转Bt基因玉米后代抗虫性鉴定方法研究
|
摘要
对转Bt基因材料杂交种NC7882的F2,F3,F4后代和自交系C237采用卡那霉素叶片涂抹、潮霉素叶片涂抹、田间接虫鉴定和NOS终止子序列引物和Bt序列设计的引物（W）PCR分子鉴定等5种方法的鉴定，并对鉴定结果进行成对数据T测验。两对引物的PCR分子鉴定结果表明叶片总DNA扩增产物的条带在预期扩增范围内，说明转基因后代中外源Bt基因以及NOS终止子的存在。以W为引物的分子鉴定结果与田间接虫鉴定结果T测验之间不存在显著差异，说明以W为引物的分子鉴定结果的可靠性，可以作为标准鉴定方法。以NOS为引物的PCR鉴定结果与以W为引物的PCR鉴定结果进行成对数据T测验结果表明两者之间存在显著差异，说明以NOS为引物的分子鉴定结果的不可靠，这可能是因为用NOS引物扩增产物片断小，琼脂糖凝胶电泳不能区分分子量稍有差异的扩增片断与DNA碎片。1000mg/L（处理1）和（处理2）1250mg/L浓度的卡那霉素鉴定结果与以W为引物的分子鉴定结果成对数据T测验也存在显著差异，而500mg/L（处理3）浓度的潮霉素鉴定结果以W为引物的分子鉴定结果成对数据T测验不存在显著差异，说明转Bt基因玉米NC7882和C237含有抗潮霉素标记的基因，并能表达,而不含抗卡那霉素基因，或者抗卡那霉素基因不能表达，因而潮霉素叶片涂抹的方法可以作为是否携带Bt基因间接鉴定方法。对杂交种NC7882杂交2代用W引物PCR鉴定结果阳性阴性植株的分离比例符合3：1，F3、F4代株系大部分也符合一对显性基因的分离比例，验证转Bt基因的遗传是符合一对显性基因的孟德尔分离规律，Bt基因可以在世代中稳定遗传。通过对转基因玉米后代不同株系抗虫性的筛选，为以后抗虫性植株的选育打下良好的基础。
The insect-resistance trait of F2,F3,F4 progeny from transgenic Bt hybrids NC7882 and transgenic Bt inbred lines C237 were identificated by five differ- -ent methods as kanamycin identification, hygtomycin iden tific at ion, identification of insect -resistance in field and PCR analysis. PCR primers were designed according to sequence of Bt gene and NOS terminator,The amplify- -ing results by two pairs of primers PCR revealed that the length of amplified flagment was consistant with the length expected. This indicated that the Bt gene and NOS terminator were existed in the progeny of NC7882 and C237. T-test of pairs data showed there was no obvious difference between the result of insect -resistance identification in field and that of W primer PCR identifica- -tion,which was regarded as standard identification technique . There was obv- -ious difference between the result of NOS primer PCR identification and that of W primer PCR identification,So the result of NOS primer PCR identificati- -on was truthless.Because NOS primer PCR anplified flagment was not enough long,it was not easy to distinguish the amplified flagment from small DNA piece by gelose electrophoresis . There was significant difference between the results of kanamycin identification and that of W primer PCR identification, but there was no significant difference between identifying result of hygtomycin with 500mg/L concentration and that of W primer PCR.This indicated that the anti-- hygtomycin gene was existed and express, anti-kana- -mycin gene was not existed or not express in transgenic Bt hybrids NC7882
and transgenic Bt inbred lines C237. Thus the method about hygtomycin涂抹(daub) leaf can indirectly identify Bt gene . In NC7882 and C237 progeny the segregation of Bt+and Bt-plants fitted 3:1 in NC7882F2and parts of F3, F4 linesally ,which showed one pair dominant gene Mendel inheritance.Those researchs about identification methods and selection insect-resistance lines in Bt transgenic Progeny make a solid base for insect-resistance.breeding.
The insect-resistance trait of F2,F3,F4 progeny from transgenic Bt hybrids NC7882 and transgenic Bt inbred lines C237 were identificated by five differ- -ent methods as kanamycin identification, hygtomycin iden tific at ion, identification of insect -resistance in field and PCR analysis. PCR primers were designed according to sequence of Bt gene and NOS terminator,The amplify- -ing results by two pairs of primers PCR revealed that the length of amplified flagment was consistant with the length expected. This indicated that the Bt gene and NOS terminator were existed in the progeny of NC7882 and C237. T-test of pairs data showed there was no obvious difference between the result of insect -resistance identification in field and that of W primer PCR identifica- -tion,which was regarded as standard identification technique . There was obv- -ious difference between the result of NOS primer PCR identification and that of W primer PCR identification,So the result of NOS primer PCR identificati- -on was truthless.Because NOS primer PCR anplified flagment was not enough long,it was not easy to distinguish the amplified flagment from small DNA piece by gelose electrophoresis . There was significant difference between the results of kanamycin identification and that of W primer PCR identification, but there was no significant difference between identifying result of hygtomycin with 500mg/L concentration and that of W primer PCR.This indicated that the anti-- hygtomycin gene was existed and express, anti-kana- -mycin gene was not existed or not express in transgenic Bt hybrids NC7882
and transgenic Bt inbred lines C237. Thus the method about hygtomycin涂抹(daub) leaf can indirectly identify Bt gene . In NC7882 and C237 progeny the segregation of Bt+and Bt-plants fitted 3:1 in NC7882F2and parts of F3, F4 linesally ,which showed one pair dominant gene Mendel inheritance.Those researchs about identification methods and selection insect-resistance lines in Bt transgenic Progeny make a solid base for insect-resistance.breeding.
引文
[1] 李云等，葡萄遗传转化研究进展，生物工程进展，2000，20（3）：49—52
[2] 刘风华等，转甜菜碱醛脱氢酶基因植物的耐盐性研究，遗传学报，1997，24（1）：54-58
[3] 王学聘等，欧美扬转基因植株的PCR检测，林业科学，1997，33（4）：380-383
[4] 张赛群等，异戊烯基转移酶基因导入番茄及转基因植株再生，园艺学报，1999，26（6）：376-379
[5] 李银心等，转甜菜碱醛脱氢酶基因豆瓣菜的耐盐性，植物学报，2000，42（5）：480-484
[6] 郭北海等，甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因转化小麦及其表达，植物学报，2000，42（5）：279-283
[7] 张宗江等 .黄瓜花叶病毒壳蛋白基因转化辣椒及其在转基因株后代的表达 .华北农学报 . 1 994,9(3 ) :6 7- 7
[8]. Fromm M.E,Taylor,Walbot V. Stable transformation of maize after gene transfer by electroporation.Nature 1986,319:791-793
[9]. Hodges T.K,Kamo K.K,Imbric C.W,et al Genotypes specificity of somatic embryogenesis and regeneration in maize[J].Bio.Tech,1986,4:219-22
[10]. Rhodes C A, Pierce D A, Mettler I J, et al Genetically transformed maize plants from protoplasts.Science,1988,240:204-207
[11] 李晚忱，容延昭，我国21世纪玉米遗传育种工程技术展望，玉米科学，2000，8（2）：10-14
[12] Klein T M,al Apllication of the particle gun biology.In Ni jkamp HJJ,Vander plas LHW,van Artrijk(des).Progress on Plant Cdllwler and Moiecular Biotogy.The Netherlans:Kluwer Academic Publish,1900.599-563
[13] Gordon-Kamm W J, Spence T M,Mangano M I,et al.Transformation of maize cells and regeneration of fertile transgenic plants.The Plant Cell ,1990,2:603-618
[14] 郭三堆.ＣｒｙＩＡ杀虫基因的人工合成[Ｊ].中国农业科学,1997,26(2):85-86.
[15] 贾士荣.植物基因工程原理与技术[Ｍ].大连:辽宁师范大学出版社,1998.127-585.
[16] Koziel M G,Beland G L,Bowman C,et al.Field performance of elite transgenic maize plants expressing an insecticidal protein derived from Bacillus thuringiensis. Bio/ Technology, 1993, 11: 194-200
[17] 丁群星,谢友菊,戴景瑞,等 用子房注射法将Bt毒蛋白基因导入玉米的研究[Ｊ]. 中国科学,Ｂ
辑,1993,23(7):707-713.
[18] 王国英,杜天兵,张宏,等 用基因枪将Bt毒蛋白基因转入玉米及转基因植株再生[Ｊ]. 中国科学,Ｂ辑,1995,25(1):71-76.
[19] 张宏，王国英，谢友菊等，用超声波介导法转化玉米愈伤组织及可育转基因植株的获得.中国科学,C辑,1997,27(2):162-167
[20]杨剑波，许智宏，卫志明等，影响根癌农杆菌附着禾谷类作物培养细胞的因素.[J]实验生物学报，1993，26（1）：1
[21] 王守才,王国英,戴景瑞， 关于高等植物转基因遗传问题的讨论[Ｊ]. 生物工程进展,2000,20(4):64-66.
[22] 董云洲,段胜军等，用基因枪转化花粉获得转基因谷子与玉米。中国农业科学。1999，32（2）：9-13
[23] 王关林，方宏筠.植物基因工程[M] 北京科学出版社,2002.
[24] 杜娟，季静.基因枪在植物遗传转化中的应用，吉林农业科学.2000,25(2):38-40
[25] 瞿礼嘉,等.现代生物技术导论,高等教育出版社,施普林格出版社,1998,241
[26] 吴乃虎 基因工程原理[M] 科学出版社，2001
[27] Willams JGK,Kuberlik AR ,Livak KJ et,al,DNA Polymerhpisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers,Nucleric Acid Res,1990,18:6531-6534
[28] Saiki P K.Amplification of genomic DNA.in: PCR Protocols:aguiden to methods and application (eds.Innis MA,etal)[M].Academic Press inc, 1995.13-20
[29] Welsh J ,MC cleuand M Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers, Nucleric Acid Res,1990,18:7513-7218
[30] 周世力，.PCR技术原理及在法医学中的应用[Ｊ].武汉教育学院学报,1999 18(3):82-85
[31] 武长剑,范云六，水稻广亲和品种”02428”抗除草剂转基因植株的获得[Ｊ].农业生物技术学报,1994,2(2):32-38
[32] Gandhi-R;Paramjit-Khurana; Khurana-P.Stress-mediated regeneration from nature embryo-derived calli and gene transfer through Agrobactrium Oryze ativa) Indian-Journal- of-Evperimental-Biology. 1999,37:4, 332-339;33ref
[33] 王保民,何钟佩,赵继勋,等.抗虫棉Bt杀虫晶体蛋白免疫检测方法的研究[Ｊ],棉花学报，1998，10（4）：220-221
[34] Berberich SA,Maclntosh SC,Fuchs RL.Quanitificayion of BtＫ proteinsin plants by ELISA[A].In:Frurth symposia of the protein society [C].1990.60-79
[35] 陈松,吴敬音,程德荣,等.转Bt基因棉Bt毒蛋白的ELISA检测方法研究(英文)[Ｊ]. 棉花学报,1999,11(5):259-267.
[36] 王保民,何钟佩,田晓莉.苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白ＣｒｙＩＡ单克隆抗体的制备及在转Bt基因棉毒蛋白检测上的应用(英文)[Ｊ]. 棉花学报,2000,12(1):35-39.
[37] 吴家和,陈志贤,李淑君,等. 转Bt基因棉各组织器官对棉铃虫抗性研究[Ｊ]. 棉花学报,1999,11(4):222-223.
[38] 赵建周,卢美光,范贤林.转Bt基因棉对棉铃虫不同龄期幼虫的杀虫活性和抑制生长作用[Ｊ].昆虫学报,1998,41(4):254-258.
[39] 周大荣,何康来 玉米螟综合防治技术[M] 北京:金盾出版社,1995
[40] 曹小凤，杨美珠，朱玉贤等，马铃薯Y病毒外壳蛋白基因在转基因马铃薯中的表达.植物学报，1996，38（5）：417-420
[41] Tian Wen-Zhong,et al.Rice Transformation with aphytoalex ingene and bioassay of the transgenic plants.Acta botanica Sinica,1998,40(9):803-808
[42] Jankins J N,Parrott W L,Mc Carty J C,et al. Growth and Survival of Helithis virsenceson transgenic cotton on taining at runcated from of the Deltend otoxingene from Bacilluathuringiensis [J].Jecon Entomol, 1993,86(1):185-186.
[43] 刘宗华，苏海玲，汤继华，等.Bt转基因植株抗虫性鉴定研究初报[Ｊ] 河南农业大学学报，1999，33(3)，215-218.
[44] 吴家和,陈志贤,李淑君,等.转Bt基因棉各组织器官对棉铃虫抗性研究[Ｊ]. 棉花学报,1999,11(4):222-223.
[45] 束春娥,孙洪武,孙以文,等.转Bt基因棉毒性表达的时空动态及对棉铃虫生存、繁殖的影响[Ｊ]. 棉花学报,1998,10(3):131-135
[46] 赵建周,卢美光,范贤林.转Bt基因棉对玉棉铃虫不同龄期幼虫的杀虫活性和抑制生长作用
[Ｊ].昆虫学报,1998,41(4):254-258
[47] Ｈａｌｃｏｍｂ Ｊ Ｈ,Ｂｅｎｅｄｉｃｔ Ｊ Ｈ,Ｃｏｏｋ Ｂ,ｅｔ ａｌ.Ｓｕｒｖｉｒａｌ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｂｏｌｌ ｗｏｒｍ ａｎｄ ｔｏｂａｃｃｏｂｕｄ ｗｏｒｍ ｏｎ ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｏｔｔｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉng ａＣｒｙＩＡ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ[Ｊ].Ｅｎｖｉｒｏ Ｅｎｔｏｍ,1996,25(2):250-255.
[48] 马丽华,李春花. 棉花抗棉铃虫性室内生物测定新方法[Ｊ].中国棉花，1998，25（7）：27-36。
[49] 孟钊红,焦改丽,张换样,等.GUS基因在转基因玉米花细胞中的表达及其与NPTⅡ基因、Bt基因表达的相关性[Ｊ]. 棉花学报,2001,13(4):243-246
[50] 曹美莲,李朋波,刘惠民,等.转Bt基因棉抗棉铃虫技术及抗性表示方法研究[Ｊ]. 棉花学报,2000,12(2):87-90.
[51] 何康来,王振营，周大荣等，玉米抗螟性鉴定方法与评价标准，沈阳农业大学学报，2000 ,31（5）：439-443
[52] 曹美莲,李朋波,刘惠民,等.转Bt基因棉抗棉铃虫技术及抗性表示方法研究[Ｊ]. 棉花学报,2000,12(2):87-90.
[53] 王坤波,张香娣,刘方,等.子叶期卡那霉素快速鉴定转基因棉花[Ｊ].中国棉花，2000，27 (12):20-21
[54] 孙敬,唐灿明，袁小玲等利用卡那霉素间接鉴定法进行大规模的棉花转基因育种技术，棉花学报,2000,12(5):270-276
[55] 祝建波,王爱英,吴刚等.转基因棉花的田间筛选技术研究[Ｊ].棉花学报，2000，12（5）:230-233
[56] 马丽华，棉花主要害虫与棉花抗虫性鉴定[C]国家级棉花品种区试培训教材。北京：全国农业技术推广服务中心，2000，20-36
[57] 李燕娥,焦改丽,李淑君.转基因棉花纯度快速检测法[Ｊ].中国棉学报，1998，25 (8):14-18.
[58] 曹际娟,覃文，朱水芳等商业化种植的六种玉米基因改良玉米品系的鉴定检测方法，生物技术通报，2003（1）：23-29
[59] 刘光明，苏文金，转基因产品的检测方法[J]。集美大学学报，2001，6（1）：68
[60] 贾士荣 .转基因植物食品中标记基因的安全性评价 .中国农业科学 . 1 997,3 0 (2 ) :1 -
1 5
[61] 吕山花，丘丽娟，陶波等，转基因植物食品涓检测技术研究进展，生物技术通报，2002（4）：34-38
[62] 曹际娟，曹远银，PCR对转基因玉米MON810的鉴定检测。玉米科学，2003，11（1）：19-21
[63] 张燕花，季静，王罡，转基因植物与生物安全性，作物杂志，2003（6）：4-7
[64] 基因芯片技术及其在植物上的应用，生物技术通报，2002，4：30-33
[65] 孙秀兰，赵晓联，张银志等，生物芯片技术与食品分析，生物技术通报，2002，4：22-25
[66] Persidis A,Nature Biotechnology,1998,16(3):981-983
[67] Pace S J,US Planent,1990,908
[68] Fodor S P, Science,1991,251(5):767-773
[69] Pease A C,Proc Natl Acad Sci USA,1994,91(8):5022-5026
[70] Baner J,Nilsson M,Hartving M M,Landegren U.Signal amplification of pandlock probes by rolling replication Nucl Acids Res,1998,26(22):5073-5078
[71] Lizardi P M,Huang X H,Zhu Z G,etal,Mutaion detection and sigle-molecule counting using isothermal rolling-cirle amplification Nature Genetics 1998,19:225-232
[72]Thomas D,Nardone G,Randall S, Amplification of paddle probes for DNA diagnostice by cascade rolling circle amplification or the polymerase chain reaction Arch Pathol Lab Med, 1999,123:1170-1176
[73]Baner J,Nilsson M,Isaksson A,etal.More keys to padlock probes:mechanisms for high -throughput nucleic acid analysia Current Opinion in Biotechnology ,2001,12:11-15
[74]陶震，蔡兴峰，颜志强等 HRCA技术在转基因植物检测中的应用 生物工程学报，2003，19（3）：294-300
[75] Wang zhonghua,Cuihairui,Shu qinyao,et.al The inheritance and expression of transgenes in the progenies of Bt rice crossed to conventional rice varieties and its breeding utilization [J]. Journal of Agriculture Biotechnology(农业生物技术学报)2000，8（1）：89-94(in china
[76] 李桂玲 玉米转Bt基因后代的抗虫性鉴定研究，河南农业大学硕士学位论文，2002，6
[77] .联合国通过基因食品贸易协定[J]。食品工业科技，2000，21（3）：45
[78] 王颖，余道建，康林等，饲料原料中转基因成分的PCR检测[J]，遗传，2001，24（3）：293-296
[79] 王忠华，吴刚，崔海瑞,等.Bt水稻中crylAb基因的遗传分析[Ｊ] 遗传学报，2001，28（9），846-851.
[80] 毛慧珠,唐惕,曹湘玲等 抗虫转基因甘蓝及其后代的研究〔Ｊ〕 中国科学(Ｃ辑),1996,26(4):339～347
[81] 王天云，张贵星，薛乐勋等，一种简单高效的改良降落PCR，生物工程学报，2003，23（11）：80-82
[82] 张贵星，袁宝梅，许培荣等，一种高效特异性的改良降落PCR，生命科学研究，2002，6（4）：341-371
[2] 刘风华等，转甜菜碱醛脱氢酶基因植物的耐盐性研究，遗传学报，1997，24（1）：54-58
[3] 王学聘等，欧美扬转基因植株的PCR检测，林业科学，1997，33（4）：380-383
[4] 张赛群等，异戊烯基转移酶基因导入番茄及转基因植株再生，园艺学报，1999，26（6）：376-379
[5] 李银心等，转甜菜碱醛脱氢酶基因豆瓣菜的耐盐性，植物学报，2000，42（5）：480-484
[6] 郭北海等，甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因转化小麦及其表达，植物学报，2000，42（5）：279-283
[7] 张宗江等 .黄瓜花叶病毒壳蛋白基因转化辣椒及其在转基因株后代的表达 .华北农学报 . 1 994,9(3 ) :6 7- 7
[8]. Fromm M.E,Taylor,Walbot V. Stable transformation of maize after gene transfer by electroporation.Nature 1986,319:791-793
[9]. Hodges T.K,Kamo K.K,Imbric C.W,et al Genotypes specificity of somatic embryogenesis and regeneration in maize[J].Bio.Tech,1986,4:219-22
[10]. Rhodes C A, Pierce D A, Mettler I J, et al Genetically transformed maize plants from protoplasts.Science,1988,240:204-207
[11] 李晚忱，容延昭，我国21世纪玉米遗传育种工程技术展望，玉米科学，2000，8（2）：10-14
[12] Klein T M,al Apllication of the particle gun biology.In Ni jkamp HJJ,Vander plas LHW,van Artrijk(des).Progress on Plant Cdllwler and Moiecular Biotogy.The Netherlans:Kluwer Academic Publish,1900.599-563
[13] Gordon-Kamm W J, Spence T M,Mangano M I,et al.Transformation of maize cells and regeneration of fertile transgenic plants.The Plant Cell ,1990,2:603-618
[14] 郭三堆.ＣｒｙＩＡ杀虫基因的人工合成[Ｊ].中国农业科学,1997,26(2):85-86.
[15] 贾士荣.植物基因工程原理与技术[Ｍ].大连:辽宁师范大学出版社,1998.127-585.
[16] Koziel M G,Beland G L,Bowman C,et al.Field performance of elite transgenic maize plants expressing an insecticidal protein derived from Bacillus thuringiensis. Bio/ Technology, 1993, 11: 194-200
[17] 丁群星,谢友菊,戴景瑞,等 用子房注射法将Bt毒蛋白基因导入玉米的研究[Ｊ]. 中国科学,Ｂ
辑,1993,23(7):707-713.
[18] 王国英,杜天兵,张宏,等 用基因枪将Bt毒蛋白基因转入玉米及转基因植株再生[Ｊ]. 中国科学,Ｂ辑,1995,25(1):71-76.
[19] 张宏，王国英，谢友菊等，用超声波介导法转化玉米愈伤组织及可育转基因植株的获得.中国科学,C辑,1997,27(2):162-167
[20]杨剑波，许智宏，卫志明等，影响根癌农杆菌附着禾谷类作物培养细胞的因素.[J]实验生物学报，1993，26（1）：1
[21] 王守才,王国英,戴景瑞， 关于高等植物转基因遗传问题的讨论[Ｊ]. 生物工程进展,2000,20(4):64-66.
[22] 董云洲,段胜军等，用基因枪转化花粉获得转基因谷子与玉米。中国农业科学。1999，32（2）：9-13
[23] 王关林，方宏筠.植物基因工程[M] 北京科学出版社,2002.
[24] 杜娟，季静.基因枪在植物遗传转化中的应用，吉林农业科学.2000,25(2):38-40
[25] 瞿礼嘉,等.现代生物技术导论,高等教育出版社,施普林格出版社,1998,241
[26] 吴乃虎 基因工程原理[M] 科学出版社，2001
[27] Willams JGK,Kuberlik AR ,Livak KJ et,al,DNA Polymerhpisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers,Nucleric Acid Res,1990,18:6531-6534
[28] Saiki P K.Amplification of genomic DNA.in: PCR Protocols:aguiden to methods and application (eds.Innis MA,etal)[M].Academic Press inc, 1995.13-20
[29] Welsh J ,MC cleuand M Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers, Nucleric Acid Res,1990,18:7513-7218
[30] 周世力，.PCR技术原理及在法医学中的应用[Ｊ].武汉教育学院学报,1999 18(3):82-85
[31] 武长剑,范云六，水稻广亲和品种”02428”抗除草剂转基因植株的获得[Ｊ].农业生物技术学报,1994,2(2):32-38
[32] Gandhi-R;Paramjit-Khurana; Khurana-P.Stress-mediated regeneration from nature embryo-derived calli and gene transfer through Agrobactrium Oryze ativa) Indian-Journal- of-Evperimental-Biology. 1999,37:4, 332-339;33ref
[33] 王保民,何钟佩,赵继勋,等.抗虫棉Bt杀虫晶体蛋白免疫检测方法的研究[Ｊ],棉花学报，1998，10（4）：220-221
[34] Berberich SA,Maclntosh SC,Fuchs RL.Quanitificayion of BtＫ proteinsin plants by ELISA[A].In:Frurth symposia of the protein society [C].1990.60-79
[35] 陈松,吴敬音,程德荣,等.转Bt基因棉Bt毒蛋白的ELISA检测方法研究(英文)[Ｊ]. 棉花学报,1999,11(5):259-267.
[36] 王保民,何钟佩,田晓莉.苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白ＣｒｙＩＡ单克隆抗体的制备及在转Bt基因棉毒蛋白检测上的应用(英文)[Ｊ]. 棉花学报,2000,12(1):35-39.
[37] 吴家和,陈志贤,李淑君,等. 转Bt基因棉各组织器官对棉铃虫抗性研究[Ｊ]. 棉花学报,1999,11(4):222-223.
[38] 赵建周,卢美光,范贤林.转Bt基因棉对棉铃虫不同龄期幼虫的杀虫活性和抑制生长作用[Ｊ].昆虫学报,1998,41(4):254-258.
[39] 周大荣,何康来 玉米螟综合防治技术[M] 北京:金盾出版社,1995
[40] 曹小凤，杨美珠，朱玉贤等，马铃薯Y病毒外壳蛋白基因在转基因马铃薯中的表达.植物学报，1996，38（5）：417-420
[41] Tian Wen-Zhong,et al.Rice Transformation with aphytoalex ingene and bioassay of the transgenic plants.Acta botanica Sinica,1998,40(9):803-808
[42] Jankins J N,Parrott W L,Mc Carty J C,et al. Growth and Survival of Helithis virsenceson transgenic cotton on taining at runcated from of the Deltend otoxingene from Bacilluathuringiensis [J].Jecon Entomol, 1993,86(1):185-186.
[43] 刘宗华，苏海玲，汤继华，等.Bt转基因植株抗虫性鉴定研究初报[Ｊ] 河南农业大学学报，1999，33(3)，215-218.
[44] 吴家和,陈志贤,李淑君,等.转Bt基因棉各组织器官对棉铃虫抗性研究[Ｊ]. 棉花学报,1999,11(4):222-223.
[45] 束春娥,孙洪武,孙以文,等.转Bt基因棉毒性表达的时空动态及对棉铃虫生存、繁殖的影响[Ｊ]. 棉花学报,1998,10(3):131-135
[46] 赵建周,卢美光,范贤林.转Bt基因棉对玉棉铃虫不同龄期幼虫的杀虫活性和抑制生长作用
[Ｊ].昆虫学报,1998,41(4):254-258
[47] Ｈａｌｃｏｍｂ Ｊ Ｈ,Ｂｅｎｅｄｉｃｔ Ｊ Ｈ,Ｃｏｏｋ Ｂ,ｅｔ ａｌ.Ｓｕｒｖｉｒａｌ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｂｏｌｌ ｗｏｒｍ ａｎｄ ｔｏｂａｃｃｏｂｕｄ ｗｏｒｍ ｏｎ ｎｏｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｏｔｔｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉng ａＣｒｙＩＡ ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ[Ｊ].Ｅｎｖｉｒｏ Ｅｎｔｏｍ,1996,25(2):250-255.
[48] 马丽华,李春花. 棉花抗棉铃虫性室内生物测定新方法[Ｊ].中国棉花，1998，25（7）：27-36。
[49] 孟钊红,焦改丽,张换样,等.GUS基因在转基因玉米花细胞中的表达及其与NPTⅡ基因、Bt基因表达的相关性[Ｊ]. 棉花学报,2001,13(4):243-246
[50] 曹美莲,李朋波,刘惠民,等.转Bt基因棉抗棉铃虫技术及抗性表示方法研究[Ｊ]. 棉花学报,2000,12(2):87-90.
[51] 何康来,王振营，周大荣等，玉米抗螟性鉴定方法与评价标准，沈阳农业大学学报，2000 ,31（5）：439-443
[52] 曹美莲,李朋波,刘惠民,等.转Bt基因棉抗棉铃虫技术及抗性表示方法研究[Ｊ]. 棉花学报,2000,12(2):87-90.
[53] 王坤波,张香娣,刘方,等.子叶期卡那霉素快速鉴定转基因棉花[Ｊ].中国棉花，2000，27 (12):20-21
[54] 孙敬,唐灿明，袁小玲等利用卡那霉素间接鉴定法进行大规模的棉花转基因育种技术，棉花学报,2000,12(5):270-276
[55] 祝建波,王爱英,吴刚等.转基因棉花的田间筛选技术研究[Ｊ].棉花学报，2000，12（5）:230-233
[56] 马丽华，棉花主要害虫与棉花抗虫性鉴定[C]国家级棉花品种区试培训教材。北京：全国农业技术推广服务中心，2000，20-36
[57] 李燕娥,焦改丽,李淑君.转基因棉花纯度快速检测法[Ｊ].中国棉学报，1998，25 (8):14-18.
[58] 曹际娟,覃文，朱水芳等商业化种植的六种玉米基因改良玉米品系的鉴定检测方法，生物技术通报，2003（1）：23-29
[59] 刘光明，苏文金，转基因产品的检测方法[J]。集美大学学报，2001，6（1）：68
[60] 贾士荣 .转基因植物食品中标记基因的安全性评价 .中国农业科学 . 1 997,3 0 (2 ) :1 -
1 5
[61] 吕山花，丘丽娟，陶波等，转基因植物食品涓检测技术研究进展，生物技术通报，2002（4）：34-38
[62] 曹际娟，曹远银，PCR对转基因玉米MON810的鉴定检测。玉米科学，2003，11（1）：19-21
[63] 张燕花，季静，王罡，转基因植物与生物安全性，作物杂志，2003（6）：4-7
[64] 基因芯片技术及其在植物上的应用，生物技术通报，2002，4：30-33
[65] 孙秀兰，赵晓联，张银志等，生物芯片技术与食品分析，生物技术通报，2002，4：22-25
[66] Persidis A,Nature Biotechnology,1998,16(3):981-983
[67] Pace S J,US Planent,1990,908
[68] Fodor S P, Science,1991,251(5):767-773
[69] Pease A C,Proc Natl Acad Sci USA,1994,91(8):5022-5026
[70] Baner J,Nilsson M,Hartving M M,Landegren U.Signal amplification of pandlock probes by rolling replication Nucl Acids Res,1998,26(22):5073-5078
[71] Lizardi P M,Huang X H,Zhu Z G,etal,Mutaion detection and sigle-molecule counting using isothermal rolling-cirle amplification Nature Genetics 1998,19:225-232
[72]Thomas D,Nardone G,Randall S, Amplification of paddle probes for DNA diagnostice by cascade rolling circle amplification or the polymerase chain reaction Arch Pathol Lab Med, 1999,123:1170-1176
[73]Baner J,Nilsson M,Isaksson A,etal.More keys to padlock probes:mechanisms for high -throughput nucleic acid analysia Current Opinion in Biotechnology ,2001,12:11-15
[74]陶震，蔡兴峰，颜志强等 HRCA技术在转基因植物检测中的应用 生物工程学报，2003，19（3）：294-300
[75] Wang zhonghua,Cuihairui,Shu qinyao,et.al The inheritance and expression of transgenes in the progenies of Bt rice crossed to conventional rice varieties and its breeding utilization [J]. Journal of Agriculture Biotechnology(农业生物技术学报)2000，8（1）：89-94(in china
[76] 李桂玲 玉米转Bt基因后代的抗虫性鉴定研究，河南农业大学硕士学位论文，2002，6
[77] .联合国通过基因食品贸易协定[J]。食品工业科技，2000，21（3）：45
[78] 王颖，余道建，康林等，饲料原料中转基因成分的PCR检测[J]，遗传，2001，24（3）：293-296
[79] 王忠华，吴刚，崔海瑞,等.Bt水稻中crylAb基因的遗传分析[Ｊ] 遗传学报，2001，28（9），846-851.
[80] 毛慧珠,唐惕,曹湘玲等 抗虫转基因甘蓝及其后代的研究〔Ｊ〕 中国科学(Ｃ辑),1996,26(4):339～347
[81] 王天云，张贵星，薛乐勋等，一种简单高效的改良降落PCR，生物工程学报，2003，23（11）：80-82
[82] 张贵星，袁宝梅，许培荣等，一种高效特异性的改良降落PCR，生命科学研究，2002，6（4）：341-371