中国传统发酵豆制品中毛霉的分离及性质研究
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摘要
本实验对从自然发酵生产豆制品中分离产蛋白酶菌株,并对其蛋白酶的酶学性质及对豆腐发酵变化进行了探讨。
研究结果表明:初步筛选得到4株产蛋白酶的菌株,其中产蛋白酶活力较高的是M2菌株,M1菌株的酶活力最低。经菌株稳定性试验表明,M2菌株的传代稳定性较好。对M2菌株进行简单的实验室鉴定,根据菌落形态观察,个体形态观察和扫描电镜分析,初步将该菌株归为真菌门(Fungi)、藻菌纲(Phycomycetes)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科(Mucoraceae)、毛霉属(Mucor Micheli ex Fries)。
在温度28℃、初始pH 5.0、接种量2%、装液量100 mL和转速150 r/min的条件下,有利于M2菌株蛋白酶的生产。M2菌株产的蛋白酶可能是含多种蛋白酶的复合酶系,以酸性蛋白酶为主,最适作用pH为4,最适作用温度为55℃。在4℃、pH为5～6时,蛋白酶有着较好的稳定性。一些常见的金属离子对毛霉蛋白酶活性有一定的影响,在5.0 mmol/L的浓度下,Mn2+、Ca2+、Mg2+对蛋白酶有较强的活化作用,而Zn2+、Fe2+、Fe3+对蛋白酶有一定的抑制作用。低浓度的NaCl有激活作用但在高浓度下产生抑制作用。该酶的分子量在30 KD以上。
利用质构仪和扫描电子显微镜研究毛霉发酵豆腐的质构和微观结构,通过电泳分析豆腐的蛋白质水解情况,并与未发酵豆腐经行对比。结果表明,与未发酵豆腐相比,发酵豆腐的硬度和黏性增大,内聚性和弹性减小。其微观结构较均匀致密。电泳分析和微结构分析均显示出大分子量的蛋白质在豆腐发酵过程中的降解。
A protease producting strain was isolated from a traditional fermented soy product. The characteristic of the protease and the change of fermented tofu by the strain were studied in this research.
The results of the experiments showed that the highest protease activity is M2 strain and the lowest protease activity is M1. M2 strain showed a good heredity stability by stability study. M2 strain is belonged to Fungi, Phycomycetes,Mucorales,Mucoraceae,Mucor Micheli ex Fries by lab identify according to colony form, micro observation and scanning electron microscope.
The results showed that M2 strain can produce protease well at 28℃、initial pH 5.0、liquid volume 100 mL and on a rotary shaker with a speed of 150 r/min. The protease of M2 strain producted is maybe protease compound, basis is acidic protease, the ideal conditions for the protease activity were pH 4、55℃. and had good stability in pH 5~6 and 4℃. Some metal ions had influence on protease activity. Mn2+, Ca2+ and Mg2+ could activate protease activity but Zn2+, Fe2+, and Fe3+ could inhibit protease activity at level of 5.0 mmol/L. Meanwhile NaCl showed an activation effect at low level but an inhibitory effect at high level. The protease MWs were above 30KD.
The texture and microstructure of fermented tofu by Mucor were studied by texture analyer and scanning electronmicroscopy (SEM). Proteolysis of tofu was analyzed by SDS-PEGA electrophoresis with unfermented tofu as a control. The TPA profiles showed that hardness and adhesiveness of fermented tofu were increased while the cohesiveness and springiness were reduced. The microstructure of fermented tofu was homogeneous. Results from SDS-PEGA analysis and microstructure analysis all indicated that proteins were degraded during tofu fermentation.
研究结果表明:初步筛选得到4株产蛋白酶的菌株,其中产蛋白酶活力较高的是M2菌株,M1菌株的酶活力最低。经菌株稳定性试验表明,M2菌株的传代稳定性较好。对M2菌株进行简单的实验室鉴定,根据菌落形态观察,个体形态观察和扫描电镜分析,初步将该菌株归为真菌门(Fungi)、藻菌纲(Phycomycetes)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科(Mucoraceae)、毛霉属(Mucor Micheli ex Fries)。
在温度28℃、初始pH 5.0、接种量2%、装液量100 mL和转速150 r/min的条件下,有利于M2菌株蛋白酶的生产。M2菌株产的蛋白酶可能是含多种蛋白酶的复合酶系,以酸性蛋白酶为主,最适作用pH为4,最适作用温度为55℃。在4℃、pH为5～6时,蛋白酶有着较好的稳定性。一些常见的金属离子对毛霉蛋白酶活性有一定的影响,在5.0 mmol/L的浓度下,Mn2+、Ca2+、Mg2+对蛋白酶有较强的活化作用,而Zn2+、Fe2+、Fe3+对蛋白酶有一定的抑制作用。低浓度的NaCl有激活作用但在高浓度下产生抑制作用。该酶的分子量在30 KD以上。
利用质构仪和扫描电子显微镜研究毛霉发酵豆腐的质构和微观结构,通过电泳分析豆腐的蛋白质水解情况,并与未发酵豆腐经行对比。结果表明,与未发酵豆腐相比,发酵豆腐的硬度和黏性增大,内聚性和弹性减小。其微观结构较均匀致密。电泳分析和微结构分析均显示出大分子量的蛋白质在豆腐发酵过程中的降解。
A protease producting strain was isolated from a traditional fermented soy product. The characteristic of the protease and the change of fermented tofu by the strain were studied in this research.
The results of the experiments showed that the highest protease activity is M2 strain and the lowest protease activity is M1. M2 strain showed a good heredity stability by stability study. M2 strain is belonged to Fungi, Phycomycetes,Mucorales,Mucoraceae,Mucor Micheli ex Fries by lab identify according to colony form, micro observation and scanning electron microscope.
The results showed that M2 strain can produce protease well at 28℃、initial pH 5.0、liquid volume 100 mL and on a rotary shaker with a speed of 150 r/min. The protease of M2 strain producted is maybe protease compound, basis is acidic protease, the ideal conditions for the protease activity were pH 4、55℃. and had good stability in pH 5~6 and 4℃. Some metal ions had influence on protease activity. Mn2+, Ca2+ and Mg2+ could activate protease activity but Zn2+, Fe2+, and Fe3+ could inhibit protease activity at level of 5.0 mmol/L. Meanwhile NaCl showed an activation effect at low level but an inhibitory effect at high level. The protease MWs were above 30KD.
The texture and microstructure of fermented tofu by Mucor were studied by texture analyer and scanning electronmicroscopy (SEM). Proteolysis of tofu was analyzed by SDS-PEGA electrophoresis with unfermented tofu as a control. The TPA profiles showed that hardness and adhesiveness of fermented tofu were increased while the cohesiveness and springiness were reduced. The microstructure of fermented tofu was homogeneous. Results from SDS-PEGA analysis and microstructure analysis all indicated that proteins were degraded during tofu fermentation.
引文
鲍松林,丁霄霖. 1995.腐乳豆腐坯质量的仪器测定及量化表征.浙江工业大学学报, 23(4):364-367.
鲍松林. 1994.腐乳生产菌布氏毛霉的鉴定及其生理特征.中国调味品,9(9):7-11.
陈功瑞,陈儒明,赵晴. 1997.毛霉红腐乳蛋白质的研究.营养学报, 19(1):100-103.
陈九武,杨军. 1998.发酵豆制品的保健功能.大豆通报,4:25.
程丽娟,赵树欣. 2005.豆腐乳中的功能性成分.中国调味品,12(12):10-13.
邓芳席,温琼英,鲁小春等. 1996.耐高温腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究.中国酿造,(1):27-30.
董英,郑伟. 2007.酱油曲霉蛋白酶特性研究.食品科技,(4):22-23.
杜木英. 1999.豆豉多菌种发酵工艺的研究[J].西南农业大学学报,21 ( 4) : 364- 366.
方海红,胡好远,黄红英等. 2002.微生物碱性蛋白酶的研究进展.微生物学通报,29 (1): 57-59.
符晓静,孙君社. 2005.微生物蛋白酶在腐乳生产中的应用研究进展.食品科学,26:121-6124.
傅金泉. 1994.纯种发酵毛豆腐技术.食品科学,(4):72-73
F奥斯伯, R E金斯顿, J G塞德曼等.1998.精编分子生物学实验指南.北京:科学出版社,340 - 341.
郭尧君. 1999.蛋白质电泳技术.第1版.北京:科学出版社,131– 139.
何晋浙,何昕. 1999,柠檬酸渣生物转化为酸性蛋白酶饲料的研究.饲料研究,(1):1-4.
侯美珍,宋德贵,韦平英. 2004,时间及温度对腐乳毛霉生长及产蛋白酶的影响.广西师范大学学报(自然科学版),22(4):97-100.
呼晴,殷丽君,邹磊等. 2006.黄色毛霉腐乳发酵过程中主要成分的变化.食品工业技, 27(9):85-87.
黄丽虹. 1999.大豆多肽的生理功能.食品科技,(30):50- 51.
贾利蓉. 1998.豆腐乳发酵概况及前景.四川食品与发酵,(3):36-39.
姜松,王海鸥. 2004. TPA质构分析及测试条件对苹果TPA质构分析的影响.食品科学, 25(12):68-71.
经玲,朱甫芹,鲁菲. 2004.腐乳感官和理化品质的核主成分分析.中国农业大学学报, 9(3):79-81.
荆谷,冯静,孔健等. 2002.微生物金属蛋白酶研究进展.生物工程进展,22 (1): 61-63.
雷晓燕,王志刚. 2007.土壤中产碱性蛋白酶细菌的筛选及产酶条件优化.沈阳化工学院学报,21(3):174-178.
李理,潘进权等. 2003.液体发酵法制备风味良好的大豆多肽.食品与发酵工业,
29(1): 23-26.李海梅,马莺. 2003.传统豆酱生产的现状和发展前景.食品工业科技,增刊: 202- 206.
李理,罗立新,梁世中. 2003.腐乳的研究进展.食品与发酵工业, 28(10): 70-74.
李理,罗泽民,卢向阳. 2001.梨形毛霉蛋白酶在大豆多肽制备中的应用.中国粮油学报, (2): 55-58.
李理,罗泽民,卢向阳. 1999.毛霉蛋白酶的制备及其酶解产物的分析.食品与机械, 4:18-20.
李理,杨晓泉等. 2005.毛霉蛋白酶在腐乳成熟中的作用.中国酿造, 4:18-21.
李艳丽,许少春等. 2007.中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶酶系分析.生物技术, 17(1): 20-23.
李幼筠. 1999.剖析毛霉及特性探索腐乳工艺新途径.中国调味品, 10(10):5-10.
励建荣,苏虎. 2004.酸奶凝胶的组织特性与物理特性.食品工业科技, 25(4): 157-160.
鲁绯,窦琚,刘萍等. 2005.雅致放射毛霉蛋白酶.食品与生物技术学报, 24(2):18-21.
鲁绯,孙君社. 2003.对腐乳后酵过程中一些成分变化的研究.中国酿造, 6:14-17.
马国安. 2000.腐乳生产过程中微生物的污染和防治.中国调味品, ( 2) : 9- 11.
马微,杨会琴,王海波等. 2006.谷氨酰胺转胺酶作用的酸奶超微结构电镜观察.食品科学, 27(02):104-107.
马兴胜,李艳丽. 2003.全脂大豆原料的雅致放射毛霉AS3.2778深层发酵研究.中国粮油学报, 18(5):44-48.
牛天娇,马莺. 2005.中国传统发酵豆制品中微生物的发掘与利用.中国酿造, (2): 1-5.
潘进权,李理. 2004.毛霉蛋白酶的制备及催化特性的研究.中国酿造, (5):10-12.
潘进权,刘耘. 2002.腐乳毛霉AS3.2778产蛋白酶特性研究.食品工业科技, (11): 23-25.
戚淑威,黄遵锡. 2006.青霉( Penicillium ) P-1007产酸性蛋白酶的条件和酶学性质.中国食品添加剂, (1):93-98.
邱雁临,曾莹等. 1997.两种曲霉产蛋白酶特性的研究.中国酿造, (2):12-16.
邵伟,唐明,李玲等. 2004.复合诱变再毛霉高产蛋白酶菌株选育中的应用.中国调味品, 12(12):13-16.
沈子林. 2005.绍兴腐乳发酵过程主要成分变化讨论.中国调味品, 10:37-40.
施巧琴. 2005.酶工程[M].北京:科学出版社,
石继红,赵永同,王俊楼等. 2000. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽.第四军医大学学报, 21 (6):761-763.
宋永生. 2003.豆豉加工前后营养与活性成分变化的研究.食品营养, 24 ( 7) : 79- 81.
孙剑秋,刘井权,肖静等. 2005.制酱用蛋白酶产生菌的分离和鉴定.中国酿造, (6):6-8.
孙剑秋,刘井权等. 2005.制酱用蛋白酶产生菌的分离和鉴定.中国酿造, (6): 6-8.
孙兴民. 1997.少孢根霉RT-3在传统发酵食品中的应用研究.中国酿造, (4):15-17.
孙哲浩. 2001.明胶与к-卡拉胶交互作用特性及机理的研究.食品科学, 22(1): 14-18.
汤鸣强,刘小建,连阳梅. 2007.产中性蛋白酶米曲霉紫外诱变与产酶条件研究.中国饲料,(10):13-16.
唐传核,彭志英. 2000.大豆功能性成分的开发现状.中国油脂, 25 ( 4) : 44- 47.
唐胜球,董小英,许梓荣。2005.酒用酸性蛋白酶的研究进展.酿酒科技, 1:41-43.
田三德,潘婕,刘晓望等. 2004.大豆腐乳加工工艺的研究[J].食品科学, 25(4):203-206.
田三德,王东等. 2004.纯大豆发酵豆乳的风味物质与微观结构的初探[J].中国酿造, 6:8-9.
汪家政,范明. 2008.蛋白质技术手册[M].北京:科学出版社.
王谦,靳发彬,刘利群等. 2005.雅致放射毛霉液体培养工艺及其多糖的免疫调节作用研究.菌物学报,24(1):79-84 .
王吉庄,钟芳等. 2003.高水解度大豆肽的制备.食品工业科技, 24(9): 40-42.
王家槐. 2002.腐乳的营养与保健功能.中国酿造,(4):4-6.
王俊,黄明,徐幸莲等. 2003.干酪乳杆菌蛋白酶的性质研究.食品工业科技, 24(7): 56-58.
王磊,张志光. 1999.毛霉M-9105产蛋白酶的条件.中国调味品, (9): 14-15.
王磊,张志光. 1997.毛霉M-9105产蛋白酶的条件.中国调味品, (9):14-15.
王丽英,王谦等. 2001.雅致放射毛霉液体深层培养条件及发酵培养基的优化研究.中国酿造, (6): 17-22.
王明,纪春,陈小光. 2001.大豆豆酱和酱油中褐色色素的生理功能作用.大豆通报, (1) : 28- 29.
王瑞芝. 2006.说中国腐乳.中国调味品, 1(1):43-57.
王瑞芝. 2004.应用现代生物技术酿造腐乳的技术探讨.中国酿造, (2): 1-5.
王瑞芝. 1999.中国腐乳酿造.北京:中国轻工业出版社,
王旭,何冰芳,李霜等. 2003. Tricine-SDS-PAGE电泳分析小分子多肽.南京工业大学学报, 3,25(3):79-81.
王彦荣,孟祥春,任连彬等. 2003.酸性蛋白酶生产与应用的研究.酿酒科技, 30( 3):16- 18.
魏建华. 2001.玉米中真菌的分离和鉴定[J].中兽医医药杂志, 6:16-17.
肖竞,孙建议,李卫芬. 2003.酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用.饲料博览, ( 3):27- 29.
徐威,李福德等. 1997.碱性蛋白酶生产菌的筛选及发酵条件考察.生物技术, 7(3): 22-24.
许尧兴,许少春,姚晓红. 2001.不同测定程序对饲用酸性蛋白酶检测的影响.中国饲料(14):26-28.
薛林贵. 1997.我国碱性蛋白酶的应用及研究进展.微生物学通报, 24(6):370-371.
阎致远,张益庆,廖德胜等. 1995.酸性蛋白酶生产酒的代谢研究.粮食与饲料工业, (8):24-25.
杨少军,孟广震,张树政. 1989.米黑毛霉天冬氨酸蛋白酶的研究.生物化学杂志. 8:359-365.
杨佐毅,李理,杨晓泉等. 2005.大豆凝乳菌株筛选及其蛋白酶性质的研究.食品与发酵工业, 31(11): 22-26.
易博,黄蓓蓓,陆倍倍等. 2006.植物金属蛋白酶的研究进展.药学实践杂志, 24(1):7-9.
于宏伟,栗志丹等. 2006,蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究.农产品加工学刊, (10): 67-73.
于雯,吕玉琼. 2001 .全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质.中国卫生检验志. 10 ,1 (5):610.
张海德,张永华. 1999.酱油中的生理活性物质.食品科学, ( 1): 7- 9.
张继红,黄一平. 1996.复合蛋白酶测定法的探讨[J].广州食品工业科技,12(12):52-54.
张岭,刘景春. 2002.浅谈腐乳的营养价值. 5(5):9-10.
张树政. 1998.酶制剂工业.北京:科学出版社,
张雪梅,蒲彪. 2005.腐乳的研究概况与发展前景.食品与发酵工业, 31(5): 94-97.
章剑林,黄建宁等. 1995.耐高温酸性蛋白酶的菌株筛选及特性研究.浙江农业科学, (4):171-173.
章佩芬,郭勇,罗焕敏. 2002.菠萝蛋白酶的研究与应用进展.华西药学杂志. 17:128.
赵丛,张敏,王建玲等. 2007.枯草芽孢杆菌ZC - 7中性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究[J].中国生物工程杂志,27(10):28-33.
赵彩艳,蔡克周,陈丽娟等. 2006.黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究.中国饲料, (10):17-19.
赵玉莲,李宏梁等. 1994.腐乳生产菌种的选育.无锡轻工业学院学报, 13(4): 310-321.
赵玉莲,郑学翔. 1998.豆腐乳生产用微生物(一).中国调味品, (12):5-7.
郑铁曾,涂提坤,黄登禹等. 1993.提高C1213菌碱性蛋白酶活力的的研究.食品与发酵工业, (1): 25-31.
郑小平,莫蓓红,郭本恒. 2007.质构仪在干酪凝乳终点判定中的应用.乳品工业与技术, 3:122-124.
周桂芳,郭永银,康毅. 1990,腐乳生产中氨基酸态氮含量的变化及影响因素的研究.天然产物研究与开发, 2(3):49-53.
左爱,军梁东,春郭刚等. 2004 .多肽的电泳分离.天津医药10,32(10):604-606
Aftab Ahamed, Ajay Singh and Owen P. Ward. (2005) Culture-based strategies for reduction of protease activity in filtrates from Aspergillus niger NRRL-3. World Journal of Microbiology & Biotechnology21:1577–1583.
A.I. Sanni .A.A. Onilude .O.T. Ibidapo. (1999) Physicochemical characteristics of weaning food formulated from different blends of cereal and soybean. Z Lebensm Unters Forsch A208 :221–224.
Bei-Zhong Han and Robert M.J. Nout. 2000. Effects of temperature, water activity and gas atmosphere on mycelial growth of tempe fungi Rhizopus microsporus var. microsporus and R. microsporus var. oligosporus. World Journal of Microbiology & Biotechnology,16: 853-858.
Bei-Zhong Han,Angelina F.A. Kuijpers, Nguyen V. Thanh and M.J. Robert Nout. 2004.Mucoraceous moulds involved in the commercial fermentation of Sufu Pehtze. Antonie van Leeuwenhoek 85: 253–257,
B. I. ADERIYE and A. A. OGUNJOBI. 1998. Fermentation of yam: microbiology and sensory evaluation of cooked fermented yam tissues. Plant Foods for Human Nutrition 52: 49–54,
Chengtao Wang, Baoping Ji, Bo Li ,Hong Ji. (2006)Enzymatic properties and identification of a fibrinolytic serine protease purified from Bacillus subtilis DC33. World J Microbiol Biotechnol 22:1365–1371.
L. H. Grimm . S. Kelly . R. Krull . D. C. Hempel. (2005) Morphology and productivity of filamentous fungi[J]. Appl Microbiol Biotechnol 69: 375–384.
M.T.H. Cavalcanti, C.R. Martinez, V.C. Furtado, B.B. Neto. 2005. Milk-clotting protease production by Nocardiopsis sp. in an inexpensive medium. World Journal of Microbiology & Biotechnology 21: 151–154.
M. Vidyasagar, S. Prakash, S. K. Jayalakshmi, K. Sreeramulu. 2007.Optimization of culture conditions for the production of halothermophilic protease from halophilic bacterium Chromohalobacter sp. TVSP101. World J Microbiol Biotechnol , (23): 655–662.
Namrata Thapa, Joydeb Pal and Jyoti Prakash Tamang. 2004.Microbial diversity in ngari, hentak and tungtap, fermented fish products of North-East India. World Journal of Microbiology & Biotechnology 20: 599–607,
O.D. Teniola, W.H. Holzapfe and S.A. Odunfa. 2005 . Comparative assessment of fermentation techniques useful in the processing of ogi. World Journal of Microbiology & Biotechnology (21): 39–43.
Park K Y, Jung K O, Rhee S H, et al. 2003. Antimutagenic effectsof doenjang ( Korean fermented soypaste) and its activecompounds. Mutation Research, 523 -524, 43- 53.
P.S. Channe and J.G. Shewale. Influence of culture conditions on the formation of milk-clotting protease by Aspergillus niger MC4. World Journal of Microbiology & Biotechnology 14, 11-15
Roberto Zazueta-Sandoval. (1999) Developmental and environmental influences in the production of a single NAD-dependent fermentative alcohol dehydrogenase by the zygomycete Mucor rouxii. Arch Microbiol 172 :280–286.
S.C. sindhu and N. khetarpaul. 2003. Fermentation with one step single and sequential cultures of yeast and lactobacilli: Effect on antinutrients and digestibilities (in vitro) of starch and protein in an indigenously developed food mixture. Plant Foods for Human Nutrition 58: 1–10,
Seong-Bo Kim, Dong-Woo Lee, Chan-Ick Cheigh,Eun-Ah Choe. (2006) PyunPurification andcharacterization of a fibrinolytic subtilisin-like protease of Bacillus subtilisTP-6 from an Indonesian fermented soybean, Tempeh. J Ind Microbiol Biotechnol 33: 436–444.
S. George, V. Raju, T.V. Subramanian, K. Jayaraman. 1997. Comparative study of protease production in solid substrate fermentation versus submerged fermentation. Bioprocess Engineering , (16): 381–382.
S. Preetha , R. Boopathy. 1997. Purification and characterization of a milk clotting protease from Rhizomucor n miehei. World Journal of Microbiology & Biotechnology, (13):573-578.
Sujaya S. Ingale, Meenakshi V. Rele, M.C. Srinivasan. Alkaline protease production by Basidiobolus (N.C.L. 97.1.1): 2002. effect of‘darmform’morphogenesis and cultural conditions on enzyme production and preliminary enzyme characterization[J]. World Journal of Microbiology & Biotechnology, (18): 403–408.
Subash C.B. Gopinath·Periasamy Anbu·Azariah Hilda. (2005) Extracellular enzymatic activity profiles in fungi isolated from oil-rich environments. Mycoscience 46:119–126.
T. Miyazawa. (1999) Enzymatic resolution of amino acids via ester hydrolysis. Amino Acids 16:191-213.
鲍松林. 1994.腐乳生产菌布氏毛霉的鉴定及其生理特征.中国调味品,9(9):7-11.
陈功瑞,陈儒明,赵晴. 1997.毛霉红腐乳蛋白质的研究.营养学报, 19(1):100-103.
陈九武,杨军. 1998.发酵豆制品的保健功能.大豆通报,4:25.
程丽娟,赵树欣. 2005.豆腐乳中的功能性成分.中国调味品,12(12):10-13.
邓芳席,温琼英,鲁小春等. 1996.耐高温腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究.中国酿造,(1):27-30.
董英,郑伟. 2007.酱油曲霉蛋白酶特性研究.食品科技,(4):22-23.
杜木英. 1999.豆豉多菌种发酵工艺的研究[J].西南农业大学学报,21 ( 4) : 364- 366.
方海红,胡好远,黄红英等. 2002.微生物碱性蛋白酶的研究进展.微生物学通报,29 (1): 57-59.
符晓静,孙君社. 2005.微生物蛋白酶在腐乳生产中的应用研究进展.食品科学,26:121-6124.
傅金泉. 1994.纯种发酵毛豆腐技术.食品科学,(4):72-73
F奥斯伯, R E金斯顿, J G塞德曼等.1998.精编分子生物学实验指南.北京:科学出版社,340 - 341.
郭尧君. 1999.蛋白质电泳技术.第1版.北京:科学出版社,131– 139.
何晋浙,何昕. 1999,柠檬酸渣生物转化为酸性蛋白酶饲料的研究.饲料研究,(1):1-4.
侯美珍,宋德贵,韦平英. 2004,时间及温度对腐乳毛霉生长及产蛋白酶的影响.广西师范大学学报(自然科学版),22(4):97-100.
呼晴,殷丽君,邹磊等. 2006.黄色毛霉腐乳发酵过程中主要成分的变化.食品工业技, 27(9):85-87.
黄丽虹. 1999.大豆多肽的生理功能.食品科技,(30):50- 51.
贾利蓉. 1998.豆腐乳发酵概况及前景.四川食品与发酵,(3):36-39.
姜松,王海鸥. 2004. TPA质构分析及测试条件对苹果TPA质构分析的影响.食品科学, 25(12):68-71.
经玲,朱甫芹,鲁菲. 2004.腐乳感官和理化品质的核主成分分析.中国农业大学学报, 9(3):79-81.
荆谷,冯静,孔健等. 2002.微生物金属蛋白酶研究进展.生物工程进展,22 (1): 61-63.
雷晓燕,王志刚. 2007.土壤中产碱性蛋白酶细菌的筛选及产酶条件优化.沈阳化工学院学报,21(3):174-178.
李理,潘进权等. 2003.液体发酵法制备风味良好的大豆多肽.食品与发酵工业,
29(1): 23-26.李海梅,马莺. 2003.传统豆酱生产的现状和发展前景.食品工业科技,增刊: 202- 206.
李理,罗立新,梁世中. 2003.腐乳的研究进展.食品与发酵工业, 28(10): 70-74.
李理,罗泽民,卢向阳. 2001.梨形毛霉蛋白酶在大豆多肽制备中的应用.中国粮油学报, (2): 55-58.
李理,罗泽民,卢向阳. 1999.毛霉蛋白酶的制备及其酶解产物的分析.食品与机械, 4:18-20.
李理,杨晓泉等. 2005.毛霉蛋白酶在腐乳成熟中的作用.中国酿造, 4:18-21.
李艳丽,许少春等. 2007.中性蛋白酶高产菌株的筛选及产酶酶系分析.生物技术, 17(1): 20-23.
李幼筠. 1999.剖析毛霉及特性探索腐乳工艺新途径.中国调味品, 10(10):5-10.
励建荣,苏虎. 2004.酸奶凝胶的组织特性与物理特性.食品工业科技, 25(4): 157-160.
鲁绯,窦琚,刘萍等. 2005.雅致放射毛霉蛋白酶.食品与生物技术学报, 24(2):18-21.
鲁绯,孙君社. 2003.对腐乳后酵过程中一些成分变化的研究.中国酿造, 6:14-17.
马国安. 2000.腐乳生产过程中微生物的污染和防治.中国调味品, ( 2) : 9- 11.
马微,杨会琴,王海波等. 2006.谷氨酰胺转胺酶作用的酸奶超微结构电镜观察.食品科学, 27(02):104-107.
马兴胜,李艳丽. 2003.全脂大豆原料的雅致放射毛霉AS3.2778深层发酵研究.中国粮油学报, 18(5):44-48.
牛天娇,马莺. 2005.中国传统发酵豆制品中微生物的发掘与利用.中国酿造, (2): 1-5.
潘进权,李理. 2004.毛霉蛋白酶的制备及催化特性的研究.中国酿造, (5):10-12.
潘进权,刘耘. 2002.腐乳毛霉AS3.2778产蛋白酶特性研究.食品工业科技, (11): 23-25.
戚淑威,黄遵锡. 2006.青霉( Penicillium ) P-1007产酸性蛋白酶的条件和酶学性质.中国食品添加剂, (1):93-98.
邱雁临,曾莹等. 1997.两种曲霉产蛋白酶特性的研究.中国酿造, (2):12-16.
邵伟,唐明,李玲等. 2004.复合诱变再毛霉高产蛋白酶菌株选育中的应用.中国调味品, 12(12):13-16.
沈子林. 2005.绍兴腐乳发酵过程主要成分变化讨论.中国调味品, 10:37-40.
施巧琴. 2005.酶工程[M].北京:科学出版社,
石继红,赵永同,王俊楼等. 2000. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽.第四军医大学学报, 21 (6):761-763.
宋永生. 2003.豆豉加工前后营养与活性成分变化的研究.食品营养, 24 ( 7) : 79- 81.
孙剑秋,刘井权,肖静等. 2005.制酱用蛋白酶产生菌的分离和鉴定.中国酿造, (6):6-8.
孙剑秋,刘井权等. 2005.制酱用蛋白酶产生菌的分离和鉴定.中国酿造, (6): 6-8.
孙兴民. 1997.少孢根霉RT-3在传统发酵食品中的应用研究.中国酿造, (4):15-17.
孙哲浩. 2001.明胶与к-卡拉胶交互作用特性及机理的研究.食品科学, 22(1): 14-18.
汤鸣强,刘小建,连阳梅. 2007.产中性蛋白酶米曲霉紫外诱变与产酶条件研究.中国饲料,(10):13-16.
唐传核,彭志英. 2000.大豆功能性成分的开发现状.中国油脂, 25 ( 4) : 44- 47.
唐胜球,董小英,许梓荣。2005.酒用酸性蛋白酶的研究进展.酿酒科技, 1:41-43.
田三德,潘婕,刘晓望等. 2004.大豆腐乳加工工艺的研究[J].食品科学, 25(4):203-206.
田三德,王东等. 2004.纯大豆发酵豆乳的风味物质与微观结构的初探[J].中国酿造, 6:8-9.
汪家政,范明. 2008.蛋白质技术手册[M].北京:科学出版社.
王谦,靳发彬,刘利群等. 2005.雅致放射毛霉液体培养工艺及其多糖的免疫调节作用研究.菌物学报,24(1):79-84 .
王吉庄,钟芳等. 2003.高水解度大豆肽的制备.食品工业科技, 24(9): 40-42.
王家槐. 2002.腐乳的营养与保健功能.中国酿造,(4):4-6.
王俊,黄明,徐幸莲等. 2003.干酪乳杆菌蛋白酶的性质研究.食品工业科技, 24(7): 56-58.
王磊,张志光. 1999.毛霉M-9105产蛋白酶的条件.中国调味品, (9): 14-15.
王磊,张志光. 1997.毛霉M-9105产蛋白酶的条件.中国调味品, (9):14-15.
王丽英,王谦等. 2001.雅致放射毛霉液体深层培养条件及发酵培养基的优化研究.中国酿造, (6): 17-22.
王明,纪春,陈小光. 2001.大豆豆酱和酱油中褐色色素的生理功能作用.大豆通报, (1) : 28- 29.
王瑞芝. 2006.说中国腐乳.中国调味品, 1(1):43-57.
王瑞芝. 2004.应用现代生物技术酿造腐乳的技术探讨.中国酿造, (2): 1-5.
王瑞芝. 1999.中国腐乳酿造.北京:中国轻工业出版社,
王旭,何冰芳,李霜等. 2003. Tricine-SDS-PAGE电泳分析小分子多肽.南京工业大学学报, 3,25(3):79-81.
王彦荣,孟祥春,任连彬等. 2003.酸性蛋白酶生产与应用的研究.酿酒科技, 30( 3):16- 18.
魏建华. 2001.玉米中真菌的分离和鉴定[J].中兽医医药杂志, 6:16-17.
肖竞,孙建议,李卫芬. 2003.酸性蛋白酶及其在畜牧业中的应用.饲料博览, ( 3):27- 29.
徐威,李福德等. 1997.碱性蛋白酶生产菌的筛选及发酵条件考察.生物技术, 7(3): 22-24.
许尧兴,许少春,姚晓红. 2001.不同测定程序对饲用酸性蛋白酶检测的影响.中国饲料(14):26-28.
薛林贵. 1997.我国碱性蛋白酶的应用及研究进展.微生物学通报, 24(6):370-371.
阎致远,张益庆,廖德胜等. 1995.酸性蛋白酶生产酒的代谢研究.粮食与饲料工业, (8):24-25.
杨少军,孟广震,张树政. 1989.米黑毛霉天冬氨酸蛋白酶的研究.生物化学杂志. 8:359-365.
杨佐毅,李理,杨晓泉等. 2005.大豆凝乳菌株筛选及其蛋白酶性质的研究.食品与发酵工业, 31(11): 22-26.
易博,黄蓓蓓,陆倍倍等. 2006.植物金属蛋白酶的研究进展.药学实践杂志, 24(1):7-9.
于宏伟,栗志丹等. 2006,蛋白酶产生菌的筛选及酶学性质研究.农产品加工学刊, (10): 67-73.
于雯,吕玉琼. 2001 .全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质.中国卫生检验志. 10 ,1 (5):610.
张海德,张永华. 1999.酱油中的生理活性物质.食品科学, ( 1): 7- 9.
张继红,黄一平. 1996.复合蛋白酶测定法的探讨[J].广州食品工业科技,12(12):52-54.
张岭,刘景春. 2002.浅谈腐乳的营养价值. 5(5):9-10.
张树政. 1998.酶制剂工业.北京:科学出版社,
张雪梅,蒲彪. 2005.腐乳的研究概况与发展前景.食品与发酵工业, 31(5): 94-97.
章剑林,黄建宁等. 1995.耐高温酸性蛋白酶的菌株筛选及特性研究.浙江农业科学, (4):171-173.
章佩芬,郭勇,罗焕敏. 2002.菠萝蛋白酶的研究与应用进展.华西药学杂志. 17:128.
赵丛,张敏,王建玲等. 2007.枯草芽孢杆菌ZC - 7中性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究[J].中国生物工程杂志,27(10):28-33.
赵彩艳,蔡克周,陈丽娟等. 2006.黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究.中国饲料, (10):17-19.
赵玉莲,李宏梁等. 1994.腐乳生产菌种的选育.无锡轻工业学院学报, 13(4): 310-321.
赵玉莲,郑学翔. 1998.豆腐乳生产用微生物(一).中国调味品, (12):5-7.
郑铁曾,涂提坤,黄登禹等. 1993.提高C1213菌碱性蛋白酶活力的的研究.食品与发酵工业, (1): 25-31.
郑小平,莫蓓红,郭本恒. 2007.质构仪在干酪凝乳终点判定中的应用.乳品工业与技术, 3:122-124.
周桂芳,郭永银,康毅. 1990,腐乳生产中氨基酸态氮含量的变化及影响因素的研究.天然产物研究与开发, 2(3):49-53.
左爱,军梁东,春郭刚等. 2004 .多肽的电泳分离.天津医药10,32(10):604-606
Aftab Ahamed, Ajay Singh and Owen P. Ward. (2005) Culture-based strategies for reduction of protease activity in filtrates from Aspergillus niger NRRL-3. World Journal of Microbiology & Biotechnology21:1577–1583.
A.I. Sanni .A.A. Onilude .O.T. Ibidapo. (1999) Physicochemical characteristics of weaning food formulated from different blends of cereal and soybean. Z Lebensm Unters Forsch A208 :221–224.
Bei-Zhong Han and Robert M.J. Nout. 2000. Effects of temperature, water activity and gas atmosphere on mycelial growth of tempe fungi Rhizopus microsporus var. microsporus and R. microsporus var. oligosporus. World Journal of Microbiology & Biotechnology,16: 853-858.
Bei-Zhong Han,Angelina F.A. Kuijpers, Nguyen V. Thanh and M.J. Robert Nout. 2004.Mucoraceous moulds involved in the commercial fermentation of Sufu Pehtze. Antonie van Leeuwenhoek 85: 253–257,
B. I. ADERIYE and A. A. OGUNJOBI. 1998. Fermentation of yam: microbiology and sensory evaluation of cooked fermented yam tissues. Plant Foods for Human Nutrition 52: 49–54,
Chengtao Wang, Baoping Ji, Bo Li ,Hong Ji. (2006)Enzymatic properties and identification of a fibrinolytic serine protease purified from Bacillus subtilis DC33. World J Microbiol Biotechnol 22:1365–1371.
L. H. Grimm . S. Kelly . R. Krull . D. C. Hempel. (2005) Morphology and productivity of filamentous fungi[J]. Appl Microbiol Biotechnol 69: 375–384.
M.T.H. Cavalcanti, C.R. Martinez, V.C. Furtado, B.B. Neto. 2005. Milk-clotting protease production by Nocardiopsis sp. in an inexpensive medium. World Journal of Microbiology & Biotechnology 21: 151–154.
M. Vidyasagar, S. Prakash, S. K. Jayalakshmi, K. Sreeramulu. 2007.Optimization of culture conditions for the production of halothermophilic protease from halophilic bacterium Chromohalobacter sp. TVSP101. World J Microbiol Biotechnol , (23): 655–662.
Namrata Thapa, Joydeb Pal and Jyoti Prakash Tamang. 2004.Microbial diversity in ngari, hentak and tungtap, fermented fish products of North-East India. World Journal of Microbiology & Biotechnology 20: 599–607,
O.D. Teniola, W.H. Holzapfe and S.A. Odunfa. 2005 . Comparative assessment of fermentation techniques useful in the processing of ogi. World Journal of Microbiology & Biotechnology (21): 39–43.
Park K Y, Jung K O, Rhee S H, et al. 2003. Antimutagenic effectsof doenjang ( Korean fermented soypaste) and its activecompounds. Mutation Research, 523 -524, 43- 53.
P.S. Channe and J.G. Shewale. Influence of culture conditions on the formation of milk-clotting protease by Aspergillus niger MC4. World Journal of Microbiology & Biotechnology 14, 11-15
Roberto Zazueta-Sandoval. (1999) Developmental and environmental influences in the production of a single NAD-dependent fermentative alcohol dehydrogenase by the zygomycete Mucor rouxii. Arch Microbiol 172 :280–286.
S.C. sindhu and N. khetarpaul. 2003. Fermentation with one step single and sequential cultures of yeast and lactobacilli: Effect on antinutrients and digestibilities (in vitro) of starch and protein in an indigenously developed food mixture. Plant Foods for Human Nutrition 58: 1–10,
Seong-Bo Kim, Dong-Woo Lee, Chan-Ick Cheigh,Eun-Ah Choe. (2006) PyunPurification andcharacterization of a fibrinolytic subtilisin-like protease of Bacillus subtilisTP-6 from an Indonesian fermented soybean, Tempeh. J Ind Microbiol Biotechnol 33: 436–444.
S. George, V. Raju, T.V. Subramanian, K. Jayaraman. 1997. Comparative study of protease production in solid substrate fermentation versus submerged fermentation. Bioprocess Engineering , (16): 381–382.
S. Preetha , R. Boopathy. 1997. Purification and characterization of a milk clotting protease from Rhizomucor n miehei. World Journal of Microbiology & Biotechnology, (13):573-578.
Sujaya S. Ingale, Meenakshi V. Rele, M.C. Srinivasan. Alkaline protease production by Basidiobolus (N.C.L. 97.1.1): 2002. effect of‘darmform’morphogenesis and cultural conditions on enzyme production and preliminary enzyme characterization[J]. World Journal of Microbiology & Biotechnology, (18): 403–408.
Subash C.B. Gopinath·Periasamy Anbu·Azariah Hilda. (2005) Extracellular enzymatic activity profiles in fungi isolated from oil-rich environments. Mycoscience 46:119–126.
T. Miyazawa. (1999) Enzymatic resolution of amino acids via ester hydrolysis. Amino Acids 16:191-213.