摘要
目的优化巢湖蓝藻藻蓝蛋白的纯化工艺。方法将新鲜蓝藻藻泥经冻融破壁处理,获得藻蓝蛋白粗提液。采取两步盐析及Cellfine A-500阴离子交换层析结合法进行纯化,并以纯度和回收率为检测指标,对一步盐析摩尔浓度(0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mol/L)及二步盐析摩尔浓度(1.6、1.8、2.0、2.2、2.4 mol/L)、阴离子交换层析缓冲液pH(6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、进样浓度(0.418、0.726、1.044、1.288、2.090 mg/L)、洗脱速度(0.5、1、1.5、2、2.5、3.0 cm/min)及洗脱液盐梯度浓度[(0.08、0.10、1.0)、(0.08、0.15、1.0)、(0.08、0.20、1.0)、(0.08、0.25、1.0)、(0.08、0.30、1.0)mol/L]进行优化。同时采用最适条件纯化3批藻蓝蛋白。结果两步盐析的最适摩尔浓度分别为1.0和1.8 mol/L,阴离子交换层析最适条件为缓冲液p H 7.0,进样浓度为1.0～2.0 mol/L,洗脱流速为2 cm/min,洗脱液盐梯度浓度为0.08、0.20、1.0 mol/L。最适条件纯化的3批藻蓝蛋白纯度可达4.0以上,回收率达11%以上。结论成功优化了巢湖蓝藻藻蓝蛋白的纯化工艺,纯化出了试剂级(纯度4.0以上)的藻蓝蛋白。
Objective To optimize the purification procedure for phycocyanin(PC)from cyanobacteria from Chaohu Lake.Methods Fresh cyanobacterial mud salvaged from Chaohu Lake was subjected to freeze-thawing for breakage,and the obtained crude extract of PC was purified by two-step salting-out and Cellfine A-500 anion exchange chromatography.The molar concentrations ammonia sulfate in the steps 1(0.8,1.0,1.2,1.4 and 1.6 mol/L)and 2(1.6,1.8,2.0,2.2 and 2.4 mol/L)of salting-out,pH value of buffer in anion exchange chromatography(6.0,6.5,7.0,7.5 and 8.0),sample concentration for loading(0.418,0.726,1.044,1.288 and 2.090 mg/L),elution rate(0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 and 3.0 cm/min)and salt gradient of eluent[(0.08,0.10,1.0),(0.08,0.15 and 1.0),(0.08,0.20 and 1.0),(0.08、0.25、1.0),(0.08,0.30and 1.0)mol/L]were optimized using purity and recovery rate as indicators.Three batches of PC were purified under the optimal condition.Results The optimal molar concentrations of ammonia sulfate in steps 1 and 2 of salting-out were 1.0and 1.8 mol/L respectively,while optimal pH of buffer,sample concentration for loading,elution rate were 7.0,1.0～2.0 mol/L and 2 cm/min respectively.However,the concentration gradient of eluent for anion exchange chromatography was 0.08,0.20 and 1.0 mol/L.The purity of three batches of purified PC reached more than 4.0,while the recovery rate was more than 11%.Conclusion The purification procedure for phycocyanin from cyanobacteria from Chaohu Lake was optimized successfully,and the phycocyanin of reagent grade(with a purity of more than 4.0)was obtained.
引文
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