Des étu
des expérimentales et cliniques ont suggéré l’intérêt
de l’a
dministration
d’aérosols
d’amphotéricine B pour la prophylaxie
de l’aspergillose invasive. La moin
dre toxicité cellulaire
de l’amphotéricine B liposomale (L-AmB) par rapport à l’amphotéricine B
désoxycholate (D-AmB) a été montrée par
des tests colorimétriques
de viabilité cellulaire en point final. Cepen
dant, ces tests ne peuvent pas mesurer la viabilité
de cellules a
dhérentes en culture cellulaire
de fa&cce
dil;on non invasive et en temps réel. Notre ob
jectif était
donc
de suivre la viabilité cellulaire en temps réel sur une lignée
de cellules épithéliales alvéolaires en utilisant une technologie basée sur l’impé
dance cellulaire et
d’étu
dier le niveau
d’expression
de gènes
de cytokines pro-inflammatoires après exposition à L-AmB ou D-AmB.
d="absSec_2">Méthodes
d="spar0010">Des cellules épithéliales alvéolaires A549 ont été cultivées dans des puits contenant des électrodes (plaques xCELLigence, ACEA Biosciences) permettant des mesures d’impédance en continu. Les résultats sont exprimés en index cellulaires (IC) mesurés sur une période de 100 h, prenant en compte l’adhésion cellulaire aux électrodes et globalisant divers états biologiques comme la prolifération, la viabilité et la morphologie. Les cellules A549 ont été ensemencées à une concentration de 18̊000 cellules/puits et, après 23 h de culture, les antifongiques (50 à 400 μg/ml de D-AmB ou L-AmB) ou des concentrations équivalentes de liposomes vides ont été ajoutés en quadruplicat. En parallèle, 2 plaques de culture ont été utilisées pour quantifier l’expression des gènes de 2 cytokines pro-inflammatoires (TNF-α et IL-8) 6 h et 24 h après l’addition des drogues par RT-PCR en temps réel sur les lysats cellulaires.
d="absSec_3">Résultats
d="spar0015">Une diminution de l’IC a été observée avec le D-AmB à partir d’une concentration de 50 μg/ml avec une récupération des cellules à 60 h. Avec des concentrations plus élevées de D-AmB, aucune récupération cellulaire n’a été observée. Au contraire, aucune altération de l’IC n’a été observée avec le L-AmB ou avec les liposomes vides, même à 400 μg/ml. Aucune augmentation de l’expression de gènes de cytokines n’a été observée à 6 h, ni avec les liposomes vides, ni avec le L-AmB excepté une induction de 2 fois et de 6 fois de l’ARNm du TNF-α à 200 et 400 μg/ml, respectivement, et une induction de 4 fois de l’ARNm de l’IL-8 à 400 μg/ml. Au contraire, même avec une faible concentration de D-AmB (50 μg/ml), des inductions de 4 fois et 7 fois du TNF-α et de l’IL-8, respectivement, ont été observées à 6 h.
d="absSec_4">Conclusions
d="spar0020">La mesure de l’impédance cellulaire en continu est un outil intéressant pour suivre la toxicité cellulaire. La cinétique en temps réel de l’impédance cellulaire et la mesure de l’expression de gènes de cytokines pro-inflammatoires ont confirmé la meilleure tolérance cellulaire de l’amphotéricine B liposomale comparé à l’amphotéricine B désoxycholate.
