife resources has been fewer and fewer due to over-exploitation.And the seeds of thorowax germination and cultivation techniques have difficult issues.Further more,there are different degrees of hybrid varieties phenomenon at almost every origin of Bupleurum,causing impure germplasm and uneven quality.The declined overall quality has affected the accuracy and stability of medicine quality.The export business of thorowax has also been affected unfavorably.
The most urgent problem is producing thorowax plants with characteristics such as good quality,small variability and high-yield to supply market.The plants mentioned above should be gained by purifying and rejuvenating current popular artificial cultivation of germplasm.
In order to mass-producing high quality seedlings and seeds of B. chinese DC.,1~(st),we dispose seeds named Zhongchai No.1 through damaging the seed capsule or soaking them in different phytohormones;2~(nd),applying the rapid propagation technology on B.chinese which are picked from eight different areas such as Linchuan,Wanrong,Zuoquan,Ruicheng,Linqiu, Fangshan county in Shanxi province,Longxi county in Gansu province and Shanglv county in Shaanxi province;3~(rd),collected the B.chinese roots after being transplanted for six months,tested total saikoside by spectrophotometry, and determined the amount of saikosaponin a and d by HPLC-UV,tested if they meet quality standards;4~(th),tested,compared and analysed the chlorophyll contents of thorowax leaves sampled from test-tube plantlets, transplanted plants grown in nutrition pot,transplanted plants grown in fields in the second year,plants grown in field by spectrophotometry.
The experiment results in following conclusions:The phytohormone has little effect on seed germination of B.chinese,but scraping the testa could increase the germination percentage of seeds by 20%as well as shorten the germinating time greatly.The optimum medium for bud propagation was B_5 supplemented with 1.0mg/L 6-BA and 0.2mg/L KT.The optimum medium for root induction of test-tube plantlets was 1/2 MS added with 0.1mg/L NAA,0.5mg/L IBA and 1.0mg/L DSC.The annual propagation coefficient of B.chinese plants is more than 1×10~8,and the survival rate of transplantation reaches 94%～97%.After transplanted in field for more than six months,the saikosaponin content of thorowax root meets the quality inspection standards. There are sufficient nutriments in bud stage and transplanting stage,growing condition for test-tube plantlets is good.After transplanted in nutrition pots, the photosynthesis ability has enhanced.
引文
[1]薛准,刘敏,张纯花.中国药用植物组织培养研究进展[J].植物杂志,2002,(1):6-7.
[2]曹孜义,刘国民.实用植物组织培养技术教程[M].兰州:甘肃农业技术出版社,1996.
[3]黄群声,李娘辉,黄群慧.广藿香的组织培养[J].植物生理学通讯,2003,9(2):145.
[4]刘德华,朱永华.肉苁蓉组织培养的研究[J].湖南农业大学学报,2003,29(1):35-37.
[5]郝建平,李宝平.蛇床幼茎离体培养中体细胞胚胎的形成与观察[J].武汉植物学研究,1994,12(3):247-250.
[6]慈忠玲.磁场对防风体细胞胚发生发育和亚显微结构的影响[J].植物生理学报1999,25(3):09-312.
[7]白雨,高山林.半夏组织培养诱导胚状体的正交试验[J].植物资源与环境学报,2003,12(4):16-20.
[8]冉懋雄.中药组织培养实用技术[M].北京:科学技术文献出版社,2004.
[9]胡之璧,刘涤.生物技术在中药现代化中的地位和作用[J].世界科学技术:中医药现代化,1999,4(1):23-29.
[10]潘胜利,顺庆生,柏巧明,等.中国药用柴胡原色图志[M].上海:上海科学技术文献出版社,2002.
[11]舒璞,袁昌齐,余孟兰,等.中国柴胡属药用植物的数量分类研究[J].西北植物学报,18(2):277-283.
[12]潘胜利.中国柴胡的药源调查及商品鉴定[J].中药材,1996,19(5):16-18.
[13]王志有,张亚云.中药柴胡的物种调查和鉴定[J].中国药学杂志,1994,29(1):16-18.
[14]丁永辉,宋平顺,朱俊儒,等.甘肃柴胡属植物资源及中药柴胡的商品调查[J].中草药,2002,33(11):1036-1038.
[15]秦雪梅,王玉庆,岳建英.栽培柴胡资源状况分析[J].中药研究与信息,2005,7(8):30-32.
[16]黄文华,杨孝需,段金省,等.北柴胡的农业气象条件与资源开发研究[J].中国 农业气象,1995,16(2):28-32.
[17]魏建和,李昆同,程惠珍,等.北柴胡器官建成与干物质积累规律的研究[J].中药材,2003,26(7):469.
[18]于英,王秀全,包玉晓,等.北柴胡生长发育规律的研究[J].吉林农报.2003,25(5):523-527,530.
[19]魏建和,程惠珍,李昆同,等.北柴胡植株生长分析[J].中药材.2003,26(9):617-619.
[20]刘鸣远,都晓伟.柴胡皂苷的组织化学研究.中国中药杂志[J].1992,17(5):261-263.
[21]Lin CC,Yen MH,Chen JY,et al.Anatomical and histological studies of Bupleuri radix[J].Am J Chin Med,1991,19(4):265.
[22]黄真,毛庆秋.甘肃陇南地区三岛柴胡与南、北柴胡的性状及显微组织特征比较[J].温州医学院学报.2005,35(4).326-327.
[23]谭玲玲,胡正海,蔡霞,等.北柴胡营养器官中主要化学成分的组织化学定位及其含量比较[J].分子细胞生物学报.2007,40(4).214-222.
[24]徐丽霞,郝建平,秦雪梅,等.野生柴胡和栽培柴胡的根、叶显微结构比较[J].山西大学学报:自然科学版.2006,29(2).198-200.
[25]胡小荣,孙雨珍,陈辉.柴胡种子发芽条件及TTC活力测定方法的研究[J].种子科技,1998(3):28-29.
[26]邓友平,赵力强.外源激素促进北柴胡和三岛柴胡种子萌发的影响[J].中草药,1996,27(7):427-429.
[27]邓友平,赵力强.北柴胡与三岛柴胡种子萌发特性研究[J].药用植物栽培,1996,19(2):55-57.
[28]彭琳,季良,塞都拉.柴胡种子发芽特性的研究[J].新疆农业科学,2003,1(12):182-183.
[29]王秀琴,郑群,艾沙.不同药剂处理对柴胡种子活力的影响[J].种子,2002,(2):24.
[30]胡继鹰,何德刚,张正磷.柴胡种子萌发的环境因素[J].现代中药研究与实践,2004,18(5):21-22.
[31]陈莹,蔡霞,胡正海,等.北柴胡胚和胚乳的发育及对其种子萌发的影响[J].植物研究.2008(1).14-19.
[32]刘绣华,李明静,王汉卿.三岛柴胡种子化学成分分析[J].分析化学,2000,28(9):1079-1084.
[33]莫日根,吴庆如.内蒙古柴胡属植物花粉形态及其分类[J].内蒙古大学学报,1994,25(5):554-557.
[34]Wang Pingli,PuFading.PollenMorphology of Bupleurum L.from Sino-Himalaya and Its Syatematic Significance,Chin[J].Appl.Environ.Biol,1995,1(1):34.
[35]姜传明,路芳,徐娜,等.黑龙江柴胡属染色体数目[J].哈尔滨师范大学自然科学学报,1992,8(4):96-99.
[36]姜传明,徐娜,王好友,等.6种柴胡的核型分析[J].东北柴胡属细胞分类研究Ⅰ,1994,14(3):267-272.
[37]Jiang Chuan-ming.Cytotaxonomical Studies on Bupleurum.L.im Northeast China I.Karyology Analysis of Six Taxa and Their Significance of Taxonomy[J].Bulletln of Botanical Research,1994,14(3):267-275.
[38]Sakurai MH,Matsumoto T,Kiyoharaetal H,Detection and tissue distribution of anti-ulcer pectic polysaccharides from Bupleurum falcatum by polyclonal antibody[J].Planta Med,1996,62(4):341-364.
[39]步世忠,商权.柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响[J].中国中西医杂志,2000,20(5):350-352.
[40]宋锡全,夏光敏,周爱芬,等.葡萄与柴胡科间体细胞杂交再生杂种植株[J].科学通报,1999,44(17):1832-1836.
[41]Hsu Ming-Jen,Cheng Jur-Shan,Huang Huei-Chen.Effect of saikosaponin,a triterpene saponin,on apoptosis in lymphocytes:sasociation with c-myc,p53,and bcl-2mRNA Br[J].Pharmacol,2000,13(1):1285-1293.
[42]夏薇,崔新羽,陈静波.柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞凋亡及基因表达影响的研究[J].中国现代医学杂志,2002,12(10):21-23.
[43]梁之桃,秦民坚,王峥涛,等.柴胡属五种植物RAPD分析与分类鉴定[J].中草药,2002,33(12):1117-1119.
[44]王秀全,张永刚,赵露,等.北柴胡种源地道性的RAPD分析[J].中药材,2003,26(12):855-856.
[45]付杨,陈凤清,孙冬雪,等.大叶柴胡愈伤组织继代培养及其RAPD分析[J].东北 师范大学自然科学版,2005,37(2):90-92.
[46]丁锐,李利华.利用脂酶鉴定柴胡及其亲缘关系的研究[J].安徽农业科学,2006,34(13):2938.
[47]武莹,刘春生,刘玉法,等.5种习用柴胡ITS序列鉴别[J],中国中药杂志,2005,30(10):732-734.
[48]刘小刚.柴胡栽培品的RAPD和AFLP分析[D].山西大学2007届硕士学位论文,2007.6.
[49]Kanazawa H,Nagata Y.Determination of acidic saponins in crude drugs by high performance liquid chromatograohy on octadecylsilyl porous glass[J].Chromatogr,1993,63(12):408.
[50]Hiroshi Kohda,刘春华.柴胡芽尖的快速繁殖[J].国外特种经济动植物,1992,44(1):50-51.
[51]Katakura M.Saikosaponin production from cultures of Buleurum falcatum [J].Bioprocess Eng.1991,7(3):97-100.
[52]赵胜利,郭春鹏,索建政,等.三岛柴胡体细胞胚胎发生与植株再生的研究[J].中国中药杂志,1993,8(9):525-526.
[53]郝建平,周小梅,李宝平,等.柴胡固定化细胞培养[J].山西大学学报,1995,18(2):190-193.
[54]周小梅,郝建平,张江涛,等.柴胡细胞悬浮培养[J].山西大学学报,1996,19(2):191-194.
[55]罗玉.三岛柴胡下胚轴离体培养的全息现象[J].江西科学,1996,14(4):218-222.
[56]宋锡全,夏光敏,周爱芬,等.葡萄与柴胡科间体细胞杂交再生杂种植株[J].科学通报,1999,44(17):1832-1836.
[57]黄贤荣,向凤宁,夏光敏,等.柴胡与胡萝卜体细胞杂交及其再生愈伤组织的同功酶鉴定[J].中国中药杂志,2002,27(12):887-890.
[58]向凤宁,黄贤荣,王颖,等.柴胡与高寒藏药—獐芽菜科间体细胞杂交[J].山东大学学报,2003,38(2):93-97.
[59]杨东方.北柴胡种子萌发、愈伤组织诱导及根无性系研究[D].山西大学2007届硕士学位论文,2007,6.
[60]史青,聂淑琴,黄璐琦.柴胡属植物化学成分及药理研究新进展[J].中国实验 方剂学杂志,2002,27(1):7-11.
[61]梁鸿,白焱晶,赵玉英,等.北柴胡化学成分研究[J].中国药学:英文版,1998,7(2):98-99.
[62]梁鸿,赵玉英,邱海蕴,等.北柴胡中新皂甙的结构鉴定[J].药学学报,1998,7(2):98-99.
[63]刘沁虹,潭利,白焱晶,等.柴胡属植物皂甙近10年研究概况[J].中国中药杂志,2002,27(1):7-11.
[64]王英华,羽野芳生,野村太郎,等.小黑叶柴胡中皂甙成分的研究[J].中国中药杂志,1998,23(2),96.
[65]Liu Xiaohua,He Jianying,Saikosaponins from Bupleurum Falcatum L.[J].Chemical Research,2000,11(1):8.
[66]葛欢发,李莹,谢健明,等.超临界CO_2从柴胡中萃取挥发油及其皂甙的研究[J].中国中药杂志,2002,25(3):149-153.
[67]Kanazawa H,Nagata Y.Determination of acidic saponins in crude drugs by high-performance liquid chromatograohy on octadecylsilyl porous glass[J].Chromatogr,1993,630(1-2):408.
[68]张艺,付春华,向永臣,等.三岛柴胡须根中挥发油成分的气相色谱-质谱联用分析[J].成都中医药大学学报 1998,21(1):51-52.
[69]潘胜利,郭济贤,程丹华,等.柴胡类专题研究[A].常用中药材品种整理和质量研究[M].福州:福州科技出版社,1994.
[70]杜景红,李凤兰,胡宝忠,等.柴胡属植物研究进展[J].东北农业大学学报2003,34(3):352-359.
[71]梁鸿,赵玉英,邱海蕴,等.北柴胡中黄酮类化合物的分离鉴定[J].北京医科大学学报,2000,32(3):223-225.
[72]韩强,李映丽.四种柴胡地上部分黄酮成分比较[J].西北药学杂志,1996,11(4):154-155.
[73]鲁孝先,金义兴.竹叶柴胡多糖成分研究[J].武汉植物学研究,1997,15(1):94-96.
[74]骆传环.柴胡多糖分子量测定[J].中国医药工业杂志,1997,28(6):267-268.
[75]杨立明,王永中.柴胡多糖的制备以及部分理化性质测定[J].安徽农业技术师范学院学报,2000,14(3):27-29.
[76]单宇,冯煦,董云发,等.柴胡属植物化学成分及药理研究新近展[J].中国野生植物资源,2004,23(4):5-7.
[77]徐秀珍,王英华,伊桂兰.小黑叶柴胡中甾醇类成分的定量测定[J].宁夏医科大学学报,2000,22(6):404-406.
[78]Toshihiro Fujioka,Keisuke Yoshida.Antiproliferative Constituents from Umbelliferae Plants Ⅵ.New Ursane TypeSaikosaponin Analogs from the Fruits of Bupleurum rotundifolium[J].Chemical and Pharmaceutical Bulletin,2003,15(4):365-372.
[79]林明栋,曾熙兰,胡本荣.柴胡分离组分对腺苷酸环化酶的影响(二)[J].中药药理与临床,1991,7(4):17-21.
[80]孙兵,郝洪谦,郑开俊.柴胡皂甙调节猫睡眠节律电活动机理的初探[J].天津医科大学学报.2000,6(3):274-276.
[81]杜景红,左廷兵,李凤兰,等.柴胡属植物研究进展[J].东北农业大学学报,2003,34(3):352-359.
[82]贾冬梅.浅谈柴胡之药理作用[J].黑龙江中医药,2005,5:45-46.
[83]张永文.柴胡果胶多糖的结构与药理活性研究进展[J].国外医学中医中药分册,1996,18(4):20-23.
[84]冯煦,王鸣,赵友谊.北柴胡茎叶总黄酮抗流感病毒作用的研究[J].植物资源与环境学报,2002,11(4):15-17.
[85]Chang WL.Immuno suppressive flavones and lignans from Bupleurum scorzonerifolium[J].Phytochemistry,2003,64:1375-1379.
[86]Capakob A.C.多脉柴胡地上部分的制剂新的药理活性[J].国外医学中医中药分册,1991,13(3):23-24.
[87]齐凯琴.柴胡提取物防醉作用的研究[J].天然产物研究与开发,1995,17(3):20-23.
[88]陈妍.HPLC-ELSD法测定柴胡中柴胡皂苷a、d的含量[J].天津药学,2002,14(3):73-75.
[89]王兰霞,杨玲霞等.甘肃省庆阳地区栽培柴胡质量考察[J].中国中药志,1994,19(10):596-597.
[90]孔伶俐,崔青娟,史德胜,等.HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷a的含量.中草药,2004,35(6):643-644.
[91]李嫒嫒,秦雪梅,王玉庆,等.柱前衍生化法评价不同品种和产地柴胡药材和饮片质量[J].中国中药杂志,2008,33(3):237-240。
[92]洪筱坤,王智华.中药数字化色谱指纹谱[M].上海科学技术出版社,2003:113-149.
[93]李媛媛,秦雪梅,王玉庆,等.北柴胡皂苷类成分的指纹图谱研究[J].中国医院药学杂志,2007,27(11):1500-1503.
[94]魏建和,程惠珍,李昆同.种子成熟度及种皮对北柴胡和三岛柴胡种子萌发的影响[J].中国中药杂志,2003,28(7):614-617.
[95]王秀丽,王义,王秀全,等.三岛柴胡种子生物学特性研究[J].吉林农业大学学报,1997,19(2):54-57.
[96]刘沁舡,谭利,白焱晶,等.柴胡属植物皂苷近10年研究概况[J].中国中药杂志,2002,27(1):7-11.
[97]任东植,李峰,曲运琴,等.影响枣组培苗玻璃化的几个因素及其防治简报[J].植物生理学通讯,2000,01:21-23.
[98]靳占发,孙琦云.浅山地区柴胡与小麦套种栽培技术[J].青海农技推广.2006(3):34-35.
[99]黄立海.柴胡和万寿果套种立体栽培的方法.2003.05.21公告.
[100]于英,王秀全,刘霞,等.摘花序、打顶对北柴胡生育性状及根部产量的影响[J].吉林农业大学学报.2003,25(3):303-306.
[101]吴春满,于庆海.柴胡及其有效成分皂苷的抗炎作用[J].中国药理学报,1982.2(1):60-60.
[102]王兰霞,杨玲霞,张伯崇.甘肃省庆阳地区栽培柴胡质量考察[J].中国中药杂志,1994,19(10):596-597.
[103]李媛媛,秦雪梅,王玉庆,等.北柴胡不同农家栽培类型与有效成分相关性研究[J].山西中医学院学报,2007,8(2):44.
[104]黄帆,郭正元,徐珍.测定浮萍叶绿素含量的方法研究[J].实验技术与管理2007,5(24):29-31.
[105]金玲梅,王钦.草坪植物正常生长期叶绿素含量测定值的影响因素[J].兰州草业科学,1993,10(5):51-53.
[106]李薇,曹碚生,王燕.胡萝卜中胡萝卜素、叶绿素含量与生长量变化关系初探[J].江苏农业科学,1990,5,45-47.
[2]曹孜义,刘国民.实用植物组织培养技术教程[M].兰州:甘肃农业技术出版社,1996.
[3]黄群声,李娘辉,黄群慧.广藿香的组织培养[J].植物生理学通讯,2003,9(2):145.
[4]刘德华,朱永华.肉苁蓉组织培养的研究[J].湖南农业大学学报,2003,29(1):35-37.
[5]郝建平,李宝平.蛇床幼茎离体培养中体细胞胚胎的形成与观察[J].武汉植物学研究,1994,12(3):247-250.
[6]慈忠玲.磁场对防风体细胞胚发生发育和亚显微结构的影响[J].植物生理学报1999,25(3):09-312.
[7]白雨,高山林.半夏组织培养诱导胚状体的正交试验[J].植物资源与环境学报,2003,12(4):16-20.
[8]冉懋雄.中药组织培养实用技术[M].北京:科学技术文献出版社,2004.
[9]胡之璧,刘涤.生物技术在中药现代化中的地位和作用[J].世界科学技术:中医药现代化,1999,4(1):23-29.
[10]潘胜利,顺庆生,柏巧明,等.中国药用柴胡原色图志[M].上海:上海科学技术文献出版社,2002.
[11]舒璞,袁昌齐,余孟兰,等.中国柴胡属药用植物的数量分类研究[J].西北植物学报,18(2):277-283.
[12]潘胜利.中国柴胡的药源调查及商品鉴定[J].中药材,1996,19(5):16-18.
[13]王志有,张亚云.中药柴胡的物种调查和鉴定[J].中国药学杂志,1994,29(1):16-18.
[14]丁永辉,宋平顺,朱俊儒,等.甘肃柴胡属植物资源及中药柴胡的商品调查[J].中草药,2002,33(11):1036-1038.
[15]秦雪梅,王玉庆,岳建英.栽培柴胡资源状况分析[J].中药研究与信息,2005,7(8):30-32.
[16]黄文华,杨孝需,段金省,等.北柴胡的农业气象条件与资源开发研究[J].中国 农业气象,1995,16(2):28-32.
[17]魏建和,李昆同,程惠珍,等.北柴胡器官建成与干物质积累规律的研究[J].中药材,2003,26(7):469.
[18]于英,王秀全,包玉晓,等.北柴胡生长发育规律的研究[J].吉林农报.2003,25(5):523-527,530.
[19]魏建和,程惠珍,李昆同,等.北柴胡植株生长分析[J].中药材.2003,26(9):617-619.
[20]刘鸣远,都晓伟.柴胡皂苷的组织化学研究.中国中药杂志[J].1992,17(5):261-263.
[21]Lin CC,Yen MH,Chen JY,et al.Anatomical and histological studies of Bupleuri radix[J].Am J Chin Med,1991,19(4):265.
[22]黄真,毛庆秋.甘肃陇南地区三岛柴胡与南、北柴胡的性状及显微组织特征比较[J].温州医学院学报.2005,35(4).326-327.
[23]谭玲玲,胡正海,蔡霞,等.北柴胡营养器官中主要化学成分的组织化学定位及其含量比较[J].分子细胞生物学报.2007,40(4).214-222.
[24]徐丽霞,郝建平,秦雪梅,等.野生柴胡和栽培柴胡的根、叶显微结构比较[J].山西大学学报:自然科学版.2006,29(2).198-200.
[25]胡小荣,孙雨珍,陈辉.柴胡种子发芽条件及TTC活力测定方法的研究[J].种子科技,1998(3):28-29.
[26]邓友平,赵力强.外源激素促进北柴胡和三岛柴胡种子萌发的影响[J].中草药,1996,27(7):427-429.
[27]邓友平,赵力强.北柴胡与三岛柴胡种子萌发特性研究[J].药用植物栽培,1996,19(2):55-57.
[28]彭琳,季良,塞都拉.柴胡种子发芽特性的研究[J].新疆农业科学,2003,1(12):182-183.
[29]王秀琴,郑群,艾沙.不同药剂处理对柴胡种子活力的影响[J].种子,2002,(2):24.
[30]胡继鹰,何德刚,张正磷.柴胡种子萌发的环境因素[J].现代中药研究与实践,2004,18(5):21-22.
[31]陈莹,蔡霞,胡正海,等.北柴胡胚和胚乳的发育及对其种子萌发的影响[J].植物研究.2008(1).14-19.
[32]刘绣华,李明静,王汉卿.三岛柴胡种子化学成分分析[J].分析化学,2000,28(9):1079-1084.
[33]莫日根,吴庆如.内蒙古柴胡属植物花粉形态及其分类[J].内蒙古大学学报,1994,25(5):554-557.
[34]Wang Pingli,PuFading.PollenMorphology of Bupleurum L.from Sino-Himalaya and Its Syatematic Significance,Chin[J].Appl.Environ.Biol,1995,1(1):34.
[35]姜传明,路芳,徐娜,等.黑龙江柴胡属染色体数目[J].哈尔滨师范大学自然科学学报,1992,8(4):96-99.
[36]姜传明,徐娜,王好友,等.6种柴胡的核型分析[J].东北柴胡属细胞分类研究Ⅰ,1994,14(3):267-272.
[37]Jiang Chuan-ming.Cytotaxonomical Studies on Bupleurum.L.im Northeast China I.Karyology Analysis of Six Taxa and Their Significance of Taxonomy[J].Bulletln of Botanical Research,1994,14(3):267-275.
[38]Sakurai MH,Matsumoto T,Kiyoharaetal H,Detection and tissue distribution of anti-ulcer pectic polysaccharides from Bupleurum falcatum by polyclonal antibody[J].Planta Med,1996,62(4):341-364.
[39]步世忠,商权.柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响[J].中国中西医杂志,2000,20(5):350-352.
[40]宋锡全,夏光敏,周爱芬,等.葡萄与柴胡科间体细胞杂交再生杂种植株[J].科学通报,1999,44(17):1832-1836.
[41]Hsu Ming-Jen,Cheng Jur-Shan,Huang Huei-Chen.Effect of saikosaponin,a triterpene saponin,on apoptosis in lymphocytes:sasociation with c-myc,p53,and bcl-2mRNA Br[J].Pharmacol,2000,13(1):1285-1293.
[42]夏薇,崔新羽,陈静波.柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞凋亡及基因表达影响的研究[J].中国现代医学杂志,2002,12(10):21-23.
[43]梁之桃,秦民坚,王峥涛,等.柴胡属五种植物RAPD分析与分类鉴定[J].中草药,2002,33(12):1117-1119.
[44]王秀全,张永刚,赵露,等.北柴胡种源地道性的RAPD分析[J].中药材,2003,26(12):855-856.
[45]付杨,陈凤清,孙冬雪,等.大叶柴胡愈伤组织继代培养及其RAPD分析[J].东北 师范大学自然科学版,2005,37(2):90-92.
[46]丁锐,李利华.利用脂酶鉴定柴胡及其亲缘关系的研究[J].安徽农业科学,2006,34(13):2938.
[47]武莹,刘春生,刘玉法,等.5种习用柴胡ITS序列鉴别[J],中国中药杂志,2005,30(10):732-734.
[48]刘小刚.柴胡栽培品的RAPD和AFLP分析[D].山西大学2007届硕士学位论文,2007.6.
[49]Kanazawa H,Nagata Y.Determination of acidic saponins in crude drugs by high performance liquid chromatograohy on octadecylsilyl porous glass[J].Chromatogr,1993,63(12):408.
[50]Hiroshi Kohda,刘春华.柴胡芽尖的快速繁殖[J].国外特种经济动植物,1992,44(1):50-51.
[51]Katakura M.Saikosaponin production from cultures of Buleurum falcatum [J].Bioprocess Eng.1991,7(3):97-100.
[52]赵胜利,郭春鹏,索建政,等.三岛柴胡体细胞胚胎发生与植株再生的研究[J].中国中药杂志,1993,8(9):525-526.
[53]郝建平,周小梅,李宝平,等.柴胡固定化细胞培养[J].山西大学学报,1995,18(2):190-193.
[54]周小梅,郝建平,张江涛,等.柴胡细胞悬浮培养[J].山西大学学报,1996,19(2):191-194.
[55]罗玉.三岛柴胡下胚轴离体培养的全息现象[J].江西科学,1996,14(4):218-222.
[56]宋锡全,夏光敏,周爱芬,等.葡萄与柴胡科间体细胞杂交再生杂种植株[J].科学通报,1999,44(17):1832-1836.
[57]黄贤荣,向凤宁,夏光敏,等.柴胡与胡萝卜体细胞杂交及其再生愈伤组织的同功酶鉴定[J].中国中药杂志,2002,27(12):887-890.
[58]向凤宁,黄贤荣,王颖,等.柴胡与高寒藏药—獐芽菜科间体细胞杂交[J].山东大学学报,2003,38(2):93-97.
[59]杨东方.北柴胡种子萌发、愈伤组织诱导及根无性系研究[D].山西大学2007届硕士学位论文,2007,6.
[60]史青,聂淑琴,黄璐琦.柴胡属植物化学成分及药理研究新进展[J].中国实验 方剂学杂志,2002,27(1):7-11.
[61]梁鸿,白焱晶,赵玉英,等.北柴胡化学成分研究[J].中国药学:英文版,1998,7(2):98-99.
[62]梁鸿,赵玉英,邱海蕴,等.北柴胡中新皂甙的结构鉴定[J].药学学报,1998,7(2):98-99.
[63]刘沁虹,潭利,白焱晶,等.柴胡属植物皂甙近10年研究概况[J].中国中药杂志,2002,27(1):7-11.
[64]王英华,羽野芳生,野村太郎,等.小黑叶柴胡中皂甙成分的研究[J].中国中药杂志,1998,23(2),96.
[65]Liu Xiaohua,He Jianying,Saikosaponins from Bupleurum Falcatum L.[J].Chemical Research,2000,11(1):8.
[66]葛欢发,李莹,谢健明,等.超临界CO_2从柴胡中萃取挥发油及其皂甙的研究[J].中国中药杂志,2002,25(3):149-153.
[67]Kanazawa H,Nagata Y.Determination of acidic saponins in crude drugs by high-performance liquid chromatograohy on octadecylsilyl porous glass[J].Chromatogr,1993,630(1-2):408.
[68]张艺,付春华,向永臣,等.三岛柴胡须根中挥发油成分的气相色谱-质谱联用分析[J].成都中医药大学学报 1998,21(1):51-52.
[69]潘胜利,郭济贤,程丹华,等.柴胡类专题研究[A].常用中药材品种整理和质量研究[M].福州:福州科技出版社,1994.
[70]杜景红,李凤兰,胡宝忠,等.柴胡属植物研究进展[J].东北农业大学学报2003,34(3):352-359.
[71]梁鸿,赵玉英,邱海蕴,等.北柴胡中黄酮类化合物的分离鉴定[J].北京医科大学学报,2000,32(3):223-225.
[72]韩强,李映丽.四种柴胡地上部分黄酮成分比较[J].西北药学杂志,1996,11(4):154-155.
[73]鲁孝先,金义兴.竹叶柴胡多糖成分研究[J].武汉植物学研究,1997,15(1):94-96.
[74]骆传环.柴胡多糖分子量测定[J].中国医药工业杂志,1997,28(6):267-268.
[75]杨立明,王永中.柴胡多糖的制备以及部分理化性质测定[J].安徽农业技术师范学院学报,2000,14(3):27-29.
[76]单宇,冯煦,董云发,等.柴胡属植物化学成分及药理研究新近展[J].中国野生植物资源,2004,23(4):5-7.
[77]徐秀珍,王英华,伊桂兰.小黑叶柴胡中甾醇类成分的定量测定[J].宁夏医科大学学报,2000,22(6):404-406.
[78]Toshihiro Fujioka,Keisuke Yoshida.Antiproliferative Constituents from Umbelliferae Plants Ⅵ.New Ursane TypeSaikosaponin Analogs from the Fruits of Bupleurum rotundifolium[J].Chemical and Pharmaceutical Bulletin,2003,15(4):365-372.
[79]林明栋,曾熙兰,胡本荣.柴胡分离组分对腺苷酸环化酶的影响(二)[J].中药药理与临床,1991,7(4):17-21.
[80]孙兵,郝洪谦,郑开俊.柴胡皂甙调节猫睡眠节律电活动机理的初探[J].天津医科大学学报.2000,6(3):274-276.
[81]杜景红,左廷兵,李凤兰,等.柴胡属植物研究进展[J].东北农业大学学报,2003,34(3):352-359.
[82]贾冬梅.浅谈柴胡之药理作用[J].黑龙江中医药,2005,5:45-46.
[83]张永文.柴胡果胶多糖的结构与药理活性研究进展[J].国外医学中医中药分册,1996,18(4):20-23.
[84]冯煦,王鸣,赵友谊.北柴胡茎叶总黄酮抗流感病毒作用的研究[J].植物资源与环境学报,2002,11(4):15-17.
[85]Chang WL.Immuno suppressive flavones and lignans from Bupleurum scorzonerifolium[J].Phytochemistry,2003,64:1375-1379.
[86]Capakob A.C.多脉柴胡地上部分的制剂新的药理活性[J].国外医学中医中药分册,1991,13(3):23-24.
[87]齐凯琴.柴胡提取物防醉作用的研究[J].天然产物研究与开发,1995,17(3):20-23.
[88]陈妍.HPLC-ELSD法测定柴胡中柴胡皂苷a、d的含量[J].天津药学,2002,14(3):73-75.
[89]王兰霞,杨玲霞等.甘肃省庆阳地区栽培柴胡质量考察[J].中国中药志,1994,19(10):596-597.
[90]孔伶俐,崔青娟,史德胜,等.HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷a的含量.中草药,2004,35(6):643-644.
[91]李嫒嫒,秦雪梅,王玉庆,等.柱前衍生化法评价不同品种和产地柴胡药材和饮片质量[J].中国中药杂志,2008,33(3):237-240。
[92]洪筱坤,王智华.中药数字化色谱指纹谱[M].上海科学技术出版社,2003:113-149.
[93]李媛媛,秦雪梅,王玉庆,等.北柴胡皂苷类成分的指纹图谱研究[J].中国医院药学杂志,2007,27(11):1500-1503.
[94]魏建和,程惠珍,李昆同.种子成熟度及种皮对北柴胡和三岛柴胡种子萌发的影响[J].中国中药杂志,2003,28(7):614-617.
[95]王秀丽,王义,王秀全,等.三岛柴胡种子生物学特性研究[J].吉林农业大学学报,1997,19(2):54-57.
[96]刘沁舡,谭利,白焱晶,等.柴胡属植物皂苷近10年研究概况[J].中国中药杂志,2002,27(1):7-11.
[97]任东植,李峰,曲运琴,等.影响枣组培苗玻璃化的几个因素及其防治简报[J].植物生理学通讯,2000,01:21-23.
[98]靳占发,孙琦云.浅山地区柴胡与小麦套种栽培技术[J].青海农技推广.2006(3):34-35.
[99]黄立海.柴胡和万寿果套种立体栽培的方法.2003.05.21公告.
[100]于英,王秀全,刘霞,等.摘花序、打顶对北柴胡生育性状及根部产量的影响[J].吉林农业大学学报.2003,25(3):303-306.
[101]吴春满,于庆海.柴胡及其有效成分皂苷的抗炎作用[J].中国药理学报,1982.2(1):60-60.
[102]王兰霞,杨玲霞,张伯崇.甘肃省庆阳地区栽培柴胡质量考察[J].中国中药杂志,1994,19(10):596-597.
[103]李媛媛,秦雪梅,王玉庆,等.北柴胡不同农家栽培类型与有效成分相关性研究[J].山西中医学院学报,2007,8(2):44.
[104]黄帆,郭正元,徐珍.测定浮萍叶绿素含量的方法研究[J].实验技术与管理2007,5(24):29-31.
[105]金玲梅,王钦.草坪植物正常生长期叶绿素含量测定值的影响因素[J].兰州草业科学,1993,10(5):51-53.
[106]李薇,曹碚生,王燕.胡萝卜中胡萝卜素、叶绿素含量与生长量变化关系初探[J].江苏农业科学,1990,5,45-47.